CN104382956A - 金耳子实体皂甙提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种金耳子实体皂甙提取物及其制备方法和用途,所述皂甙提取物以人参皂甙Rb1计算,含有20-60%总皂甙,并且该提取物是由如下方法制备得到的,低极性有机溶剂提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;水提取去除水溶性物质;30-70%乙醇溶液提取、浓缩;甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物;本发明提供的皂甙提取物具有降低血糖、调节血脂、增强机体免疫等功效,其不仅为深度开发利用金耳打开了一条崭新的途径,而且为降低血糖,调节血脂和增强机体免疫提供理想的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取物,特别涉及一种金耳子实体皂甙提取物及其制备方法和用途。
背景技术
糖尿病、高血脂症是目前中老年人的常见病和多发病,由糖尿病、高血脂引起的并发症严重危及人们的生命健康。现有西药类降糖药物难免有副作用,而天然中药类降糖药物备受人们青睐。
金耳,因其子实体呈金黄色而得名,又名黄金银耳、黄木耳、金木耳、黄耳、脑耳、胶耳,该菌在分类学上,属于真菌门,担子菌纲(Basidiomycetes),银耳目(Tremellales),银耳科(Tremellaceae),银耳属(Tremella),学名Tremella aurantialbavb;主要分布于我国云贵高原,是一种名贵的食药用真菌,其子实体质地细腻,润滑可口,味香色美。
民间对金耳的认识和药用有着非常悠久的历史,早在明朝时期,著名的药物学家李时珍在他的《本草纲目》中详细记载金耳。如“其金色者(当指金耳)治癖饮积聚,服痛金苍”。另外,《中国药用真菌》、《中国中药大典宗旨》、《云南食用菌》对金耳的药用价值均有详细介绍。金耳性温寒,味甘,能化痰,止咳,定喘,调气,平阴阳;临床上治神经衰弱,肺热,哮喘,慢性支气管炎,高血压,肝炎等疾病。
近年来国内对金耳的研究主要集中于它的驯化栽培、营养成分分析以及多糖及药效等方面;国外有关金耳的研究主要集中在子实体多糖的药理学上。
对于金耳多糖的降血糖降血脂功能,华东师范大学瞿伟菁等(上海农业学报.1998,14,58-62)研究发现,用金耳子实体浸液连续灌胃四氧嘧啶致高血糖大鼠21d,可以显著降低大鼠血糖。日本Kiho T等(Biosci.Biotechnol.Biochem,2000,64,417-419;Biological&PharmaceuticalBulletin,2001,24,1400-1403)发现,腹腔注射酸性金耳子实体多糖TAP能够显著增加正常和糖尿病小鼠肝中葡萄糖激酶、己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,降低葡萄糖-6-磷酸酶活性,同时减少肝糖原含量;非胰岛素依赖型糖尿病小鼠连续口服金耳酸性多糖TAP及其降解产物TAP-H 10周,可以抑制血糖的增加。
目前金耳子实体的生物活性研究主要集中于多糖,研究表明金耳多糖在提高机体免疫、抗肿瘤、降血糖、抗氧化作用、化学性肝损伤保护、改善记忆、改善营养性贫血、抗辐射、改善胃肠道功能等方面具有良好的保护作用,但未见有关金耳子实体其它活性成分的报道。
皂甙又称皂素、皂甙。它是由皂甙元和糖、糖醛酸或其他有机酸组成,结构复杂、极性大,大多可溶于水,振摇后易起持久性的肥皂样泡沫,因而得名。皂甙广泛存在于高等植物和某些海洋生物中的一种特殊苷类。皂甙是一类具有多种生理功能的活性物质,但目前关于金耳子实体中还未见含有皂甙成份文献或专利报到。
发明内容
本发明以金耳子实体作为研究对象,分析其成分组成,并对其有效成分皂甙进行提取和分离;对得到的皂甙提取物进行了生理功能的研究,发现经过本方法提取的皂甙提取物具有降低血糖、调节血脂和增强机体免疫等功效。
本发明具体技术方案如下:
本发明提供一种金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有20-60%总皂甙,其中皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
a.低极性有机溶剂提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
b.水提取去除水溶性物质;
c.30-70%乙醇溶液提取、浓缩;
d.甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物;
所述低极性有机溶剂选自石油醚、环己烷或***中的一种或多种。
本发明提供的金耳子实体皂甙提取物中总皂甙含量的测定是依据Pan Shu-yi方法并加以修改而得到的。
