CN104212734A - 一种耐盐复合菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种耐盐复合菌剂及其制备方法，所述该菌剂的制备首先是将枯草芽孢杆菌、细黄链霉菌的菌种进行高密度培养，然后将高密度培养得到的各单一菌体用载体吸附、制备成干燥的单一菌剂，最好按照枯草芽孢杆菌50～70份、细黄链霉菌30～50份的质量比，混合得到耐盐复合菌剂。本发明的有益效果为：本发明提供了一种耐盐复合菌剂，该复合菌剂适用于盐碱地高盐渗透压情况使用，菌种耐盐能力强，繁殖快；该菌剂所含活性菌株还以产生吲哚乙酸、枯草菌素等物质，对植物具有促生、抗病功能；可以提高作物的盐耐受度，改良土壤，提高作物产量；另外本发明提供了一种耐盐复合菌剂的制备方法，方法简单合理，操作方便。
Description
技术领域
本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种耐盐复合菌剂及其制备方法。
背景技术
随着全球环境的恶化，土壤的沙漠化、盐渍化问题日益威胁着人类赖以生存的有限的土地资源。农业是人类赖以生存的第一产业。在人口不断增加，耕地日趋减少和淡水资源不足的严重压力下，如何利用大面积的盐碱地、荒漠化土地等资源发展农业，已成为生物科学迫切需要解决的重大课题。
目前，有关盐渍土的开发利用主要采取两种措施：一是通过工程措施来改良盐渍土；二是开展生物治理，即通过农业生物技术培育耐盐植物品种或开发利用有经济价值的盐生植物资源以改良盐渍土。通过生物途径使植物充分适应盐渍环境，以提高植物在盐渍土壤上的生产力是近年来国内外盐渍土改良的新方向。
发明内容
本发明的目的是克服目前现有技术存在的不足，并针对盐碱地施用微生物肥料资源相对较少的情况提供一种耐盐复合菌剂，同时提供一种用来降低土壤盐碱地对植物的毒害或提高植物耐盐能力的耐盐复合菌剂制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现：
一种耐盐复合菌剂，所述该菌剂由枯草芽孢杆菌和细黄链霉菌混合组成，所述枯草芽孢杆菌含有50～70份，所述细黄链霉菌含有30～50份，以上份数为质量份数。
一种耐盐复合菌剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)首先分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)的菌种进行高密度培养，得到单菌体；
(2)然后将高密度培养得到的单菌体用载体吸附、制备成干燥的单一菌剂；以及
(3)最后将50～70份的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的单一菌剂与30～50份的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)的单一菌剂混合得到耐盐复合剂。
进一步的，步骤(2)中，所述载体包括草炭、蛭石及凹凸棒，所述草炭、蛭石及凹凸棒的质量比为1～5∶1～3∶0.2～0.5；所述单一菌剂中含有菌体为10～20％，以上百分比为质量百分比。
进一步的，所述枯草芽孢杆菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为36～40℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养24～32小时，所述活化培养基包括15～20g/L的葡萄糖、10～15g/L的蛋白胨、3～7g/L的氯化钠和0.3～0.8g/L的牛肉膏；
(2)将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70％发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3％，在培养温度为36℃～40℃，发酵罐搅拌转速为200～220rpm的条件下，培养24～40小时，发酵罐中枯草芽孢杆菌的含量≥1×109个/mL，所述发酵培养基包括10～15g/L的玉米粉、3～8g/L的葡萄糖、18～22g/L的豆饼粉、3～8g/L的鱼粉、5～10g/L的碳酸钙、0.8～1.0g/L的硫酸铵、0.1～0.5g/L的磷酸氢二钾、0.1～0.3g/L的硫酸镁和0.1～0.3g/L的硫酸锰。；以及
(3)将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌按质量百分比5～15％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
进一步的，所述细黄链霉菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的细黄链霉菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在pH为7.2-7.4，培养温度为26～30℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养45～60小时，所述活化培养基包括20～25g/L的可溶性淀粉、1～1.5g/L的硝酸钾、0.5～1.0g/L的氯化钠、0.5～1.0g/L的磷酸氢二钾、0.5～1.0g/L的硫酸镁、0.01～0.05g/L的硫酸亚铁和1L的水；
(2)将活化培养的细黄链霉菌菌种接种到装有体积比为50～70％培养基的固体发酵罐内，接种量体积比为1～3％，在培养温度为27℃～30℃的条件下，培养90～120天，发酵罐链霉菌的含量≥1×108个/mL，所述发酵培养基包括30～40％的肥土、10～20％的干牛粪、3～5％的豆饼粉、5～10％的草炭、5～10％的麦麸、10～20％的花生壳粉、5～10％的玉米粉、2～5％的石灰，所述发酵培养基的pH为6.7-8.5，以上百分比为质量百分比；以及
