CN104306372B - 一种丁苯酞制剂组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种丁苯酞制剂组合物及其制备方法，其中丁苯酞制剂组合物包括丁苯酞及藁本内酯，该药物组合物还可以加入药学上可接受的辅料，制成软胶囊、液体硬胶囊、胶丸、滴丸等。

Description

一种丁苯酞制剂组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种丁苯酞制剂组合物及其制备方法，具体是指一种丁苯酞与藁本内酯的药物组合物及其制备方法及用途。

背景技术

丁苯酞(3-n-butylpHthalide，简称NBP)，全名3-丁基-1(H)-异苯并呋喃酮，又名芹菜甲素，是从芹菜籽中提取出来的消旋体，也可人工合成。丁苯酞是一种油状液体，不溶于水，具有浓烈的芹菜味，分子中含有一个手性碳原子，因此它存在两种光学异构体，即左旋丁苯酞(l-3-n-butylpHthalide)和右旋丁苯酞(d-3-n-butylpHthalide)。其分子式如下图所示

丁苯酞可缩小局灶性脑缺血后的梗死灶，增加缺血区脑血流量和改善脑缺血区微循环，保护线粒体功能，减轻神经功能损伤的程度，改善全脑缺血后脑的能量代谢等，作用于脑缺血病理的多个环节。中国专利98125618.X、03137457.3、200310100222.2和200410001748.X分别公布了丁苯酞在抗血栓形成及抗血小板聚集、左旋丁苯酞在预防和治疗痴呆、脑梗塞及脑缺血药物中的应用。

藁本内酯(Ligustilide)是从川芎、当归等伞型科植物的根部提取的一种挥发油成分，其是具淡黄色带香味的油状液体,沸点为168～169℃,可溶于乙醇、甲醇、***、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂,分子式为C12H 14O2,相对分子质量为190.24，其化学结构式如下图所示：

藁本内酯的化学结构为与丁苯酞相似，3位上连有活泼的丁烯基，为化学不稳定因素，在室温自然放置条件下，可发生脱氢、氧化、水解、降解等多种异构化反应，极易异构化成其他丁烯基呋内酯类化合物，长时间放置使样品由透明澄清、可流动的液体逐步转变成褐色、粘稠的半固体或固体，氧化成多种复杂产物乃至最后消失，给使用及研究带来诸多的困难。

现有技术表明：藁本内酯对心脑血管、循环***及免疫功能等均有较强的药理作用。

中国专利CN92111278.5公开了藁本内酯有很强的解痉、平喘、镇定作用，在临床上可用于治疗支气管炎和妇科疾病；由于其对平滑肌有明显的松弛作用，可用于治疗眼睛疲劳以及皮肤抗皱；同时还有降低体温、治疗脉管炎和脑血栓等功效。

中国专利CN03123994.3公开了藁本内酯有预防和治疗微循环障碍有关的疾病中的应用，其还具有改善呼吸功能、减慢心率等作用。

中国专利CN200310108859.6公开了藁本内酯及其二聚体对动脉粥状硬化具有防治作用。

鉴于以上，现有技术中缺乏一种将丁苯酞与藁本内酯等联合使用的一种药用的组合物，其不仅能够充分的发挥这两种化合物的功效，且质量稳定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物，包括丁苯酞及藁本内酯，该药物组合物联合应用具有协同作用，且藁本内酯的稳定性得到了显著地提高。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种药物组合物，包括丁苯酞及藁本内酯。

上述组合物中，所述丁苯酞为消旋丁苯酞或左旋丁苯酞。

上述组合物中，所述的藁本内酯为顺式藁本内酯或反式藁本内酯或二者以任意比例的混合物。

上述的药物组合物中，所述的藁本内酯为纯度大于90％的藁本内酯，优选纯度大于92％的藁本内酯，更优选大于95％的藁本内酯，更优选大于97％的藁本内酯；更优选大于98％的藁本内酯。

上述药物组合物中，丁苯酞与藁本内酯的重量比为1:100～100:1，优选重量比为1:20～20:1；更优选重量比为1:5～20:1；更优选重量比为：1:5～5:1。

进一步的，上述组合物中还可以加入抗氧化剂，抗氧剂可以为生育酚、卵磷脂、柠檬酸、抗坏血酸的一种或几种，抗氧化剂占组合物总重量的0.01％～0.2％、优选0.025％～0.1％。

