CN104593307A - 具有抑制血管紧张素酶作用的鼠李糖乳杆菌和用途 - Google Patents

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Abstract

具有抑制血管紧张素酶作用的鼠李糖乳杆菌和用途，随着相关生物技术、保健医学学科等研究的不断深入，高血压新的生物活性成分、功能基因、功能蛋白等作用新靶点的相继发现，为筛选出高效降压、安全、高活性的益生菌产品提供了基础条件。本发明由采集于自然发酵豆制品中，经分离、纯化、物理诱变、优选获得的高活性菌株，菌学分类名称actobacillus rhamnosus HLH 20120717，菌学特性为：置于37℃恒温培养箱的培养基中进行培养，通过培养发现稀释浓度为10-5时菌生长较良好，菌落分散；在相同条件下菌落生长有大有小，菌落呈圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，其中较小的菌落微黄色；保藏号为：CGMCC No.7084。本发明为进一步研究开发预防和治疗高血压的益生菌功能性保健食品和药品提供基础。

Description

具有抑制血管紧张素酶作用的鼠李糖乳杆菌和用途
技术领域
本发明通过优选所获得一种鼠李糖乳杆菌HLH 20120717(Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717)，用于发酵制备具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的豆浆和相关食品。
背景技术
随着世界经济的不断发展，人们的生活水平提高，以高血压为代表的心血管疾病的危害日益加重。采取一切预防措施、治疗手段，控制高血压的发生、发展，以合理应用降压药物降低其患病率和死亡率已成为国际针对高血压的共识。目前临床上主要治疗高血压的药物如利尿剂、β-受体阻断剂、钙通道阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂等。但都有一定的副作用或不良反应，易引肝肾功能危害，作为预防用药或长期服用就更加不合理。
目前，对应高血压的发病因素，可通过改善不良生活习惯、合理膳食、加强健康教育等方式最大限度的预防高血压的发生，已成为世界宣传的重点，以功能性的食品来达到预防、治疗高血压的双重目的，其中益生菌及其产品的开发比较热门。
我国对益生菌的研究和应用起步比较晚，政府和地方高度重视，目前已被列入国家高新技术研究发展计划的重点支持项目。但研究和开发具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的益生菌制品报道还是比较少，随着相关生物技术、保健医学学科等研究的不断深入，高血压新的生物活性成分、功能基因、功能蛋白等作用新靶点的相继发现，为筛选出高效降压、安全、高活性的益生菌产品提供了基础条件。
发明内容
本发明的目的是提供一株发酵具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用豆浆的鼠李糖乳杆菌HLH 20120717(Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717)，为进一步研究开发预防和治疗高血压的益生菌功能性保健食品和药品提供基础。
上述目的通过以下技术方案实现：
一种来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，由采集于自然发酵豆制品中，经分离、纯化、物理诱变、优选获得的高活性菌株，菌学分类名称actobacillus rhamnosus HLH 20120717，菌学特性为：置于37℃恒温培养箱的培养基中进行培养，通过培养发现稀释浓度为10-5时菌生长较良好，菌落分散；在相同条件下菌落生长有大有小，菌落呈圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，其中较小的菌落微黄色；保藏号为：CGMCC No.7084。
所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其菌学特性还包括：革兰氏染色结果呈阳性；芽孢染色菌体呈绿色；接触酶试验中没有气泡产生；溶钙圈法培养观察到菌落周围出现透明圈，具备明显乳酸菌的特征。
所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，经16S rDNA部分序列在线进行BLAST比对，结果具有Lactobacillus菌属rhamnosus菌种的主要遗传特性：
16S rDNA测序部分序列如下所示：
