CN104382966B - 一种薰倒牛总黄酮的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种薰倒牛总黄酮的提取方法。该方法包括下列步骤:将薰倒牛原料粉末,与体积百分比为40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇混合,超声提取后固液分离,得滤液A;将滤液A浓缩至干,即得薰倒牛总黄酮提取物;其中,超声提取的温度为15℃~65℃;超声提取的时间为20min~120min;超声提取的功率为200W~1000W;体积百分比为40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇,与薰倒牛原料粉末的体积质量比为1mL/g~60mL/g。本发明薰倒牛总黄酮的提取方法的提取率高,提取出的总黄酮抗氧化能力和抑菌能力均较好,同时该提取工艺操作简单,设备通用性好,提取溶剂可以回收利用,生产成本低,更适用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种薰倒牛总黄酮的提取方法。
背景技术
黄酮类物质广泛存在于植物界,它可分为黄酮类、异黄酮类、黄酮醇类、查尔酮类等多种类型。不同类型的黄酮溶解的溶剂也有不同。例如黄芩,从中分离出来的黄酮类化合物有黄芩苷(含4.0%-5.2%)、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素。其中黄芩苷是主要有效成分,具有抗菌、消炎作用;此外,其还具有降转氨酶的作用。黄芩苷的苷元是黄芩素,黄芩素的磷酸酯钠盐可用于治疗过敏、喘息等疾病。黄芩苷几乎不溶于水,难溶于甲醇、乙醇和丙酮等溶剂,可溶于热乙酸。因此,在现有技术中,黄芩苷可用水煎煮加酸沉淀的办法提取。又例如葛根,其含有的黄酮类成分主要为大豆异黄酮,在分离葛根总黄酮时用氧化铝柱色谱法分离方法。
薰倒牛(Biebersteinia heterostem on Maxim)为1年生草本植物,具有浓烈的腥臭味,民间又称臭花椒、狼尾巴,是蔷薇纲牻牛儿苗亚纲薰倒牛科(Biebersteiniaceae)薰倒牛属的植物。
薰倒牛主要分布在西藏,青海,甘肃、四川、新疆等地区,于海拔1000~3200米的草原和河滩可见。薰倒牛具有很高的药用价值,其味辛、苦,性寒,具有消炎止痛,清热解毒,清血热,祛风毒的作用,具有广泛的药理活性。《藏药薰倒牛的活性物质研究》(药学学报,1995年;30(3):211-214)中已经有报道了薰倒牛中含有相当的黄酮类成分。黄酮类化合物具有抗病毒、抗肿瘤、强心、降压、扩张冠状动脉降低胆固醇、利尿、止咳祛痰、保肝等作用。通过检索国内外相关资料,至今尚未发现薰倒牛中黄酮提取的相关研究与报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了填补现有技术中没有薰倒牛总黄酮提取工艺的空白,而提供一种薰倒牛总黄酮的提取方法。本发明薰倒牛总黄酮的提取方法的提取率高,提取出的总黄酮抗氧化能力和抑菌能力均较好,同时该提取工艺操作简单,设备通用性好,提取溶剂可以回收利用,生产成本低,更适用于工业化生产。
本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题的。
本发明提供了一种薰倒牛总黄酮的提取方法,其包括下列步骤:将薰倒牛原料粉末,与体积百分比为40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇混合,超声提取后固液分离,得滤液A;将所述的滤液A浓缩至干,即得薰倒牛总黄酮提取物;其中,所述的超声提取的温度为15℃~65℃;所述的超声提取的时间为20min~120min;所述的超声提取的功率为200W~1000W;所述的体积百分比为40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇,与薰倒牛原料粉末的体积质量比为1mL/g~60mL/g。
所述的薰倒牛原料粉末中的薰倒牛原料可为薰倒牛的根、茎、叶、花和果实中的一种或多种,较佳地为薰倒牛茎。本发明中,所述的薰倒牛茎可自行采集,采集地点为甘肃省天祝藏族自治县,采集时间为每年8月下旬;也可在甘肃省天祝藏族自治县购买得到(市售可得)。
所述的薰倒牛原料粉末在使用前,可按照本领域常规的方法进行干燥处理。所述的干燥的方法可为本领域中药材粉末干燥常规的方法,较佳地为真空干燥。所述的真空干燥的方法较佳地为采用本领域常规的真空干燥设备进行干燥。其中,所述的真空干燥的温度较佳地为20℃~65℃。所述的真空干燥的真空度较佳地为20kPa~60kPa。
所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径可为本领域中药材粉末常规的颗粒粒径,较佳地为24~150目,更佳地为50~120目。
所述的薰倒牛原料粉末的制备方法可为本领域中药材粉末常规的制备方法,较佳地为采用本领域常规的中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎,过24~150目筛,较佳地过50~120目筛,即可。所述的薰倒牛原料在粉碎前,较佳地经洗净,自然条件下干燥后再使用。