测定方法如下:精密称取干燥至恒重的人参皂甙Rb175mg,加无水乙醇定容至25mL,得到3mg/mL人参皂甙Rb1标准溶液;精密量取上述人参皂甙Rb1标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分别置于25mL刻度试管中,分别加无水乙醇定容至1mL,加入质量分数5%的香草醛-冰乙酸溶液0.2mL和0.8mL高氯酸,于60℃水浴15min,流动水冷却至室温,再加入3mL冰乙酸,摇匀后置于室温,用乙醇代替人参皂甙Rb1标准溶液重复上述操作用作空白,在570nm处测定吸光度值,以浓度-吸光度值做标准曲线,根据标准曲线计算总皂甙含量。
本发明所述金耳子实体优选为山西、云南或西藏中的任意一种金耳子实体。
本发明另一方面提供一种金耳子实体皂甙提取物的制备方法,该方法包括如下步骤:
(a)低极性有机溶剂提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
(b)水提取去除水溶性物质;
(c)30-70%乙醇溶液提取、浓缩;
(d)甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物;
所述低极性有机溶剂选自石油醚、环己烷或***中的一种或多种。
发明提供的制备方法简单,能够有效地提取金耳子实体中的总皂甙;其采用石油醚等低极性有机溶剂去除金耳子实体中的脂溶性物质,通过水提取去除水溶性物质,再乙醇溶液提取并沉淀,甲醇复溶,沉淀等步骤得到金耳子实体皂甙提取物。
进一步改进的方案中,所述金耳子实体皂甙提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体用石油醚提取,收集石油醚提取后残渣;
(3)将石油醚提取后残渣用水提取,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣用30-70%乙醇溶液提取,收集滤液,将滤液浓缩,获得浆状物;
(5)向浆状物中加入乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,静置,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
优选地,所述制备方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,过20-40目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:10-80加入石油醚,在温度为50-80℃下提取2-5次,每次5-8h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:20-80的水,在70-100℃下提取2-5次,每次2-5h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:10-80加入30-70%乙醇,在温度为60-100℃下提取3次,每次0.5-8h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入5-20倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置15-40h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
本发明所指的固液比为重量和体积的比。
本发明通过对各步骤中的参数进行优化,通过对上述制备方法中的参数进行限定,使得制备的皂甙提取物中含总皂甙的量显著提高。
另一方面,本发明提供一种由皂甙提取物和药用辅料制成的制剂,其中,所述皂甙提取物和药用辅料的重量份数比为8-9:1-2。本发明的制剂可按照药学领域的常规方法制备,该制剂可以是液体或固定形式的;优选为口服制剂,例如片剂、胶囊、含片、口服液等。
本发明提供的制剂中,该制剂优选为片剂,所述药用辅料是重量份数比为3:1:1的微晶纤维素、胶态二氧化硅和硬脂酸镁的混合物。本发明通过将微晶纤维素、胶态二氧化硅和硬脂酸镁及皂甙提取物制成片剂后,使得制备的片剂具有很好的稳定性、崩解时限和脆碎度。
本发明的又一目的是提供了包括金耳子实体皂甙提取物的药物组合物,该药物组合物由皂甙提取物和其他活性成分组成,所述药物组合物中含有10-40%总皂甙。
优选地,所述其他活性成分由下列重量份数的各组分制备而成:
紫草15-30 南瓜20-40 苍耳子15-30
虎杖10-20 菟丝子5-10 枇杷叶5-10。
本发明通过将金耳子实体皂甙提取物和其他活性成分组成药物组合物,显著提高了对糖尿病、高血脂症和增强肌体免疫力的疗效。
本发明的又一目的是提供了金耳子实体皂甙提取物、包括金耳子实体皂甙提取物的制剂和药物组合物的用途,其均具有降低血糖、调节血脂和增强肌体免疫力的作用,可用于生产治疗或预防糖尿病、高血脂症和增强肌体免疫力的药物。
本发明提供了一种金耳子实体皂甙提取物及其制备方法,该皂甙提取物具有显著的降低血糖、调节血脂和增强机体免疫的功效,并且其疗效高于金耳子实体多糖,其制备方法简单,能够有效地提取皂甙提取物,并且为金耳子实体皂甙提取物提供了一种新用途,为进一步开发金耳奠定了基础。
采用苯酚硫酸法检测对本发明提供的金耳子实体皂甙提取物中的多糖进行检测,检测方法如下:
