CN104120091A - 一种糊状的光合细菌培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于养殖技术领域，本发明公开了一种糊状的光合细菌的培养技术，该技术采用多次转种、多次培养，最后乙酸调节pH后，继续培养，得到糊状的光合细菌产品。该产品具有品质稳定、保存时间长和菌数高的特点，该产品使用后能够沉入水底，起到快速改善池塘底质的作用，克服了常规光合细菌菌液很难作用于池底等问题。
Description
技术领域
本发明属于养殖技术领域，具体涉及一种糊状的光合细菌培养方法。
背景技术
光合细菌( PSB) 是自然界中广泛存在的比较古老并具有原始光能合成体系的原核生物，能在厌氧条件下进行不放氧的光合作用。光合细菌具有多种生理功能，代谢类型极为多样，有光能自养、异养和混养多种营养生长方式，具有光合、固碳、降解大分子有机物、固氮、脱氮、硝化、反硝化、硫化物氧化等代谢方式，在养殖水质的净化处理中显示出其强有力的优势。
光合细菌作为净化剂，目前国内外均已进人生产应用阶段。在日本、东南亚各国和我国的养鱼池和养虾池均已较普遍地投放光合细菌作为改善水质的净化剂，并已取得明显的效果。与传统活性污泥法相比，光合细菌作为水产养殖的水质净化剂主要有以下优点：①有机负荷高，可以直接处理由几千至几万高浓度的有机污水，无须稀释；②不存在污泥的处置问题，处理后的污泥是很好的有机肥料，其中的单细胞蛋白质可用做水产动物的饲料；③除氮效果好，耐盐能力强；④占地面积小，投资费用省，消耗动力低，节省能源；⑤容易管理，在10-40℃内均可处理，受季节影响小，且不会产生污泥膨胀现象。因此利用光合细菌处理各类污水越来越受到人们重视。
光合细菌能够针对污染的主要根源―池底有机物产生作用。它能够利用水中这些有机物质作为营养源合成自身营养，产生新的，同时能迅速分解水中的氨态氮、硫化物等有害物质，大幅度降低养殖水体中的COD（化学需氧量）、BOD（生化需氧量）等污染指标，提高水体的pH值，光合细菌还可通过吸收水 中的耗氧因子而间接增加水中的氧气含量，增加溶氧，提高养殖密度，改善水体环境。
目前水产养殖中用的光合细菌，用于净化水质，防治疾病和促进水产动物的生长，效果比较明显。然而养殖过程中绝大多数问题都出现在池底，而现有市面上的光合细菌都是水剂型，泼洒后悬浮于水中，很难作用于池底，本发明通过改进光合细菌的培养工艺，将光合细菌在不加任何粘稠剂的情况下，通过培养，可把它培养成纯天然的粘稠，膏状，***，在水中迅速下沉的糊状光合细菌。
发明内容
基于上述原因，申请人经过多年的实践研究，得到一种品质稳定、保存时间长和菌数高的糊状光合细菌菌液，该产品使用后能够沉入水底，起到快速改善池塘底质的作用，克服了常规光合细菌菌液很难作用于池底等问题。本发明解决了常规光合细菌菌液品质不稳定、难保存、菌数低和难沉底的技术问题
本发明通过下述技术方案实现的。
一种糊状的光合细菌培养方法，取光合细菌菌种，取培养液体积量的25-30%，接种在培养液中，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养4-5d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养4-5d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养3-4d后，用10%-30%乙酸，调整pH至7.2-7.5，继续培养4-5d，完成培养过程，得到所需的糊状光合细菌。
所述的一种糊状的光合细菌培养方法，培养液组成为，以g/L计：酵母膏0.05-0.2，乙酸钠3.0-3.5，碳酸氢钠1.0-2.0，氯化铵1.0，氯化钠5.0，氯化镁0.2，磷酸氢二钾0.5，磷酸二氢钾0.2，氯化钙0.05，氯化亚铁-EDTA 0.005，维生素 C 0.25，蒸馏水至足量。例如：培养液组成为酵母膏0.05-0.2g，乙酸钠3.0-3.5g，碳酸氢钠1.0-2.0g，氯化铵1.0g，氯化钠5.0g，氯化镁0.2g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钙0.05g，氯化亚铁-EDTA 0.005g，维生素C 0.25g，蒸馏水熔解完全，用蒸馏水补足至1000mL。
所述光合细菌的菌种为沼泽红假单胞菌。
所述光合细菌的菌种为球形红假单胞菌。
制备实施例
实施例1
取沼泽红假单胞菌菌液，取培养液体积量的25%，接种在培养液中，培养温度25℃，在光照强度3000LX下，培养5d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25℃，在光照强度3000LX下，培养5d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25℃，在光照强度3000LX下，培养5d后，用10%乙酸，调整pH至2，继续培养5d，完成培养过程，得到所需的糊状光合细菌。