进一步的，上述组合物还可以加入药学上可接受的辅料，制成软胶囊、液体硬胶囊、胶丸、滴丸等。

其中：

所述的药学上的辅料可以为植物油，所述的植物油选自是麻油、玉米油、花生油、大豆油、杏仁油、桃仁油、棉籽油、葵花籽油、橄榄油中的一种。植物油占组合物总重量的0～90％，优选10～80％，更优选30～70％。

所述的药学上的辅料可以为助溶剂，所述的助溶剂为司盘20、司盘60、司盘80、山嵛酸甘油酯、单亚油酸甘油酯、单辛酸丙二醇酯、单月桂酸丙二醇酯、单油酸甘油酯、高纯度二乙二醇单乙基醚、亚油酸聚乙醇-6甘油酯、月桂酸聚乙醇-6甘油酯、中链甘油三酯、辛酸癸酸甘油酯、辛酸癸酸丙二醇酯、油酸聚乙二醇甘油酯中一种或几种，助溶剂占组合物总重量的0～50％，优选0～40％，更优选0～20％。

上述组合物可以制备成软胶囊或液体硬胶囊，胶囊质量稳定，在25℃和60％RH贮存组合物以下时间段后：3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月后，胶囊内容物中的丁苯酞的含量不低于98％，藁本内酯的含量不低于95％，优选，藁本内酯的含量不低于96％；进一步优选胶囊内容物中的藁本内酯的含量不低于97％；更优选藁本内酯的含量不低于98％。

发明人通过对上述组合物中过氧化值的测定，所述药物组合物具有不大于以下的初始过氧化值：2Meq/kg，在25℃和60％RH贮存组合物以下时间段后：3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月后，胶囊内容物的过氧化值不超过5Meq/kg、优选不超过4Meq/kg、优选不超过3Meq/kg，优选不超过2Meq/kg，更优选不超过1Meq/kg。

本发明的另一个目的是提供上述组合物在治疗心脑缺血的药物中的应用。

具体实施方式

本发明公开了丁苯酞及藁本内酯的组合物，本领域技术人员可以借鉴本发明的内容，结合药剂学原理，适当改进工艺参数或处方配比来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

以下通过实施例来进一步阐述本发明，但实施例不对本发明做任何限定。

对比例1：丁苯酞软胶囊，现有技术产品，按照中国专利CN1623542公开的处方及制备方法制备

1)处方组成(1000粒)：

内容物组成：丁苯酞100g、大豆油400g

囊皮组成：明胶100g、甘油30g、水130kg、尼泊金乙酯200mg

2)制备方法：

a、囊皮溶液的制备：取明胶加入适量的水使其吸水膨胀，另将剩余的水、甘油、尼泊金乙酯加入到化胶桶中，升温温度至70-80℃，达到温度后加入膨胀的明胶，使其完全溶解，溶解过程中抽真空除气泡，保温备用；

b、内容物的制备：将丁苯酞、大豆油混匀溶解，备用；

c、压制软胶囊：用上述内容物和囊皮溶液压制软胶囊，压制过程中严格控制环境温度为18～22℃，环境湿度为10～20％RH，干燥10～40h，包装，每粒含丁苯酞100mg。

对比例2：藁本内酯软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

内容物组成：藁本内酯100g

囊皮组成：明胶100g、甘油30g、水130kg、尼泊金乙酯200mg

2)制备方法：

a、囊皮溶液的制备：取明胶加入适量的水使其吸水膨胀，另将剩余的水、甘油、尼泊金乙酯加入到化胶桶中，升温温度至70-80℃，达到温度后加入膨胀的明胶，使其完全溶解，溶解过程中抽真空除气泡，保温备用；

b、内容物的制备：将藁本内酯混匀溶解，备用；

c、压制软胶囊：用上述内容物和囊皮溶液压制软胶囊，压制过程中严格控制环境温度为18～22℃，环境湿度为10～20％RH，干燥10～40h，包装，每粒含藁本内酯100mg。

对比例3：藁本内酯软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

内容物组成：藁本内酯100g、大豆油100g

囊皮组成：明胶100g、甘油30g、水130kg、尼泊金乙酯200mg

2)制备方法：

a、囊皮溶液的制备：同对比例1；

b、内容物的制备：将藁本内酯、大豆油混匀溶解，备用；

c、压制软胶囊：用上述内容物和囊皮溶液压制软胶囊，压制过程中严格控制环境温度为18～22℃，环境湿度为10～20％RH，干燥10～40h，包装，每粒含藁本内酯100mg。

