CN104546821A - 丹酚酸b在制备治疗硬皮病的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医院化工领域，尤其是涉及一种小分子化合物的新用途，具体地涉及小分子化合物丹酚酸B在制备治疗硬皮病的药物中的用途。本发明提供丹酚酸B在制备治疗硬皮病的药物中的用途，进一步提供相应的药物组合物和药物制剂。本发明发明人通过动物实验显示化合物SAB显著缓解硬皮病小鼠肺纤维化，进一步细胞实验表明，该小分子化合物可抑制TNFα诱导的细胞炎症，并能抑制体外培养的硬皮病病人皮肤成纤维细胞、人胚肺成纤维细胞的增殖及胶原表达，抑制肺上皮细胞向间充质细胞的转化。本发明显示该化合物具有抗硬皮病纤维化的作用，对于硬皮病的预防及治疗具有良好的应用前景。

Description

丹酚酸B在制备治疗硬皮病的药物中的用途

技术领域

本发明涉及医院化工领域，尤其是涉及一种小分子化合物的新用途，具体地涉及小分子化合物丹酚酸B（又称丹参酚酸B、丹酚酸乙）在制备治疗硬皮病的药物中的用途。

背景技术

硬皮病（scleroderma），又称***性硬化症(systemic sclerosis,SSc)，是一以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为特征，并累及心、肺、肾、消化道等内脏器官的自身免疫性疾病，同时伴随有微血管***的损害。自身免疫反应（高免疫球蛋白血症及血清中存在多种自身抗体）、血管病变（小血管内膜损伤以及肢端、内脏频发雷诺现象）和皮肤、内脏组织中的胶原纤维增生是导致***性硬皮病产生多***损害的三大因素。

***性硬皮病病变由躯干向远端扩展，雷诺现象少，病情重，病变进展快，预后差，往往侵犯一个或包括肺、心脏、消化道等在内的多个器官。硬皮病患者四肢近端皮肤受累，导致手指功能障碍，影响患者日常生活工作，症状重的可导致死亡。在美国，***性硬皮病的5年生存率约为50%，与肿瘤相当，而内脏器官的纤维化是引起硬皮病患者高死亡率的最重要因素，累及内脏者，五年生存率低。肺是硬皮病常累及的器官之一，肺纤维化是硬皮病死亡的主要原因。SSc发病率在***病中仅次于类风湿性关节炎、***性红斑狼疮而居第三位。

硬皮病机理研究及治疗现状：现有研究表明硬皮病的发病是在遗传的基础上，在环境因素促发下，导致免疫***紊乱，血管内皮损伤，成纤维细胞激活，多种促胶原增生因子过多释放，胶原等细胞外基质合成与分解失衡，从而导致组织纤维化。硬皮病是一种慢性自身免疫性疾病，以多脏器炎症和弥漫性纤维化为特征。硬皮病进程可分为早期的炎症期及晚期的纤维化期，炎症在硬皮病的发生发展中具有重要作用。人体合成胶原的最主要场所是成纤维细胞，故成纤维细胞的数量及活性与胶原的合成密切相关。在调节细胞外基质代谢的细胞因子中，与细胞外基质积聚关系最密切的是转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）。此外EMT(epithelial-to mesenchymal transition，上皮细胞-间充质细胞转化)在肺纤维化发生过程中发挥重要作用，上皮细胞能够发生EMT，产生成纤维细胞，最终导致组织纤维化。

目前西医主要的治疗措施有以下几个方面：①针对自身免疫紊乱的药物如糖皮质激素、免疫抑制剂CTX等；②调节血管功能异常的药物如***素、钙离子通道抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂；③调节细胞外基质代谢的药物和生物制品如青霉胺、γ干扰素、松弛素（relaxin）等。但是，这些治疗措施效果欠佳，或副作用大，如肾衰、骨髓抑制、肝损伤、肺纤维化等。目前，没有能够改善SSc病情的安全有效的药物或者干预措施存在。在疾病发展早期，免疫抑制剂、抗炎药物或者抗纤维化药物具有控制病情的潜力。而疾病一旦发展到纤维化阶段，现存的治疗手段就难以阻止病情进展及组织损伤。对于硬皮病，以西药为主的治疗措施效果欠佳或副作用较大，迄今没有任何美国食品药品管理局（FDA）及我国国家食品药品监督管理局（SFDA）批准的硬皮病药物。因此寻找效果显著且副作用小的硬皮病治疗药物已成为当务之急。