金耳子实体皂甙提取物1克完全溶于100mL20%的乙醇溶液制成1%的皂甙提取物溶液。
标准曲线的制作:配制1mg/mL的标准葡萄糖溶液,分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4mL定容至2mL,再加入5%苯酚1mL,然后加入5mL浓硫酸,摇匀静止5min后,放置于沸水浴15min,流动水冷却至室温,并以蒸馏水做空白对照,最后在490nm处测定吸光度A,以吸光度作为自变量,葡萄糖浓度作为变量绘制糖浓度-吸光度的标准曲线。
样品中多糖含量测定:吸取皂甙提取物溶液20μL,加蒸馏水定容至体积为2mL,再加入5%苯酚1mL,然后加入5mL浓硫酸,摇匀静止5min后,放置于沸水浴15min,流动水冷却至室温,并以蒸馏水做空白对照,最后在490nm处测定吸光度A,根据上述标准曲线,以A计算样品溶液中多糖含量。
结果显示,金耳子实体皂甙提取物中未检测出多糖。
本发明的方法所制备的金耳子实体皂甙的降低血糖的功能,可通过下面的实验证明:
将购进的小鼠,适应性喂养5天后,禁食24小时,以柠檬酸缓冲液(pH=4.6)灭菌后配制4%的四氧嘧啶(alloxan)注射液,按体重160mg/kg剂量一次性腹腔注射造型,5天后尾部静脉采血,测定血糖值。选择血糖值大于10mmol/L的小鼠随机分为5组,每组10只,组间差异小于0.5mmol/L,设未注射四氧嘧啶的正常鼠为正常对照组(I),未给予任何药物的模型鼠为模型对照组(II),正常组和模型对照组给予生理盐水;药物对照组按剂量120mg/kg体重给予二甲双胍;金耳子实体皂甙提取物按低、中、高三种剂量组(分别为Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),分别以20、40、80mg/kg体重灌胃。上述试验给药30天后,金耳子实体皂甙组与对照组相比,血糖和果糖胺均极显著降低(pH<0.01),可见金耳皂甙30d即能显著降低高血糖小鼠血糖。
本发明的方法所制备的金耳子实体皂甙的调节血脂的功能,可通过下面的药剂实验证明:
大鼠购进后饲喂含有2%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶和88%基础饲料组成的高脂饲料3个月,诱导高血脂症模型鼠。3个月后禁食12h后眼球采血,测定甘油三酯,总胆固醇选取甘油三酯和总胆固醇含量分别高于10mmol/L和7mmol/L的高血脂大鼠按照甘油三酯、总胆固醇值和体重随机均衡分为空白对照组,模型对照组,血脂康对照组和金耳子实体皂甙高、中、低剂量组。共6组,每组10只。空白对照组给予普通饲料,余5组给予高脂饲料造模,同时空白对照组、模型组给予生理盐水,其他给药组给予对应受试药物共30d。最后1次给药,禁食12h后,腹主动脉采血4ml,测定甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白。
本发明经过上述试验研究显示应用本发明的生产的金耳子实体皂甙提取物经口服途径给予高血糖、高血脂和正常小鼠可显著降低其血糖和果糖胺,甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白含量,显著升高了小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,促进了小鼠淋巴细胞的转化,增加了NK细胞活性,因此证实了金耳子实体皂甙提取物具有降低血糖、调节血脂和增强肌体免疫力的功能。从而为糖尿病和高血脂患者提供了理想的药物,并为金耳的应用开创了广阔的前景。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明的技术方案所涉及的材料及工艺,给出了下述的实施例。但这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1 金耳子实体皂甙提取物
金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有60%总皂甙,该皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
(1)将金耳子实体粉碎,过40目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:80加入石油醚,在温度为80℃下提取5次,每次6h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:80的水,在100℃下提取5次,每次4h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:80加入30%乙醇,在温度为100℃下提取3次,每次0.5h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入20倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置40h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例2 金耳子实体皂甙提取物