实施例1：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯100g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：

a、囊皮溶液的制备：同对比例1；

b、药液的制备：将药液组成各组分混匀溶解，备用；

c、压制软胶囊：用上述药液和囊皮溶液压制软胶囊，干燥，包装，每粒含丁苯酞100mg、藁本内酯100mg。

实施例2：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯20g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例1。

实施例3：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞20g、藁本内酯100g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例1。

实施例4：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯100g，大豆油300g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：

a、囊皮溶液的制备：同对比例1；

b、药液的制备：将药液组成各组分混匀溶解，备用；

c、压制软胶囊：用上述药液和囊皮溶液压制软胶囊，干燥，包装，每粒含丁苯酞50mg、藁本内酯100mg。

实施例5：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯20g，花生油380g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例6：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞20g、藁本内酯100g，大豆油380g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例7：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯100g，大豆油300g，生育酚0.5g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：

d、囊皮溶液的制备：同对比例1；

e、药液的制备：将药液组成各组分混匀溶解，备用；

f、压制软胶囊：用上述药液和囊皮溶液压制软胶囊1000粒，干燥，包装，每粒含丁苯酞50mg、藁本内酯100mg。

实施例8：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯20g，大豆油380g，生育酚0.3g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例7。

实施例9：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞20g、藁本内酯100g，大豆油380g，生育酚0.25g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例7。

实施例10：丁苯酞组合物液体硬胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯50g，花生油350g，生育酚0.25g

液体硬胶囊囊壳主要成分：HPMC(2906)

2)制备方法：

a、内容物的制备：按照处方比例称取药液组分各组分，搅拌溶解、混匀，得到的混合物即为内容物；

b、填充液体硬胶囊：将内容物充填于硬胶囊囊壳内，密封后即得丁苯酞组合物液体硬胶囊。

实施例11：丁苯酞组合物液体硬胶囊组合物

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞50g、藁本内酯100g，花生油350g，卵磷脂0.25g

液体硬胶囊囊壳主要成分：HPMC(2906)

2)制备方法：同实施例10。

实施例12：丁苯酞组合物液体硬胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞30g、藁本内酯100g，花生油370g，生育酚0.25g

液体硬胶囊囊壳主要成分：HPMC(2906)

2)制备方法：同实施例10。

实施例13：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞10g、藁本内酯100g，大豆油390g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例14：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞8g、藁本内酯100g，大豆油390g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例15：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞5g、藁本内酯100g，大豆油390g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例16：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯5g，大豆油390g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例17：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯10g，大豆油390g；

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例18：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯40g，橄榄油230g，聚甘油油酸酯140g。生育酚0.25g囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例19：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯60g，杏仁油240g，单油酸甘油酯100g，生育酚0.25g囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例20：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞40g、藁本内酯100g，葵花油310g，山嵛酸甘油酯50g，生育酚0.25g囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例21：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯40g，玉米油180g，中链甘油三酯180g，生育酚0.25g囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例22：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯30g，葵花籽油240g，单油酸甘油酯130g生育酚0.25g囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例23：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞30g、藁本内酯100g，棉籽油320g，聚甘油油酸酯50g生育酚0.25g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例24：丁苯酞组合物软胶囊

1)处方组成(1000粒)：

药液组成：丁苯酞100g、藁本内酯100g，大豆油200g，单油酸甘油酯50g、单辛酸丙二醇酯50g，生育酚0.5g

囊皮组成：同对比例1

2)制备方法：同实施例4。

实施例25稳定性试验结果

取对比例1～3、实施例1～24样品适量，模拟上市包装，在温度25℃±2℃、相对湿度为60％±10％条件下放置24个月，分别于第3、6、9、12、18、24个月末取样，对其性状、含量、有关物质及氧化值进行了测定，结果见表1：

