CN104397499B - 预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂领域。本发明首先公开了一种预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂，包括以下组分：黄芩苷，牛磺酸和硫辛酸。本发明还公开了制备所述饲料添加剂的方法，包括：按重量配比称取各组分，混匀，即得。本发明饲料添加剂能显著降低由于断奶应激造成的仔猪血液内毒素含量，有效升高断奶仔猪的红细胞数、白细胞总数和淋巴细胞数，提高仔猪断奶前后的活力和免疫抵抗力，促进断奶仔猪的生长，有效缓解断奶给仔猪带来的应激；此外本发明饲料添加剂还有确切的抗腹泻效果。
Description
技术领域
本发明涉及饲料添加剂，尤其涉及预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂，本发明还涉及所述饲料添加剂的制备方法和应用，属于仔猪断奶期内饲料添加剂领域。
背景技术
畜禽养殖中，腹泻、水肿、内毒素性休克是断奶仔猪中的常见疾病，这些疾病一般多发生于仔猪断奶后10天左右。由于仔猪在断奶后受到各种应激因素的刺激，机体免疫功能降低，引起致病性细菌大量繁殖，这些致病性细菌吸附在小肠绒毛上，释放多种毒素，如肠毒素、内毒素等，毒素再经肠道吸收进入血液后造成毒血症，肠毒素导致仔猪断奶后腹泻，内毒素导致水肿病和内毒素性休克。
同时，通过解剖大量没吃奶的新生仔猪验证发现，新生仔猪内脏器官在母体子宫内就已经受到损害，如肝脏发黄质脆、肾脏充血等。这一发现充分证明母猪血液内毒素蓄积后，穿过胎盘屏障造成胎儿血液污染，引起胎儿组织器官损伤，而且极有可能这种损伤是在母猪妊娠后期发生的。
目前临床上的常规治疗是使用抗生素针对致病菌的抑制或杀灭，但抗生素在杀灭有害细菌的同时也杀灭有益细菌，使菌群失衡，肠壁上皮细胞破溃，肠屏障功能丧失，被杀灭的革兰氏阴性细菌及崩解的内毒素大量进入体内，随血液移位到各个器官，造成各器官功能障碍，产生全身炎症反应、进而引发多器官功能不全综合征。
因此，针对临床突出症状和病理环节，从控制仔猪血液中内毒素的产生、减轻机体的氧化应激双方面着手，亟待为养猪业提供一种疗效突出、无药残、无毒副作用的预防和缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂，减少断奶期仔猪血液中的内毒素，提高和维护仔猪断奶前后的活力和免疫抵抗力，有效缓解断奶给仔猪带来的应激。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
本发明首先公开了一种预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂，包括以下各组分：黄芩苷，牛磺酸和硫辛酸。
优选的，各组分的重量份是：黄芩苷0.5～1份，牛磺酸1～2份，硫辛酸0.6～0.9份；
更优选的，各组分的重量份是：黄芩苷0.5份，牛磺酸1.5份，硫辛酸0.6份；
其中，所述的饲料添加剂中还含有载体，载体的重量份可以是6-8份，优选为7.4份；所述载体为淀粉、无水葡萄糖或糊精中的任意一种或几种。
本发明饲料添加剂组方中黄芩苷有逆转内毒素血症、使内毒素凝化作用减弱，对内毒素攻击所致小鼠死亡也有一定抑制作用；此外，黄芩在清除氧自由基、抗细菌、抗病毒和抗真菌、调节免疫等多方面均具有作用。
牛磺酸能够增强细胞膜抗氧化、抗自由基损伤及抗病毒损伤的能力。牛磺酸与VE、VC、类胡萝卜素和一些多酚类化合物一样，具有清除活性氧自由基的作用，它们共同组成生命内源的防御***，防止毒素对细胞及组织的伤害，同时牛磺酸的清除活性氧自由基和抗脂质过氧化损伤的作用与其剂量呈依赖关系。
硫辛酸是唯一兼具脂溶性与水溶性的抗氧化剂，具有很强的抗氧化活性，它可以通过螯合金属离子、清除自由基、再生内源性抗氧化剂来减缓或修复氧化损伤，也被称为“万能抗氧化剂”。
本发明饲料添加剂能够应用于预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染。本发明饲料添加剂组方能清热解毒、降低断奶期仔猪血液中的内毒素，增强断奶仔猪机体免疫力，改善抗氧化能力，从而减缓仔猪的断奶应激，提高仔猪生长性能。