所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，所述培养基处方为：
所述的比例为重量份数比。
鼠李糖乳杆菌HLH 20120717经VITEK 2Compact鉴定结果
鼠李糖乳杆菌HLH 20120717经VITEK 2Compact鉴定结果
鼠李糖乳杆菌HLH 20120717经VITEK 2Compact鉴定结果
一种利用上述的鼠李糖乳杆菌制作的豆浆，将所述的菌株接种于经大豆浸泡，研磨、匀浆、煮沸，过滤、高温灭菌制得的豆浆中，37℃-42℃发酵24小时以上，制得酸豆浆。
一种上款所述的豆浆的制作方法：
称取100g大豆清洗后放于250mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水 洗净,将浸泡好的大豆以重量比1∶8的豆水比用组织捣碎机磨浆，加热至沸腾10分钟后用，三层纱布过滤后。倒入三角瓶中于121℃灭菌15min,纱布封口冷却后，无菌用接种环挑去MRS试管斜面培养的李糖乳杆菌HLH 20120717菌落五环，振摇均匀后，放置在37℃培养12小时，冷却至室温，后放入冰箱4℃冷存，作为备用的豆浆；
同上称取2000g大豆清洗后放于50000mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水洗净,将浸泡好的大豆以1∶8重量比的豆水比用豆浆机磨浆，加热至沸腾后，离心过滤出去豆渣；经巴士灭菌器135℃灭菌10秒快速灭菌，置于清洗灭菌好的发酵罐中,按5％体积比例加入上述备用的发酵豆浆，以30r/min,37-40℃的发酵2小时，而后分装、密封到酸奶塑料杯里，室温发酵12小时后，放入冰箱4℃冷存；
剩余部分置于清洗灭菌好的大烧杯中，纱布封口后室温发酵24个小时以上，当pH达到4.9以下，酸豆浆呈凝固状，搅拌器将酸豆浆都搅成可流动性状，平铺2cm厚度的珐琅盘中，-40℃到30℃冷冻干燥，成松脆黄色固体状，粉碎成100目的粉末，经凯氏定氮法测定蛋白含量47％。密封低温干燥保存。
将上述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，用于制作抑制血管紧张素酶(ACE)、用于制作预防和治疗高血压的保健食品和药品的用途。
有益效果： 
益生菌具有多种保健功能，降低和调整血压的功能，研究的报到比较多，益生菌对高血压保健作用已引起高度重视。益生菌之所以能产生降压和调整血压的效果，主要是特定益生菌的分泌蛋白酶，酶解食物蛋白，产生能释放出降压活性肽类物质，如血管紧张素转换酶抑制肽等；释放细胞壁中的具有降压作用肽聚糖和矿物质，具有显著的；三是部分益生菌可促进机体对某些调节血压的矿物质的吸收。利用现代生物技术制备益生菌降血压产品，具有广阔的开发价值和市场前景。
血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE)是上世纪中期发现抗高血压药物靶位酶，通过肾素-血管紧张素-激肽***的调节。可以把血管紧张素I转化成具有收缩血管、升压作用的血管紧张素II；同时ACE将具有降压功能的舒缓激肽降解，使之失去降压作用，引起血压升高活性。血管紧张素转换酶抑 制剂(ACEI)是目前临床上广泛采用的新型抗高血压药物，疗效显著，作用安全。主要用于治疗心血管疾病，尤其在治疗高血压、心力衰竭、心肌缺血、动脉粥样硬化等疾病的防治中正发挥越来越重要的作用。现代研究表明血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)在降低高血压的同时，还有预防心衰心衰、延缓合并糖尿病的发生。对脑供血不全型痴呆也有可喜的作用。因此，ACEI活性水平可用来作为降压保健产品及药物的参考评价指标，广泛应用与食品和药品研究领域ACE含量最高的组织部位是脑脉络丛、黑质纹状体通路和基底节区组织。[HONGGER1]ACEI降低血压血压的机制，主要在[HONGGER2]体内能竞争性地与ACE的活性配基锌离子结合，抑制ACE的活性，阻断血管紧张素I转变成血管紧张素Ⅱ；对肾血管直接的影响，进一步通过交感神经***及影响醛固酮分泌，进而减少缓激肽的降解，起到降压。ACEI适用于各型高血压，在降压的同时，不伴有反射性心率加快；能减少尿蛋白和改善肾功能；不易引起电解质紊乱和脂质代谢障碍；可防止和逆转高血压患者血管壁的增厚和心肌细胞增生肥大，可发挥直接的心脏保护作用等。随着对ACE化学结构及其性质的深入研究，目前一大批活性较强的ACEI先后上市，将为治疗高血压发挥更好的临床疗效。
