CN104546993A - 治疗黑眼圈的药物组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗黑眼圈的药物组合物及其制备方法与用途，本发明原材料均为天然活性成分，对皮肤无刺激性。所述具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，是以白花败酱、六月青、毛冬青、透骨草、积雪草、天山雪莲、金挖耳和飞机草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的30％。本发明的药物组合物原料获取简单，制备方法便捷。临床试验结果证实：本发明的药物组合物治疗黑眼圈效果具有良好的效果，对皮肤无刺激性和致敏性，易于被广大消费者接受，具有良好的应用前景和市场前景。

Description

治疗黑眼圈的药物组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法与用途，特别是一种具有治疗黑眼圈作用的化妆品用药物组合物及其制备方法与用途。

背景技术

身体皮肤以眼周部分最薄，且黑色素活动非常旺盛，加上年龄增长、外来刺激等因素作祟，很容易出现各种问题，黑眼圈的出现就在所难免！所谓黑眼圈，即为当眼部静脉血管血流速度过于缓慢，眼部皮肤红血球细胞供养不足，静脉血管中二氧化碳及代谢废物积累过多，形成慢性缺氧，血液较暗并形成滞留以及眼部色素沉着在眼部形成的青蓝色或深褐色的阴影。中医称“睑黡”。临床表现：男女都可发病，女多于男；可见于任何年龄，少数自***开始发病；患者大多无自觉症状；皮损特点为上下眼睑的皮肤呈现青黑色，界限清楚；可伴有精神紧张、面无光泽、神情憔悴、用眼疲劳、***、甲亢等病史；睡眠不足，夜生活频繁，吸烟喝酒可致本病加重。开发治疗黑眼圈效果更好的天然药物已经成为药物学家和皮肤学家普遍关心的科学问题。如专利申请号201110400186.6，该申请中公开了一种具有祛除黑眼圈功效的中药组合物、制剂及其制备方法，所述组合物由下述重量份配比的原料药组成：黄芪40-60份、葛根10-30份、枳实10-30份、姜黄10-30份。再如专利申请号201210245706.5，该专利公开了一种抗黑眼圈眼霜，其配方按重量份包括如下组分：茉莉纯露50-60：貂油8-12：葛根油7-9：橄榄油1-3：小烛蜜蜡1-2：植物美白剂1-2：植物胶原蛋白1-2：防腐剂0.8-1.2。再如专利申请号201210295087.4，该专利公开了一种抗黑眼圈脂质纳米粒乳液及其制备方法，所述乳液包括以下组分，乳香树脂提取物、欧洲七叶树籽提取物、四氢胡椒碱的混合物0.5-7.3％，硬脂酸单甘酯或植物油脂或硬脂酸单甘酯与植物油脂的混合物1.0-19.6％乳化剂0.5-11.8％，防腐剂0.006-1.3％，余量为水。再如专利申请号201010563016.5，该专利公开了一种黑眼圈增白抗皱霜。由70-80％的水、5-10％丁二醇、1-3％的硬脂醇、1-3％的聚山梨醇酯-60、1-3％的甘油硬脂酸、1-3％的山梨坦硬脂酸酯、2-6％的霍霍巴油、0.5-2％的维生素E、0.5-2％的辅酶Q10、0.5-2％的二棕榈酰羟脯氨酸、0.1-1％的薰衣草油、0.1-1％的极大螺旋藻提取物、0.1-1％麦饭石和0.1-1％的双(羟甲基)咪唑烷基脲组成。

综上所述，黑眼圈是由于经常熬夜，情绪不稳定，眼部疲劳、衰老，静脉血管血流速度过于缓慢，眼部皮肤红血球细胞供氧不足，静脉血管中二氧化碳及代谢废物积累过多，形成慢性缺氧，血液较暗并形成滞流以及造成眼部色素沉着，也就是我们常说的“熊猫眼”。深深的黑眼圈会让人看起来无精打采，很影响形象，因此，开发新型安全有效的外用治疗黑眼圈的产品具有良好的社会和经济效益。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种具有治疗黑眼圈作用的药物组合物及其制备工艺。

本发明所述的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，是以白花败酱、六月青、毛冬青、透骨草、积雪草、天山雪莲、金挖耳和飞机草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的30％。