表1-1稳定性结果表

表1-2稳定性结果表

表1-3稳定性结果表

表1-4稳定性结果表

表1-5稳定性结果表

表1-6稳定性结果表

分析上表，我们可以得出：

1、比较对比例2～3与实施例1～3，可以明显的看出：丁苯酞与藁本内酯的组合物，能够显著的提升藁本内酯的稳定性

以对比例2～3和实施例1为例，长期放置24月时，其显著差别如表2所示：

表2-1：对比例2和实施例1对比表

表2-2：对比例3和实施例1对比表

由表2可以明显的看出：丁苯酞与藁本内酯的组合物，能够显著的提升藁本内酯的稳定性，即藁本内酯的含量得到了显著的提高，长期放置24月，不低于95％；有关物质得到了显著的降低，长期放置24月，不高于5.0％；过氧化值也得到了显著的降低，长期放置24月，不高于3.0Meq/kg。

2比较实施例1～3与实施例4～6，可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油的组合物，能够进一步的显著的提升藁本内酯的稳定性

以实施例1和实施例4为例，长期放置24月时，其显著差别如表3所示：

表3:实施例1和实施例4对比表

由表3可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油的组合物，能够显著的提升藁本内酯的稳定性，即藁本内酯的含量得到了显著的提高，长期放置24月，不低于97％，有关物质得到了显著的降低，长期放置24月，不高于3.0％，过氧化值也得到了显著的降低，长期放置24月，不高于2.0Meq/kg。

3、比较实施例4～6与实施例7～12，可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油、抗氧化剂的组合物，能够进一步显著的提升藁本内酯的稳定性

以实施例4和实施例7为例，长期放置24月时，其显著差别如表4所示：

表4:实施例4和实施例7对比表

由表4可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油、抗氧化剂的组合物，能够显著的提升藁本内酯的稳定性，即藁本内酯的含量得到了显著的提高，长期放置24月，不低于98％，有关物质得到了显著的降低，长期放置24月，不高于1.0％，过氧化值也得到了显著的降低，长期放置24月，不高于1.0Meq/kg。

4、比较实施例7～12与实施例18～24，可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油、抗氧化剂、助溶剂的组合物，能够进一步显著的提升藁本内酯的稳定性

以实施例7和实施例24为例，长期放置24月时，其显著差别如表5所示

表5：实施例7和实施例24对比表

由表5可以明显的看出：丁苯酞、藁本内酯、植物油、抗氧化剂、助溶剂的组合物，能够进一步的显著的提升藁本内酯的稳定性，即藁本内酯的含量得到了显著的提高，长期放置24月，不低于99％，有关物质得到了显著的降低，长期放置24月，不高于0.6％，过氧化值未发生变化。

试验1：局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

1、动物实验材料：

1.1药品的制备：将丁苯酞、藁本内酯溶于大豆油中；

1.2动物：成年，健康的雄性CD1小鼠，体重25～30g，河北医科大学实验动物中心提供，为清洁级小鼠，购入后用标准饲料喂养并饮用纯净水，由动物室饲养员负责管理，恒温20～25℃；

1.3数据处理：数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2、局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

2.1局灶性脑缺血模型制备小鼠预处理后，用10％水合氯醛0.4g/Kg腹腔注射麻醉，参照Longa等采用线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(transient middlecerebral artery was occluded,tMCAO)，造成小鼠局灶性脑缺血，1小时后拔出线栓，实现再灌。消毒、缝合皮下组织和皮肤，回笼饲养。假手术组小鼠仅分离、暴露右侧大脑中动脉，不结扎及***线栓。

2.2动物分组及给药

小鼠120只，随机分为10组：①假手术组(12只)；②模型对照组(12只)；③溶剂对照组(12只)；④丁苯酞100mg·Kg^-1组(12只)；⑤藁本内酯50mg·Kg^-1(12只)；⑥丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯10mg·Kg^-1组(12只)；⑦丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯20mg·Kg^-1组；⑧丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯50mg·Kg^-1组；⑨丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯80mg·Kg^-1组；⑩丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组。参照Longa等的线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(transient middle cerebral artery was occluded,tMCAO)，术后立即灌胃给予小鼠药液，溶剂对照组给予等计量的溶剂(大豆油)。假手术组、模型对照组给予等计量的生理盐水。24小时后各组小鼠均做神经功能评分，评分后其中6只用于脑含水量测定，6只用于脑梗死体积测定。

2.3观察指标

2.3.1神经功能评分：成功构建动物模型后，各组小鼠在再灌后24h采用改良的Longa分级法进行行为学评分：0分，无任何神经功能障碍；1分，不能完全伸展病灶对侧的前肢；2分，病灶对侧的前肢屈曲；3分，轻度向病灶对侧转圈；4分，严重向病灶对侧转圈；5分，向病灶对侧跌倒。

