CN104430545A - 一种美国白蛾病毒杀虫剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种美国白蛾病毒杀虫剂及其制备方法。通过人工饲料饲养美国白蛾，制备核型多角体病毒沉淀，并在病毒沉淀中添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂。本制备方法使昆虫病毒杀虫剂的组分更完整，悬浮性更好，保质期延长，杀虫剂田间应用时对紫外光具有良好的防护作用，病毒持续作用时间长，防治效果极大提高。

Description

一种美国白蛾病毒杀虫剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物杀虫剂领域，具体涉及一种美国白蛾核型多角体病毒杀虫悬浮剂。本发明还涉及制备美国白蛾核型多角体病毒杀虫悬浮剂的制备方法。

背景技术

美国白蛾自1979年在辽宁省发现以来，现疫情已在天津、北京、河北和山东等多个省市蔓延。美国白蛾幼虫在北方年可繁殖2-3代，具有食性杂、适应性强，繁殖量大、传播途径广，危害严重等特点，对林果、农作物及绿色植物都会造成直接危害。

传统的美国白蛾防治主要是化学农药。化学农药对美国白蛾的防治初期具有高效，快速的特点。随着美国白蛾的传代，抗性增强，农药对环境的污染，化学农药的优势越来越少。利用美国白蛾天敌、灭虫灯、引诱剂等防治美国白蛾的技术不断发展。中国林业科学院森环森保所发明的周氏啮小蜂及美国白蛾NPV(核型多角体病毒)防治方法，取得了很好的效果。

美国白蛾核型多角体病毒，是美国白蛾的天然病原体。利用美国白蛾核型多角体病毒防治美国白蛾，是一种环保，专一性很强的生物防治方法。美国白蛾NPV在白蛾体内自我复制增殖，破坏白蛾内部结构致其死亡。这种防治方法具有持续性，能很好的控制美国白蛾病虫害，而且防治成本低，对环境友好。

蓟县***林业科技推广中心提供一种立体多层封闭式美国白蛾核型多角体病毒增殖工艺，该工艺技术简单、可提高病毒增殖的数量、降低病毒增殖成本、便于感染病毒死虫的收集，适宜在广大乡村推广应用。但是，容易受季节和气候的原因，不能实现美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂工厂化的规模化生产。

中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所发明了美国白蛾NPV病毒水分分散粒剂。但是由于制剂在田间应用时加水稀释的情况下，受加工时的技术水平限制，病毒多角体的分散性不如悬浮剂好，从而导致田间应用效果低于悬浮剂。

目前，美国白蛾核型多角体病毒以在美国白蛾幼虫体内复制最为经济，而且美国白蛾人工饲养已完全解决，可以实现美国白蛾核型多角体病毒室内人工规模化扩繁。北京市西山试验林场提供一种美国白蛾核型多角体病毒的生产工艺，其中对美国白蛾饲养密度、饲养容器以及病毒复制最佳幼虫龄期、接毒浓度等进行了改进。通过这些改进完善了美国白蛾核型多角体病毒工厂化生产流程与方法，扩大了美国白蛾病毒产量。但是，就美国白蛾病毒杀虫剂的剂型设计和加工工艺均未涉及。

发明内容

本发明提供一种美国白蛾病毒杀虫剂，对紫外光有较好的防护作用，病毒持续作用时间延长，防治效果提高。

本发明还提供一种美国白蛾病毒杀虫剂的制备方法，使用美国白蛾核型多角病毒沉淀，添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂，使昆虫病毒杀虫剂的组分更完善，悬浮性更好，货架寿命更长。

本发明提供一种美国白蛾病毒杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：

取美国白蛾虫卵饲养健康虫：将所述虫卵消毒后放入21-25℃，湿度40％-70％，光照16小时的健康虫饲养室，选择4-5天破茧的1龄幼虫，用毛笔接入已装好饲料的养虫板中，每板20头，饲养到4龄；