治疗黑眼圈的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的：白花败酱1～60份，六月青1～60份，毛冬青1～60份，透骨草1～60份，积雪草1～60份，天山雪莲1～60份，金挖耳1～60份，飞机草1～60份。

治疗黑眼圈的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的：白花败酱1～50份，六月青1～50份，毛冬青1～50份，透骨草1～50份，积雪草1～50份，天山雪莲1～50份，金挖耳1～50份，飞机草1～50份。

优选的，所述具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱1～40份

六月青1～40份

毛冬青1～40份

透骨草1～40份

积雪草1～40份

天山雪莲1～40份

金挖耳1～40份

飞机草1～40份

优选的，所述具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱2～35份

六月青2～35份

毛冬青2～35份

透骨草2～35份

积雪草2～35份

天山雪莲2～35份

金挖耳2～35份

飞机草2～35份

优选的，所述具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱8～30份

六月青8～30份

毛冬青8～30份

透骨草8～30份

积雪草10～30份

天山雪莲10～30份

金挖耳10～30份

飞机草10～30份

最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱10份

六月青10份

毛冬青10份

透骨草10份

积雪草10份

天山雪莲10份

金挖耳10份

飞机草10份

最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱8份

六月青8份

毛冬青8份

透骨草12份

积雪草12份

天山雪莲12份

金挖耳12份

飞机草12份

最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱8份

六月青8份

毛冬青15份

透骨草15份

积雪草15份

天山雪莲15份

金挖耳15份

飞机草15份

最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱10份

六月青10份

毛冬青10份

透骨草12份

积雪草12份

天山雪莲12份

金挖耳12份

飞机草12份

最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：

白花败酱8份

六月青8份

毛冬青8份

透骨草10份

积雪草10份

天山雪莲15份

金挖耳15份

飞机草15份

本发明所述的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将上述的各个原料置于体积浓度为20％～80％的乙醇中浸泡2～48小时，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；

优选的，过滤残渣再用体积浓度为20％～80％的乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。

(2)浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5～95％的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物；

优选的，乙醇的体积浓度为40％～95％；

所述大孔树脂采用日本三菱化学公司以聚苯乙烯-二乙烯基苯为基体的HP825L型大孔树脂；浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓缩。

试验证明，本发明的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，具有等多重作用，能够用于制备治疗黑眼圈的化妆品和皮肤的治疗性药物；

本发明还涉及一种皮肤保养化妆品，包括所述具有治疗黑眼圈作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料；

本发明还涉及一种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物和医学上可接受的载体。

尤其可以用于制备眼部周围皮肤护理化妆品，包括包括眼霜、精华液、涂搽剂和洗剂，但不局限于上述剂型，可按照护肤品工业领域中已知的方法，将上述药物组合物按已知方法除菌后制成各种不同的外用制剂；

制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的10％～50％，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5％～10％。

黑眼圈常表现为下睑皮肤颜色灰暗，包括过多的色素沉着、皮肤松弛和泪槽形成的阴影、下睑皮肤的菲薄和透明化，影响面部美观。医学界对黑眼圈越来越多的重视主要源于美容界近些年来对它越来越多的关注，尽管它既不会威胁健康，也不会造成疾病而引起任何病理性改变，但是它会严重影响个人的情绪和自我感受。尤其很多女性被其严重困扰，甚至影响到她们的生活质量。黑眼圈会使人看起来疲倦、悲伤、无精打采，这使得很多人在工作和社交时要对黑眼圈进行掩饰。中医认为，眼圈发黑是肾亏所致，黑乃肾之本色，眼晴靠五脏精气的滋养，如房事过度，肾精亏少则两目缺少精气的滋润，而肾之黑色浮于上所以两目无神，眼圈发黑。