金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有53%总皂甙,该皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
(1)将金耳子实体粉碎,过20目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:60加入石油醚,在温度为75℃下提取5次,每次8h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:60的水,在90℃下提取2次,每次5h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:60加入50%乙醇,在温度为90℃下提取3次,每次6h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃下旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入15倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置30h,抽滤,收集沉淀,
烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例3 金耳子实体皂甙提取物
金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有48%总皂甙,该皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
(1)将金耳子实体粉碎,过30目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:40加入石油醚,在温度为70℃下提取3次,每次5h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:40的水,在70℃下提取4次,每次2h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:40加入40%乙醇,在温度为70℃下提取3次,每次3h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入10倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置20h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例4 金耳子实体皂甙提取物
金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有21%总皂甙,该皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
a.环己烷提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
b.水提取去除水溶性物质;
c.30%乙醇溶液提取、浓缩;
d.甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物。
实施例5 金耳子实体皂甙提取物
金耳子实体皂甙提取物,以人参皂甙Rb1计算,该皂甙提取物中含有30%总皂甙,该皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
(1)将金耳子实体粉碎,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体用石油醚提取,收集石油醚提取后残渣;
(3)将石油醚提取后残渣用水提取,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣用50%乙醇溶液提取,收集滤液,将滤液浓缩,获得浆状物;
(5)向浆状物中加入乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,静置,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例6 金耳子实体皂甙提取物的制备方法
该方法包括如下步骤:
(a)***提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
(b)水提取去除水溶性物质;
(c)70%乙醇溶液提取、浓缩;
(d)甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物。
实施例7 金耳子实体皂甙提取物的制备方法
该方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体用石油醚提取,收集石油醚提取后残渣;