本发明通过饲料添加剂的组分筛选实验，确定黄芩苷、牛磺酸和硫辛酸为饲料添加剂主要组分；进一步通过用量筛选实验，确定本发明饲料添加剂各组分的用量为：黄芩苷0.5～1份，牛磺酸1～2份，硫辛酸0.6～0.9份，余量为载体，添加至10份；优选的，各组分的重量份是：黄芩苷0.5份，牛磺酸1.5份，硫辛酸0.6份，余量为载体，添加至10份，可使仔猪血浆内毒素含量显著降低。
动物实验证明，添加本发明饲料添加剂的仔猪在试验期内获得了较高的日增重和日采食以及较低的料肉比，其腹泻率及死亡率均小于对照组，反映了本发明饲料添加剂对仔猪生产的促进作用。
红细胞具有免疫和参与机体免疫调节的功能，同时也是检验是否贫血的主要指标；血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2；白细胞是主要免疫细胞之一，其数量多少直接影响动物免疫能力；中性粒细胞对机体有非特异性防御和保护作用，对于清除体内内毒素、防御原发性内毒素血症和继发性内毒素血症对机体产生损害具有重要的作用；淋巴细胞是细胞免疫的主要物质，它对抗原有明显的专一性，接受抗原刺激后，则被激活、增殖、分化、发生免疫应答；仔猪断奶后10～20天期间，血液中白细胞、血红蛋白及血液总量的减少都可看作抗体抵抗力与反应性下降的标志；在白细胞分类计数中，嗜酸性白细胞和淋巴细胞的减少及嗜中性细胞增加，既可作为抗体抵抗力下降的标志，又是应激反应的典型变化，是早期断奶应激诊断的依据。试验结束时，本发明添加剂组血液中的红细胞数和白细胞数相对于空白对照组有显著增加，血红蛋白含量也相应提高，说明本发明饲料添加剂对断奶仔猪的造血功能的提高有促进作用，同时起到维护仔猪免疫力和抵抗力的作用。
仔猪断奶应激对生长发育的影响主要表现在断奶后10天左右的时间，从内毒素测定结果来看，空白组仔猪在断奶后一周内血液内毒素含量达到较高水平，断奶两周后有所下降，但仍处于一个较高水平。从仔猪7日龄到断奶后2周内的整个期间添加饲料添加剂，断奶后一周时，添加不同饲料添加剂的血液内毒素含量较空白组均有所下降，其中本发明添加剂组下降的最为显著，充分说明添加本发明饲料添加剂能有效降低由于断奶应激造成的仔猪血液内毒素含量。
有研究表明血内毒素与血MDA的相关系数(r)高达0.8145，因此测定血清中SOD、GSH-Px活性和MDA含量不仅能反映体内自由基的程度，还能反映出内毒素的水平高低。动物实验证明，本发明添加剂组的血清SOD活性显著高于对照组及其他实验组，同时MDA含量有所下降，表明本发明饲料添加剂改善了仔猪机体自由基清除酶类的活性，增强机体的抗氧化能力，同时也反映了其具有抗内毒素的作用。
本发明还公开了一种制备所述饲料添加剂的方法，包括以下步骤：按所述重量配比称取各组分，混匀，即得。
本发明饲料添加剂的添加量为仔猪饲料重量的1-5％；优选为1％。
本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
(1)在日粮中添加本发明饲料添加剂的仔猪在整个试验期内血浆内毒素的水平均维持在很低的水平，说明添加本发明添加剂能有效降低由于断奶应激造成的仔猪血液内毒素含量；
(2)可提高断奶仔猪的生长性能，并有抗腹泻效果：本发明饲料添加剂组与空白对照组相比，平均日增重提高，料重比下降，腹泻率、死亡率均显著降低；
(3)能够明显升高断奶仔猪白细胞总数和淋巴细胞数，可提高和维护仔猪断奶前后的活力和免疫抵抗力，有效缓解断奶给仔猪带来的应激；
(4)与空白对照组相比，本发明添加剂组红细胞数与血红蛋白有所升高，表明该添加剂能够促进动物机体新陈代谢，对机体的生长发育有积极的作用，这也是该添加剂提高断奶仔猪平均日增重的其中一个药理基础；
(5)可提高断奶仔猪机体的抗氧化功能，从而提高断奶仔猪的抗应激能力：本发明添加剂组与空白对照组相比，超氧化物歧化酶(SOD)活性提高，谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活性提高，丙二醛(MDA)的含量降低。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1饲料添加剂的制备
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)：黄芩苷0.5，牛磺酸1，硫辛酸0.6，载体无水葡萄糖7.9；混合均匀，即得。
实施例2饲料添加剂的制备
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)：黄芩苷1，牛磺酸2，硫辛酸0.9，载体糊精6.1；混合均匀，即得。