本发明根据文献记载和大量实验筛选，从大量的天然植物中，选用了白花败酱、六月青、毛冬青、透骨草、积雪草、天山雪莲、金挖耳和飞机草为原料，制备获得了所述的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物，其中，所述的白花败酱选用败酱科植物Patrinia villosa Juss.的干燥全草；六月青选用爵床科植物肖鸡笼Taraphochlamys affinis(G riff)Bremekhu[Strobilanthesaffinis(Griff)Y.C.Tang]的干燥地上部分；毛冬青选用冬青科冬青属植物毛冬青(Ilx pubescensHook.et Am.)的干燥根；透骨草选用紫葳科角蒿属草植物Incarrillea sinensis LaM.的干燥全草；积雪草选用积雪草属伞形科植物Centella asialica(L.)的干燥全草；天山雪莲选用菊科风毛菊属雪莲亚属草本植物Saussurea involucrate (Kar.et Kir.)Sch.Bip的干燥花；金挖耳为菊科天名精属植物Carpesium divaricatum Sieb.et Zucc.的干燥全草；飞机草选用菊科泽兰属多年生草本植物Eupatorium odoratum L.的干燥全草。

根据文献记载：

六月青为爵床科植物肖鸡笼Taraphochlamys affinis(G riff)Bremekhu[Strobilanthes affinis(Griff)Y.C.Tang]的干燥地上部分，是一种广西民间草药，《本草拾遗》记载其根能活血、凉血、疏肝泻湿、消肿止痛，目前临床主要用于急慢性肝炎、黄疸等病的治疗。

白花败酱(Phylanthus urinaria L.)是败酱草的来源之一，为败酱科多年生草本植物白花败酱Patrinia villosa Juss.的干燥带根全草，又名苦菜、苦斋、鹿肠，广泛分布于我国南方各省，因含有多种氨基酸、维生素和矿物质等有益成分而被广泛食用。败酱始载于《神农本草经》，具有清热解毒，利湿排脓，活血化瘀，镇心安神的功效，临床上常用于治疗阑尾炎，肺脓痈，结核瘰疬，痈肿疮毒，肠炎，痢疾，肝炎，扁桃体炎，眼结膜炎，产后瘀血腹痛，咯血，衄血，神经衰弱，心脏神经官能症等。药理学研究表明，败酱草具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、镇静和升高白细胞等作用，毒副作用极小。

毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青(Ilx pubescens Hook.et Am.)的干燥根或叶，具有活血通脉、消肿止痛、清热解毒的功效，是我国南方常用的中药材。毛冬青的化学成分研究表明其主要含有三萜及其苷、木脂素、环烯醚萜等类型化合物，其中三萜及其苷类是毛冬青的主要成分。药理学研究显示毛冬青具有抗动、静脉血栓、扩张外周血管、抑制血小板聚集、调节机体免疫状态等作用，临床上，毛冬青各类制剂广泛用于治疗冠心病、脑血栓、血栓性脉管炎、糖尿病足等多种疾病。

透骨草是紫葳科角蒿属草植物Incarrillea sinensis LaM.的干燥全草，别名疥草、毒蛆草、接生草。主要分布在辽宁、吉林、河北、河南、山东、陕西等地，性味甘、辛，温，入肺、肝二经，具有祛风、除湿、舒筋活血、止痛等功效，临床上用于治疗风湿痹痛、寒湿脚气、阴囊湿疹，疮疡肿毒等症。

积雪草是积雪草属伞形科植物Centella asialica(L.)的干燥全草，又名连线草、地线草、老公根等。积雪草为多年生匍匐草本植物，常卷缩成团状，其茎细长，结节生根。原产于印度，现广泛分布于世界热带、亚热带区，在我国主要分布于长江以南各省。积雪草喜生于湿润的河岸、沼泽、草地中。陶弘景曰：此草以寒凉得名，其性大寒，故名积雪草。积雪草始载于《神农本草经》，具有清热解毒、消肿利湿之功效。用于湿热黄疸、中暑腹泻、砂淋血淋、痈肿疮毒、跌扑损伤。药理研究表明：积雪草提取物具有出色的愈合伤口和疤痕修复作用，其原因在于积雪草苷有促进体内胶原合成和新血管生成、刺激肉芽生长等重要作用，故而有利于伤口愈合。如在皮肤创面上连续施用含积雪草苷的制剂，可防止伤口感染化脓，缩短伤口愈合时间，可降低皮肤硬度和改善皮肤营养，促进新陈代谢作用。