食物蛋白是机体必需氨基酸、蛋白等营养成分的重要来源，其降解所生成的的生物活性肽具有多种生理功能(如：降压、抗***反应药、抗氧化、提高免疫力等)。针对其他降压和扩张血管药物的不良反应，开发安全、天然、高效的、特别是食源ACEI保健产品和药品，必将成为心血管治疗和预防的新理念和发展方向。目前报道中已从大豆、小红豆、大蒜、玉米、麦胚、牛奶、鱼、贝、鸡蛋、酒糟中成功地获得了各种不同的ACE抑制肽。从发酵乳蛋白源中提取的ACEI研究比较深入。但利用大豆发酵作为来源获得ACEI相关报道还很少。
通过益生菌发酵乳蛋白获取ACEI研究表明，乳蛋白中所含有的多生物活性肽段，可通过益生菌代谢酶酶解和乳酸的水解释放出来。国外研究学者通过瑞士乳杆菌CP790蛋白酶水解α-酪蛋白(α-CN)和β-酪蛋白(β-CN)，获得的ACE抑制肽，具有较好的降压活性。其他学者采用不同的方法从酪蛋白水解物中分离出具有ACE抑制活性的5-12肽。功能性考察也表明，长期服用乳源性ACE抑制肽不仅可以达到预防、控制、缓解、辅助治疗高血压的目的，还具有一定的保健和营 养价值。我国是大豆的原产地，很多地区的人们有饮用豆浆和食用豆制品的习惯，利用大豆，开发大豆源性具有ACEI作用，预防和治疗高血压的功能性保健产品，必将成为功能性食品行业和市场的热点。
药理学研究 
1，李糖乳杆菌HLH 20120717发酵豆浆急性毒性实验研究
1.1实验动物
昆明种小鼠，体重范围18-22g，雌雄各半，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。
发酵豆浆样品的制备
将上述贮存于酸奶包装塑料杯中的酸豆浆加入等体积蒸馏水(100ml)，用搅拌器混匀后(凯氏定氮法测得蛋白质含量3％).备用
1.3实验方法
将40只昆明小鼠雌雄各半随机分为对照组和实验组，实验组连续三天，每次灌胃0.1mL发酵豆浆样品溶液，对照组灌胃0.1mL的生理盐水，每天早上定量添加饲料和饮水，恒温21±3℃，相对湿度为50-70％，12h照明，持续观察7天。记录小鼠的体重、体征及死亡情况。将试验组和对照组各取出10只小鼠处死，取出肝脏、脾脏，称重，计算肝体比、脾体比。
细菌易位感染实验
剩余小鼠连续灌胃至28天后，无菌操作眼球取血后，立即处死，取出肝脏、脾脏，称重，计算肝体比、脾体比。按1mL/g的量加入无菌生理盐水，用无菌组织匀浆器捣碎，取肝脾100μL组织匀浆液及血液涂布于MRS固体培养基平板上，37℃倒置培养48小时，随时观察菌落生长情况。
实验结果
李糖乳杆菌HLH 20120717发酵制备的酸豆浆急性毒性实验和易位实验结果表明，各组实验小鼠未发生死亡，实验期间实验组和对照组体征(体重、行为、活动、毛发、色泽、饮食、粪便等)各项指标无明显异常；脏器(肝脏、脾脏)的生理指标无显著性差异，并且未见菌株易位感染现象，初步证明了李糖乳杆菌HLH 20120717发酵制备的酸豆浆安全性。
2,李糖乳杆菌HLH 20120717发酵豆浆对原发性高血压大鼠(SHR)影响：
2.1实验动物和仪器试剂
雄性原发性高血压大鼠(SHR)，出生60天左右，体重180-220g，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。
雄性SD大鼠，出生60天左右，体重180-220g，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。
实验大鼠均自由采食和饮水，专业管理。动物室灯光12h照明，室温控制在21±3℃，相对湿度为50-70％。
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总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密脂蛋白胆固醇(HDL-G)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
发酵豆浆对SHR降血压作用的影响研究
2.2.1试验用样品
发酵豆浆样品的制备：将上述贮存于酸奶包装塑料杯中的酸豆浆加入等体积蒸馏水(100ml)，用搅拌器混匀后(凯氏定氮法测得蛋白质含量3％).备用
豆浆检测样品的制备：将上述制备发酵豆浆所用的经巴士灭菌后的豆浆，量取100ml加入等体积蒸馏水(100ml)。用组织捣碎机混匀。备用
2.2.2实验分组
将SHR大鼠随机分为对照组，低剂量样品组、中剂量样品组、高剂量样品组三组，每组8只SHR大鼠
另取8只SD大鼠设为SD对照组。
对照组：用10mL/Kg豆浆检测样品灌胃
高剂量样品组：用15mL/Kg发酵豆浆样品灌胃；
中剂量样品组：用10mL/Kg发酵豆浆样品灌胃
低剂量样品组：用5mL/Kg发酵豆浆样品灌胃；
SD对照组：10mL/Kg发酵乳。
短期降压效果实验
