CN104297374A

CN104297374A - 一种金银花的质量检测方法

Info

Publication number: CN104297374A
Application number: CN201410542954.5A
Authority: CN
Inventors: 余赟
Original assignee: NANJIANG BAICAO TRADITIONAL CHINESE MEDICINAL MATERIALS Co Ltd
Current assignee: NANJIANG BAICAO TRADITIONAL CHINESE MEDICINAL MATERIALS Co Ltd
Priority date: 2014-10-14
Filing date: 2014-10-14
Publication date: 2015-01-21

Abstract

本发明提供一种金银花检测方法，其主要步骤包括50％甲醇溶解、超声、定容、过滤制备供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A：乙腈；流动相B：0.3％(w/v)柠檬酸和2％(w/v)四氢呋喃水溶液，采用梯度洗脱程序对其活性成分进行检测，本发明建立的金银花检测方法对其大部分药理活性物质进行了有效表征，实现了对其化学成分的较全面表征进，避免了只测定其中几个化学成分就对金银花整体质量判断的片面性，各有效成分的峰分离性好，主要活性成分的峰在35分钟内出峰，检测时间合理，并且重复性和稳定性好。

Description

一种金银花的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种金银花的质量检测方法。

背景技术

金银花又名忍冬，为忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物忍冬的花蕾和藤叶,是一种常见的药食两用的传统植物药材，在我国已有2200多年栽植史。“金银花”一名出自《本草纲目》，由于忍冬花初开为白色，后转为黄色，因此得名金银花。金银花一般产四季花，花期在5～10月间，南北地区有所差异，越靠南方花期越提前。四季花中第一、二两季的花期最为明显，尤以第一季最显著，品质最佳且产量占全年产量50％以上。

金银花具有多种重要的药效功能，是传统、常用和大宗的中药材。具有清热解毒、疏利咽喉、消暑除烦、抑菌等功能，临床上广泛应用于急性热病及外科感染性疾病，如上呼吸道感染、风热感冒、急性扁桃体炎、咽炎、肺炎、关节疼痛、荨麻疹、腮腺炎、痢疾等的治疗，其药理作用主要为：1)解热抗炎，金银花能抑制炎性物质的渗出与增生，通过注射液、口服液及水煎液等作用能退热，同时提高了巨噬细胞的吞噬作用，临床多作为清热解毒制剂使用；2)降血脂作用，金银花能够保护胰腺B细胞，同时有着显著的降糖作用，一些研究发现，金银花可与胆固醇结合；3)抗病毒作用，金银花主要成分中的异绿原酸及绿原酸能够抑制埃可病毒、柯萨病毒等发挥作用，同时金银花对抵抗皮肤真菌效果显著；4)利胆作用，金银花具有显著的利胆作用，缓解肝脏的损伤，保护急性肝损伤；5)止血及抗氧化作用，金银花混悬液及炭水煎液具有较强的止血作用，同时金银花能够清除H₂O₂，抗氧化反应。

金银花中活性成分众多，主要包括：(1)挥发油类，挥发油是金银花的有效成分。金银花干品中含有挥发油成分60种以上，主要成分为棕榈酸，占挥发油26％以上，其它成分则多为醇、醛、酮、酸、酯类和烷烃等。鲜花挥发油成分多为低沸点的不饱和萜烯类，其中以芳香醇为主，含量占挥发油的45.5％以上。金银花干花蕾中多为单萜及倍半萜类化合物，含量较高的有香树烯、芳樟醇和香叶醇；(2)黄酮类，已分离鉴定出的黄酮类成分主要为木犀草素、木犀草素-7-O-α-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷等类似结构的化合物；(3)有机酸类，绿原酸类化合物是金银花的重要有效成分，主要包括绿原酸、异绿原酸和咖啡酸。其中异绿原酸为一混合物，包含4，5-二咖啡酸酰奎尼酸、3，4-二咖啡酸酰奎尼酸、3，5-二咖啡酸酰奎尼酸、1，3-二咖啡酸酰奎尼酸、3-阿魏酰奎尼酸，4-阿魏酰奎尼酸、5-阿魏酰奎尼酸七种异构体；(4)皂苷类：从金银花中分离得到的皂苷类化合物主要包括：3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-L-吡喃***糖基常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃木糖基-(1-6)-β-D吡喃葡萄糖酯，3-0-α-L-吡喃***糖基常春藤皂苷元 -28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1-2)-[β-D-吡喃木糖基-(1-6)]-8-D-吡喃葡萄糖酯，3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1-2)-α-L-吡喃***糖基常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1-2)-[β-D-吡喃木糖基-(1-6)]-β-D-吡喃葡萄糖酯，灰毡毛忍冬皂苷甲，灰毡毛忍冬皂苷乙，川续断皂苷乙，木通皂苷D等；(5)无机元素类，金银花含微量元素共15种：Fe、Mn、Cu、Zn、Ti、Sr、Mo、Ba、Cr、Pb、V、Co、Li、Ca。面对如此复杂的活性成分，如何保证药物的质量，控制其疗效，需要对它的活性物质群进行控制，然而现有的检测方法中普遍存在检测时间长、检测到的活性成分峰个数少、分离效果不好等技术问题，因此，寻求一种能够快速、有效的检测方法对于金银花的质量控制而言显得尤为重要。

