CN104306406A - 一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途。本发明采用冷冻干燥发酵工艺制备全蝎发酵物，后经超滤器不同滤膜的超滤获得不同相对分子质量的全蝎超滤物。本发明制备工艺简单，制得的全蝎发酵物及超滤物能抑制病毒和癌细胞的生长，尤其是在抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549）肿瘤细胞的生长方面作用显著。

Description

一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途
技术领域
本发明涉及一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其在抑制病毒和癌细胞生长中的应用，属于中药发酵物及其应用技术领域。
背景技术
病毒感染是目前世界范围内发病频率最高，范围最广泛，危害最大的一类疾病，每年世界各国都投入了大量的人力与物力开发研究抗病毒类药物。由于病毒本身所具有的变异性，这就决定了抗病毒药物开发的难度，尽管如此，人们还是锲而不舍地在研究对抗各种病毒的新技术、新方法。目前抗病毒药物数量有限，效果也不尽如意，有些病毒人类目前还没有解决的有效办法。本发明的全蝎发酵物及其超滤物就是对抗H1N1病毒、上呼吸道合胞病毒、肠道病毒和珂萨奇病毒的较有希望的物质，它的发明成功必将对抗病毒事业产生巨大的影响。
癌症是当今世界上仅次于心脑血管病的第二大杀手，尤其是肺癌，发病率高、愈后差、死亡率高，是目前最为凶险的疾病，目前西医上对癌症的治疗主要采用化疗，但是化疗副作用大，给患者带来极大的痛苦，治疗效果也不理想。在中医治疗癌症方面，中药的复方也能起到一定的辅助作用。全蝎发酵物及其超滤物为研究抗癌药物提供了全新的思路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种全蝎发酵物及超滤物。本发明制得的全蝎发酵物及超滤物能抑制病毒和癌细胞的生长，尤其是在抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549）肿瘤细胞的生长方面作用显著。
本发明的另一目的在于提供一种全蝎发酵物及超滤物的制备工艺及制备的产品在抑制病毒和癌细胞的生长中的应用。
本发明采用以下技术方案：
一种全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，它是由以下步骤的方法制备得到：
（1）将活的野生全蝎用清水漂洗，沥干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温度-60℃，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉；
（2）取步骤（1）制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，加水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵品；
（3）将步骤（2）制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，经超声提取2~3次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物；
（4）将步骤（3）所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤，分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
上述步骤（1）中冷冻室温度为-18℃~-60℃，冷冻时间为2-72小时。
上述步骤（1）中冷冻干燥时间为12-24小时，真空度为1Pa。
上述步骤（2）中恒温培养箱温度为25~28℃，湿度为70~95%。
上述步骤（3）中超声时间为30-60min。
上述全蝎发酵物及超滤物的制备工艺，其特征在于，它包括以下步骤：
（1）将活的野生全蝎用清水漂洗，沥干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温度-60℃，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉；
（2）取步骤（1）制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，加水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵品；
（3）将步骤（2）制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，，经超声后提取2~3次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物；
（4）将步骤（3）所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤，分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
上述全蝎发酵物及超滤物在抑制病毒和癌细胞生长中的应用。实验结果表明，本发明制备的全蝎发酵物对体外肺腺癌细胞具有明显的抑制生长作用，全蝎超滤物也能明显的起到抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549）肿瘤细胞的生长的作用。
本发明所有实验中使用的冷冻干燥机型号为 LGJ-18A型（北京四环仪器设备有限公司），全蝎为钳蝎科、向荆属的东亚钳蝎（Buthus martensi Karsch），白僵菌为球孢白僵菌（Beauveria bassiana，100亿/g，山东农业科学院制），超滤器（型号WT6002G）。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
（1）本发明制备的全蝎发酵物对体外肺腺癌（A549）细胞的生长具有明显的抑制作用。
（2）采用本发明工艺制备的全蝎超滤物在抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549）肿瘤细胞的生长方面作用显著。
（3）本发明的全蝎发酵物、超滤物的制备工艺简单合理。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
实施例1
采用以下方法制备一种全蝎发酵物：
（1）将活的野生东亚钳蝎用清水漂洗，沥干，然后放入-18℃的冷冻室冷冻72小时，匀浆，在冷阱温度-60℃，真空度1Pa，室温下，冷冻干燥12小时至粉末得全蝎冻干粉；
（2）取全蝎冻干粉25重量份，加入活的球孢白僵菌孢子粉（100亿/g，山东农业科学院制）2重量份，加水10重量份，拌匀，置于恒温恒湿培养箱中，温度25℃，湿度为70%，发酵8天，得全蝎发酵品。
（3）取全蝎发酵品，加入25倍于其重量的纯净水，超声提取2次，每次30min，合并提取液，抽滤得全蝎发酵物。将所得的全蝎发酵物经lowrry法测定可溶性蛋白的含量。
用MTT法测定上述全蝎发酵物对体外食道癌、乳腺癌和肺腺癌（A549）细胞的生长抑制作用。采用SPSS16.0单因素方差分析观察各组与空白组之间是否存在显著性差异。实验结果显示如下表1：
注：与空白对照组比较*P<0.05。
结果显示，顺铂与全蝎发酵物蛋白质含量50μg/mL、100μg/mL对肺腺癌细胞的抑制率与空白组之间均有显著性差异。这说明全蝎发酵物对肺腺癌细胞起到很好的抑制作用。
实施例2
将活的野生东亚钳蝎用清水漂洗，沥干，然后放入-60℃的冷冻室冷冻2小时，匀浆，在冷阱温度-60℃，真空度1Pa，室温下，冷冻干燥24小时至粉末得全蝎冻干粉；
取上述制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的球孢白僵菌孢子粉（100亿/g，山东农业科学院制）12重量份，加纯净水15重量份，拌匀，置于恒温恒湿培养箱中，温度26℃，湿度为80%，发酵20天，得全蝎发酵品。
取全蝎发酵品，加入30倍于其重量的纯净水，超声提取3次，每次45min，合并提取液，得全蝎发酵物。分别用30KDa，3 KDa超滤膜进行超滤，分别得到含有相对分子量在＞30 KDa，30 KDa~3 KDa，＜3 KDa的相对分子量的超滤物。可用lowrry法测定可溶性蛋白的含量。用MTT法测定其对体外肺腺癌（A549）细胞的生长抑制作用，结果见表2。
 