所有实验动物购进后在动物实验室内饲养一周，每天上午8点和下午3点用BP-600A全自动无创血压测量***各测一次鼠尾血压，稳定三天后，灌胃时间为每 天上午8:00。各实验组按剂量灌胃，连续灌胃3d，每次灌胃结束后的0h、2h、4h、6h、8h、10h、24h，测定SHR尾部动脉血压，每只重复3次，取平均值，实验数据以“平均值±标准差”表示。
长期降压效果评价
所有实验动物购进后在动物实验室内饲养一周，每天上午8点和下午3点用BP-600A全自动无创血压测量***各测一次鼠尾血压，稳定三天后，灌胃时间为每天上午8:00。各实验组按剂量灌胃，连续灌胃4周，每周定时测定一次血压和体重，重复3次，取平均值，实验数据以“平均值±标准差”表示；四周后，动物禁食20h，经心脏穿刺取血，37℃孵育2h，2500r/min离心20min，取血清，测定血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇的含量。
实验结果
表：喂食发酵酸豆浆短期对SHR大鼠降压效果实验结果
注：*0.01<P<0.05，与对照组相比呈显著性差异；**P<0.01，与对照组相比呈极显著性差异。
表：喂食发酵酸豆浆长期对SHR大鼠降压效果实验
注：*0.01<P<0.05，与对照组相比呈显著性差异；**P<0.01，与对照组相比呈极显 著性差异。
表：发酵豆浆对SHR大鼠体重的影响(，g)
注：*0.01<P<0.05，与对照组相比呈显著性差异；**P<0.01，与对照组相比呈极显著性差异。
表：发酵豆浆对SHR大鼠血清胆固醇、甘油三酯、高密脂蛋白检测结果影响
注：*0.01<P<0.05，与对照组相比呈显著性差异；**P<0.01，与对照组相比呈极显著性差异。
喂食由李糖乳杆菌HLH 20120717制备的发酵豆浆对原发性高血压大鼠(SHR)降血压作用的影响研究实验表明：短期和长期喂食高、中、低剂量发酵豆浆组，对SHR大鼠尾动脉收缩压变化均有显著性的影响；对照组和SD对照组无显著性变化；另外喂食高、中、低剂量发酵豆浆组除体重外，对血清中总胆固醇、甘油三酯、高密脂蛋白含量也有显著性影响。因此证实喂食由李糖乳杆菌HLH 20120717制备的发酵豆浆对原发性高血压大鼠(SHR)降血压作用明显。
具体实施方式：
实施例1：
一种来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，由采集于自然发酵豆制品中，经分离、纯化、物理诱变、优选获得的高活性菌株，菌学分 类名称actobacillus rhamnosus HLH 20120717，菌学特性为：置于37℃恒温培养箱的培养基中进行培养，通过培养发现稀释浓度为10-5时菌生长较良好，菌落分散；在相同条件下菌落生长有大有小，菌落呈圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，其中较小的菌落微黄色；保藏号为：CGMCC No.7084。
实施例2：
实施例1所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其菌学特性还包括：革兰氏染色结果呈阳性；芽孢染色菌体呈绿色；接触酶试验中没有气泡产生；溶钙圈法培养观察到菌落周围出现透明圈，具备明显乳酸菌的特征。
实施例3：
实施例1或2所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，经16S rDNA部分序列在线进行BLAST比对，结果具有Lactobacillus菌属rhamnosus菌种的主要遗传特性：
16S rDNA测序部分序列如下所示：
实施例4：
实施例1、2、3所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，所述培养基处方为：
所述的比例为重量份数比。
实施例5：
利用实施例1或2或3或4所述的鼠李糖乳杆菌制作的豆浆，将上述的实施例得到的菌株接种于经大豆浸泡，研磨、匀浆、煮沸，过滤、高温灭菌制得的豆浆中，37℃-42℃发酵24小时以上，制得酸豆浆。
实施例6：
将上述的实施例所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，用于制作抑制血管紧张素酶(ACE)、用于制作预防和治疗高血压的保健食品和药品的用途。
实施例7：
一种来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717，已于2013年1月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址是：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号(100101)电话：64807355保藏号为：CGMCC No.7084。
鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717，是由采集于自然发酵豆制品中，经分离、纯化、物理诱变、优选获得的高活性菌株，置于37℃恒温培养箱中进行培养，通过培养菌生长较良好，菌落分散，大小不一，菌落呈圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，其中较小的菌落微黄色。
优化所获得的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717，培养 条件为：培养基为蛋白胨10份、牛肉膏10.份、酵母膏5份、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2份葡萄糖(C6H12O6·H2O)20份、吐温801份、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5份、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2份、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58份、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25份、琼脂18份、蒸馏水1000份、pH 6.2～6.6，37℃恒温培养。
革兰氏染色结果呈阳性；芽孢染色菌体呈绿色；接触酶试验中没有气泡产生；溶钙圈法培养可以观察到菌落周围出现透明圈，经高级全自动细菌鉴定/药敏***(VITEK 2Compact)具备明显乳酸菌的特征。
表3：鼠李糖乳杆菌HLH 20120717经VITEK 2Compact鉴定结果
经16S rDNA部分序列在线进行BLAST比对，结果具有Lactobacillus菌属rhamnosus菌种的主要遗传特性。
表：鼠李糖乳杆菌HLH 20120717经VITEK 2Compact鉴定结果
黑龙江大学 
实施例8：
采用鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717发酵酸豆浆工艺：
称取100g大豆清洗后放于250mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水洗净,将浸泡好的大豆以1∶8的豆水比用组织捣碎机磨浆，加热至沸腾10分钟后用，三层纱布过滤后。倒入三角瓶中于121℃灭菌15min,五层纱布封口冷却后，无菌用接种环挑去MRS试管斜面培养的李糖乳杆菌HLH 20120717菌落，大约五环，振摇均匀后，放置在37℃培养12小时，冷却至室温，后放入冰箱4℃冷存，备用于后续发酵。
同上称取2000g大豆清洗后放于50000mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水洗净,将浸泡好的大豆以1∶8的豆水比用豆浆机磨浆，加热至沸腾后，离心过滤出去豆渣。经巴士灭菌器135℃灭菌10秒快速灭菌，置于清洗灭菌好的发酵罐中,按5％体积比例加入上述备用的发酵豆浆，以30r/min,37-40℃的发酵2小时，而后部分以每杯100mL分装、密封于150mL酸奶塑料杯里，室温(25℃左右)发酵12小时后，放入冰箱4℃冷存。
剩余部分置于清洗灭菌好的100mL大烧杯中，五层纱布封口后室温发酵24个小时以上，当pH达到4.9以下，酸豆浆呈凝固状，搅拌器将酸豆浆都搅成可流动性状，平铺2cm厚度的珐琅盘中，-40℃到30℃冷冻干燥，成松脆黄色固体状，粉碎成100目的粉末，经凯氏定氮法测定蛋白含量47％。密封低温干燥保存备用。
实施例9：
发酵豆浆检测样品的制备
将上述贮存于酸奶包装塑料杯中的酸豆浆加入等体积蒸馏水(100ml)，用搅拌器混匀后，8000r/min离心10min，收集上清液、检测PH值，用5mol/L的NaOH和0.1mol/LNaOH调节其pH至8.2-8.4，再以8000r/min下离心10min，取上清液于-4℃保存。备用
豆浆检测样品的制备
将上述制备发酵豆浆所用的经巴士灭菌后的豆浆，量取100ml加入等体积蒸馏水(100ml)，8000r/min离心10min，收集上清液、检测PH值，用5mol/L的NaOH 和0.1mol/LNaOH调节其pH至8.2-8.4，再以8000r/min下离心10min，取上清液于-4℃保存。备用
对照品溶液配制：(0.1mol/L pH8.3硼酸盐缓冲液)
分别称取19.068g四硼酸钠与8.766gNaCl，加入400mL蒸馏水溶解，用5M NaOH调pH到8.3，用蒸馏水定容至500mL。备用