天山雪莲是菊科风毛菊属雪莲亚属草本植物Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.Bip的干燥花，又名新疆雪莲、大苞雪莲。天山雪莲是新疆特有的名贵中草药，当地人奉雪莲为“百草之王”、“药中极品”。天山雪莲生长于雪线以上海拔在2600-4000米的高山砾石及石缝里。在天山南北坡均有分布，特别是在新疆的伊犁地区有着丰富的资源。早在清代《本草纲目拾遗》中已有对天山雪莲的记载，称雪莲“性大热，能补精益阳”。《新疆中草药》称：“雪莲性温、微苦，功能祛风除湿”。目前对天山雪莲的研究结果表明，其有效成分主要为黄酮类化合物和多糖。天山雪莲具有祛风湿、通经活血、暖宫散瘀、壮阳补血等功效，临床用于治疗风湿痹痛、***、宫冷小腹冷疼、肾虚腰痛、麻疹不透等症。近年来，雪莲作为民族药在抗早孕、抗衰老及抑制肿瘤细胞增殖方面的作用倍受关注。

金挖耳为菊科天名精属植物Carpesium divaricatum Sieb.et Zucc.，生长于山野草丛中，主要分布于四川、贵州、湖南、福建以及东北等地。其根及茎基部均可供药用。其味辛苦涩，性凉无毒常用作清热解毒剂，治疗感冒、头风、泄泻、咽喉肿痛、赤眼、痈肿疮毒、痔核出血等症。

飞机草为菊科泽兰属多年生草本植物Eupatorium odoratum L.，在我国主要分布于广东、海南、广西、云南、贵州(西南部)等地。飞机草全草入药，在我国亦是民间常用草药，具有散瘀消肿、解毒、止血和杀虫功效，主要用于跌打肿痛、疮疡肿毒、皮炎和外伤出血。现代药理学研究表明飞机草叶的提取物具有抑制绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、***的活性，并可促进伤口的愈合。

目前，国内外尚未见将白花败酱、六月青、毛冬青、透骨草、积雪草、天山雪莲、金挖耳和飞机草的组合物用于治疗黑眼圈的相关报道。

综上所述，黑眼圈的形成主要与色素沉着和血管改变有关，其原因主要与一些不良生活习惯如熬夜、吸烟、饮酒、情绪困扰及使用化妆品情况有关。目前黑眼圈缺乏有效的外用护肤品，本发明的有益效果在于根据黑眼圈的病因和病理机制，查阅了大量专著和文献，先后筛选多种天然植物，终于筛选出能够有效治疗黑眼圈的药物组合物。本发明的药物组合物原料获取简单，制备方法便捷。临床试验结果证实：本发明的药物组合物治疗黑眼圈效果具有良好的效果，对皮肤无刺激性和致敏性，易于被广大消费者接受，具有良好的应用前景和市场前景。

本发明上述发明内容部分已经对本发明的技术方案做了详细的描述，本领域技术人员根据上述内容即可重复本发明并获得本发明所述的技术效果。下面通过具体实施方式对本发明内容作进一步的解释，以使本领域技术人员更清楚地理解本发明，并非对本发明的限制，任何等同替换或公知改变均属于本发明保护范围。

具体实施方式

实施例1

在室温下，取白花败酱10公斤、六月青10公斤、毛冬青10公斤、透骨草10公斤、积雪草10公斤、天山雪莲10公斤、金挖耳10公斤、飞机草10公斤(共80公斤)，用体积浓度70％的乙醇800公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70％的乙醇800公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。

实施例2

在室温下，取白花败酱8公斤、六月青8公斤、毛冬青8公斤、透骨草12公斤、积雪草12公斤、天山雪莲12公斤、金挖耳12公斤、飞机草12公斤(共84公斤)，用体积浓度50％的乙醇1680公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50％的乙醇1680公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。

实施例3

在室温下，取白花败酱8公斤、六月青8公斤、毛冬青15公斤、透骨草15公斤、积雪草15公斤、天山雪莲15公斤、金挖耳15公斤、飞机草15公斤(共106公斤)，用体积浓度80％的乙醇1060公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80％的乙醇1060公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。

实施例4

在室温下，取白花败酱10公斤、六月青10公斤、毛冬青10公斤、透骨草12公斤、积雪草12公斤、天山雪莲12公斤、金挖耳12公斤、飞机草12公斤(共90公斤)，用体积浓度30％的乙醇2700公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度30％的乙醇2700公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。