实施例3饲料添加剂的制备
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)：黄芩苷0.8，牛磺酸1，硫辛酸0.8，载体淀粉7.4；混合均匀，即得。
实施例4饲料添加剂的制备
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)：黄芩苷0.5，牛磺酸1.5，硫辛酸0.6，载体淀粉7.4；混合均匀，即得。
实施例5饲料添加剂的制备
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)：黄芩苷1，牛磺酸1，硫辛酸0.6，载体淀粉7.4；混合均匀，即得。
实验例1饲料添加剂的组分及用量筛选实验
1、组分筛选实验
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)制备饲料添加剂：
实验1组：黄芩苷1，牛磺酸1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验2组：黄芩苷1，维生素E 1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验3组：黄芩苷1，牛磺酸1，维生素C 1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验4组：黄芪甲苷1，牛磺酸1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀；
实验5组：小檗碱1，牛磺酸1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀；
实验6组：黄芪甲苷1，维生素E 1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
采用随机分组试验设计，选择14窝胎次、与配公猪相同的84头杜长大杂种仔猪，随机分成7组，每组2窝仔猪，分别饲喂基础日粮(空白对照组)，基础日粮中分别添加实验1-6组饲料添加剂。
仔猪7日龄开始补饲。采用湿喂法饲喂，自由采食，自由饮水，按猪场防疫程序注射疫苗。仔猪21日龄断乳，试验至35日龄结束。断奶前饲养于分娩舍分娩床，断奶当日将母猪从分娩舍移开，仔猪在分娩舍饲养3天后转入保育舍。
各组添加剂在仔猪饲料中的添加量均为1％(重量比)。
试验开始(7日龄)及21、28、35日龄采血，早上8:00空腹称重，采用去热源的一次性注射器，前腔静脉采血，每头采取全血5ml，血样立即装在无热源离心管内，立即以1000rpm低速离心10min制得血浆，血浆密封冷冻保存，用于血液内毒素浓度测定。血液内毒素浓度用LAL试剂(鲎试剂)测定。
用SPSS13.0统计软件中的one-way ANOVA进行数据的方差分析，用LSD检验进行数据的多重比较。
实验结果见表1。
表1仔猪不同日龄内毒素测定结果
注：同列数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
结果表明，21日龄时，实验1组仔猪血浆内毒素含量显著低于对照组(p<0.05)，其余各组与对照组无明显差异(p>0.05)；28日龄时，实验1组仔猪血浆内毒素含量显著低于对照组和4-6组；35日龄时，实验1组仔猪血浆内毒素含量显著低于对照组、2-3组和5-6组。因此，本发明饲料添加剂的组分确定为黄芩苷、牛磺酸和硫辛酸。
2、用量筛选实验
按照以下重量份称取各原料药(单位：kg)制备饲料添加剂：
实验1组：黄芩苷1，牛磺酸1，硫辛酸1，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验2组：黄芩苷0.5，牛磺酸0.5，硫辛酸0.5，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验3组：黄芩苷3，牛磺酸3，硫辛酸3，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验4组：黄芩苷0.5，牛磺酸1.5，硫辛酸0.6，余量为载体淀粉，添加至10，混合均匀。
实验5组：黄芩苷0.5，牛磺酸1，硫辛酸0.6，余量为载体淀粉，添加至10；混合均匀，即得。
