CN104546839A

CN104546839A - 喹诺里西丁生物碱的新用途

Info

Publication number: CN104546839A
Application number: CN201510062300.7A
Authority: CN
Inventors: 张连峰; 杨亚军
Original assignee: Institute of Laboratory Animal Science of CAMS
Current assignee: Institute of Laboratory Animal Science of CAMS
Priority date: 2015-02-05
Filing date: 2015-02-05
Publication date: 2015-04-29
Anticipated expiration: 2035-02-05
Also published as: CN104546839B

Abstract

本发明涉及医药领域，尤其涉及喹诺里西丁生物碱的新用途。发明提供了在EV71病毒感染或不感染的条件下，喹诺里西丁生物碱提高T细胞水平中的应用，并提供了喹诺里西丁生物碱在制备防治EV71感染引发疾病的药物中的应用。研究表明，终浓度为60mg/kg/天的喹诺里西丁生物碱，能够使小鼠体内T细胞水平得到显著提高(p<0.01)。对EV71感染小鼠模型，每天给予15mg/kg体重剂量的喹诺里西丁生物碱，持续给药7天，小鼠模型体内的T细胞水平得到显著提高(p<0.01)感染小鼠后肢瘫痪和体重减轻的症状减弱，死亡率降至30％。而未给与喹诺里西丁生物碱的模型小鼠的死亡率为100％。

Description

喹诺里西丁生物碱的新用途

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其涉及喹诺里西丁生物碱的新用途。

背景技术

喹诺里西丁生物碱(quinolizidine)主要分布于豆科植物中，数量众多，主要分为七大类：羽扁豆碱类、鹰爪豆碱类、金雀花碱类、苦参碱类、石松碱类和三环类。其中，苦参碱类因具有广泛的药理活性而应用于临床，代表性化合物有苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱、槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱，结构如下：

喹诺里西丁类生物碱数量众多，生理活性具有多样性，以苦参碱类为例，其生理活性主要涉及：1、对中枢神经***的作用；2、对心血管***的作用；3、抗肿瘤作用；4、抗肝炎和抗肝纤维化作用；5、抗炎作用；6、抗菌、抗病毒作用。其中，抗病毒作用表现在：槐果碱可对抗柯萨奇B病毒、SARS病毒；槐定碱可对抗柯萨奇病毒B3。

T细胞是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝***原的应答反应以及产生细胞因子等。当机体受到外来生物侵袭时，T细胞被激活、增多。T细胞表面带有白细胞分化抗原(CD)，其中，CD3分子表达在全部T细胞上，CD4分子分布在T细胞的辅助细胞诱导亚群和抑制细胞诱导亚群表面，CD8分子分布在抑制性T淋巴细胞和杀伤性T淋巴细胞表面。

人肠道病毒71型为小RNA病毒科肠道病毒属的成员，归属于人类肠道病毒A，简称EV71，常引起手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、迟缓性麻痹、肺水肿、病毒性心肌炎等疾病，统称为肠道病毒71型感染。研究结果表明，感染EV71病毒患者体内T细胞含量降低，且CD4+T淋巴细胞亚群及CD8+T淋巴细胞亚群的百分比降低。

EV71病毒感染多发生于6岁以下的婴幼儿，少数病情较为严重，甚至会引起死亡。该病一年四季都可发生，常见于4-9月份。EV71病毒感染患儿多以发热起病，一般为38℃左右，发热同时，在口腔、手足、臀部出现皮疹，或出现口腔内溃疡、粘膜疹。部分病人早期有咳嗽等感冒样表现。少数患儿可出现严重并发症。这类病人大多持续高热，病情发展迅速，多在发病后3-5天内出现中枢神经***、呼吸***、循环***严重并发症，并可引起死亡，死亡原因主要为脑水肿、脑疝、中枢性呼吸、循环衰竭。EV71病毒在世界范围内多次爆发，经由胃肠道或呼吸道传播，根据***的数据，自2008年到2012年10月，内地儿童手足口病发生率一直居高不下，患病者超过500万人，死亡人数超过2000，疫情依然严峻。目前，对于EV71感染尚没有公认的特效药物或疫苗。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供喹诺里西丁生物碱的新用途。

本发明提供了喹诺里西丁生物碱在提高T细胞水平中的应用。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为苦参碱类。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱、槐定碱、槐果碱或氧化槐果碱。

