CN104614526A - 一种鳞状上皮细胞内癌scc-tct联合检测方法 - Google Patents
一种鳞状上皮细胞内癌scc-tct联合检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法。该方法是将宫颈部位的脱落细胞取样，预处理后得到样品溶液；将皂素和样品溶液，离心后取沉淀，加入磷酸盐缓冲液混匀后，进行细胞数总数的计数；将计数后的细胞悬液离心后加入磷酸盐缓冲液进行至少一次冻融，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；然后对其进行细胞内SCC抗原酶标检验分析；根据测定结果判断筛选，将高于临界值的标本筛选出来，该标本相对应的样品溶液在液基细胞仪上制成均匀涂片后固定，巴氏染色法染色，显微镜细胞形态学分析，判断肿瘤细胞的形态。本发明采用SCC-TCT联合检测技术，把80～90﹪正常标本筛选出来，可提高病理医生的工作效率。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种人鳞状上皮细胞内癌抗原细胞（SCC）与液基细胞（TCT）联合检测的方法，具体涉及一种人体脱落细胞，即脱落的鳞状上皮细胞内癌抗原（SCC）检测来筛选出阳性或疑似样品后再进行液基细胞（TCT）病理细胞形态学分析的方法。
背景技术
***是最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，发病率占女性恶性肿瘤的第二位，约占所有肿瘤总数的11﹪。在某些发展中国家，***的发病率甚至超过乳腺癌的发病率，成为女性恶性肿瘤的第一位。
鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）是一种特异性很好而且是最早用于诊断鳞癌的肿瘤标志物。它最初从***组织中分离获得，它包括两个基因SCC1和SCC2。SCC广泛存在于不同器官的正常组织中（含量极微）和恶性病变的上皮细胞中。SCC在正常的鳞状上皮细胞中抑制细胞调亡和参与鳞状上皮层的分化，在肿瘤细胞中参与肿瘤的生长,它有助于所有鳞状上皮细胞起源癌的诊断和监测，例如：子***、肺癌（非小细胞肺癌）、头颈部癌、食管癌以及外***鳞状细胞癌等。
随着鳞状上皮细胞的恶性增殖，细胞内SCC被迅速释放入血，从而引发外周血SCC的升高。现在临床上一般多在血清中使用酶联免疫吸附试验检测总SCC。但在血清中检查SCC的相关性、特异性并不高，对疾病诊断不具有针对性意义，因为SCC分布于全身正常组织的鳞状上皮细胞内。因此检测来自于特定组织的脱落细胞内的鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）的具有很高的关性、特异性，对疾病诊断有明确的针对性意义。
目前国内外针对***的临床实验室检查普遍使用液基细胞（TCT）病理细胞形态学分析，虽然病理细胞形态学分析是金标准，但由于妇科门诊的***阳性率在 4-5﹪间，特别是健康体检的阳性率更低，读片病理医生易漏判且工作量较大。
本发明的意义是将宫颈部位脱落的鳞状上皮细胞用检测细胞内SCC抗原与液基细胞TCT联合检测的方法，可以把正常的片子筛选出来只留阳性或疑是片子供病理医生判断，可以节省80～90﹪的读片工作量，把筛选工作给技术员，病理医生可以集中精力在阳性或疑似样品上，降低漏判率。
脱落细胞鳞状上皮细胞癌细胞内SCC抗原的检测及与液基细胞TCT联合检测的方法在国内外都没有涉及。
发明内容
本发明的目的是针对上述目前国内外没有涉及的联合检验方法，是提供一种新的检验方法和技术，即一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法，为临床诊断提供更有价值的判断依据。
本发明为解决其技术问题，所采取的步骤如下：
步骤(1).脱落细胞预处理：
将宫颈部位的脱落细胞取样，放入保存液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于0℃～8℃下保存；
所述的保存液为质量分数为10～50﹪的甲醇溶液、质量分数为10～50﹪的乙醇溶液或质量分数为10﹪的甲醛溶液；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入20～50μl 1wt﹪皂素，然后加入5～10ml步骤（1）得到的样品溶液，2000～3000转/分钟下离心5～10分钟后，弃去上清液；
所述的皂素用于破除样品溶液中的红细胞；
步骤(3).脱落细胞数总数计数：
步骤(2)离心后的脱落细胞沉淀聚集于试管中，加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对该试管内细胞悬液进行细胞数总数的计数；
所述的细胞数总数的计数方法可以采用人工细胞计数法计数或者细胞计数仪计数；
1.人工细胞计数法是在2ml细胞悬液内取50μl滴入细胞计数板的细胞池内，在显微镜下人工计数四个大方格内的细胞数。细胞池内大方格的面积是1mm×1mm=1mm2,四个大方格的面积是4mm2,细胞池的高度是1mm,4个大方格的体积是4mm3=0.004ml,2ml/0.04ml=500。若人工计数得四大方格内的细胞数为20个，那么该管的细胞数总量为20×500=10000个细胞。
2.细胞计数仪计数法： SCC-100细胞计数仪是一种集成了激光诱导荧光检测的电子显微镜，以碘化丙锭（propidium iodide）作为染料标记DNA，进行检测出细胞悬液中的细胞总数。
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液于2000～3000转/分钟下离心5～10分钟，弃去上清液后再次加入100μl pH值为7.4的磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行至少一次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻2～3分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液20～50μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应30～60min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min后形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB（3＇，3＇，5＇，5＇-四甲基联苯胺）进行显色。TMB在50μlHRP酶（辣根过氧化物酶）的催化下转化成蓝色，并在50μlpH值为5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；颜色的深浅和待检液中的鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab) 呈正相关。
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度，单位为_ng/_万细胞；
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，若高于临界值的标本筛选出来，然后进行步骤(7)；
所述的临界值可根据临床试验得出的结果，通过人为设定。
步骤(7).液基细胞TCT检查：
将步骤（6）筛选出来的标本相对应的样品溶液在液基细胞仪上制成均匀涂片并立即用95wt﹪酒精固定，然后用巴氏染色法将制片染色，显微镜细胞形态学分析，判断肿瘤细胞的形态，得出SCC-TCT的检验结果。
步骤（3）处理后的沉淀在进行步骤（4）前，可对其进行抗原修复，具体操作是在沉淀中加入0.05wt﹪～0.1 wt﹪胰蛋白酶修复液100μl混匀，37℃下反应30～60min。
由于在保存液中有固定液会使抗原蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，因此进行抗原修复或暴露，可提高后续步骤抗原的检测精确度。
本发明的有益效果是：
1.现有医生采用TCT技术检查鳞状上皮细胞形态学病变，工作繁琐，成本较高，耗时较长，需要数个工作日；而本发明采用SCC-TCT联合检测技术，把80～90﹪正常标本筛选出来，可提高病理医生的工作效率，只需要一个工作日。
2.步骤5.4将细胞实际量与鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度，单位为_ng/_万细胞，可实现脱落细胞的定量计数；
3.由于在保存液中有固定液会使抗原蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，因此进行抗原修复或暴露，可提高后续步骤抗原的检测精确度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的分析。
下面实施例步骤6所提及的临界值是用正常人的标本200例实验后得出的结果。
实施例1.
病人李XX，宫颈部位检查发现子宫颈表面光滑或呈糜烂状、质硬、触之易出血。
步骤(1).脱落细胞预处理：
妇科医生在该病人的宫颈部位用妇科专用宫颈刷取得脱落细胞，放入10～50wt﹪甲醇溶液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于0℃下保存；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入20μl 1wt﹪皂素，然后加入5ml步骤（1）得到的样品溶液，2000转/分钟下离心10分钟后，弃去上清液；
所述的皂素用于破除样品溶液中的红细胞；
步骤(3).脱落细胞数总量计数：
步骤(2)离心后的脱落细胞沉淀聚集于试管中，加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对细胞悬液采用人工计数法计数进行细胞数总数计数；
人工细胞计数法是在2ml细胞悬液内取50μl滴入细胞计数板的细胞池内，在显微镜下人工计数四个大方格内的细胞数。细胞池内大方格的面积是1mm×1mm=1mm2,四个大方格的面积是4mm2,细胞池的高度是1mm,4个大方格的体积是4mm3=0.004ml,2ml/0.04ml=500。如人工计数得四大方格内的细胞数为20个那么该管的细胞数总量为20×500=10000个细胞。
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液于2000转/分钟下离心10分钟后，弃去上清液后再次加入100μlpH7.4磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行一次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻3分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液20μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应30min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB（3＇，3＇，5＇，5＇-四甲基联苯胺）进行显色。TMB在50μlHRP酶（辣根过氧化物酶）的催化下转化成蓝色，并在50μlpH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；显色结果是450nm吸光度的黄色。
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度，该病人标本实际测得的SCC浓度为50ng/1万细胞；
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，该病人标本实际测得的SCC浓度以大大高于临界值，将该病人标本筛选出来然后进行步骤(7)；
步骤(7).液基细胞TCT检查：
将步骤（6）将筛选出来的该标本在液基细胞仪上制成均匀涂片并立即用95wt﹪酒精固定，然后用巴氏染色法将制片染色，制片后提供病理医生显微镜细胞形态学分析，最后供病理医生判断该标本的脱落细胞的细胞核内染色体有CINⅢ 结果，得出报告：SCC 50ng/1万细胞、TCT的检验结果为脱落细胞CINⅢ。
实施例2
病人张XX宫颈部位检查发现子宫颈表面光滑、质硬。
步骤(1).脱落细胞预处理：
妇科医生在该病人的宫颈部位用妇科专用宫颈刷取得脱落细胞，放入10﹪wt﹪乙醇溶液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于8℃下保存；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入50μl 1wt﹪皂素，然后加入 10ml步骤（1）得到的样品溶液，3000转/分钟下离心5分钟后，弃去上清液；