实验6组：黄芩苷1，牛磺酸2，硫辛酸0.9，余量为载体淀粉，添加至10；混合均匀。
采用随机分组试验设计，选择14窝胎次、与配公猪相同的84头杜长大杂种仔猪，随机分成7组，每组2窝仔猪，分别饲喂基础日粮(空白对照组)，基础日粮中分别添加实验1-6组饲料添加剂。饲料添加剂的添加比例、投喂方法和血液内毒素浓度测定方法同上述组分筛选实验。
实验结果见表2。
表2仔猪不同日龄内毒素测定结果
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
结果表明，本发明饲料添加剂实验1组、4组、5组和6组仔猪血浆内毒素含量显著低于其他各组(p<0.05)；其中，实验4组仔猪血浆内毒素含量在各个日龄中均表现为最低；35日龄时，实验4组仔猪血浆内毒素含量显著低于其他各组。因此，本发明饲料添加剂的组分用量确定为黄芩苷0.5～1份，牛磺酸1～2份，硫辛酸0.6～0.9份，余量为载体，添加至10份；优选的，各组分的重量份是：黄芩苷0.5份，牛磺酸1.5份，硫辛酸0.6份，余量为载体，添加至10。
实验例2本发明饲料添加剂预防和缓解仔猪断奶期内毒素感染实验
1、材料和方法
1.1试验动物和分组
采用随机分组试验设计，选择12窝胎次、与配公猪相同的72头杜长大杂种仔猪，随机分成4组，每组3窝仔猪，分别饲喂基础日粮(空白对照组)，基础日粮中分别添加不同饲料添加剂。
分组：
空白对照组：投喂基础日粮；
本发明添加剂组：添加本发明实施例4制备的饲料添加剂；
黄芩苷组：添加以下组分的添加剂，黄芩苷0.5kg，载体为淀粉，淀粉添加至10kg；
牛磺酸+硫辛酸组：添加以下组分的添加剂，牛磺酸1.5kg，硫辛酸0.6kg，载体为淀粉，淀粉添加至10kg。
各饲料添加剂的添加量均为仔猪饲料重量的1％。
仔猪7日龄开始补饲。采用湿喂法饲喂，自由采食，自由饮水，按猪场防疫程序注射疫苗。仔猪21日龄断乳，试验至35日龄结束。断奶前饲养于分娩舍分娩床，断奶当日将母猪从分娩舍移开，仔猪在分娩舍饲养3天后转入保育舍。
测定初生、7、21、35日龄体重。除初生重外，均为清晨空腹称重。准确记录各阶段的投料量和剩料量，计算采食量。根据平均采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)计算料重比(F/G)。试验期每天观察仔猪粪便的颜色、形状等，记录仔猪腹泻的头数及次数，计算腹泻率。
1.2血样采集
试验开始(7日龄)及21、28、35日龄采血，早上8:00空腹称重，采用去热源的一次性注射器，前腔静脉采血，每头采取全血5ml，一部分装入抗凝管中，用于血液生理指标的测定，一部分血样立即装在无热源离心管内，立即以1000rpm低速离心10min制得血浆，血浆密封冷冻保存，用于血液内毒素浓度测定和抗氧化指标测定。
1.3血浆内毒素浓度及抗氧化指标测定
血液内毒素浓度用LAL试剂(鲎试剂)测定；超氧化物歧化酶(SOD)：羟胺法；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)：二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接测定法；丙二醛(MDA)：TBA(硫代巴比妥酸)法；试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，用UV762型紫外分光光度计测定。
1.4统计分析
用SPSS13.0统计软件中的one-way ANOVA进行数据的方差分析，用LSD检验进行数据的多重比较。
2、实验结果
2.1本发明添加剂对断奶仔猪抗腹泻效果的影响
不同饲料添加剂对断奶仔猪腹泻率及死亡率的对比结果见表3。
表3饲料添加剂对断奶仔猪腹泻率及死亡率对比结果
由表3可见，本发明添加剂组腹泻率为11.11％，死亡率为5.56％，显著低于其他各组；空白对照组腹泻率较高，为44.44％，死亡率为33.33％。结果表明，本发明添加剂能明显降低仔猪的腹泻率和死亡率，总体疗效明显优于对照组、黄芩苷组及牛磺酸+硫辛酸组。
2.2仔猪各阶段生长情况
仔猪不同日龄体重见表4，饲料添加剂对断奶仔猪采食量及料重比的影响结果见表5。
表4仔猪不同日龄体重
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
表5饲料添加剂对断奶仔猪采食量及料重比影响结果