2.3.2脑梗死面积的测定：再灌后24h后，每组取6只大鼠以水合氯醛深度麻醉后颈椎脱臼法处死，快速断头取脑，切除额极，冠状切片6片(厚度2mm)，放置于2％的TTC磷酸盐缓冲液中，避光，37℃恒温水浴箱中染色15min，染上颜色后弃去TTC，置于4％多聚甲醛中固定24h，用数码相机进行拍照，将图像导入计算机(Image-Pro Plus 5.1软件进行图像分析)，先计算出每片脑组织梗塞的总面积、梗塞侧脑片的总面积以及梗塞对侧脑片的总面积，最终得出总梗塞体积：总梗塞体积＝总梗死面积×脑片的厚度。计算梗塞体积百分比：梗死体积百分比(％)＝{[梗塞总体积－(梗塞侧半球体积－梗塞对侧半球体积)]/梗塞对侧半球体积}×100％。

2.3.3脑组织含水量测定：采用干湿法，切除额极后，在病变侧取约2mm厚的脑组织测定脑含水量。脑组织称重(湿重)；置于烤箱内100℃烘24h后，再次称重(干重)。脑组织含水量(％)＝(湿重－干重)/湿重×100％。

3、试验结果

3.1神经功能评分

^##P＜0.01，与假手术组比较。^*P＜0.05，^**P＜0.01与容剂对着组比较。

^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01与丁苯酞100mg·Kg^-1组相比较。

丁苯酞单独给药(100mg·Kg-1)能显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂对照组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的神经功能改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P＞0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相对照比，具有非常显著性差异(P＜0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，对脑缺血有治疗作用。

3.2脑梗死面积

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

^ΔP＜0.05，^ΔΔP0.01与丁笨酞100mg·Kg^-1组相比较。

经TTC染色后正常脑组织显示呈红色，梗死后脑组织显示为白色。假手术组呈现均匀红色的脑组织，并无白色梗死灶出现，而模型对照组和溶剂对照组则可见大面积的白色梗死灶。与假手术组相比，具有非常显著地差别。

丁苯酞单独给药能显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的梗死面积改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，明显的丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能。

试验2：局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

1、动物实验材料：

1.1药品的制备：同试验1

1.2动物：同试验1

1.3数据处理：数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2、局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

2.1局灶性脑缺血模型制备同试验1。

2.2动物分组及给药

小鼠120只，随机分为10组：①假手术组(12只)；②模型对照组(12只)；③溶剂对照组；④丁苯酞50mg·Kg^-1组(12只)；⑤藁本内酯100mg·Kg^-1(12只)；⑥丁苯酞10mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组(12只)；⑦丁苯酞20mg·Kg^-1+藁本内酯20mg·Kg^-1组；⑧丁苯酞50mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组；⑨丁苯酞80mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组；⑩丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组。参照Longa等的线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(transient middle cerebral artery was occluded,tMCAO)，术后立即灌胃给予小鼠药液，溶剂对照组给予等计量的溶剂(大豆油)。假手术组、模型对照组给予等计量的生理盐水。24小时后各组小鼠均做神经功能评分，评分后其中6只用于脑含水量测定，6只用于脑梗死体积测定。

2.3观察指标

2.3.1神经功能评分：同试验1

2.3.2脑梗死面积的测定：同试验1

2.3.3脑组织含水量测定：同试验1。

3、试验结果

3.1神经功能评分

^**P＜0.01，与假手术组比较。^*P＜0.05，**P＜0.01与溶剂对照组相比较。

^ΔP＜0.05，与丁笨酞50mg·Kg^-1组比较。

与假手术组比较，模型对照组、溶剂对照组的小鼠神经功能评分显著升高(P<0.01)，说明模型制备成功。

丁苯酞单独给药(50mg·Kg^-1)能显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药能降低小鼠的神经功能评分，但与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，对脑缺血有治疗作用。

3.2脑梗死面积

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

^ΔP＜0.05与丁笨酞50mg·Kg^-1组相比较。

经TTC染色后正常脑组织显示呈红色，梗死后脑组织显示为白色。假手术组呈现均匀红色的脑组织，并无白色梗死灶出现，而模型对照组和溶剂对照组则可见大面积的白色梗死灶。与假手术组相比，具有非常显著地差别。