(3)将石油醚提取后残渣用水提取,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣用50%乙醇溶液提取,收集滤液,将滤液浓缩,获得浆状物;
(5)向浆状物中加入乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,静置,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例8 金耳子实体皂甙提取物的制备方法
该方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,过20目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:80加入石油醚,在温度为80℃下提取2次,每次6h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:20的水,在70℃下提取5次,每次4h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:80加入30%乙醇,在温度为100℃下提取3次,每次0.5h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入5倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置40h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例9 金耳子实体皂甙提取物的制备方法
该方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,过30目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:50加入石油醚,在温度为65℃下提取4次,每次6h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:50的水,在85℃下提取3次,每次4h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:50加入50%乙醇,在温度为80℃下提取3次,每次0.5h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入13倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置24h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例10 金耳子实体皂甙提取物的制备方法
该方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,过40目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:10加入石油醚,在温度为50℃下提取5次,每次6h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:80的水,在100℃下提取2次,每次4h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:10加入70%乙醇,在温度为60℃下提取3次,每次8h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃下旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入20倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置15h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
实施例11 含金耳子实体皂甙提取物的片剂
实施例1的皂甙提取物90g 微晶纤维素6g
胶体二氧化硅2g 硬脂酸镁2g
制备方法:
a.将实施例1的皂甙提取物与微晶纤维素和1.5g的胶体二氧化硅混合均匀,制得混合物;
b.将步骤a制得的混合物造粒,加入剩下的胶态二氧化硅和硬脂酸镁混合均匀,整粒,压片。
实施例12 含金耳子实体皂甙提取物的胶囊剂
将实施例1的金耳子实体皂甙提取物装入每粒200mg的胶囊中。该胶囊作为保健品食用;每天服用两粒或每天早晚各服用一粒。
实施例13 含有金耳子实体皂甙提取物的药物组合物
该药物组合物由下列成分组成:
实施例1的皂甙提取物10g、其他活性成分10g
其他活性成分由下列重量份数的各组分制备而成:
紫草15g 南瓜20g 苍耳子15g
虎杖10g 菟丝子5g 枇杷叶5g
其中该药物组合物中总皂甙的含量为30%。
实施例14 含有金耳子实体皂甙提取物的药物组合物
实施例1的皂甙提取物4g、其他活性成分20g
其他活性成分由下列重量份数的各组分制备而成:
紫草30g 南瓜40g 苍耳子30g