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
由表4可见：各组的初生重、7日龄重、21日龄重均无显著差异(p>0.05)，至35日龄时，本发明添加剂组表现出明显的长势(p<0.05)；相应的，该组平均日增重较空白对照组显著增加(p<0.05)；料重比较空白对照组、黄芩苷组和牛磺酸+硫辛酸组有显著降低(p<0.05)(表5)。
2.3仔猪血液生理指标变化情况
试验结束时不同组别仔猪血液生理指标变化情况见表6。
表6试验结束时不同组别仔猪血液生理指标变化情况
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
由上表可见：试验结束时，本发明添加剂组仔猪血液RBC含量与对照组相比显著升高(p<0.05)；本发明添加剂组和牛磺酸+硫辛酸组血液WBC含量与对照组相比显著升高(p<0.05)；其余各指标各组间均无显著差异(p>0.05)。
2.4仔猪不同日龄内内毒素变化情况
仔猪不同日龄内毒素测定结果见表7。
表7仔猪不同日龄内毒素测定结果
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
由表7可见，空白对照组仔猪体内的内毒素含量在断奶时较7日龄上升，断奶后一周内继续上升到0.770EU/ml，断奶后两周内有所缓解，下降至0.565EU/ml；用药各组表现出相同的变化趋势，但断奶后不同时间内血浆内毒素含量均较对照组要低。
7日龄时，各组仔猪血浆内毒素含量均无显著差异(p>0.05)；21日龄时，本发明添加剂组仔猪血浆内毒素含量显著低于其他各组(p<0.05)；28日龄时，用药各组仔猪血浆内毒素含量均显著低于空白对照组(p<0.05)，其中，本发明添加剂组仔猪血浆内毒素含量显著低于黄芩苷组、牛磺酸+硫辛酸组(p<0.05)；35日龄时，各组血浆内毒素含量均有所下降，本发明添加剂组仔猪血浆内毒素含量仍然显著低于空白对照组和另外两个实验组(p<0.05)。
2.5仔猪抗氧化酶活性变化情况
试验结束时不同组别仔猪血液抗氧化酶变化情况见表8。
表8试验结束时不同组别仔猪血液抗氧化酶变化情况
注：同行数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05，Means±SD)。
由表8可见，试验结束时，本发明添加剂组的血液SOD活性显著高于其余各组(p<0.05)；本发明添加剂组和牛磺酸+硫辛酸组血液MDA含量与对照组相比显著下降(p<0.05)；用药各组血液GSH-Px活性均有所提高，但与对照组相比均无显著差异(p>0.05)。
Claims (3)
1.一种预防或缓解仔猪断奶期内毒素感染的饲料添加剂，其特征在于，由以下组分组成：黄芩苷，牛磺酸，硫辛酸和载体；
各组分的重量份是：黄芩苷0.5份，牛磺酸1.5份，硫辛酸0.6份，余量为载体，添加至10份。
2.按照权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于：所述载体为淀粉、无水葡萄糖或糊精中的任意一种或几种。
3.一种制备权利要求1所述饲料添加剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：按所述重量配比称取各组分，混匀，即得。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Feed additive for preventing or alleviating endotoxin infection in weaning piglets and its preparation method Effective date of registration: 20220526 Granted publication date: 20180302 Pledgee: Guanggu Branch of Wuhan Rural Commercial Bank Co.,Ltd. Pledgor: WUHAN HUAYANG ANIMAL PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2022420000137 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |