CN104094851A - 一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法 - Google Patents

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陈权
孙建
肖建梅
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Shanghai Agriculture Science & Technology Seed Co Ltd
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SHANGHAI SUNQIAO MORDERN GREENHOUSE SEED AND SEEDING CO Ltd
Shanghai Agriculture Science & Technology Seed Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法。所述生根培养基配方为：基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉。所述生根培养基的配制方法为：配制基本培养基，按生根培养基配方称取各组分；将称取的香蕉、土豆制备成糊状，然后加入水煮沸，冷却至室温；将配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合；将前述制备得到的各组分混合、定容，调节pH值至5.9-6.0，灭菌，冷却凝固，制得所述生根培养基。按上述组成成分及配制方法制备的生根培养基，培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定，可使生根培养周期缩短至1.5-2个月，组培室的周转效率提高30％以上。

Description

一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种铁皮石斛试管苗的生根培养基及其配制方法。
背景技术
铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物，是石斛属药用植物中最为珍稀名贵的一种。铁皮石斛被列为“中华九大仙草之首”，具有独特的药用价值，其茎、花都可入药，具有益胃生津，滋阴清热的作用。现代医学证明，铁皮石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力的作用。铁皮石斛因表皮呈铁绿色而得名，中国铁皮石斛主要分布于云南、浙江广西、四川贵州等地。
近年来，越来越多的研究机构或企业进行铁皮石斛的人工繁殖，尤其是利用组培技术进行试管苗的繁殖，相关的生产技术已日趋成熟，但是仍存在组织培养周期长的问题。无论是试管苗的增殖培养还是生根培养，培养周期均为3个月左右。试管苗培养周期长造成组培室周转率低、试管苗的污染率升高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法，确保培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定，使生根培养周期缩短，组培室的周转效率提高。
为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
一种铁皮石斛试管苗生根培养基，该生根培养基的配方为：基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉；上述各组分严格按照制备工艺制成。
其中，所述基本培养基的配方为：
大量元素：硝酸钾2200-2700 mg/L、硝酸铵500-600mg/L、七水硫酸镁150-200mg/L、磷酸二氢钾300-400 mg/L、二水氯化钙150-200mg/L；
微量元素：一水硫酸锰15-20mg/L、七水硫酸锌70-100mg/L、碘化钾0.8-1.0mg/L、六水氯化钴0.02-0.03mg/L；
有机物：肌醇100mg/L、维生素B10.1mg/L、维生素B60.1mg/L、甘氨酸3mg/L；
铁盐：七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L。
本发明还提供一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法，包括如下步骤：
(1)配制基本培养基，按照权利要求1所述的质量配比称取香蕉、土豆、NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉；
(2)将前述称取的香蕉、土豆去皮后制备成糊状，然后加入水煮沸，冷却至室温；
(3)将前述配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合；
(4)将前述(1)和(2)制备得到的各组分混合、定容，调节pH值至5.9-6.0，灭菌，冷却凝固，制得所述生根培养基。
优选地，前述步骤(4)中的灭菌条件为：温度121℃、压力0.1MPa条件下灭菌18min。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、利用本发明配制的生根培养基，生根培养时间仅1.5-2个月，组培室的周转效率提高30％以上。
2、本发明配制的生根培养基pH值较为稳定，因此培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定。本发明中，将香蕉泥和土豆泥的混合物加热煮沸冷却后，再和培养基其他组分混合定容后，最后测定pH值。培养基灭菌后的pH变化较小，培养基稳定培养的试管苗质量更稳定。
具体实施方式
以下通过具体实施例来说明本发明的技术方案。本发明中所用的原料和试剂均市售可得。下面结合实施例对铁皮石斛试管苗生根培养基的配制进行详细说明。
以制备40升生根培养基为例，其制备过程如下：
(1)香蕉、土豆去皮，分别称取香蕉4000克、土豆2000克，将香蕉、土豆切成小块，用搅拌机制成糊状后加7-8升水加热，加热过程中，不断搅拌防止粘锅，直至煮沸，然后冷却至室温。
(2)准备一个体积为10升左右的容器，在容器中加入5-6升纯水，分别量取2000ml大量元素20倍母液、40ml微量元素1000倍母液、200ml铁盐200倍母液、40ml有机物1000倍母液(以上均为优化配方的母液)、40mlNAA0.5mg/ml母液，倒入容器中；称取40克活性炭、800克白砂糖、200克琼脂粉，分别倒入容器中并搅拌均匀。
(3)将前述制备好的(1)和(2)各组分倒入50L的容器中混合、搅拌，定容至40L，调节pH值至6.0，然后进行分装，每瓶灌装量为60ml左右。最后在高温121℃，高压0.1MPa灭菌18分钟，培养基冷却凝固后使用。
利用上述配制的生根培养基进行铁皮石斛试管苗培养，在1.5-2个月的培养周期内试管苗根系数量4-5根，根到3cm以上，试管苗株高5cm以上。使得组培室的周转效率提高30％以上。
常规的铁皮石斛培养基配制步骤是：将包括香蕉、土豆在内的所有组分混合、定容后，调节pH值，再加热、灭菌，这会造成培养基pH值因上述原因在灭菌后发生较大变化，因此试管苗质量因培养基pH值的差异而不稳定。
由于培养基中的香蕉泥和土豆泥是天然的添加物，所用香蕉和土豆产地或成熟度的不同，使两种添加物在加热后的酸碱度发生不同的变化，致使经过灭菌后，培养基的pH值发生较大改变。
本发明中，则是将香蕉泥和土豆泥的混合物加热煮沸冷却后，和培养基其他组分混合定容，然后再测定pH值。因此，培养基灭菌后的pH值变化很小，从而使得培养的试管苗质量稳定。
上述本发明的实施例，并不用于限制本发明。对于本领域技术人员来说，本发明的培养基配制方法可以有变化。凡在本发明的精神和原则内，所作的等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种铁皮石斛试管苗生根培养基，其特征在于：所述生根培养基的配方为：基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉；
所述基本培养基的配方为：
大量元素：硝酸钾2200-2700 mg/L、硝酸铵500-600mg/L、七水硫酸镁150-200mg/L、磷酸二氢钾300-400 mg/L、二水氯化钙150-200mg/L；
微量元素：一水硫酸锰15-20mg/L、七水硫酸锌70-100mg/L、碘化钾0.8-1.0mg/L、六水氯化钴0.02-0.03mg/L；
有机物：肌醇80-100mg/L、维生素B10.05-0.15mg/L、维生素B60.05-0.15mg/L、甘氨酸2-4mg/L；
铁盐：七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L。
2.如权利要求1所述的一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法，包括如下步骤：
(1)配制基本培养基，按照权利要求1所述的质量配比称取去皮的香蕉和土豆，以及NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉；
(2)将前述称取的香蕉、土豆制备成糊状，然后加入水煮沸，冷却至室温；
(3)将前述配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合；
(4)将前述(1)和(2)制备得到的各组分混合、定容，调节pH值至5.9-6.0，灭菌，冷却凝固，制得所述生根培养基。
3.如权利要求2所述的一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法，其特征在于，所述步骤(4)中的灭菌条件为：温度121℃、压力0.1MPa条件下灭菌18min。
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