CN104396707A - 一种提高樟子松苗木抗逆性的方法 - Google Patents

一种提高樟子松苗木抗逆性的方法 Download PDF

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尹大川
邓勋
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Abstract

本发明涉及一种提高樟子松苗木抗逆性的方法，(1)菌丝体发酵液培养，(2)菌剂制作，(3)种子处理，(4)无菌土制备，(5)播种，(6)菌剂接种。本发明提高樟子松苗木生长及抗逆水平，采用打孔灌根及间隔接种的方式，对出苗1个月的樟子松苗木接种褐环乳牛肝菌发酵液，生长1个月后，采用同样的方式接种绿木霉发酵液。180天苗木高生长提高42.3％，地径提高66.7％，过氧化物酶提高268.3％，超氧化物歧化酶提高66.18％，接种苗木无病害发生。

Description

一种提高樟子松苗木抗逆性的方法
技术领域
本发明涉及一种提高樟子松苗木抗逆性的方法。
背景技术
樟子松是北方主要的造林树种，其良好的耐旱抗逆性使其在植被恢复、生态修复和园林绿化方面都发挥了重要作用。苗木质量是造林成功与否的关键。引入植物根际有益微生物(如菌根菌和木霉菌)有利于改善苗圃土壤环境，可以有效促进苗木生长、增强苗木抗逆性和预防病害的发生。以多种微生物复合接种来提高苗木的抗逆性可以得到良好的效果，提高苗木的成活率。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术中存在的不足之处，提供一种提高樟子松苗木生长和抗逆性的根际益生菌的接种方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
(1)菌丝体发酵液培养：采用马铃薯葡萄糖培养基，马铃薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，将制作好的培养基装入500mL的三角瓶中，装液量200-300mL/500mL，置于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，在无菌条件下接种褐环乳牛肝菌和绿木霉，接种量10％-15％，将接种后的三角瓶置于转速120-140r/min，温度25℃-27℃的摇床培养，发酵天数褐环乳牛肝菌20d-30d，绿木霉3d-5d，
(2)菌剂制作：将褐环乳牛肝菌、绿木霉发酵液在无菌条件下粉碎，加入无菌水配成发酵液：无菌水浓度为1∶5，
(3)种子处理：将供试种子用0.5％高锰酸钾消毒30min，清水冲洗数次后，用灭菌湿纱布包裹保湿，在人工气候箱中，置于25℃下催芽，每天早晚用无菌水各冲洗一次，直至出芽，
(4)无菌土制备：将草炭土、蛭石和河沙按2∶1∶1的比例配制混合土，置高温高压灭菌器中121℃下灭菌2h，装入直径15cm×高13cm 营养钵中，
(5)播种：将经催芽的樟子松种子播入营养钵中，每钵30颗种子，上覆2cm厚无菌土，浇透水后放入大棚中培养，待幼苗出土后，定苗至每钵15株，进行常规的日常管护，
(6)菌剂接种：采取打孔灌根接种的方式，在出苗30d进行接种，每盆接种褐环乳牛肝菌菌剂40mL-50mL，待苗木生长30d后，以同样的方式接种绿木霉菌剂。
本发明的优点是：
(1)提高樟子松苗木生长及抗逆水平；
(2)采用打孔灌根及间隔接种的方式，对出苗1个月的樟子松苗木接种褐环乳牛肝菌发酵液，生长1个月后，采用同样的方式接种绿木霉发酵液。180天苗木高生长提高42.3％，地径提高66.7％，过氧化物酶提高268.3％，超氧化物歧化酶提高66.18％，接种苗木无病害发生。
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所
保藏日期：2014年6月4日
保藏编号：9246(N94)9264(M43) 
分类命名：褐环乳牛肝菌，suillus luteus；绿木霉Trichodermavirens 
具体实施方式
下面对本发明的实施例作进一步详细描述。
实施例1、
(1)菌丝体发酵液培养：采用的马铃薯葡萄糖培养基，马铃薯180g，葡萄糖18g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，将制作好的培养基装入500mL的三角瓶中，装液量200mL/500mL，置于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，在无菌条件下接种褐环乳牛肝菌和绿木霉，接种量10％，将接种后的三角瓶置于转速120r/min，温度25℃的摇床培养，发酵天数褐环乳牛肝菌20d，绿木霉3d，
(2)菌剂制作：将褐环乳牛肝菌、绿木霉发酵液在无菌条件下粉碎，加入无菌水配成发酵液：无菌水浓度为1∶5，
(3)种子处理：将供试种子用0.5％高锰酸钾消毒30min，清水冲洗数次后，用灭菌湿纱布包裹保湿，在人工气候箱中，置于25℃下催芽，每天早晚用无菌水各冲洗一次，直至出芽，
(4)无菌土制备：将草炭土、蛭石和河沙按2∶1∶1的比例配制混合土，置高温高压灭菌器中121℃下灭菌2h，装入直径15cm×高13cm 营养钵中，
(5)播种：将经催芽的樟子松种子播入营养钵中，每钵30颗种子，上覆2cm厚无菌土，浇透水后放入大棚中培养，待幼苗出土后，定苗至每钵15株，进行常规的日常管护，
(6)菌剂接种：采取打孔灌根接种的方式，在出苗30d进行接种，每盆接种褐环乳牛肝菌菌剂40mL，待苗木生长30d后，以同样的方式接种绿木霉菌剂。
实施例2、
(1)菌丝体发酵液培养：采用的马铃薯葡萄糖培养基，马铃薯210g，葡萄糖19g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，将制作好的培养基装入500mL的三角瓶中，装液量260mL/500mL，置于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，在无菌条件下接种褐环乳牛肝菌和绿木霉，接种量12％，将接种后的三角瓶置于转速130r/min，温度26℃的摇床培养，发酵天数褐环乳牛肝菌25d，绿木霉4d，
(2)菌剂制作：将褐环乳牛肝菌、绿木霉发酵液在无菌条件下粉碎，加入无菌水配成发酵液：无菌水浓度为1∶5，
(3)种子处理：将供试种子用0.5％高锰酸钾消毒30min，清水冲洗数次后，用灭菌湿纱布包裹保湿，在人工气候箱中，置于25℃下催芽，每天早晚用无菌水各冲洗一次，直至出芽，
(4)无菌土制备：将草炭土、蛭石和河沙按2∶1∶1的比例配制混合土，置高温高压灭菌器中121℃下灭菌2h，装入直径15cm×高13cm营养钵中，
(5)播种：将经催芽的樟子松种子播入营养钵中，每钵30颗种子，上覆2cm厚无菌土，浇透水后放入大棚中培养，待幼苗出土后，定苗至每钵15株，进行常规的日常管护，
(6)菌剂接种：采取打孔灌根接种的方式，在出苗30d进行接种，每盆接种褐环乳牛肝菌菌剂45mL，待苗木生长30d后，以同样的方式接种绿木霉菌剂。
实施例3、
(1)菌丝体发酵液培养：采用的马铃薯葡萄糖培养基，马铃薯250g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，将制作好的培养基装入500mL的三角瓶中，装液量300mL/500mL，置于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，在无菌条件下接种褐环乳牛肝菌和绿木霉，接种量15％，将接种后的三角瓶置于转速140r/min，温度27℃的摇床培养，发酵天数褐环乳牛肝菌30d，绿木霉5d，
(2)菌剂制作：将褐环乳牛肝菌、绿木霉发酵液在无菌条件下粉碎，加入无菌水配成发酵液：无菌水浓度为1∶5，
(3)种子处理：将供试种子用0.5％高锰酸钾消毒30min，清水冲洗数次后，用灭菌湿纱布包裹保湿，在人工气候箱中，置于25℃下催芽，每天早晚用无菌水各冲洗一次，直至出芽，
(4)无菌土制备：将草炭土、蛭石和河沙按2∶1∶1的比例配制混合土，置高温高压灭菌器中121℃下灭菌2h，装入直径15cm×高13cm营养钵中，
(5)播种：将经催芽的樟子松种子播入营养钵中，每钵30颗种子，上覆2cm厚无菌土，浇透水后放入大棚中培养，待幼苗出土后，定苗至每钵15株，进行常规的日常管护，
(6)菌剂接种：采取打孔灌根接种的方式，在出苗30d进行接种，每盆接种褐环乳牛肝菌菌剂50mL，待苗木生长30d后，以同样的方式接种绿木霉菌剂。