所述的皂素用于破除样品溶液中的红细胞；
步骤(3).脱落细胞数总量计数：
步骤(4)离心后的脱落细胞沉淀聚集于试管中，加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对细胞悬液采用人工计数法计数进行细胞数总数计数；
用细胞计数仪计数如： SCC-100细胞计数仪是一种集成了激光诱导荧光检测的电子显微镜，以碘化丙锭（propidium iodide）作为染料标记DNA，进行检测出细胞悬液中的细胞总数为25000。
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液于3000转/分钟下离心5分钟后，弃去上清液后再次加入100μlpH7.4磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行3次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻2分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液50μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应60min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min后形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB（3＇，3＇，5＇，5＇-四甲基联苯胺）进行显色。TMB在50μlHRP酶（辣根过氧化物酶）的催化下转化成蓝色，并在50μlpH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；显色结果是450nm吸光度的黄色。
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度为2.5ng，该病人标本的单位（2.5ng/2.5万细胞）SCC浓度为_1.0ng/_1万细胞；
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，该病人标本实际测得的SCC浓度低于临界值，该病人标本不需要进行液基细胞TCT检查。得出报告：SCC 1.2ng/1万细胞。
实施例3.
病人王XX，宫颈部位检查发现子宫颈表面光滑、质硬、触之易出血。
步骤(1).脱落细胞预处理：
妇科医生在该病人的宫颈部位用妇科专用宫颈刷取得脱落细胞，放入10wt﹪甲醛溶液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于5℃下保存；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入30μl 1wt﹪皂素，然后加入6ml步骤（1）得到的样品溶液，2500转/分钟下离心7分钟后，弃去上清液；
所述的皂素用于破除样品溶液中的红细胞；
步骤(3).脱落细胞数总量计数：
步骤(2)离心后的脱落细胞沉淀聚集于试管中，加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对细胞悬液采用人工计数法计数进行细胞数总数计数；
人工细胞计数法是在2ml细胞悬液内取50μl滴入细胞计数板的细胞池内，在显微镜下人工计数四个大方格内的细胞数。细胞池内大方格的面积是1mm×1mm=1mm2,四个大方格的面积是4mm2,细胞池的高度是1mm,4个大方格的体积是4mm3=0.004ml,2ml/0.04ml=500。如人工计数得四大方格内的细胞数为40个那么该管的细胞数总量为40×500=20000个细胞。
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液进行抗原修复，具体操作是在沉淀中加入0.05wt﹪胰蛋白酶修复液100μl混匀，37℃下反应30min；然后于2500转/分钟下离心7分钟后，弃去上清液后再次加入100μlpH7.4磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行4次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻3分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液30μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应50min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB（3＇，3＇，5＇，5＇-四甲基联苯胺）进行显色。TMB在50μlHRP酶（辣根过氧化物酶）的催化下转化成蓝色，并在50μlpH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；显色结果是450nm吸光度的黄色。
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度为3ng，该病人标本的单位（3ng/2万细胞）SCC浓度为_1.5ng/_1万细胞；
步骤(6).筛选结果：
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，该病人标本实际测得的SCC浓度低于临界值，该病人标本不需要进行液基细胞TCT检查。得出报告：SCC 1.5ng/1万细胞。
实施例4
病人陈XX宫颈部位检查发现子宫颈表面光滑、质硬。
步骤(1).脱落细胞预处理：
妇科医生在该病人的宫颈部位用妇科专用宫颈刷取得脱落细胞，放入50﹪wt﹪乙醇溶液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于7℃下保存；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入40μl 1wt﹪皂素，然后加入 9ml步骤（1）得到的样品溶液，2800转/分钟下离心6分钟后，弃去上清液；