培养液组成:酵母膏0.2g，乙酸钠3.0g，碳酸氢钠1.0g，氯化铵1.0g，氯化钠5.0g，氯化镁0.2g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钙0.05g，氯化亚铁-EDTA 0.005g，维生素C 0.25g，蒸馏水熔解完全，用蒸馏水补足至1000mL。
实施例2
取沼泽红假单胞菌菌液，取培养液体积量的30%，接种在培养液中，培养温度30℃，在光照强度2000LX下，培养4d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度30℃，在光照强度2000LX下，培养4d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度35℃，在光照强度2000LX下，培养4d后，用 10%乙酸，调整pH至7.5，继续培养5d，完成培养过程。
培养液组成:酵母膏0.05g，乙酸钠3.0g，碳酸氢钠1.0g，氯化铵1.0g，氯化钠5.0g，氯化镁0.2g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钙0.05g，氯化亚铁-EDTA 0.005g，维生素C 0.25g，蒸馏水熔解完全，用蒸馏水补足至1000mL。
实施例3
取球形红假单胞菌菌液，取培养液体积量的25%，接种在培养液中，培养温度30℃，在光照强度2000LX下，培养5d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度30℃，在光照强度2500LX下，培养5d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度30℃，在光照强度2000LX下，培养5d后，用15%乙酸，调整pH至7.3，继续培养5d，完成培养过程，得到所需的糊状光合细菌。
培养液组成:酵母15g，乙酸钠3.2g，碳酸氢钠1.5g，氯化铵1.0g，氯化钠5.0g，氯化镁0.2g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钙0.05g，氯化亚铁-EDTA 0.005g，维生素C 0.25g，蒸馏水熔解完全，用蒸馏水补足至1000mL。
实施例4
取球形红假单胞菌菌液，取培养液体积量的30%，接种在培养液中，培养温度30℃，在光照强度2500LX下，培养4d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度30℃，在光照强度3000LX下，培养4d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度35℃，在光照强度2000LX下，培养4d后，用25%乙酸，调整pH至7.4，继续培养5d，完成培养。
培养液组成:酵母膏0.15g，乙酸钠3.3g，碳酸氢钠1.8g，氯化铵1.0g，氯化钠5.0g，氯化镁0.2g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钙0.05g，氯化亚铁-EDTA 0.005g，维生素C 0.25g，蒸馏水熔解完全，用蒸馏水补足至1000mL。
1、本发明糊状的光合细菌的效果试验：
试验方法：试验水池2亩，共5个，水深1.5米，试验前，各水池投放双氧水，投放量为0.5L/亩，3天后投放上述本发明实施例3的糊状光合细菌，用量为0.5L/亩，对照组试验水池不投入光合细菌，同步检测分析7天内各实验组底泥水质。
水质指标测定方法：pH采用pH计（上海雷磁PHBJ-260便携式pH计）直接测量；溶解氧采用便携式溶解氧分析仪（上海雷磁JPBJ-608型便携式溶解氧测定仪）进行测定；NO2 --N含量采用盐酸乃乙二胺法测定（参照GB5009.33-85）；NH3-N含量采用纳氏试剂分光光度法测定（参照GB/T 7479-1987）。
试验结果见表1-表5。
表1初始底泥水质分析结果
| 组别 | 溶解氧（mg/L） | NH3-N（mg/L） | NO2 --N（mg/L） | pH |
| 对照组 | 6.24 | 1.14 | 1.08 | 8.10 |
| 实施例1组 | 6.01 | 1.20 | 1.10 | 8.20 |
| 实施例2组 | 6.30 | 1.13 | 1.02 | 8.32 |
| 实施例3组 | 6.10 | 1.25 | 0.99 | 8.10 |
| 实施例4组 | 6.09 | 1.23 | 1.05 | 8.17 |
表2第3天底泥水质分析结果