实施例5

在室温下，取白花败酱8公斤、六月青8公斤、毛冬青8公斤、透骨草10公斤、积雪草10公斤、天山雪莲15公斤、金挖耳15公斤、飞机草15公斤(共89公斤)，用体积浓度60％的乙醇1335公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60％的乙醇1335公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。

实施例6

将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的10％～50％，得药物组合物浓缩液，用于制备治疗黑眼圈的精华液，组分的重量百分比如下：

生产工艺：将透明质酸钠加入水中搅拌分散均匀，然后依次加入其它成分，70℃情况下搅拌均匀即可。

本发明较佳实施例所用的基质成分如上所述，本实施例所用的基质成分可以将本发明的药物组合物的功效发挥到最佳。但其它厂家生产的可应用于化妆品的常用基质也可用于本发明，用量只要符合国家化妆品添加剂用量标准即可，不会影响本发明效果，因此不一一列举。

本发明所用的均质乳化设备为上海弗鲁克流体机械制造有限公司生产的FV-30L FISCO真空均质乳化机，其有均质、搅拌和温控等功能。其它厂家生产的用于化妆品制备的均质乳化设备也可以用于本发明，只要严格按照本发明所述的工艺参数进行操作，均可达到本发明所述的效果。

实施例7

药物组合物治疗黑眼圈的临床试验研究报告：下述实验中，所用的药物组合物为实施例6的化妆品配方制备的治疗黑眼圈的眼霜。

1.材料与方法

1.1黑眼圈患者的病例选择56例女性患者，年龄20～40岁，平均为33岁，其中，FitzpatrickIII型皮肤者48例，IV型皮肤者8例。黑眼圈主要表现为下睑静脉的显露，未做过其它治疗。随机分为治疗组(30例)和对照组(26例)，两组在性别、年龄、病情方面无显著差别。

1.2治疗方法治疗组的含有本发明药物组合物的眼霜由众合国际科技有限公司提供，清洁面部后按常规方法将眼霜涂抹于黑眼圈处，3次/天。对照组：不含本发明药物组合物的眼霜，也是清洁面部后按常规方法将眼霜涂抹于黑眼圈处，3次/天。治疗60天后观察疗效，进行疗效评价，并记录不良反应。

1.3.疗效观察指标及评分标准：治疗前和治疗60天后随访并拍照，由两名经验丰富的美容师对治疗效果进行评价，病灶清除率采用四级评价标准，即痊愈：黑眼圈消退达90％～100％；显效：黑眼圈消退达70％～89％；有效：黑眼圈消退30％～69％；无效：黑眼圈消退在30％以下或者无明显变化。有效率以痊愈加显效加有效计。

2.结果

治疗组和对照组在改善面部红血丝患者客观体征方面的疗效有极显著性差异(P＜0.1，表1)，含有本发明药物组合物的眼霜能显著改善绝大多数患者的黑眼圈。

表1两组患者客观体征改善情况

产品安全性评估治疗前后均未发生不良反应，无1例患者脱落。整个研究过程未发生与含有本发明药物组合物的眼霜相关的不良反应事件。

采用其它实施例的具有治疗黑眼圈作用的药物组合物进行临床试验，结果也证明具有相同的作用。这说明本发明的药物组合物是目前治疗黑眼圈理想的外用护肤品，其安全性好、不良反应小、适应性强，值得推广应用。

实施例8

治疗黑眼圈的药物组合物的皮肤刺激性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的治疗黑眼圈药物组合物急性眼刺激、多次接触家兔的完整皮肤和破损皮肤所产生的皮肤局部刺激反应及过敏反应情况。下述实验中，所用的药物组合物为实施例1的药物组合物。

1动物

16只普通级成年健康新西兰兔，雌雄各半，2.5kg～3.5kg，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2012A016。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。

2方法

(1)依据中华人民共和国***《化妆品卫生规范(2007年版)》，采用同体自身左右侧对比法，将受试家兔固定于兔固定盒中，轻轻拉开试验兔右侧眼睛的下眼睑，取0.1mL药物组合物挤入结膜囊内，并使上、下眼睑被动闭合1秒。左侧眼不处理作自身对照。滴入受试物后1、24、48、72h对家兔双侧眼睛进行检查，并按照我国《化妆品卫生规范》(2007年版)中的评分标准对结膜、角膜、虹膜刺激反应进行评分。在给受试物前20h和给受试物后24h分别应用荧光素钠对家兔双侧眼睛进行检查。检查方法：将1％的荧光素钠溶液滴入试验兔眼内，被动闭合约10秒，再用生理盐水进行冲洗，随后对角膜检查是否有荧光素钠着色的斑点以判断角膜是否有损伤。