注：与空白对照组比较*P<0.01、**P<0.05。
采用SPSS 19.0统计软件，单因素方差分析比较组间差异的显著性，以P=0.01、P=0.05为检验水准。结果：各超滤物对肺腺癌细胞有抑制作用，且多为低浓度抑制率较高。与空白组比较有极显著或显著性差异。
实施例3
将活的野生东亚钳蝎用清水漂洗，沥干，然后放入-30℃的冷冻室冷冻48小时，匀浆，在冷阱温度-60℃，真空度1Pa，室温下，冷冻干燥18小时至粉末得全蝎冻干粉；
取上述制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的球孢白僵菌孢子粉（100亿/g  山东农业科学院制）25重量份，加纯净水25重量份，拌匀，置于恒温恒湿培养箱中，温度28℃，湿度为95%，发酵30天，得全蝎发酵品。
取全蝎发酵品，加入50倍于其重量的纯净水，超声提取2次，每次60min，合并提取液过滤得全蝎发酵物。将全蝎发酵物分别用8KDa超滤膜进行超滤，分别得到含有相对分子量在≥8 KDa，＜8 KDa的分子量段的超滤物。用lowrry法测定可溶性蛋白的含量。用MTT法测定其对体外HSV1、H1N1、RSV病毒(引自中国疾病预防控制中心病毒研究所流感病毒研究室)的抑制作用进行研究，实验结果见表3、4、5。
根据公式：实验细胞存活率=（实验组OD值-空白D值）/（细胞对照组OD值-空白OD值）×100%，得存活率，存活率>50%为有效；与空白组比较*P<0.05，**P<0.01。
根据公式：实验细胞存活率=（实验组OD值-空白D值）/（细胞对照组OD值-空白OD值）×100%，得存活率，存活率>50%为有效；与空白组比较*P<0.05，**P<0.01。
根据公式：实验细胞存活率=（实验组OD值-空白D值）/（细胞对照组OD值-空白OD值）×100%，得存活率，存活率>50%为有效；与空白组比较*P<0.05，**P<0.01。
对以上三个数据表中数据采用三倍标准差法剔除不合理数据后计算存活率并利用Reed和Muench氏法计算治疗指数(TI)。结果显示全蝎超滤物≥8K Da段具有显著的抗HSV1、H1N1、RSV活性，其TI指数分别为36.83、184.81、398.59；全蝎超滤物＜8K Da段具有显著的抗HSV1活性，TI值为24.46；全蝎超滤物＜8K Da段具有显著的抗H1N1活性，TI值为53.47。