所述的体积百分比为40%以上的乙醇水溶液较佳地为体积百分比为65%~75%的乙醇水溶液。所述的超声提取的温度较佳地为15℃~40℃,更佳地为20℃~35℃。所述的超声提取的时间较佳地为30min~120min,更佳地为30min~60min。所述的超声提取的功率较佳地为200W~800W,更佳地为300W~600W。所述的体积百分比为40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇,与薰倒牛原料粉末的体积质量比较佳地为20mL/g~60mL/g;更佳地为20mL/g~40mL/g。
所述的固液分离的方法可为本领域固液分离常规的方法,只要能够使滤液A与薰倒牛残渣分开即可;所述的固液分离中使用的过滤膜的孔径较佳地为0.22~10μm。
所述的滤液A浓缩至干中所述的浓缩的方法可为本领域滤液浓缩常规的方法,较佳地为减压蒸馏。所述的减压蒸馏的温度较佳地为30℃~60℃。所述的减压蒸馏的真空度较佳地为0~50kPa。
所述的滤液A浓缩至干后的回收液,即体积百分比在40%以上的乙醇水溶液或无水乙醇,还可以回收套用至下批提取工艺中。
所述的薰倒牛总黄酮的提取工艺中,其还可进一步包含精制的操作。所述的精制的方法可为本领域常规的精制方法,较佳地包括下列步骤:将所述的薰倒牛总黄酮,用有机溶剂萃取后,得有机相,将有机相浓缩至干,即得薰倒牛总黄酮提取物产品。其中,所述的有机溶剂为酯类溶剂、酮类溶剂和氯代烃类溶剂中的一种或多种。所述的酯类溶剂较佳地为乙酸乙酯。所述的酮类溶剂较佳地为丙酮。所述的氯代烃类溶剂较佳地为三氯甲烷。所述的将有机相浓缩至干中所述的浓缩的方法可为本领域常规的方法,较佳地为减压蒸馏。所述的减压蒸馏的温度较佳地为30℃~70℃。所述的减压蒸馏的真空度较佳地为20kPa~60kPa。
在不违背本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于:
本发明薰倒牛总黄酮的提取工艺的提取率高,提取出的总黄酮抗氧化能力和抑菌能力均较好,同时该提取工艺操作简单,设备通用性好,提取溶剂可以回收利用,生产成本低,更适用于工业化生产。
附图说明
图1为实施例1提取薰倒牛总黄酮工艺的总流程图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
下述实施例1~4中,薰倒牛茎为自行采集,采集地点为甘肃省天祝藏族自治县,采集时间为每年8月下旬。薰倒牛茎的一般处理过程为:选取薰倒牛茎,洗净薰倒牛茎上泥土,自然条件下干燥。
下述实施例5中,薰倒牛为在甘肃省天祝藏族自治县购买得到。
下述实施例中提取率=总黄酮的质量/原料的质量。
实施例1
(1)粉碎干燥:将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎,过100目筛,采用真空干燥器在25℃,真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎粉末。
(2)超声提取:将锥形瓶放入超声波清洗仪中,选用乙醇超声提取薰倒牛茎总黄酮。超声提取条件为:体积百分比为75%的乙醇水溶液,超声提取时间55min,超声提取温度是35℃,超声提取功率600W,乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量比37:1mL/g。
(3)固液分离:提取完成后,用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液,滤纸下层得到滤液A,滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。
(4)滤液A浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa,温度40℃的条件下,浓缩滤液A至干,并回收体积百分比为75%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。
(5)精制:采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮的粗提物,得到乙酸乙酯相。然后采用旋转蒸发仪在真空度为40kPa,温度30℃的条件下,浓缩乙酸乙酯相至干,并回收乙酸乙酯,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物产品。提取率为2.2%。
实施例2
(1)粉碎干燥:将洗净的薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎,过50目筛,采用真空干燥器在25℃,真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎粉末。
(2)超声提取:将锥形瓶放入超声波清洗仪中,选用乙醇超声提取薰倒牛茎总黄酮。体积百分比为75%的乙醇水溶液,超声提取时间55min,超声提取温度是35℃,超声提取功率360W,乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量比20:1mL/g。
(3)固液分离:提取完成后,用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液,滤纸下层得到滤液A,滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。