将所述健康虫感染病毒，得到染毒虫：将病毒毒株加蒸馏水配制成接毒水，均匀接入饲料表面，待所述饲料表面干燥无水滴，放入所述4龄幼虫任其自由取食，使所述幼虫感染病毒；

将所述感染病毒的幼虫粉碎、过滤，滤液经差速离心后得到病毒沉淀；

所述病毒沉淀制得所述杀虫剂：在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到美国白蛾病毒杀虫剂。

所述饲养室可控温、控湿、控光，达到千级洁净水平，≥0.5μm的灰尘≤35粒/L，室顶和四壁使用隔热彩钢板建造，顶部进风口安装空气净化装置及送风机组，功率循环60次/小时，加温采用空调机，顶及四壁安装日光灯，光照强度3000LX以上，顶部安装紫外灯，洁净室入口安装风淋机。

所述病毒为美国白蛾核型多角体病毒。

所述美国白蛾病毒杀虫剂为悬浮液。

本发明再提供一种美国白蛾病毒杀虫剂，采用如上方法制备，包括：200亿PIB/mL病毒沉淀2.5-15％，60nm二氧化硅0.1-0.5％，芳香族氨基酸0.1-0.15％，精制荧光增白剂0.5-1％，木质素磺酸钠0.1-1％，氟啶脲0.01-0.1％，甘油1.0-5.0％，无菌水余量。

所述美国白蛾病毒杀虫剂为悬浮液。

所述病毒沉淀为美国白蛾核型多角体病毒沉淀。

本发明客服了现有技术的缺点，不受外界环境制约，可为大规模连续生产出安全高效的生物杀虫剂提供充足的虫源。本发明提供的美国白蛾核型多角体病毒杀虫悬浮剂，同时添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂，使昆虫病毒杀虫剂的组分更完善，悬浮性更好，货架寿命更长，田间应用时对紫外光有较好的防护作用，病毒持续作用时间延长，防治效果提高。

具体实施例

下文将结合实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合和相互结合从而达到更好的技术效果。

实施例1美国白蛾蛹5000头，置于25℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。美国白蛾幼虫人工饲料按照表1的配方1加热均匀，分装到美国白蛾幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为25℃。将饲料分装置美国白蛾幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒沉淀。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒沉淀15％、60nm二氧化硅0.3％、芳香族氨基酸0.12％、精制荧光增白剂1.0％、木质素磺酸钠0.2％、氟啶脲0.05％、甘油2.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例2美国白蛾蛹10000头，置于25℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。美国白蛾幼虫人工饲料按照表1的配方2加热均匀，分装到美国白蛾幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为25℃。将饲料分装置美国白蛾幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒沉淀。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒沉淀10％、60nm二氧化硅0.2％、芳香族氨基酸0.14％、精制荧光增白剂0.8％、木质素磺酸钠0.3％、氟啶脲0.06％、甘油1.5％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例3美国白蛾蛹20000头，置于25℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。美国白蛾幼虫人工饲料按照表1的配方3加热均匀，分装到美国白蛾幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为25℃。将饲料分装置美国白蛾幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒沉淀。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒沉淀8％、60nm二氧化硅0.15％、芳香族氨基酸0.14％、精制荧光增白剂0.8％、木质素磺酸钠0.3％、氟啶脲0.08％、甘油2.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例4美国白蛾蛹25000头，置于25℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。美国白蛾幼虫人工饲料按照表1的配方4加热均匀，分装到美国白蛾幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为25℃。将饲料分装置美国白蛾幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒沉淀。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒沉淀8％、60nm二氧化硅0.15％、芳香族氨基酸0.14％、精制荧光增白剂0.8％、木质素磺酸钠0.3％、氟啶脲0.08％、甘油2.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

表1  美国白蛾幼虫人工饲料不同配方各物质的重量百分比

元素(％)	配方1	配方2	配方3	配方4
					麦胚	6.0	7.0	8.0	10.0
蔗糖	3.0	4.0	5.0	6.0
					蛋白质粉	3.0	4.0	5.0	7.0
韦氏盐	0.3	0.5	0.7	1.0
					山梨酸	0.4	0.6	0.8	1.0
对羟基苯甲酸甲酯	0.2	0.3	0.4	0.5
					抗坏血酸	0.5	0.7	0.8	1.0
维生素B	0.03	0.09	0.12	0.15
					肌醇	0.03	0.2	0.4	0.6
胆固醇	0.05	0.1	0.2	0.3
					琼脂	1.2	1.4	1.6	1.8
水	85	81	77	70