(3)将发酵得到的细黄链霉菌单菌按质量百分比10～20％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
本发明的有益效果为：本发明提供了一种耐盐复合菌剂，该复合菌剂适用于盐碱地高盐渗透压情况使用，菌种耐盐能力强，繁殖快；该菌剂所含活性菌株还以产生吲哚乙酸、枯草菌素等物质，对植物具有促生、抗病功能；可以提高作物的盐耐受度，改良土壤，提高作物产量；另外本发明提供了一种耐盐复合菌剂的制备方法，方法简单合理，操作方便。
具体实施方式
本发明实施例提供了一种耐盐复合菌剂，所述该菌剂由枯草芽孢杆菌和细黄链霉菌混合组成，所述枯草芽孢杆菌含有50～70份，所述细黄链霉菌含有30～50份，以上份数为质量份数。
一种耐盐复合菌剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)首先分别将枯草芽孢杆菌、细黄链霉菌的菌种进行高密度培养，得到单菌体；
(2)然后将高密度培养得到的单菌体用载体吸附、制备成干燥的单一菌剂，所述载体包括草炭、蛭石及凹凸棒，所述草炭、蛭石及凹凸棒的质量比为1～5∶1～3∶0.2～0.5；所述单一菌剂中含有菌体为10～20％，以上百分比为质量百分比；以及
(3)最后将50～70份的枯草芽孢杆菌的单一菌剂与30～50份的细黄链霉菌的单一菌剂混合得到耐盐复合剂。
所述枯草芽孢杆菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为36～40℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养24～32小时，所述活化培养基包括15～20g/L的葡萄糖、10～15g/L的蛋白胨、3～7g/L的氯化钠和0.3～0.8g/L的牛肉膏；
(2)将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70％发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3％，在培养温度为36℃～40℃，发酵罐搅拌转速为200～220rpm的条件下，培养24～40小时，发酵罐中枯草芽孢杆菌的含量≥1×109个/mL，所述发酵培养基包括10～15g/L的玉米粉、3～8g/L的葡萄糖、18～22g/L的豆饼粉、3～8g/L的鱼粉、5～10g/L的碳酸钙、0.8～1.0g/L的硫酸铵、0.1～0.5g/L的磷酸氢二钾、0.1～0.3g/L的硫酸镁和0.1～0.3g/L的硫酸锰。；以及
(3)将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌按质量百分比5～15％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
所述细黄链霉菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的细黄链霉菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在pH为7.2-7.4，培养温度为26～30℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养45～60小时，所述活化培养基包括20～25g/L的可溶性淀粉、1～1.5g/L的硝酸钾、0.5～1.0g/L的氯化钠、0.5～1.0g/L的磷酸氢二钾、0.5～1.0g/L的硫酸镁、0.01～0.05g/L的硫酸亚铁和1L的水；
(2)将活化培养的细黄链霉菌菌种接种到装有体积比为50～70％培养基的固体发酵罐内，接种量体积比为1～3％，在培养温度为27℃～30℃的条件下，培养90～120天，发酵罐链霉菌的含量≥1×108个/mL，所述发酵培养基包括30～40％的肥土、10～20％的干牛粪、3～5％的豆饼粉、5～10％的草炭、5～10％的麦麸、10～20％的花生壳粉、5～10％的玉米粉、2～5％的石灰，所述发酵培养基的pH为6.7-8.5，以上百分比为质量百分比；以及
(3)将发酵得到的细黄链霉菌单菌按质量百分比10～20％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
本发明中的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有极强的抗逆能力和抗病能力，且可产生植酸酶。磷是植物生长发育所必需的矿质元素，能够加强光合作用和碳水化合物的合成与运转，与油脂代谢、氮素代谢也关系重大。植物缺磷时，代谢过程不能正常进行，光合速率下降，生长发育受阻，花、果实和种子都减少，开花期和成熟期都延迟，产量降低，抗性减弱。本发明的枯草芽胞杆菌产生的植酸酶，可以将植酸及质酸盐水解成肌醇与磷酸(或磷酸盐)，所释放的有效磷对植物生长具有良好的促进作用。
本发明中的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)在植物根际可以产生吲哚乙酸，可直接参与植物的生长；另外本发明所述的细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)可以通过诱导作物脯氨酸合成积累提高作物抗逆性。