近年来的临床治疗及研究显示，中药对硬皮病具有明显的疗效，且副作用显著降低，多年来不少学者用活血化淤法治疗此病获得较好疗效。丹参是临床最常用的活血化瘀中药，多年来，国内用含有丹参的中药复方制剂治疗SSc，取得了较好的疗效：对其皮肤硬化、雷诺现象、肺纤维化均有明显的改善，且不良反应较西药低。

丹参重要的水溶性成分是丹酚酸B（Salvianolic acid B,SAB），又称丹参酚酸B、丹酚酸乙，是目前上市的从丹参中提炼出的唯一的一种单体成分，其在丹参的功效中占有重要地位。SAB具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改善微循环、抗氧化损伤等功效。临床用于冠心病稳定型心绞痛，SAB对心脏微血管内皮细胞的延迟保护作用。心脏缺血缺氧时，心脏微血管内皮细胞首先和最易损伤，实验研究表明丹酚酸B预处理可抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中的钙离子超载、减少内皮素-1(ET-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放、降低缺氧/复氧损伤后内皮细胞细胞间粘附分子的表达，起到保护内皮细胞的作用。

硬皮病是一种以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为特征，并累及心、肺、肾、消化道等内脏器官的自身免疫性疾病，同时伴随有微血管***的损害。其理特征主要为组织内胶原沉积及血管损伤，鉴于上述SAB的相关功能，拟研究该小分子化合物在缓解硬皮病纤维化中的作用，该研究将为其应用于临床提供坚实的理论依据。

发明内容

鉴于以上所述现有技术，本发明的目的在于提供一种丹酚酸B（Salvianolic acid B,SAB，CAS No.115939-25-8）的新用途，用于解决现有技术中的问题。

丹酚酸B化学式C₃₆H₃₀O₁₆，相对分子质量：718.62。丹酚酸B纯品为淡黄色，粉末状，有特殊气味，味微苦、涩。可溶于水、乙醇、甲醇，该小分子化合物结构中多个酚羟基，有较强的抗氧化性，具体分子结构如下：

在现有技术中，丹酚酸B的来源主要有两种：一是丹参提取法，二是化学合成法。目前专门针对丹酚酸B的分离提取方法有很多，丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，为唇形科植物丹参的根及根茎提取而得。丹酚酸B的分离制备，主要工艺流程是提取、分离、纯化等工艺。丹酚酸B的提取方法有：传统水煎法，超声波提取法，回流提取法，超临界CO₂萃取等，使用的分离方法有硅胶柱层析，大孔树胶层析，高效逆流色谱法等。对于化学合成方法，以3-羟基-4-甲氧基苯甲醛(异香兰醛)为原料，经过Claisen重排、乙酰化和氧化反应合成4-羟基-5-甲氧基苯并吡喃-2-酮，再与甲氧甲氧基异香兰醛发生Aldol缩合反应，打开内酯环产生羟甲基，羟甲基氧化生成醛，在氢溴酸作用下环合生成反式2，3-二氢苯并呋喃，醛基与丙二酸缩合生成丙烯酸，即得丹酚酸B。丹酚酸B目前已经上市，多家公司都有销售，如Sigma等，其制备方法亦是现有技术。