丁苯酞单独给药能显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的梗死面积改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，非常显著地减少脑梗死面积，对脑缺血有治疗作用。

3.3脑组织含水量

^##P＜0.01，与假手术组比较。^*P＜0.05，^**P0.01与溶剂对照组比较。

^ΔP＜0.05，与丁苯酞100mg·Kg^-1组比较。

与假手术组相比，模型对照组和溶剂对照组小鼠病变组织脑组织含水量明显升高，具有具有非常显著性差异(P<0.01)。

丁苯酞单独给药能显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠病变组织脑组织含水量改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，非常显著地降低脑组织的含水量，对脑缺血有治疗作用。

试验3：局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

1、动物实验材料：

1.1药品的制备：将丁苯酞、藁本内酯溶于大豆油中

1.2动物：成年，健康的雄性CD1小鼠，体重25～30g，河北医科大学实验动物中心提供，为清洁级小鼠，购入后用标准饲料喂养并饮用纯净水，由动物室饲养员负责管理，恒温20～25℃。

1.3数据处理：数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验

2、局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

2.1动物分组及给药

小鼠120只，随机分为10组：①假手术组(12只)；②模型对照组(12只)；③溶剂对照组(12只)；④丁苯酞100mg·Kg^-1组(12只)；⑤藁本内酯50mg·Kg^-1(12只)；⑥丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯10mg·Kg^-1组(12只)；⑦丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯20mg·Kg^-1组；⑧丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯50mg·Kg^-1组；⑨丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯80mg·Kg^-1组；⑩丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组。溶剂对照组给予等计量的溶剂(大豆油)。假手术组、模型对照组给予等计量的生理盐水。按照上述剂量灌胃，每日一次，喂养10天。

2.2局灶性脑缺血模型制备将喂养10天的小鼠，用10％水合氯醛0.4g/Kg腹腔注射麻醉，参照Longa等采用线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(transient middlecerebral artery was occluded,tMCAO)，造成小鼠局灶性脑缺血，1小时后拔出线栓，实现再灌。消毒、缝合皮下组织和皮肤，回笼饲养。假手术组小鼠仅分离、暴露右侧大脑中动脉，不结扎及***线栓。24小时后各组小鼠均做神经功能评分，评分后其中6只用于脑含水量测定，6只用于脑梗死体积测定。

2.3观察指标

2.3.1神经功能评分：同试验1

2.3.2脑梗死面积的测定：同试验1

2.3.3脑组织含水量测定：同试验1

3、试验结果

3.1神经功能评分

^##P＜0.01，与假手术组比较。

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01与丁苯酞100mg·Kg-1组比较

与假手术组比较，模型对照组、溶剂对照组的小鼠神经功能评分显著升高(P＜0.01)，说明模型制备成功。

丁苯酞单独给药能显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的神经功能改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P＞0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P＜0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，对脑缺血有预防作用。

3.2脑梗死面积

^*P＜0.05，^**P0.01与溶剂对照组比较。

^ΔΔP＜0.01与丁苯酞100mg·Kg-1组比较。

经TTC染色后正常脑组织显示呈红色，梗死后脑组织显示为白色。假手术组呈现均匀红色的脑组织，并无白色梗死灶出现，而模型对照组和溶剂对照组则可见大面积的白色梗死灶。与假手术组相比，具有非常显著地差别。

丁苯酞单独给药能显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的梗死面积改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，非常显著地减少脑梗死面积，对脑缺血有预防作用。

3.3脑组织含水量

与假手术组相比，模型对照组和溶剂对照组小鼠病变组织脑组织含水量明显升高，具有具有非常显著性差异(P<0.01)。

丁苯酞单独给药能显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠病变组织脑组织含水量改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，显著地降低脑组织的含水量，对脑缺血有预防作用。

试验4：局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

1、动物实验材料：

1.1药品的制备：同试验3

1.2动物：同试验3

1.3数据处理：数据由SPSS11.5统计软件进行方差分析及组间检验。

2、局灶性脑缺血小鼠神经细胞功能试验

2.1动物分组及给药

小鼠120只，随机分为10组：①假手术组(12只)；②模型对照组(12只)；③溶剂对照组；④丁苯酞50mg·Kg^-1组(12只)；⑤藁本内酯100mg·Kg^-1(12只)；⑥丁苯酞10mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组(12只)；⑦丁苯酞20mg·Kg^-1+藁本内酯20mg·Kg^-1组；⑧丁苯酞50mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组；⑨丁苯酞80mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组；⑩丁苯酞100mg·Kg^-1+藁本内酯100mg·Kg^-1组。溶剂对照组给予等计量的溶剂(大豆油)。假手术组、模型对照组给予等计量的生理盐水。按照上述上述剂量灌胃，每日一次，喂养10天。