虎杖20g 菟丝子10g 枇杷叶10g
其中该药物组合物中总皂甙的含量为10%。
实施例15 含有金耳子实体皂甙提取物的药物组合物
实施例1的皂甙提取物30g、其他活性成分15g
其他活性成分由下列重量份数的各组分制备而成:
紫草20g 南瓜30g 苍耳子20g
虎杖15g 菟丝子7.7g 枇杷叶7.5g。
其中该药物组合物中总皂甙的含量为40%。
实施例16 石油醚提取过程中各参数的考察
将石油醚提取过程中的温度设计成40℃、50℃、65℃、80℃和90℃5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表1;
将石油醚提取过程中的固液比设计成1:5、1:10、1:50、1:80和1:90,5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表1;
表1 石油醚提取过程中各参数的考察结果
从表1中可以看出,在其他条件不变的情况下,石油醚提取时的温度和固液比对皂甙提取物中,总皂甙的含量存在着显著影响,其中当温度低于50℃或者固液比小于1:10,总皂甙的含量显著降低,随着温度的升高和固液比的增加,总皂甙的含量也随着增加,但当温度升高到80℃或固液比增加到1:80后,皂甙提取物中总皂甙的含量不在发生变化;由此得出,石油醚提取过程中,将固液比控制在1:10-80,温度控制在50-80℃范围内,才能制得高收率、低耗费的皂甙提取物。
实施例17 水提取过程中各参数的考察
将水提取过程中的温度设计成60℃、70℃、85℃、100℃和110℃5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表2;
将水提取过程中的固液比设计成1:15、1:20、1:50、1:80和1:90,5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表2;
表2 水提取过程中各参数的考察结果
从表2中可以看出,在其他条件不变的情况下,水提取时的温度和固液比对皂甙提取物中,总皂甙的含量存在着显著影响,其中当温度低于70℃或者固液比小于1:20,总皂甙的含量显著降低,随着温度的升高和固液比的增加,总皂甙的含量也随着增加,但当温度升高到100℃或固液比增加到1:80后,皂甙提取物中总皂甙的含量不在发生变化;由此得出,水提取过程中,将固液比控制在1:20-80,温度控制在70-100℃范围内,才能制得高收率、低耗费的皂甙提取物。
实施例18 乙醇提取过程中各参数的考察
将乙醇提取过程中的温度设计成50℃、60℃、80℃、100℃和110℃5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表3;
将乙醇提取过程中的乙醇浓度设计成20%、30%、50%、70%和80%,5个水平,其余步骤按照实施例1的方法制备,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表3;
表3 乙醇提取过程中各参数的考察结果
从表3中可以看出,在其他条件不变的情况下,乙醇提取时的温度和乙醇浓度对皂甙提取物中,总皂甙的含量存在着显著影响,其中当温度低于50℃或者乙醇浓度高于80%,总皂甙的含量显著降低,随着温度的升高和乙醇浓度的降低,总皂甙的含量也随着增加,但当温度升高到100℃皂甙提取物中总皂甙的含量不在发生变化,当乙醇浓度降低到30%,总皂甙的含量反而降低;由此得出,乙醇提取过程中,将乙醇浓度控制在30%-70%,温度控制在60-100℃范围内,才能制得高收率、低耗费的皂甙提取物。
实施例19 实施例1的皂甙提取物的制备中步骤(5)的乙醇沉淀,和步骤(6)的甲醇复溶对金耳子实体皂甙提取物中总皂甙含量的影响
将实施例1的皂甙提取物的制备中步骤(5)的乙醇沉淀或步骤(6)的甲醇复溶的步骤分别省略,其余步骤同实施例1,检测皂甙提取物中总皂苷的含量,考察结果见表4;
表4 乙醇沉淀和甲醇复溶的考察结果
从表4中可以看出,在其他条件不变的情况下,乙醇沉淀步骤和甲醇复溶步骤对皂甙提取物中,总皂甙的含量存在着显著影响。
试验例1 金耳子实体皂甙提取物及药物组合物降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖试验
实验动物:昆明小白鼠,雄性,体重为21-26g,由中科院上海实验动物中心提供。糖尿病小鼠模型制备;雄性小鼠禁食24小时后,腹腔注射160mg/kg四氧嘧啶造模型,5天后禁食3-5小时,测血糖,血糖值>10mmol/L为实验性糖尿病型鼠。
将血糖值>10mmol/L的糖尿病型鼠随机分为7组,每组10只,分别为正常组、模型对照组、二甲双胍组、实施例1组、实施例2组、实施例3组和实施例13;组间差异小于0.5mmol/L,设未注射四氧嘧啶的正常鼠为正常对照组,未给予任何药物的模型鼠为模型对照组,正常组和模型对照组给予生理盐水;二甲双胍组按剂量120mg/kg体重给予二甲双胍;实施例1组、实施例2组和实施例3组分别给予实施例1、实施例2和实施例3提取的皂甙提取物,分别以40mg/kg体重灌胃;实施例13组给予实施例13的药物组合物,以40mg/kg体重灌胃;上述试验给药30天后,测空腹血糖值,各组对糖尿病小鼠血糖的作用见表5;