用可见分光光度法检测发酵豆浆测抑制ACE活性操作
分别量取提前37℃预热10min的50μL(1mmol/L)FAPGG、40μL(0.1U/mL)ACE，分别迅速加入到三组装有40μL发酵豆浆样品液、40μL豆浆溶液和40μL对照品液96孔培养板中，混匀，37℃下分别在0min、30min时于酶标仪340nm波长下连续测定吸光值三次。按如下公式计算。
其中A：30min后对照组吸光值减小值；B：30min后样品组吸光值减小值。
检测结果：检测发酵豆浆及其对照品抑制ACE酶活性结果 
表：检测发酵豆浆及其对照品抑制ACE酶活性结果
检测结果表明：李糖乳杆菌HLH 20120717发酵制备的酸豆浆具有显著的抑制ACE酶活性。
16S rDNA测序部分序列如下所示：
。
<110>黑龙江大学
<120>来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶（ACE）作用的鼠李糖乳杆菌
<141>日期
<160>1
<210> Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717
<211>1562
<212>RNA
<213>鼠李糖乳杆菌
<223> n =a或g或c或t
<400>核苷酸序列和/或氨基酸序列
 
aaggaggtgatccagccgca ggttctccta cggctacctt gttacgactt caccctaatc  60
atttgtcccaccttagacgg ctcgctccct aaaagggtta cgccaccggc ttcgggtgtt  120
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gtgctgatccgcgattacta gcgattccga cttcgtgtag gcgagttgca gcctacagtc  240
cgaactgagaatggctttaa gagattagct tgacctcgcg gtctcgcaac tcgttgtacc  300
atccattgtagcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca taatgatttg acgtcatccc  360
caccttcctccggtttgtca ccggcagtct tactagagtg cccaactaaa tgctggcaac  420
tagtcataagggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac  480
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accgcttgtgcgggcccccg tcaattcctt tgagtttcaa ccttgcggtc gtactcccca  660
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attcatcgtttacggcatgg actaccaggg tatctaatcc tgttcgctac ccatgctttc  780
gagcctcagcgtcagttaca gaccagacag ccgccttcgc cactggtgtt cttccatata  840
tctacgcatttcaccgctac acatggagtt ccactgtcct cttctgcact caagtttccc  900
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ctgcgctcgctttacgccca ataaatccgg ataacgcttg ccacctacgt attaccgcgg  1020
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ctctgccgaccattcttctc caacaacaga gttttacgac ccgaaagcct tcttcactca  1140
cgcggcgttgctccatcaga cttgcgtcca ttgtggaaga ttccctactg ctgcctcccg  1200
taggagtttgggccgtgtct cagtcccaat gtggccgatc aacctctcag ttcggctacg  1260
tatcattgccttggtgagcc gttacctcac caactagcta atacgccgcg ggtccatcca  1320