2.2局灶性脑缺血模型制备将喂养10天的小鼠，用10％水合氯醛0.4g/Kg腹腔注射麻醉，参照Longa等采用线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型(transient middlecerebral artery was occluded,tMCAO)，造成小鼠局灶性脑缺血，1小时后拔出线栓，实现再灌。消毒、缝合皮下组织和皮肤，回笼饲养。假手术组小鼠仅分离、暴露右侧大脑中动脉，不结扎及***线栓。24小时后各组小鼠均做神经功能评分，评分后其中6只用于脑含水量测定，6只用于脑梗死体积测定。

2.3观察指标

2.3.1神经功能评分：同试验1

2.3.2脑梗死面积的测定：同试验1

2.3.3脑组织含水量测定：同试验1。

3、试验结果

3.1神经功能评分

^##P＜0.01，与假手术组比较。^*P0.05，^**P0.01与熔剂对照组比较。

^ΔP＜0.05，与丁苯酞50mg··Kg-1组比较。

与假手术组比较，模型对照组、溶剂对照组的小鼠神经功能评分显著升高(P＜0.01)，说明模型制备成功。

丁苯酞单独给药(50mg·Kg^-1)能显著降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。

藁本内酯单独给药能降低小鼠的神经功能评分，但与溶剂组比较，不具有显著性差异(P＞0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可降低小鼠的神经功能评分，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P＜0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，对脑缺血有预防作用。

3.2脑梗死面积

^*P＜0.05，**P＜0.01与溶剂对照组比较。

^ΔΔP＜0.01，与丁苯酞50mg·Kg-1组相比较。

经TTC染色后正常脑组织显示呈红色，梗死后脑组织显示为白色。假手术组呈现均匀红色的脑组织，并无白色梗死灶出现，而模型对照组和溶剂对照组则可见大面积的白色梗死灶。与假手术组相比，具有非常显著地差别。

丁苯酞单独给药能显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有显著性差异(P<0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠的梗死面积改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P>0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著减少小鼠的梗死面积，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P<0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，非常显著地减少脑梗死面积，对脑缺血有治疗作用。

3.3脑组织含水量

^##P＜0.01，与假手术组比较。^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照组比较。

^ΔP＜0.05，与丁苯酞50mg·Kg-1组比较。

与假手术组相比，模型对照组和溶剂对照组小鼠病变组织脑组织含水量明显升高，具有具有非常显著性差异(P＜0.01)。

丁苯酞单独给药能显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。

藁本内酯单独给药对小鼠病变组织脑组织含水量改善作用较小，与溶剂组比较，不具有显著性差异(P＞0.05)。

丁苯酞与藁本内酯联合给药均可显著降低小鼠病变组织脑组织含水量，与溶剂组相比，具有非常显著性差异(P＜0.01)。

以上信息提示：丁苯酞与藁本内酯联合给药具有协同作用，联合应用能够增强丁苯酞或藁本内酯对局灶性脑缺血小鼠的神经保护功能，显著地降低脑组织的含水量，对脑缺血有预防作用。

Claims (7)

1.一种丁苯酞制剂组合物，其特征在于，包括丁苯酞和藁本内酯，丁苯酞与藁本内酯的重量比为1:5～5:1。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，丁苯酞与藁本内酯的重量比为1:2～2:1。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述丁苯酞为消旋丁苯酞或左旋丁苯酞。

4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，加入抗氧化剂，抗氧剂为生育酚、卵磷脂、柠檬酸、抗坏血酸的一种或几种，抗氧化剂占组合物总重量的0.025％～0.1％。

5.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于，加入药学上可接受的辅料，制成软胶囊、液体硬胶囊、胶丸、滴丸。

6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述的药学上可接受的辅料为植物油，所述的植物油选自麻油、玉米油、花生油、大豆油、杏仁油、桃仁油、棉籽油、葵花籽油、橄榄油中的一种；植物油占组合物总重量的30～70％。

7.如权利要求1至5任一项所述的组合物在制备治疗心脑缺血的药物中的应用。