本发明第一方面提供丹酚酸B在制备治疗硬皮病（***性硬化症）的药物中的用途。

优选的，所述硬皮病主要为皮肤和内脏的纤维化，内脏的纤维化主要为肺的纤维化。

由于在硬皮病早期，炎症反应是其主要表现，也是进一步促进成纤维细胞活化并合成细胞外基质的主要因素。其中，细胞因子网络失衡，如TNF-a和IL-1β等多种促炎症因子参与了成纤维细胞的活化。因此本发明发明人通过研究化合物丹酚酸B对TNFα诱导的细胞炎症的作用，发现丹酚酸B能够抑制TNFα诱导的细胞炎症，且能够降低炎症因子基因表达的上调，从而达到抑制炎症信号通路、阻断硬皮病的病情进展的效果。另外，发明人还发现丹酚酸B具有从蛋白水平上抑制EMT的作用，且能够有效缓解或抑制细胞纤维化，进一步达到治疗或缓解症状的目的。

所述药物中，可以以丹酚酸B作为治疗硬皮病的唯一有效成分，也可以将丹酚酸B作为治疗硬皮病的有效成分之一。

所述治疗硬皮病（***性硬化症）的药物，为抑制TNFα诱导的细胞炎症而阻断硬皮病病情进展的药物；或者，为缓解或抑制细胞纤维化而治疗硬皮病或缓解硬皮病症状的药物。

本发明进一步的公开了丹酚酸B在制备抑制TNFα诱导的细胞炎症的制剂或者缓解或抑制细胞纤维化的制剂中的用途。

本发明第二方面提供一种用于治疗硬皮病（***性硬化症）的药物组合物，所述药物组合物中包括有效量的丹酚酸B。

所述药物组合物中，药效成分为单一成分的丹酚酸B。

所述药物组合物中，还可以包括其他药学上可接受的促进剂，所述促进剂可以进一步提高丹酚酸B在治疗或缓解硬皮病的过程中的有益效果，和/或减少丹酚酸B的副作用。

本发明第三方面提供一种用于治疗或缓解硬皮病（***性硬化症）的药物制剂，所述药物制剂由所述的药物组合物和药学上可接受的辅料组成。

所述药物制剂可以是本领域技术人员所公知的各种形式，如针剂、片剂、膏剂、汤剂等，并通过本领域的常规制备方法获得。

本发明提供了丹酚酸B的新的用途，即丹酚酸B在抗硬皮病纤维化中的使用。发明人通过动物实验显示化合物SAB显著缓解硬皮病小鼠肺纤维化，进一步细胞实验表明，该小分子化合物可抑制TNFα诱导的细胞炎症，并能抑制体外培养的硬皮病病人皮肤成纤维细胞、人胚肺成纤维细胞的增殖及胶原表达，抑制肺上皮细胞向间充质细胞的转化。本发明显示该化合物具有抗硬皮病纤维化的作用，对于硬皮病的预防及治疗具有良好的应用前景。