Claims (1)

1.一种提高樟子松苗木抗逆性的方法，其特征在于：
(1)菌丝体发酵液培养：采用马铃薯葡萄糖培养基，马铃薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，将制作好的培养基装入500mL的三角瓶中，装液量200-300mL/500mL，置于121℃高压灭菌锅中灭菌20min，在无菌条件下接种褐环乳牛肝菌和绿木霉，接种量10％-15％，将接种后的三角瓶置于转速120-140r/min，温度25℃-27℃的摇床培养，发酵天数褐环乳牛肝菌20d-30d，绿木霉3d-5d，
(2)菌剂制作：将褐环乳牛肝菌、绿木霉发酵液在无菌条件下粉碎，加入无菌水配成发酵液：无菌水浓度为1∶5，
(3)种子处理：将供试种子用0.5％高锰酸钾消毒30min，清水冲洗数次后，用灭菌湿纱布包裹保湿，在人工气候箱中，置于25℃下催芽，每天早晚用无菌水各冲洗一次，直至出芽，
(4)无菌土制备：将草炭土、蛭石和河沙按2∶1∶1的比例配制混合土，置高温高压灭菌器中121℃下灭菌2h，装入直径15cm×高13cm营养钵中，
(5)播种：将经催芽的樟子松种子播入营养钵中，每钵30颗种子，上覆2cm厚无菌土，浇透水后放入大棚中培养，待幼苗出土后，定苗至每钵15株，进行常规的日常管护，
(6)菌剂接种：采取打孔灌根接种的方式，在出苗30d进行接种，每盆接种褐环乳牛肝菌菌剂40mL-50mL，待苗木生长30d后，以同样的方式接种绿木霉菌剂。
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