作为优选，喹诺里西丁生物碱提高T细胞水平的剂量为60mg/kg。

传统认为对依赖T细胞的抗SRBC抗体反应,苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱都有明显抑制作用、槐果碱、槐定碱抑制效应不明显。且有实验结果表明，苦参碱、氧化苦参碱能够抑制T淋巴细胞酯酶染色率，从而产生免疫抑制作用。另有研究结果表明，高浓度(1mg/mL)的氧化苦参碱对小鼠脾T、B淋巴细胞有抑制作用，而低浓度示则有明显的增强作用。

而本发明研究结果表明，终浓度为60mg/kg/天(60mg每kg动物体重每天)的喹诺里西丁生物碱，能够使小鼠体内T细胞水平得到显著提高(p<0.01)。

目前，对喹诺里西丁生物碱的免疫调节作用的研究常在肿瘤或肝炎病毒感染条件下进行。且大量研究结果表明，喹诺里西丁生物碱对肿瘤的抑制作用与免疫调节作用无关，即在肿瘤存在条件下，未表现出增强免疫功能的作用或表现出免疫抑制效应。具体表现为，肿瘤或肝炎病毒感染条件下，喹诺里西丁生物碱对T细胞的酯酶染色率呈抑制作用。

本发明通过实验证实并提供了喹诺里西丁生物碱在EV71感染条件下，提高T细胞水平中的应用。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为苦参碱类。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为氧化槐果碱。

作为优选，T细胞为CD4+T淋巴细胞亚群或CD8+T淋巴细胞亚群。

作为优选，喹诺里西丁生物碱在EV71感染条件下，提高T细胞水平的剂量为15mg/kg/天。

本发明的实验结果表明：对EV71感染小鼠模型，每天给予15mg/kg(15mg每kg动物体重每天)体重剂量的喹诺里西丁生物碱，持续给药7天，小鼠模型体内的T细胞水平得到显著提高(p<0.01)。

本发明还提供了喹诺里西丁生物碱在制备防治EV71感染引发疾病的药物中的应用。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为苦参碱类。

作为优选，喹诺里西丁生物碱为氧化槐果碱。

作为优选，EV71感染引发疾病为手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、迟缓性麻痹、肺水肿或病毒性心肌炎。

本发明通过实验证实；对EV71感染小鼠模型，每天给予15mg/kg体重剂量的喹诺里西丁生物碱，持续给药7天，感染小鼠后肢瘫痪和体重减轻的症状减弱，死亡率降至30％。而未给与喹诺里西丁生物碱的模型小鼠的死亡率为100％。说明喹诺里西丁生物碱对EV71所致感染具有治疗作用。

防治EV71感染引发疾病的药物中包括喹诺里西丁生物碱和药学上可接受的辅料。

作为优选，防治EV71感染引发疾病的药物的剂型为注射剂或口服制剂。

作为优选，口服制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。

本发明提供了在EV71病毒感染或不感染的条件下，喹诺里西丁生物碱提高T细胞水平中的应用，并提供了喹诺里西丁生物碱在制备防治EV71感染引发疾病的药物中的应用。而本发明研究结果表明，终浓度为60mg/kg/天(60mg每kg动物体重每天)的喹诺里西丁生物碱，能够使小鼠体内T细胞水平得到显著提高(p<0.01)。对EV71感染小鼠模型，每天给予15mg/kg(15mg每kg动物体重每天)体重剂量的喹诺里西丁生物碱，持续给药7天，小鼠模型体内的T细胞水平得到显著提高(p<0.01)感染小鼠后肢瘫痪和体重减轻的症状减弱，死亡率降至30％。而未给与喹诺里西丁生物碱的模型小鼠的死亡率为100％。

具体实施方式

本发明提供了喹诺里西丁生物碱的新用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的原料皆为普通市售品，皆可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1喹诺里西丁生物碱提高小鼠体内的T细胞水平

取成年的BALC/c小鼠，体重18-22g，每组6只。喹诺里西丁生物碱用生理盐水溶解，每只小鼠分别给予终浓度为60mg/kg的喹诺里西丁生物碱，以等体积的生理盐水代替喹诺里西丁生物碱作为阴性对照，每天一次，持续给药7天。取血以CD3抗体进行流式细胞仪分析，其结果如表1所示：

表1给药7天后流式细胞仪检测结果

	CD3+T细胞百分比
		阴对照组	36.92％^a
苦参碱	38.46％^a
		氧化苦参碱	43.84％^b
槐胺碱	49.36％^b
		槐定碱	39.17％^a
槐果碱	50.56％^bc
		氧化槐果碱	53.52％^c

注：同类肩标不同字母代表具有显著性差异(p<0.01)

结果表明：给予60mg/kg的喹诺里西丁生物碱的小鼠体内T细胞水平得到显著提高(p<0.01)。

实施例2喹诺里西丁生物碱提高EV71感染小鼠的T细胞水平

使用小鼠为SPF级ICR小鼠，10日龄，雌雄各半，每组20只。首先，腹腔注射EV71病毒对小鼠进行病毒感染，EV71病毒毒株为临床分离株FY0805在小鼠体内的适应株，毒株名为MP10，基因序列在NCBI中的存储号为HQ712020。感染2小时后腹腔注射给予喹诺里西丁生物碱或生理盐水。以喹诺里西丁生物碱用生理盐水溶解，其剂量为15毫克/公斤体重/天；每天给药一次，持续给药7天。以未感染病毒的小鼠为阴性对照；以感染病毒并给与生理盐水的小鼠为阳性对照；以感染病毒并给与喹诺里西丁生物碱的小鼠为实验组。感染后第八天，将小鼠脱颈处死，取血液以CD3、CD4、CD8抗体进行流式细胞仪分析，其中，对给与氧化槐果碱的小鼠的检测结果如表2所示：

表2给药7天后流式细胞仪检测结果

注：同类肩标不同字母代表具有显著性差异(p<0.01)

由表2可知，感染EV71会导致小鼠体内T细胞水平下降，而给予氧化槐果碱能够提高EV71感染小鼠的总T细胞水平，且能够提高体内CD4+T淋巴细胞亚群或CD8+T淋巴细胞亚群水平。其他喹诺里西丁生物碱对EV71感染小鼠的总T细胞水平的影响与此相似。

实施例3喹诺里西丁生物碱对EV71病毒感染小鼠生存率

本实验的目的是验证喹诺里西丁生物碱在小鼠体内对EV71病毒感染的治疗效果，所用模型为中国大陆地区EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型。毒株为临床分离株FY0805在小鼠体内的适应株，毒株名为MP10，基因序列在NCBI中的存储号为HQ712020。以1×10⁷TCID₅₀剂量的MP10病毒经腹腔注射感染10日龄ICR小鼠后，可导致小鼠在4日内表现出后肢瘫痪和体重减轻的症状，并于感染后10天内全部死亡。

应用上述模型，对喹诺里西丁生物碱的治疗效果进行体内评价。使用小鼠为SPF级ICR小鼠，10日龄，雌雄各半，每组20只。首先，腹腔注射MP10病毒对小鼠进行病毒感染，感染2小时后腹腔注射给予喹诺里西丁生物碱，喹诺里西丁生物碱用生理盐水溶解，其剂量为15毫克/公斤体重/天；每天给药一次，持续给药7天。以感染病毒给予等量生理盐水的小鼠为对照组。自病毒感染之日起，持续观察14天，记录小鼠的体重、症状和生存率，评价喹诺里西丁生物碱对EV71病毒感染的治疗效果。结果如表3所示：

表3喹诺里西丁生物碱对EV71病毒感染的治疗效果

	生存率(％)
		对照组	0
苦参碱	20
		氧化苦参碱	25
槐胺碱	25
		槐定碱	20
槐果碱	25
		氧化槐果碱	30

结果显示：每天给予15毫克/公斤体重剂量的喹诺里西丁生物碱，持续给药7天，感染小鼠的体重下降或后肢瘫痪的症状减弱，小鼠的死亡率显著降低。而对照组小鼠14天后全部死亡。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.喹诺里西丁生物碱在提高T细胞水平中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述喹诺里西丁生物碱为苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱、槐定碱、槐果碱或氧化槐果碱。

3.喹诺里西丁生物碱在EV71感染条件下，提高T细胞水平中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述喹诺里西丁生物碱为苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱、槐定碱、槐果碱或氧化槐果碱。

5.根据权利要求3～4任一项所述的应用，其特征在于，所述喹诺里西丁生物碱为氧化槐果碱。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述T细胞为CD4+T淋巴细胞亚群或CD8+T淋巴细胞亚群。

7.喹诺里西丁生物碱在制备防治EV71感染引发疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述喹诺里西丁生物碱为苦参碱、氧化苦参碱、槐胺碱、槐定碱、槐果碱或氧化槐果碱。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述喹诺里西丁生物碱为氧化槐果碱。

10.根据权利要求7～9任一项所述的应用，其特征在于，所述EV71感染引发疾病为手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、迟缓性麻痹、肺水肿或病毒性心肌炎。