附图说明

图1为本发明预防组小鼠中SAB具有缓解炎症及抑制肌成纤维细胞形成的作用的示意图；

图2为本发明预防和处理组小鼠中SAB阻止肺纤维化的发生的示意图；

图3-1为本发明SAB降低小鼠肺组织中胶原基因及蛋白的表达的示意图（P组）；

图3-2为本发明SAB降低小鼠肺组织中胶原基因及蛋白的表达的示意图（P&T组）；

图4为本发明SAB降低小鼠肺组织中胶原基因及蛋白的表达的示意图；

图5为本发明TNFα可诱导MRC5细胞中炎症因子表达的示意图；

图6-1为本发明SAB处理可降低NIH3T3细胞中TNFα诱导的炎症因子IL-6的表达的示意图；

图6-2为本发明SAB处理可降低NIH3T3细胞中TNFα诱导的炎症因子iNOS的表达的示意图；

图6-3为本发明SAB处理可降低NIH3T3细胞中TNFα诱导的炎症因子MMP9的表达的示意图；

图6-4为本发明SAB处理可降低NIH3T3细胞中TNFα诱导的炎症因子COX-2的表达的示意图；

图7为本发明SAB处理可降低MRC5细胞中TNFα诱导的炎症因子的表达的示意图；

图8-1为本发明基于xCELLigence***研究结果显示SAB可抑制硬皮病病人皮肤成纤维细胞增殖示意图；

图8-2为本发明SAB可降低胶原基因表达示意图；

图8-3为本发明SAB可降低分泌到细胞上清中的胶原蛋白含量示意图；

图9-1为本发明MRC5细胞中SAB抑制细胞增殖示意图；

图9-2为本发明MRC5细胞中SAB降低胶原基因表达示意图；

图9-3为本发明MRC5细胞中SAB降低分泌到细胞上清中的胶原蛋白含量示意图；

图10为本发明SAB处理可以抑制细胞间充质样的转化的示意图；

图11为本发明SAB上调TGF-β联合TNFα抑制的上皮细胞的一个标志蛋白E-cadherin的表达，降低肌成纤维细胞的一个标志蛋白α-SMA的表达的示意图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等

MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley & Sons，New York，1987and periodic updates；the seriesMETHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODSIN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1.

本发明中所使用的化合物丹酚酸B均通过市售途径获得。

化合物丹酚酸B缓解硬皮病小鼠肺纤维：

试验对象：7周龄C57BL/6雌性小鼠，购自复旦大学实验动物中心

试验方法：

1）硬皮病肺纤维化小鼠模型的建立：博来霉素诱导的硬皮病小鼠模型是成熟的、被各国科学家所公认的研究纤维化的良好工具。博来霉素气管插管导入肺部，可引起肺纤维化。采用7周龄C57BL/6雌性小鼠，采用气管插管给药方式建立博来霉素(bleomycin，BLM)诱导的硬皮病肺纤维化模型。博莱霉素用量为更改为9mg/kg，一次性给予。[注:小鼠培养时间如2)所述]

2）化合物SAB处理对小鼠硬皮病纤维化的作用：分为两个部分：

i.小鼠气管灌注博来霉素的前三天开始给予化合物丹酚酸B，硬皮病模型建立之后再持续给予SAB一周，用量1.14mg/只/天，以阻止纤维化的形成，称为预防组（Prevention，P)；

ii.小鼠气管灌注博来霉素前三天给予SAB，硬皮病模型建立之后持续给予三周，用量1.14mg/只/天，以缓解已经形成纤维化，称为预防+处理组(Prevention & treatment,P&T)；对照组小鼠腹腔注射生理盐水。

3）硬皮病纤维化小鼠组织学检测及胶原等ECM基因和蛋白表达的检测：获取上述小鼠的纤维化肺组织，一份冻存，另外一份注入***液固定一周后用于制作石蜡切片，将切片进行HE染色及Masson染色，光镜下观察肺组织炎症及肺纤维化情况，对各组小鼠肺纤维化程度进行比对。此外，利用冻存的组织通过Real-time PCR检测纤维化相关基因的表达，包括胶原蛋白、FN1、CTGF等，进一步通过Sircol assay检测胶原蛋白的表达，并与对照组小鼠相比较。

试验结果：腹腔注射小分子化合物SAB可显著缓解硬皮病肺纤维化：预防组中SAB具有缓解炎症及抑制肌成纤维细胞形成的作用（图1）；预防&处理组中SAB阻止肺纤维化的发生（图2）；SAB降低肺组织中胶原基因及蛋白的表达（图3-1、图3-2、4）。此外，相比于模型组腹腔注射SAB没有影响小鼠的体重等生理状况，可见药物并没有对小鼠产生毒副作用。如图1所示，预防组中气管灌注博来霉素的小鼠肺部发生了明显的炎症反应及纤维化，灌注SAB则可显著缓解这些炎症及纤维化作用，并抑制肌成纤维细胞形成。如图2所示，预防+处理组中同样可以观察到SAB具有阻止纤维化发生的作用。如图3-1和图3-2所示，气管灌注博来霉素的小鼠肺部组织胶原基因Col1a1、Col1a2和Col3a1表达上调，在预防组（P）及预防&处理组（P&T）中腹腔注射小分子化合物SAB可明显降低这些基因的表达。如图4所示，在预防组及预防&处理组中腹腔注射化合物SAB可明显降低气管灌注博来霉素的小鼠肺部组织胶原蛋白含量。

实施例2.