(4)滤液A浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa,温度40℃的条件下,滤液A浓缩至干,并回收体积百分比为75%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。提取率为2.03%。
以上实验结果表明,本方法的超声提取方法缩短了预处理时间,减少了试剂消耗量,提取总黄酮的效率增高,是一种有效的薰倒牛茎的总黄酮提取方法,在开发和利用薰倒牛茎中具有重要的应用价值。
实施例3
(1)粉碎干燥:将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎,过150目筛,采用真空干燥器在20℃,真空度60kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎粉末。
(2)超声提取:将锥形瓶放入超声波清洗仪中,选用乙醇超声提取薰倒牛茎总黄酮。超声提取条件为:体积百分比为40%的乙醇水溶液,超声提取时间120min,超声提取温度是65℃,超声提取功率500W,乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量比60mL/g。
(3)固液分离:提取完成后,用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液,滤纸下层得到滤液A,滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。
(4)滤液A浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为5kPa,温度60℃的条件下,浓缩滤液A至干,并回收体积百分比为40%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。
(5)精制:采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮的粗提物,得到乙酸乙酯相。然后采用旋转蒸发仪在真空度为60kPa,温度70℃的条件下,浓缩乙酸乙酯相至干,并回收乙酸乙酯,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物产品。提取率为1.86%。
实施例4
(1)粉碎干燥:将洗净的薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎,过24目筛,采用真空干燥器在65℃,真空度20kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎粉末。
(2)超声提取:将锥形瓶放入超声波清洗仪中,选用乙醇超声提取薰倒牛茎总黄酮。体积百分比为95%的乙醇水溶液,超声提取时间30min,超声提取温度是40℃,超声提取功率1000W,乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量比1mL/g。
(3)固液分离:提取完成后,用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液,滤纸下层得到滤液A,滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。
(4)滤液A浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为30kPa,温度30℃的条件下,滤液A浓缩至干,并回收体积百分比为95%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。提取率为1.25%。
实施例5
(1)粉碎干燥:将薰倒牛茎放入中药粉碎机内粉碎,过100目筛,采用真空干燥器在25℃,真空度50kPa的条件下减压干燥得到薰倒牛茎粉末。
(2)超声提取:将锥形瓶放入超声波清洗仪中,选用乙醇超声提取薰倒牛茎总黄酮。超声提取条件为:体积百分比为65%的乙醇水溶液,超声提取时间30min,超声提取温度是35℃,超声提取功率600W,乙醇水溶液和薰倒牛茎粉末体积质量比40:1mL/g。
(3)固液分离:提取完成后,用滤纸过滤薰倒牛茎粉末与乙醇溶液的混合液,滤纸下层得到滤液A,滤纸上层得到薰倒牛茎残渣。
(4)滤液A浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa,温度40℃的条件下,浓缩滤液A至干,并回收体积百分比为65%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。
(5)精制:采用乙酸乙酯萃取薰倒牛茎总黄酮的粗提物,得到乙酸乙酯相。然后采用旋转蒸发仪在真空度为40kPa,温度30℃的条件下,浓缩乙酸乙酯相至干,并回收乙酸乙酯,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物产品。提取率为2.2%。
对比实施例1
将薰倒牛茎放置恒温培养箱中60℃烘干,粉碎。过10目筛,70%乙醇溶液和薰倒牛的比例为1:20,在35℃下,浸提60分钟,使用4层纱布过滤2次,得滤液。将滤液浓缩至干:采用旋转蒸发仪在真空度为50kPa,温度40℃的条件下,将滤液浓缩至干,并回收体积百分比为70%的乙醇水溶液,得到薰倒牛茎总黄酮的提取物。提取率为1.18%。
效果实施例1DPPH自由基清除率测定