本发明将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)的菌种进行高密度培养，将高密度培养得到的各单菌用载体吸附，制备成干燥的单一菌剂，根据其作用采用合理配比，复合得到耐盐复合菌剂。该复合菌用于盐碱地改良处理，具有以下优点：(1)适用于盐碱地高盐渗透压情况使用，菌种耐盐能力强，繁殖快。(2)该菌剂所含活性菌株还以产生吲哚乙酸、枯草菌素等物质，对植物具有促生、抗病功能。
具体实施例一
一种耐盐复合菌剂的制备方法，分别对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)的菌种进行高密度培养：
(1)单一菌剂吸附载体：将草炭、蛭石、凹凸棒按照质量比1∶1∶0.2的比例混合均匀，作为菌剂的吸附载体。
(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种接种至装有体积比为15％的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为15g/L的葡萄糖、10g/L的蛋白胨、3g/L的氯化钠和0.3g/L的牛肉膏，在培养温度为37℃，摇瓶转速为170rpm的条件下培养24小时；将活化培养好的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种接种的装有体积比为50％发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1％，所述发酵培养基的配方为10g/L的玉米粉、3g/L的葡萄糖、18g/L的豆饼粉、3g/L的鱼粉、5g/L的碳酸钙、0.8g/L的硫酸铵、0.1g/L的磷酸氢二钾、0.1g/L的硫酸镁和0.1g/L的硫酸锰，在培养温度为37℃，发酵罐搅拌转速为200rpm的条件喜爱培养28小时，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量1.8×109个/mL，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)单菌按质量百分比5％的比例经载体吸附得到单一的菌剂。
(3)细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)：将纯化培养的斜面培养基上的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)菌种接种至装有体积比为15％的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为20g/L的可溶性淀粉、1g/L的硝酸钾、0.5g/L的氯化钠、0.5g/L的磷酸氢二钾、0.5g/L的硫酸镁、0.01g/L的硫酸亚铁和1L的水，在pH为7.2，培养温度为27℃，摇瓶转速为150rpm的条件下，培养48小时；将活化培养的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)菌种接种到装有体积比为70％培养基的固体发酵罐内，接种量为体积比2％，所述发酵培养基的配方为30％的肥土、10％的干牛粪、3％的豆饼粉、5％的草炭、6％的麦麸、15％的花生壳粉、8％的玉米粉、3％的石灰，在pH为8.0，培养温度为28℃的条件下，培养100小时，发酵罐链霉菌含量1.2×108个/mL，然后将发酵得到的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)单菌按质量百分比15％的比例经载体吸附得到单一的菌剂
具体实施例二
一种耐盐复合菌剂的制备方法，分别对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)的菌种进行高密度培养：
(1)单一菌剂吸附载体：将草炭、蛭石、凹凸棒按照质量比3∶1∶0.1的比例混合均匀，作为菌剂的吸附载体。
(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)：将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种接种至装有体积比为20％的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为18g/L的葡萄糖、12g/L的蛋白胨、5g/L的氯化钠和0.5g/L的牛肉膏，在培养温度为38℃，摇瓶转速为200rpm的条件下，培养28小时；将活化培养好的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌种接种的装有体积比为70％发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为2％，所述发酵培养基的配方为15g/L的玉米粉、5g/L的葡萄糖、20g/L的豆饼粉、5g/L的鱼粉、6g/L的碳酸钙、0.8g/L的硫酸铵、0.2g/L的磷酸氢二钾、0.1g/L的硫酸镁和0.1g/L的硫酸锰，在培养温度为38℃，发酵罐搅拌转速为200rpm的条件下，培养30小时，发酵罐中枯草芽孢杆菌含量2.1×109个/mL，然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)单菌按质量百分比8％的比例经载体吸附得到单一的菌剂。