Claims (8)

1.一种全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，它是由以下步骤的方法制备得到：
将活的野生全蝎用清水漂洗，沥干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温度-60℃，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉；
取步骤（1）制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，加水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵品；
将步骤（2）制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，经超声提取2~3次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物；
将步骤（3）所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤，分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
2.根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述全蝎为东亚钳蝎。
3.根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（1）中冷冻室温度为-18℃~-60℃，冷冻时间为2-72小时。
4.根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（1）中冷冻干燥时间为12-24小时，真空度为1Pa。
5.据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（2）中恒温培养箱温度为25~28℃，湿度为70~95%。
6.据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（3）中超声时间为30-60min。
7.一种权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物的制备工艺，其特征在于，它包括以下步骤：
（1）将活的野生全蝎用清水漂洗，沥干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温度-60℃，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉；
（2）取步骤（1）制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，加水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵品；
（3）将步骤（2）制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，，经超声后提取2~3次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物；
（4）将步骤（3）所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤，分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
8.一种权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物在抑制病毒和癌细胞生长中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107043799A (zh) * 2017-03-14 2017-08-15 山东中医药大学 一种全蝎酶解液超滤物制备工艺及其用途
CN108272875A (zh) * 2018-03-29 2018-07-13 山东中医药大学 一种中药组合发酵物醇提成分的制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1341422A (zh) * 2001-09-29 2002-03-27 罗才良 冻干蝎子
CN1891233A (zh) * 2005-07-08 2007-01-10 黄巨轮 一种生肽营养液
CN101032526A (zh) * 2007-04-20 2007-09-12 北京联合大学生物化学工程学院 东亚钳蝎提取物及其预防和/或治疗口腔上皮癌药物
CN101366733A (zh) * 2008-10-07 2009-02-18 山东省医学科学院基础医学研究所 一种蝎毒提取物及其制备方法与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1341422A (zh) * 2001-09-29 2002-03-27 罗才良 冻干蝎子
CN1891233A (zh) * 2005-07-08 2007-01-10 黄巨轮 一种生肽营养液
CN101032526A (zh) * 2007-04-20 2007-09-12 北京联合大学生物化学工程学院 东亚钳蝎提取物及其预防和/或治疗口腔上皮癌药物
CN101366733A (zh) * 2008-10-07 2009-02-18 山东省医学科学院基础医学研究所 一种蝎毒提取物及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
侯林: ""全蝎的产地加工与抗肿瘤药效部位的提取分离工艺研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
刘平等: "《昆虫巧治常见病》", 31 October 2014, 金盾出版社 *
姬涛: ""全蝎的产地加工与抗惊厥药效部位的提取分离工艺研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
杨光明等: ""发酵对中药减毒增效的研究进展"", 《食品与生物技术学报》 *
王集会等: ""野生全蝎粉与酵解和酶解提取物抗肿瘤效果比较研究"", 《山东中医杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107043799A (zh) * 2017-03-14 2017-08-15 山东中医药大学 一种全蝎酶解液超滤物制备工艺及其用途
CN108272875A (zh) * 2018-03-29 2018-07-13 山东中医药大学 一种中药组合发酵物醇提成分的制备方法和应用

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