所述的皂素用于破除样品溶液中的红细胞；
步骤(3).脱落细胞数总量计数：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液进行抗原修复，具体操作是在沉淀中加入0.1wt﹪胰蛋白酶修复液100μl混匀，37℃下反应60min；然后加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对细胞悬液采用人工计数法计数进行细胞数总数计数；
用细胞计数仪计数如： SCC-100细胞计数仪是一种集成了激光诱导荧光检测的电子显微镜，以碘化丙锭（propidium iodide）作为染料标记DNA，进行检测出细胞悬液中的细胞总数为50000。
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液于2800转/分钟下离心6分钟后，弃去上清液后再次加入100μlpH7.4磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行2次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻2分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液35μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应50min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min后形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB（3＇，3＇，5＇，5＇-四甲基联苯胺）进行显色。TMB在50μlHRP酶（辣根过氧化物酶）的催化下转化成蓝色，并在50μlpH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；显色结果是450nm吸光度的黄色。
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体(SCC-Ab)的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度为2.5ng，该病人标本的单位（2.5ng/5万细胞）SCC浓度为_0.5ng/1万细胞；
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，该病人标本实际测得的SCC浓度低于临界值，该病人标本不需要进行液基细胞TCT检查。得出报告：SCC 0.5ng/1万细胞。
Claims (3)
1. 一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
步骤(1).脱落细胞预处理：
将宫颈部位的脱落细胞取样，放入保存液中固定脱落细胞，得到预处理后的样品溶液，于0℃～8℃下保存；
步骤(2).离心聚集脱落细胞：
在试管中首先加入20～50μl 1wt﹪皂素，然后加入5～10ml步骤（1）得到的样品溶液，2000～3000转/分钟下离心5～10分钟后，弃去上清液；
步骤(3).脱落细胞数总数计数：
步骤(2)离心后的脱落细胞沉淀聚集于试管中，加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液2ml再次充分混匀后，得到细胞悬液；对该试管内细胞悬液进行细胞数总数的计数；
步骤(4).细胞内的SCC抗原游离、释放：
将步骤(3)细胞数总数计数后的细胞悬液于2000～3000转/分钟下离心5～10分钟，弃去上清液后再次加入100μl pH值为7.4的磷酸盐缓冲液并混匀，得到混合液；然后将混合液进行至少一次冻融，此时细胞由于冻融的作用使细胞膜破裂，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；
所述的冻融过程为将混合液置于液氮箱内，于-190℃下迅速超低温冷冻2～3分钟后，取出置于50℃下溶解；
步骤(5).细胞内SCC抗原酶标检验分析：
5.1取步骤(4)SCC抗原游离、释放后的样品溶液20～50μl，加入到已被SCC抗体包被的酶标板小孔内，抗原抗体反应30～60min后，洗涤；
5.2然后在步骤5.1酶标板小孔内再加入50μl SCC酶标抗体，反应15min后形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,洗涤；
5.3步骤5.2抗原-抗体-酶标抗原复合物经过彻底洗涤后，加入50μl底物TMB进行显色；TMB在50μl HRP酶的催化下转化成蓝色，并在50μlpH值为5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液的作用下转化成最终的黄色；颜色的深浅和待检液中的鳞状细胞癌抗体呈正相关；
5.4将步骤5.3显色后的待检液放入酶标仪内，分析鳞状细胞癌抗体的浓度，单位为ng；并将步骤（3）计数得到的细胞数总数输入到酶标仪内，结合鳞状细胞癌抗体的浓度转换成细胞数总数内的实际测得的SCC-Ab浓度，单位为_ng/_万细胞；
步骤(6).筛选结果：
根据步骤5.4测定的结果进行判断筛选，若高于临界值的标本筛选出来，然后进行步骤(7)；
步骤(7).液基细胞TCT检查：
将步骤（6）筛选出来的标本相对应的样品溶液在液基细胞仪上制成均匀涂片并立即用95wt﹪酒精固定，然后用巴氏染色法将制片染色，显微镜细胞形态学分析，判断肿瘤细胞的形态，得出SCC-TCT的检验结果。
2.如权利要求1所述的一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法，其特征在于步骤（3）处理后的沉淀在进行步骤（4）前，可对其进行抗原修复，具体操作是在沉淀中加入0.05wt﹪～0.1 wt﹪胰蛋白酶修复液100μl混匀，37℃下反应30～60min。
3.如权利要求1所述的一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法，其特征在于步骤(1)所述的保存液为质量分数为10～50﹪的甲醇溶液、质量分数为10～50﹪的乙醇溶液或质量分数为10﹪的甲醛溶液。
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