表2  不同饲料配方饲养美国白蛾幼虫的效果

表3  人工饲料与天然饲料对美国白蛾幼虫及蛹体质量的影响

虫态	人工饲料饲养(mg)	天然饲料饲养(mg)
			4龄	15.5	13.5
5龄	40.6	30.5
			6龄	105	93.6
蛹	158	119.5

表4  人工饲料与天然饲料饲养美国白蛾幼虫龄期与历期比较

龄期	人工饲料饲养(天)	天然饲料饲养(天)
			1龄-2龄	4	6
2龄-3龄	5	5
			3龄-4龄	5	5
4龄-5龄	5	6
			5龄-6龄	6	5
6龄-7龄	4	5

由上述表3和4中可以看出：选用表1中各配方饲养美国白蛾幼虫，幼虫历期缩短3-4天；成蛹率高于85％；5龄幼虫体质量增加34％，蛹重增加32.4％。故选定本发明美国白蛾幼虫人工饲料用表1中配方含量范围。

本发明客服了现有技术的缺点，不受外界环境制约，可为大规模连续生产出安全高效的生物杀虫剂提供充足的虫源。本发明提供的美国白蛾核型多角体病毒杀虫悬浮剂，同时添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂，使昆虫病毒杀虫剂的组分更完善，悬浮性更好，货架寿命更长，田间应用时对紫外光有较好的防护作用，病毒持续作用时间延长，防治效果提高。

本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。

Claims (9)

1.一种美国白蛾病毒杀虫剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取美国白蛾虫卵饲养健康虫；

所述健康虫感染病毒，得到染毒幼虫；

将所述感染病毒的幼虫粉碎、过滤，滤液经差速离心后得到病毒沉淀；

所述病毒沉淀制得所述美国白蛾病毒杀虫剂。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述病毒沉淀制得所述美国白蛾病毒杀虫剂步骤为：在所述病毒沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到所述美国白蛾病毒杀虫剂。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述饲养健康虫步骤为：将所述虫卵消毒后放入21-25℃，湿度40％-70％，光照16小时的健康虫饲养室，选择4-5天破茧的1龄幼虫，用毛笔接入已装好饲料的养虫板中，每板20头，饲养到4龄。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述饲养室可控温、控湿、控光，达到千级洁净水平，≥0.5μm的灰尘≤35粒/L，室顶和四壁使用隔热彩钢板建造，顶部进风口安装空气净化装置及送风机组，功率循环60次/小时，加温采用空调机，顶及四壁安装日光灯，光照强度3000LX以上，顶部安装紫外灯，洁净室入口安装风淋机。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述健康虫感染病毒，得到染毒虫步骤为：将病毒毒株加蒸馏水配制成接毒水，均匀接入饲料表面，待所述饲料表面干燥无水滴，放入所述4龄幼虫任其自由取食，使所述幼虫感染病毒。

6.如权利要求1至5任一项所述的制备方法，其特征在于：所述病毒为美国白蛾核型多角体病毒。

7.一种美国白蛾病毒杀虫剂，其特征在于：所述杀虫剂的组分及其重量配比是：200亿PIB/mL病毒沉淀2.5-15％，60nm二氧化硅0.1-0.5％，芳香族氨基酸0.1-0.15％，精制荧光增白剂0.5-1％，木质素磺酸钠0.1-1％，氟啶脲0.01-0.1％，甘油1.0-5.0％，无菌水余量。

8.如权利要求7所述的一种美国白蛾病毒杀虫剂，其特征在于：所述美国白蛾病毒杀虫剂为悬浮液。

9.如权利要求7或8任一项所述的一种美国白蛾病毒杀虫剂，其特征在于：所述病毒为美国白蛾核型多角体病毒。