(2)完整皮肤的刺激试验：依据中华人民共和国***《化妆品卫生规范(2007年版)》，采用同体自身左右侧对比法，给药前准备：给药前24h，采用剃毛法去除家兔背部脊柱两侧被毛，去毛范围左、右各约3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm，勿损伤皮肤。给药：左侧空白基质(生理盐水)作为对照，右侧背部去毛区涂抹药物组合物(1.0g/只)，用干净纱布包扎，固定4h后，用温水清洁给药部位。每天涂抹1次，连续14d。在每次去除药物以及再次涂药前观察红斑及水肿、涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况以及发生时间及消退时间，并对红斑及水肿进行评分。末次涂药后，在去除药物后30-60min、24h、48h和72h肉眼观察并记录涂抹部位有无红斑、水肿以及色素沉着、出血点、皮肤柔软等情况。

(3)破损皮肤的刺激试验：依据中华人民共和国***《化妆品卫生规范(2007年版)》，采用同体自身左右侧对比法，试验前24h剪去家兔背部两侧皮毛，去毛范围左、右各约3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm。用刀片轻轻划一井字形破损，以渗血为度。而后立即左侧空白基质(生理盐水)作为对照，右侧背部去毛区涂抹药物组合物(1.0g/只)，用干净纱布包扎，固定4h后，用温水清洁给药部位。每天涂抹1次，连续14d。在每次去除药物以及再次涂药前观察红斑及水肿、涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况以及发生时间及消退时间，并对红斑及水肿进行评分。末次涂药后，在去除药物后30-60min、24h、48h和72h肉眼观察并记录涂抹部位有无红斑、水肿以及色素沉着、出血点、皮肤柔软等情况。

3结果

(1)急性眼刺激性试验结果表2的结果显示本发明的药物组合物对家兔的眼睛无刺激性。试验兔右眼在挤入药物组合物0.1mL后，3只试验兔均表现闭眼，无明显分泌物，无明显水肿。各时间观察点眼刺激反应。在给予受试物不冲洗后1、24、48、72h各时间观察点眼刺激反应积分均为0分。

表2 1.0g/只药物组合物对家兔眼睛刺激作用

(2)完整皮肤的刺激试验：表3的结果显示本发明的药物组合物对家兔完整皮肤无刺激性。病理组织学检查试验结果：对照组及药物组合物组家兔皮肤上皮细胞形态未见异常，真皮及皮下组织未见血管扩张及炎性细胞浸润及胶原纤维增生。

表3 1.0g/只药物组合物对家兔完整皮肤刺激作用

(3)破损皮肤的刺激试验：药物组合物组的16只家兔无红斑，无水肿、色素沉着等情况(表4)。病理组织学检查试验结果：对照组及药物组合物组家兔皮肤上皮细胞形态未见异常，真皮及皮下组织未见血管扩张，未见明显胶原纤维增生，可见轻度炎性细胞浸润。因此本发明的药物组合物对家兔破损皮肤无刺激性。

表4 1.0g/只药物组合物对家兔破损皮肤刺激作用

实施例10

治疗黑眼圈的药物组合物的皮肤致敏性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的治疗黑眼圈药物组合物对Hartley豚鼠皮肤的致敏性。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物。

1动物

选用普通级Hartley豚鼠50只，雌雄各半，体重范围180～250g，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2012A064。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。按编号对豚鼠进行皮肤染色，用饱和苦味酸溶液(黄色)染色标记个位数，用2％硝酸银溶液(咖啡色)染色标记十位数；按性别分开饲养，每一笼盒放5只豚鼠，笼盒外贴上标签，标示专题编号、动物类别、组别、性别、给药途径、笼号、动物编号及预计试验起止日期等信息。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g药物/只。