表5 各组对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖的作用(n=10)
与模型对照组比较,p**<0.01,与实施例1组比较,pa<0.05;
结果显示:实施例1、实施例2和实施例3的金耳子实体皂甙提取物血糖值显著低于模型对照组的血糖值(P<0.01);并且也略低于二甲双胍组的血糖值;这显示金耳子实体皂甙提取物具有显著的降低糖尿病鼠血糖的作用;并且实施例13组提供的药物组合物的血糖值也低于实施例1的血糖组,并且该血糖值小于10mmol/L,表明,药物组合物更能够显著地降低糖尿病鼠血糖的作用。
试验例2 金耳子实体皂甙提取物及药物组合物降低高脂饲料诱导的高血脂症大鼠血脂试验
大鼠购进后饲喂含有2%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶和88%基础饲料组成的高脂饲料3个月,诱导高血脂症模型鼠。3个月后禁食12h后眼球采血,测定甘油三酯(TG),总胆固醇(CHOL)。选取甘油三酯和总胆固醇含量分别高于10mmol/L和7mmol/L的高血脂症大鼠按照TG、CHOL值和体重随机均衡分为正常组,模型对照组,血脂康对照组(剂量60mg/kg)、实施例1-3中制备的金耳子实体皂甙提取物(剂量20mg/kg)和实施例13的药物组合物(剂量20mg/kg)共7组,每组10只。空白对照组给予普通饲料,余6组给予高脂饲料造模,同时正常组、模型对照组给予生理盐水,其他给药组给予对应受试药物共30d。最后1次给药,禁食12h后,腹主动脉采血4ml,测定TG、CHOL、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白,结果见表6;
表6 各组对高脂饲料诱导的高血脂症小鼠血糖的作用(n=10)
与模型对照组比较,p*<0.01,与实施例1组比较,pa<0.05;
结果显示:实施例1、实施例2和实施例3的金耳子实体皂甙提取物的TG、CHOL、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白值显著低于模型对照组的TG、CHOL、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白值;这显示金耳子实体皂甙提取物具有显著的降低高脂饲料诱导的高脂血症大鼠的血脂;并且实施例13组提供的药物组合物的TG、CHOL、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白值也低于实施例1的TG、CHOL、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白值,表明,药物组合物更能够显著地高脂饲料诱导的高脂血症大鼠的血脂。
试验例3 金耳子实体皂甙提取物及药物组合物增强正常鼠免疫力
金耳子实体皂甙的调节血脂的功能,可参照文献“灵芝孢子多糖胶囊增强免疫力的研究”(2007年10月18卷12期,3039-3040),结果表7显示金耳子实体皂甙提取物及实施例13的药物组合物增强了小鼠巨噬细胞的吞噬鸡红细胞,淋巴细胞的转化能力以及的NK细胞的活性,这些结果说明实施例1-3的金耳子实体皂甙提取物和实施例13的药物组合物均能够增强正常鼠肌体免疫力的作用,同时实施例13的药物组合物对增强正常鼠肌体免疫力的作用更加显著,结果见表7;
表7 金耳子实体皂甙提取物对正常鼠免疫力的作用(n=10)
与正常组比较,p**<0.01。
试验例4 金耳子实体皂甙提取物(TFS)与金耳子实体多糖(TFP)的降血糖作用比较
实验动物:昆明小白鼠,雄性,体重为21-33g,由中国药科大学实验动物中心提供。
糖尿病小鼠模型制备:雄性小鼠禁食2h后,按180mg/kg剂量腹腔注射四氧嘧啶造模型,5天后禁食3-5h,测血糖,血糖值>13mmol/L为实验性糖尿病模型鼠。实验模型鼠按禁食3-5h的血糖水平随机分组,分为一个模型对照组和3个试验组(TFS、TFP和二甲双胍),试验组给药剂量分别为20mg/kg体重的TFS、200mg/kg体重的TFP和100mg/kg体重的二甲双胍,分别灌胃给药,模型对照组灌以等量自来水。连续给予受试药物14天后眼眶静脉取血(禁食同实验前),分析血糖、果糖胺和糖基化血红蛋白,结果见表8;
表8 金耳子实体皂甙提取物和多糖降血糖作用比较
与模型对照组比较,p*<0.05,pb﹥0.05;与二甲双胍组比较,pa<0.05;
从表8中可以看出,模型组给药前血糖无显著差异(pb﹥0.05),给药后模型对照组血糖和给药前比,无显著差异说明模型对照组是稳定的;给药后二甲双胍组、TFP组和TFS组血糖值显著降低,其中TFP组和TFS组血糖值不仅显著低于模型对照组而且低于二甲双胍组,但是TFS组和TFP组之间无显著差异;给药后二甲双胍组、TFP组和TFS组的果糖胺值和糖基化血红蛋白也显著降低,其中TFP组和TFS组的果糖胺值和糖基化血红蛋白不仅显著低于模型对照组而且低于二甲双胍组,但是TFS组和TFP组之间无显著差异。由于果糖胺和糖基化血红蛋白可以反应较长时间的血糖值变化,可见TFS和TFP具有显著的调节血糖作用。由于TFS的给药剂量是TFP的剂量的1/10,因此,金耳子实体皂甙提取物的作用要高于金耳子实体多糖的作用。