化合物丹酚酸B抑制TNFα诱导的细胞炎症的发生：

试验对象：NIH3T3细胞（小鼠胚胎成纤维细胞）、MRC5细胞（人胚肺成纤维细胞）试验方法：

1）应用TNFα刺激细胞建立体外炎症细胞模型（Zhu X,Liu Q,Wang M,Liang M,Yang X,Xu X,Zou H,Qiu J.Activation of Sirt1by resveratrol inhibits TNF-αinduced inflammation in fibroblasts.PLoS One.2011;6(11):e27081），通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-6、COX-2、iNOS等炎症因子在TNFα不同时间点的表达水平；

2）获取经SAB或TNFα不同处理组的细胞，对于SAB及TNFα同时处理组，NIH3T3细胞用DMEM培养液进行培养，MRC5细胞用MEM培养液培养，24孔板约铺8*105（10的5次方）个细胞，培养24h后，将不同浓度的SAB加入细胞培养液中（终浓度为50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml）培养细胞24h后，添加TNFα（终浓度为10ng/ml），Real-time PCR检测相关炎症因子的基因表达水平，探讨SAB在NIH3T3及MRC5细胞中抗炎症作用。

试验结果：体外细胞实验表明SAB抑制TNFα诱导的细胞炎症，且抑制炎症作用应该是通过抑制NF-κB信号通路实现的，具体结果如下：

1）TNFα刺激建立了体外炎症细胞模型：正如有关报道，如图5显示TNFα可诱导MRC5细胞中炎症因子表达。体外炎症细胞模型的建立为后续研究SAB抑制炎症的作用提供了基础。图5中，TNF-α(10ng/ml)处理MRC-5不同时间，检测有关炎症因子mRNA的表达，结果显示：TNF-α可诱导炎症因子的表达，且具时间效应；1-36h均有炎症效应，8h时炎症因子表达相对较强，因此选择该时间点进行后续检测。

2）SAB抑制TNFα上调的炎症基因表达：SAB处理可降低NIH3T3细胞（图6-1至图6-4）及MRC5细胞（图7）中TNFα诱导的炎症因子的表达。如图图6-1至图6-4所示，TNFα可显著上调炎症因子：IL-6、iNOS、MMP9、COX-2基因mRNA表达水平；而SAB处理可降低炎症因子基因表达的上调，且抑制作用具有剂量依赖性（^##P<0.001vs.Control;*P<0.05,**P<0.001vs.TNFα）；如图7所示，MRC5细胞中，同样发现TNFα可显著上调炎症因子：IL-1B、IL-6、MMP9、COX-2基因mRNA表达水平；而SAB处理可降低炎症因子基因表达的上调(^##P<0.001vs.Control;*P<0.05,**P<0.001vs.TNFα)。

实施例3.

化合物丹酚酸B在成纤维细胞中发挥抗纤维化的作用：

试验对象：MRC5细胞（人胚肺成纤维细胞）、原代培养的硬皮病病人皮肤成纤维细胞试验方法：

1）基于xCELLIgence技术的细胞动力学模型分析***，研究SAB对成纤维细胞增殖的影响。在每个E-Plates板的孔中加入1000个细胞，培养24h后，更换不含或者含有100ug/mlSAB的培养液到细胞中，实时观察细胞增殖曲线，细胞指数越大表明细胞越多。【说明：xCELLigence***，是罗氏推出的一种非标记的实时细胞分析***，利用生物电阻读数来非主观性地实时量化细胞状态。该***可实时监控细胞活动，而不必添加标记。该***可检测集成在组织培养器E-Plates底部的叉指微电极上的电阻抗。E-Plates上的细胞越多，电阻抗越大，细胞指数越大，从而可以显示细胞数目及细胞增殖情况。】