2方法

依据国家《药品注册管理办法》、《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》。随机分为空白基质组、阳性对照组、药物组合物组，其中空白基质组10只豚鼠，其余各组20只豚鼠。各组豚鼠雌雄各半。先后进行诱导致敏和激发接触实验，两个实验之间相隔10天的洗脱期。诱导接触实验方法为前24h备皮，剪去豚鼠脊柱两侧各2cm×2cm区域的被毛。阳性对照组：取2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，分别用两层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层保鲜薄膜覆盖，以无刺激纱布覆盖6h，移去覆盖物，用温水清除残留受试样品，第7天和第14天，以同样方法重复一次；在空白基质组动物相同部位涂空白基质0.1g，药物组合物组涂0.1g。按同样的步骤进行诱导接触。激发接触则是在末次给受试物致敏接触后14天(即实验第28天)，在药物组合物组豚鼠背部备皮处涂敷0.1g的药物组合物，封包和固定，6h后去掉受试物，立刻观察，然后于24h、48h和72h再次观察皮肤过敏反应情况。阳性对照组用2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，空白基质组动物相同部位涂空白基质0.1g。在致敏后1h、24h及激发后24h、48h和72h观察给药局部皮肤红斑、水肿和其他异常反应。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，并计算各组的过敏反应发生率，按皮肤过敏性评价标准判断过敏反应发生程度。过敏反应发生率＝(组内出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物数/该组动物总数)×100％。

3结果：

激发接触实验后24h、48h和72h，由不知道实验内容的专业人员根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》评判是否出现皮肤致敏反应(表5)，致敏反应评分≥2分时，判定该动物皮肤致敏反应阳性，计算致敏率(≥2分动物数/该组动物总数×100％)，并按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》中皮肤致敏反应试验分级标准判定本发明的药物组合物对豚鼠皮肤的致敏强度(表6)。

表5皮肤致敏反应程度评分标准

首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行评价。按下列公式计算每天每只动物平均积分。

表6皮肤致敏反应程度分级标准

激发后24h、48h和72h，空白基质组、药物组合物组的豚鼠激发部位皮肤均未出现红斑、水肿情况，也未出现其它异常反应，过敏反应发生率均为0，过敏反应评价均为未见皮肤过敏反应(表7)。

激发后6h，2，4-二硝基氯代苯组豚鼠激发部位皮肤全部出现红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价为极强致敏。激发后48h，2，4-二硝基氯代苯豚鼠激发部位皮肤仍全部有红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价仍为极强致敏。

表7药物组合物豚鼠皮肤过敏反应评分

4结论

在本实验条件下，药物组合物对Hartley豚鼠皮肤进行3次致敏和1次激发后未见皮肤过敏反应。

Claims (9)

1.治疗黑眼圈的药物组合物，其特征在于：是以白花败酱、六月青、毛冬青、透骨草、积雪草、天山雪莲、金挖耳和飞机草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的30％。

2.治疗黑眼圈的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的：白花败酱1～60份，六月青1～60份，毛冬青1～60份，透骨草1～60份，积雪草1～60份，天山雪莲1～60份，金挖耳1～60份，飞机草1～60份。

3.根据权利要求2所述的治疗黑眼圈的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的：白花败酱1～50份，六月青1～50份，毛冬青1～50份，透骨草1～50份，积雪草1～50份，天山雪莲1～50份，金挖耳1～50份，飞机草1～50份。

4.根据权利要求1～3任一项所述的治疗黑眼圈的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步：将上述的各个原料置于体积浓度为20％～80％的乙醇中浸泡，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；

第二步：浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度为5～95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，即为所述的治疗黑眼圈的药物组合物。

5.根据权利要求4所述的的治疗黑眼圈的药物组合物的制备方法，其特征在于：第一步中，所述的乙醇浸泡时间为2～48小时；或各个原料先用乙醇浸泡2～48小时，残渣再用乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。

6.根据权利要求4所述的治疗黑眼圈的药物组合物的制备方法，其特征在于：第二步中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为40％～95％。

7.根据权利要求1～3任一项所述的治疗黑眼圈的药物组合物的用途，其特征在于：用于制备皮肤保养化妆品或皮肤的治疗性药物。

8.皮肤保养化妆品，包括权利要求1～3任一项所述的治疗黑眼圈的药物组合物和化妆品领域使用的辅料。

9.皮肤的治疗性药物，包括权利要求1～3任一项所述的治疗黑眼圈的药物组合物和医学上可接受的载体。