aaagcgatagcttacgccat ctttcagcca agaaccatgc ggttcttgga tttatgcggt  1380
attagcatctgtttccaaat gttatccccc acttaagggc aggttaccca cgtgttactc  1440
acccgtccgccactcgttca aaattaaatc aagatgcaag cacctttcaa taatcagaac  1500
tcgttcgacttgcatgtatt aggcacgccg ccagcgttca tcctgagcca ggatcaaact  1560
ct  1562
 

Claims (7)

1.一种来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其特征是：由采集于自然发酵豆制品中，经分离、纯化、物理诱变、优选获得的高活性菌株，菌学分类名称actobacillus rhamnosus HLH 20120717，菌学特性为：置于37℃恒温培养箱的培养基中进行培养，通过培养发现稀释浓度为10-5时菌生长较良好，菌落分散；在相同条件下菌落生长有大有小，菌落呈圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，其中较小的菌落微黄色；保藏号为：CGMCC No.7084。
2.根据权利要求1所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其特征是：其菌学特性还包括：革兰氏染色结果呈阳性；芽孢染色菌体呈绿色；接触酶试验中没有气泡产生；溶钙圈法培养观察到菌落周围出现透明圈，具备明显乳酸菌的特征。
3.根据权利要求1或2所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其特征是：经16S rDNA部分序列在线进行BLAST比对，结果具有Lactobacillus菌属rhamnosus菌种的主要遗传特性：
16S rDNA测序部分序列如下所示：
<110>黑龙江大学
<120>来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌
<141>日期
<160>1
<210>Lactobacillus rhamnosus HLH 20120717
<211>1562
<212>RNA
<213>鼠李糖乳杆菌
<223>n＝a或g或c或t
<400>核苷酸序列和/或氨基酸序列
4.根据权利要求1或2或3所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，其特征是：所述培养基处方为：
所述的比例为重量份数比。
5.一种利用权利要求1或2或3或4所述的鼠李糖乳杆菌制作的豆浆，其特征是：将权利要求1或2或3或4所述的菌株接种于经大豆浸泡，研磨、匀浆、煮沸，过滤、高温灭菌制得的豆浆中，37℃-42℃发酵24小时以上，制得酸豆浆。
6.一种权利要求5所述的豆浆的制作方法，其特征是：
称取100g大豆清洗后放于250mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水洗净,将浸泡好的大豆以重量比1∶8的豆水比用组织捣碎机磨浆，加热至沸腾10分钟后用，三层纱布过滤后。倒入三角烧瓶中于121℃灭菌15min,纱布封口冷却后，无菌条件下用接种环挑去MRS试管斜面培养的李糖乳杆菌HLH 20120717菌落五环，振摇均匀后，放置在37℃培养12小时，冷却至室温，后放入冰箱4℃冷存，作为备用的豆浆；
同上称取2000g大豆清洗后放于50000mL自来水中于室温下浸泡12h；经去皮后,清水洗净,将浸泡好的大豆以1∶8重量比的豆水比用豆浆机磨浆，加热至沸腾后，离心过滤出去豆渣；经巴士灭菌器135℃灭菌10秒快速灭菌，置于清洗灭菌好的发酵罐中,按5％体积比例加入上述备用的发酵豆浆，以30r/min,37-40℃的发酵2小时，而后分装、密封到酸奶塑料杯里，室温发酵12小时后，放入冰箱4℃冷存；
剩余部分置于清洗灭菌好的大烧杯中，纱布封口后室温发酵24个小时以上，当pH达到4.9以下，酸豆浆呈凝固状，搅拌器将酸豆浆都搅成可流动性状，平铺2cm厚度的珐琅盘中，-40℃到30℃冷冻干燥，成松脆黄色固体状，粉碎成100目的粉末，经凯氏定氮法测定蛋白含量47％。密封低温干燥保存。
7.一种将权利要求1或2或3或4所述的来源于发酵豆浆具有抑制血管紧张素酶(ACE)作用的鼠李糖乳杆菌，用于制作抑制血管紧张素酶(ACE)、用于制作预防和治疗高血压的保健食品和药品的用途。
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