2）获取经SAB或TGFβ不同处理组的细胞，即先用无血清培养基培养贴壁细胞24h后，将含有100μg/ml SAB、10ng/mlTGFβ或者100μg/ml SAB+10ng/mlTGFβ的500ul1%FBS DMEM培养基加到24孔板细胞中，培养细胞24h，Real-time PCR检测胶原基因的表达变化。通过Sircol assay胶原检测试剂盒在蛋白水平上对胶原进行检测；

试验结果：体外成纤维细胞实验表明SAB抑制硬皮病人皮肤成纤维细胞（图8）及MRC5细胞（图9）增殖，但是没有对细胞产生毒性作用；SAB可抑制硬皮病皮肤成纤维细胞及TGF-β诱导的肺成纤维细胞MRC5中胶原基因及蛋白的表达。如图8所示，基于xCELLigence***研究结果显示SAB可抑制硬皮病病人皮肤成纤维细胞增殖(图8-1)；此外SAB可降低胶原基因表达（图8-2,Real-time PCR）及分泌到细胞上清中的胶原蛋白含量（图8-3,sircol assay）。如图9所示，MRC5细胞中SAB同样抑制细胞增殖(图9-1)；降低胶原基因表达（图9-2,Real-time PCR），及分泌到细胞上清中的胶原蛋白含量（图9-3,sircol assay）。

实施例4.

丹酚酸B抑制肺上皮细胞向间充质细胞的转化：

试验对象：A549细胞（人肺腺癌细胞系，为肺II型上皮细胞）

试验方法：

1）将A549细胞进行不同处理：未处理组，TGF-β+TNFα联合处理组，TGF-β+TNFα联合处理基础上添加SAB处理组。即实验前一天铺板A549细胞，第二天更换无血清培养将细胞进行饥饿处理24h，然后按以上的分组添加不同试剂到细胞培养液中（24孔板加500ulDEME培养基，其中各试剂终浓度为200μg/ml SAB，10ng/mlTGF-β，10ng/ml TNFα），培养48h后，显微镜下观察细胞形态变化观察细胞形态变化，探讨SAB对EMT发生的影响。

2）通过Real-time PCR及Western blot检测EMT相关基因及蛋白的表达变化，进一步明确SAB对EMT的影响。

试验结果：应用A549细胞进行EMT体外实验表明SAB可抑制TGF-β联合TNFα诱导的A549细胞像间充质样细胞的转化：显微镜下可见TGF-β联合TNFα可明显诱导A549细胞间充质样转化，而SAB处理可以抑制细胞间充质样的转化（图10），进一步的Western blot也显示SAB可以上调TGF-β联合TNFα抑制的上皮细胞的一个标志蛋白E-cadherin的表达，降低肌成纤维细胞的一个标志蛋白α-SMA的表达（图11）。如图10所示，在有或无SAB的条件下应用10ng/ml TGF-β+10ng/ml TNFα处理A549细胞，48h后显微镜下观察细胞形态变化。结果显示相比于Control组（A），在细胞形态上可见TGF-β+TNAα处理组细胞EMT发生明显（B），而SAB处理可抑制EMT的发生（C）。A：Control；B：TGF-β+TNFα；C：SAB+(TGF-β+TNFα)；如图11所示，Western blot结果显示TGF-β联合TNFα明显降低上皮细胞的标志蛋白E-cadherin的表达，上调肌成纤维细胞的一个标志蛋白α-SMA的表达，促进EMT的发生。而SAB处理可上调E-cadherin的表达，降低被诱导的α-SMA的表达，从蛋白水平上反映了SAB抑制EMT的作用。

综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (4)

1.丹酚酸B在制备治疗硬皮病的药物中的用途。

2.一种用于治疗硬皮病的药物组合物，所述药物组合物中包括有效量的丹酚酸B。

3.如权利要求2所述的药物组合物，所述药物组合物中还包括药学上可接受的促进剂。

4.一种用于治疗硬皮病的药物制剂，所述药物制剂由权利要求2-3任一权利要求所述的药物组合物和药学上可接受的辅料组成。