以上已详细描述了本发明的实施方案,对本领域技术人员来说很显然可以做很多改进和变化而不会背离本发明的基本精神。所有这些变化和改进都在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种金耳子实体皂甙提取物,其特征在于,以人参皂甙Rb1计算,所述皂甙提取物中含有20-60%总皂甙,所述皂甙提取物是由如下方法制备得到的:
a.低极性有机溶剂提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
b.水提取去除水溶性物质;
c.30-70%乙醇溶液提取、浓缩;
d.甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物;
所述低极性有机溶剂选自石油醚、环己烷或***中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的金耳子实体皂甙提取物,其特征在于,所述金耳子实体为山西、云南或西藏中的任意一种金耳子实体。
3.一种权利要求1所述的金耳子实体皂甙提取物的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(a)低极性有机溶剂提取去除金耳子实体中的脂溶性物质;
(b)水提取去除水溶性物质;
(c)30-70%乙醇溶液提取、浓缩;
(d)甲醇复溶,沉淀得到金耳子实体皂甙提取物;
所述低极性有机溶剂选自石油醚、环己烷或***中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的金耳子实体皂甙提取物的制备方法,其特征在于,所述低极性有机溶剂为石油醚,所述方法包括如下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体用石油醚提取,收集石油醚提取后残渣;
(3)将石油醚提取后残渣用水提取,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣用30-70%乙醇溶液提取,收集滤液,将滤液浓缩,获得浆状物;
(5)向浆状物中加入乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,静置,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
5.如权利要求4所述的金耳子实体皂甙提取物的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)将金耳子实体粉碎,过20-40目筛,备用;
(2)将粉碎后的金耳子实体按固液比为1:10-80加入石油醚,在温度为50-80℃下提取2-5次,每次5-8h;静置,除去石油醚,收集石油醚提取后残渣,风干;
(3)向石油醚提取后残渣中加入固液比为1:20-80的水,在70-100℃下提取2-5次,每次2-5h,合并提取液,抽滤,将滤饼烘干,收集水提后残渣;
(4)将水提后残渣按固液比为1:10-80加入30-70%乙醇,在温度为60-100℃下提取3次,每次0.5-8h,合并提取液,抽滤,收集滤液,将滤液在50℃旋转蒸发至浆状,获得浆状物;
(5)向步骤(4)制备的浆状物中加入5-20倍体积的乙醇,静置,收集沉淀;
(6)将沉淀用甲醇复溶,于-20℃下,静置15-40h,抽滤,收集沉淀,烘干,制得金耳子实体皂甙提取物。
6.由权利要求1所述的金耳子实体皂甙提取物和药用辅料制成的制剂,其特征在于,所述皂苷提取物和药用辅料的重量份数比为8-9:1-2;优选地,所述药用辅料是重量份数比为3:1:1的微晶纤维素、胶态二氧化硅和硬脂酸镁的混合物。
7.包括权利要求1所述的金耳子实体皂甙提取物的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物由皂甙提取物和其他活性成分组成,所述药物组合物中含有10-40%总皂甙。
8.如权利要求7所述的药物组合物,其特征在于,所述其他活性成分由下列重量份数的各组分制备而成:
紫草15-30 南瓜20-40 苍耳子15-30
虎杖10-20 菟丝子5-10 枇杷叶5-10。
9.如权利要求1所述的金耳子实体皂甙提取物,其特征在于,所述皂甙提取物在制备用于预防或治疗糖尿病、高血脂和增强机体免疫的药物中的应用。
10.如权利要求7-8任一所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物在制备用于预防或治疗糖尿病、高血脂和增强机体免疫的药物中的应用。
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