(3)细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)：将纯化培养的斜面培养基上的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)菌种接种至装有体积比为20％的活化培养基的摇瓶中，所述活化培养基的配方为25g/L的可溶性淀粉、1.2g/L的硝酸钾、1.0g/L的氯化钠、0.8g/L的磷酸氢二钾、0.5g/L的硫酸镁、0.02g/L的硫酸亚铁、1L的水，在pH为7.4，培养温度为26℃，摇瓶转速为180rpm的条件下，培养48小时；将活化培养的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)菌种接种到装有体积比为70％培养基的固体发酵罐内，接种量为体积比1％，所述发酵培养基的配方为40％的肥土、5％的干牛粪、5％的豆饼粉、8％的草炭、10％的麦麸、10％的花生壳粉、10％的玉米粉、2％的石灰，在pH为7.2，在培养温度为27℃的条件下，培养110小时，发酵罐链霉菌含量1.7×108个/mL，然后将发酵得到的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)单菌按质量百分比10％的比例经载体吸附得到单一的菌剂。
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种耐盐复合菌剂，其特征在于：所述该菌剂由枯草芽孢杆菌和细黄链霉菌混合组成，所述枯草芽孢杆菌含有50～70份，所述细黄链霉菌含有30～50份，以上份数为质量份数。
2.一种耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)首先分别将枯草芽孢杆菌、细黄链霉菌的菌种进行高密度培养，得到单菌体；
(2)然后将高密度培养得到的单菌体用载体吸附、制备成干燥的单一菌剂；以及
(3)最后将50～70份的枯草芽孢杆菌的单一菌剂与30～50份的细黄链霉菌的单一菌剂混合得到耐盐复合剂。
3.根据权利要求2所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述载体包括草炭、蛭石及凹凸棒，所述草炭、蛭石及凹凸棒的质量比为1～5∶1～3∶0.2～0.5。
4.根据权利要求2所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述单一菌剂中含有菌体为10～20％，以上百分比为质量百分比。
5.根据权利要求4所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在培养温度为36～40℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养24～32小时；
(2)将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50～70％发酵培养基的发酵罐内，体积接种量为1～3％，在培养温度为36℃～40℃，发酵罐搅拌转速为200～220rpm的条件下，培养24～40小时，发酵罐中枯草芽孢杆菌的含量≥1×109个/mL；以及
(3)将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌按质量百分比5～15％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
6.根据权利要求5所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述活化培养基包括15～20g/L的葡萄糖、10～15g/L的蛋白胨、3～7g/L的氯化钠和0.3～0.8g/L的牛肉膏。
7.根据权利要求5所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述发酵培养基包括10～15g/L的玉米粉、3～8g/L的葡萄糖、18～22g/L的豆饼粉、3～8g/L的鱼粉、5～10g/L的碳酸钙、0.8～1.0g/L的硫酸铵、0.1～0.5g/L的磷酸氢二钾、0.1～0.3g/L的硫酸镁和0.1～0.3g/L的硫酸锰。
8.根据权利要求4所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述细黄链霉菌单一菌剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将纯化培养的斜面培养基上的细黄链霉菌菌种接种至装有体积比为15～30％的活化培养基的摇瓶中，在pH为7.2-7.4，培养温度为26～30℃，摇瓶转速为150～200rpm的条件下，培养45～60小时；
(2)将活化培养的细黄链霉菌菌种接种到装有体积比为50～70％培养基的固体发酵罐内，接种量体积比为1～3％，在培养温度为27℃～30℃的条件下，培养90～120天，发酵罐链霉菌的含量≥1×108个/mL；以及
(3)将发酵得到的细黄链霉菌单菌按质量百分比10～20％的比例经载体吸附得到单一菌剂。
9.根据权利要求8所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述活化培养基包括20～25g/L的可溶性淀粉、1～1.5g/L的硝酸钾、0.5～1.0g/L的氯化钠、0.5～1.0g/L的磷酸氢二钾、0.5～1.0g/L的硫酸镁、0.01～0.05g/L的硫酸亚铁和1L的水。
10.根据权利要求8所述的耐盐复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述发酵培养基包括30～40％的肥土、10～20％的干牛粪、3～5％的豆饼粉、5～10％的草炭、5～10％的麦麸、10～20％的花生壳粉、5～10％的玉米粉、2～5％的石灰，所述发酵培养基的pH为6.7-8.5，以上百分比为质量百分比。
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