| 组别 | 溶解氧（mg/L） | NH3-N（mg/L） | NO2 --N（mg/L） | pH |
| 对照组 | 5.88 | 1.08 | 1.01 | 8.32 |
| 实施例1组 | 5.86 | 0.90 | 0.92 | 8.31 |
| 实施例2组 | 5.74 | 0.99 | 0.87 | 8.48 |
| 实施例3组 | 5.90 | 0.96 | 0.79 | 8.23 |
| 实施例4组 | 5.92 | 1.05 | 0.86 | 8.34 |
表3第5天底泥水质分析结果
| 组别 | 溶解氧（mg/L） | NH3-N（mg/L） | NO2 --N（mg/L） | pH |
| 对照组 | 5.80 | 0.96 | 0.90 | 8.21 |
| 实施例1组 | 5.65 | 0.78 | 0.68 | 8.42 |
| 实施例2组 | 5.60 | 0.88 | 0.66 | 8.60 |
| 实施例3组 | 5.80 | 0.72 | 0.56 | 8.47 |
| 实施例4组 | 5.80 | 0.80 | 0.65 | 8.55 |
[0035] 表4第7天底泥水质分析结果
| 组别 | 溶解氧（mg/L） | NH3-N（mg/L） | NO2 --N（mg/L） | pH |
| 对照组 | 5.55 | 0.89 | 0.80 | 8.40 |
| 实施例1组 | 5.49 | 0.47 | 0.44 | 8.51 |
| 实施例2组 | 5.51 | 0.42 | 0.40 | 8.79 |
| 实施例3组 | 5.57 | 0.50 | 0.37 | 8.64 |
| 实施例4组 | 5.66 | 0.45 | 0.40 | 8.63 |
表5 各组分7天内的净化结果
| 组别 | NH3-N降解率 | NO2 --N降解率 |
| 对照组 | 21.93% | 25.93% |
| 实施例1组 | 60.83% | 60.00% |
| 实施例2组 | 62.83% | 60.78% |
| 实施例3组 | 60.00% | 62.63% |
| 实施例4组 | 63.41% | 61.90% |
试验结果：上述试验表明，本发明实施例第7天的时亚硝酸盐的含量就降低了60%以上，氨氮的含量也降低了60%以上，充分说明本发明培养光合细菌的工艺能够有效的改善池塘底泥水质。
2、稳定性试验结果
按照正常商品的保存条件，进行保存试验，每隔两个月检测光合细菌有效细菌菌数，共检测6个月。
检测方法：采用半固体试管法检测光合细菌的细菌总数。
试验结果见表6。
表6 光合细菌保存稳定性检测结果 （单位：109cfu/mL）
| 组别 | 初始活菌数 | 2个月活菌数 | 4个月活菌数 | 6个月活菌数 |
| 实施例1组 | 2.50 | 2.42 | 2.39 | 2.34 |
| 实施例2组 | 2.37 | 2.29 | 2.21 | 2.15 |
| 实施例3组 | 2.62 | 2.56 | 2.41 | 2.32 |
| 实施例4组 | 2.63 | 2.55 | 2.45 | 2.36 |
试验结果：结果表明，该工艺所生产的光合细菌在6个月内的存活率能够保 持在85%以上，有效菌数都在2.0×109cfu/mL以上。充分说明本发明培养光合细菌的工艺稳定。
本发明所述实施例包括但不限于上述。
Claims (4)
1.一种糊状的光合细菌培养方法，其特征在于：一种糊状的光合细菌培养方法，取光合细菌菌种，取培养液体积量的25-30%，接种在培养液中，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养4-5d；取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养4-5d后，取50%体积量，转种至新的培养液里，培养温度25-35℃，在光照强度1000-3000LX下，培养3-4d后，用10%-30%乙酸，调整pH至7.2-7.5，继续培养4-5d，完成培养过程，得到所需的糊状光合细菌。
2.根据权利要求1所述的一种糊状的光合细菌培养方法，培养液组成为，以g/L计：酵母膏0.05~0.2，乙酸钠3.0~3.5，碳酸氢钠1.0~2.0，氯化铵1.0，氯化钠5.0，氯化镁0.2，磷酸氢二钾0.5，磷酸二氢钾0.2，氯化钙0.05，氯化亚铁-EDTA 0.005，维生素C 0.25，蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的一种糊状的光合细菌培养方法，其中光合细菌的菌种为沼泽红假单胞菌。
4.根据权利要求1所述的一种糊状的光合细菌培养方法，其中光合细菌的菌种为球形红假单胞菌。
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