发明内容

检测时间长、检出成分少、分离效果差等技术问题，本发明提供一种快速、有效的金银花的检测方法，其包括以下步骤：

(a)供试品溶液的制备：取金银花粉末适量，精密称量，置于容量瓶中，加50％甲醇溶解、超声、定容、过滤即得供试品；

(b)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A：乙腈；流动相B：0.3％(w/v)柠檬酸和2％(w/v)四氢呋喃水溶液，检测波长为325nm。

上述检测方法中所述梯度洗脱的程序为(其中下述比例为体积比)：

0-3min时，流动相A：流动相B＝95:5

15min时，流动相A：流动相B＝90:10

20min时，流动相A：流动相B＝75:25

40min时，流动相A：流动相B＝60:40

45min时，流动相A：流动相B＝0:100

45min开始冲洗并平衡色谱柱15min。

上述指纹图谱的检测方法中供试品溶液的制备方法优选为：精密称取金银花0.2g，粉碎后置于50ml量瓶中，加50％甲醇溶解后超声30min，放冷后定容至50ml，过滤即得供试品溶液。

上述指纹图谱检测方法中，色谱条件优选为：柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：352nm；进样体积：10ul。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1、本发明建立的金银花检测方法及其指纹图谱，对于其大部分药理活性物质进行了有效表征，实现了对其化学成分的较全面表征进，避免了只测定其中几个化学成分就对金银花整体质量判断的片面性；

2、本发明所提供的指纹图谱检测方法对金银花中各有效成分的峰分离性好；

3、本发明所提供的检测方法所需检测时间合理，主要活性成分的峰在35分钟内出峰，并且峰强度都较大，因此使得检测效率高效；

4、本发明所提供的指纹图谱检测方法其重复性和稳定性好；

附图说明

图1对照品色谱图(1木樨草苷，7绿原酸)

图2-1实施例一中金银花检测色谱图

图2-2实施例一中金银花检测色谱图

图2-3实施例一中金银花检测色谱图

图3实施例二中多批次金银花检测色谱图

图4实施例二中多批次金银花检测色谱图

具体实施方式

本发明中涉及的实验仪器和药品、试剂如下：

实验仪器：Agilent infinity 1290液相色谱仪(Agilent,USA)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱：Eclipse plus C18(250mm×4.6mm，5um)(Agilent,USA)。

实验药品及试剂：金银花药材(来源：甘肃)，木樨草苷对照品(来源：中检院)，绿原酸对照品(来源：中检院)，乙腈(HPLC，Sigma aldrich Company Inc.USA)，柠檬酸、四氢呋喃为分析纯(Sigma aldrich Company Inc.USA)，纯净水经Milli-Q纯水***自制(Millipore Bedford,MA,USA)。

实施例一金银花检测方法

1、提取物供试品溶液制备

精密称取金银花0.2g，粉碎后置于50ml量瓶中，加50％甲醇溶解后超声30min，放冷后定容至50ml，过滤即得供试品溶液。

2、液相色谱条件

3、液相色谱条件

流动相：流动相A：乙腈；流动相B：0.3％(w/v)柠檬酸和2％(w/v)四氢呋喃水溶液，按梯度洗脱，洗脱程序为：

0-3min时，流动相A：流动相B＝95:5

15min时，流动相A：流动相B＝90:10

20min时，流动相A：流动相B＝75:25

40min时，流动相A：流动相B＝60:40

45min时，流动相A：流动相B＝0:100

45min开始冲洗并平衡色谱柱15min

柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：352nm；进样体积：10ul。

按照上述条件进行液相色谱检测，对照品液相色谱图如图1所示，样品溶液色谱图如图2-1、2-2、2-3所示，根据检测结果可以看出，该检测方法能够检测得到金银花中25个主要活性成分物质，出峰时间分别为1.96min、13.82min、16.65min、17.50min、21.11min、21.71min、22.06min、22.32min、22.98min、23.91min、24.96min、25.48min、26.32min、27.52min、28.07min、28.88min、29.78min、30.89min、31.78min、32.67min、34.01min、34.60min、34.91min，其中1号峰为木樨草苷，7号峰为绿原酸；且该检测结果基线平稳，各峰之间分离度较好，能够有效表征金银花有效成分，同时，该25个活性成分在35min前即出峰完毕，大大节约了检测时间和成本。

实施例二不同批次金银花检测方法

液相色谱条件

0-3min时，流动相A：流动相B＝95:5

15min时，流动相A：流动相B＝90:10

20min时，流动相A：流动相B＝75:25

40min时，流动相A：流动相B＝60:40

45min时，流动相A：流动相B＝0:100。

45min开始冲洗并平衡色谱柱15min。

柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：352nm；进样体积：10ul

按照实施例1中的样品制备方法制备金银花样品溶液，分别对10批次的样品溶液进行液相色谱检测，检测结果见图3、图4，其中10批次样品出峰时间一致，出峰面积一致，表明该方法重现性良好，检测结果稳定。

Claims

1.一种金银花的质量检测方法，其包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的金银花质量检测方法，其特征在于所述梯度洗脱的程序为：

0-3min时，流动相A：流动相B＝95:5

15min时，流动相A：流动相B＝90:10

20min时，流动相A：流动相B＝75:25

40min时，流动相A：流动相B＝60:40

45min时，流动相A：流动相B＝0:100

45min开始冲洗并平衡色谱柱15min。

3.根据权利要求1所述的金银花质量检测方法，其特征在于所述供试品溶液的制备方法为：精密称取金银花0.2g，粉碎后置于50ml量瓶中，加50％甲醇溶解后超声30min，放冷后定容至50ml，过滤即得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的金银花质量检测方法，其特征在于所述色谱条件为：柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样体积：10ul。