采用DPPH自由基清除率评定实施例1的超声提取方法提取的薰倒牛茎总黄酮粗提物以及对比实施例1的浸提法提取的薰倒牛茎总黄酮的抗氧化性。
DPPH自由基清除率的测定方法为:向2.5ml 0.004%DPPH的乙醇溶液80%乙醇溶液中加入1ml实施例1(或对比实施例1)中薰倒牛茎总黄酮提取物,混合均匀,30min以后用分光光度计在517nm处测定吸光值,同时测定2.5ml 0.004%DPPH的乙醇溶液80%乙醇溶液与1.0ml 80%乙醇溶液混合液的吸光值和2.5ml乙醇80%乙醇溶液与1.0ml样品混合液的吸光值,样品混合液是指80%乙醇+1.0mL实施例1(或对比实施例1)中薰倒牛茎总黄酮提取物。
经测定,采用本发明实施例1的超声提取方法提取的薰倒牛茎总黄酮粗提物的清除率是82.2%。对比实施例1得到的薰倒牛茎总黄酮的提取物的DPPH自由基清除率为80.7%。由此可见,采用本发明的超声提取方法得到的薰倒牛茎总黄酮粗提物,比未采用超声提取方法得到的薰倒牛茎总黄酮提取物清除率高。
效果实施例2总抗氧化能力测试
采用油脂稳定指数方法(OSI法)对实施例1和对比实施例1的提取方法得到的薰倒牛茎总黄酮提取物的总抗氧化性进行测定,其具体步骤为:用美国Omnion公司研制的油脂氧化稳定性测定仪测定样品。测定条件为:100℃连续通入空气,空气流速为20L/h;反应底物(猪油):3±0.02g。采用抗氧化保护系数(Pf)来表示样品的抗氧化性能。
Claims (13)
1.一种薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,其包括下列步骤:将薰倒牛原料粉末,与体积百分比为65%~75%的乙醇水溶液混合,超声提取后固液分离,得滤液A;将所述的滤液A浓缩至干,即得薰倒牛总黄酮提取物;其中,超声提取的温度为15℃~40℃;超声提取的时间为20min~120min;超声提取的功率为200W~1000W;所述的体积百分比为65%~75%的乙醇水溶液,与薰倒牛原料粉末的体积质量比为20mL/g~60mL/g。
2.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末中的薰倒牛原料为薰倒牛根、茎、叶、花和果实中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末在使用前进行干燥处理;所述的干燥的方法为真空干燥;所述的真空干燥的温度为20℃~65℃;所述的真空干燥的真空度为20kPa~60kPa。
4.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径为24~150目。
5.如权利要求4所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末的颗粒粒径为50~120目。
6.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末的制备方法为采用中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎,过24~150目筛,即可。
7.如权利要求6所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的薰倒牛原料粉末的制备方法为采用中药粉碎机将薰倒牛原料进行粉碎,过50~120目筛,即可。
8.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的超声提取的时间为30min~120min;和/或,所述的超声提取的功率为200~800W。
9.如权利要求8所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的超声提取的温度为20℃~35℃;所述的超声提取的时间为30min~60min;所述的超声提取的功率为200W~600W;和/或,所述的体积百分比为65%~75%以上的乙醇水溶液,与薰倒牛原料粉末的体积质量比为20mL/g~40mL/g。
10.如权利要求1所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的固液分离中使用的过滤膜的孔径为0.22~10μm;
和/或,所述的滤液A浓缩至干中所述的浓缩的方法为减压蒸馏;所述的减压蒸馏的温度为30℃~60℃;所述的减压蒸馏的真空度为0~50kPa,但不为0。
11.如权利要求1~10任一项所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,其还进一步包含精制的操作;所述的精制的方法包括下列步骤:将所述的薰倒牛总黄酮,用有机溶剂萃取后,得有机相,将有机相浓缩至干,即得薰倒牛总黄酮提取物产品。
12.如权利要求11所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的有机溶剂为酯类溶剂、酮类溶剂和氯代烃类溶剂中的一种或多种;
和/或,所述的将有机相浓缩至干中所述的浓缩的方法为减压蒸馏;所述的减压蒸馏的温度为30℃~70℃;所述的减压蒸馏的真空度为20kPa~60kPa。
13.如权利要求12所述的薰倒牛总黄酮的提取方法,其特征在于,所述的酯类溶剂为乙酸乙酯;所述的酮类溶剂为丙酮;所述的氯代烃类溶剂为三氯甲烷。
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