CN104017751B - 凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂及其制备 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌制备的益生菌剂及其制备方法,属于饲料微生物技术领域。所述益生菌剂以豆粕、麸皮、玉米粉为基质,利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌进行固态发酵而成。本发明的发酵方法降低了发酵生产成本,处理方便,污染小,并且设备结构简单、易操作,是一种可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术;本发明的益生菌剂可将豆粕、麸皮及玉米粉中的大分子蛋白质降解为寡肽,并将蛋白中的抗营养物质、抗原蛋白等彻底分解,从而提高豆粕等发酵产品的蛋白质品质及饲用价值,且发酵产品中含有活菌,能有效调节动物肠道微生物菌群,改善生产性能,提高饲料的利用率。
Description
技术领域
本发明属于饲料微生物技术领域,特别涉及一种以豆粕、麸皮、玉米粉为基质,利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌进行固态发酵制备益生菌剂的应用技术。
背景技术
现有益生菌制品多采用益生菌直接与液态牛乳和豆乳发酵,得到功能性的酸牛奶或酸豆奶,或者将其采用液态发酵后,直接收集益生菌菌体,制作成益生菌粉剂、片剂或者胶囊。在采用液态发酵时,会产生大量的废水污染环境,后处理比较困难,机器设备操作也较为繁琐。由于益生菌能够改善宿主微生态平衡,提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及代谢产物,因此,现在对益生菌的研究已经非常深入和细致化,并且已经广泛应用于工业、农业、环保、家庭等各个项领域。
目前,将益生菌制品应用于动物微生物制剂、添加至动物饲料中也已较为常见;例如,公开号为CN103202391A的发明专利《一种有效预防及改善牛***炎的复合乳酸菌微生态制剂》,公开了一种由保藏号为CGMCC No.6736的干酪乳杆菌HM-09、保藏号为CGMCCNo.6741的植物乳杆菌HM-10和沸石粉按质量份数组合而成的复合微生态制剂,能有效的降低体细胞数,预防减少隐性牛***炎发病率;公开号为CN103243043A的发明专利《一株用于改善次等猪苗养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用》,公开了一种保藏号为CGMCC No.6729的凝结芽孢杆菌,通过应用这种菌株,可有效的改善猪苗的健康状况、提高次等猪苗养殖的生产性能。公开号为CN103421711A的发明专利《用于饲料添加剂益生菌固体发酵的干酪乳杆菌、动物双歧杆菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌》公开了用于饲料添加剂益生菌固体发酵的干酪乳杆菌、动物双歧杆菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌,所述枯草芽孢杆菌HM-66、干酪乳杆菌F-08、植物乳杆菌HM-20和动物双歧杆菌V9均为益生菌,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏号分别为CGMCCNo.6733、CGMCCNo.6735、CGMCCNo.6744和CGMCCNo.5470;通过这几种菌株的应用能有效改善饲料的酸香味、色泽和口感等感官特征。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种利用凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)HM-09和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HM-10等菌对豆粕、麸皮和玉米粉基质进行分段固态发酵的方法,利用此方法发酵出的益生菌剂产品具有特殊的酸香味,且含有的活菌数高,豆粕蛋白质的降解率也高,还能够调节动物肠道微生物菌群,促进肠道吸收、增强机体免疫力,改善生产性能,提高饲料的利用率,有效抑制养殖后期机体粪便和残饵料的腐烂,改善环境卫生,降低氨氮和亚硝酸盐的产生,降低整个养殖成本。
本发明是通过下述技术方案实现的:
一种利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌制备的益生菌剂,其制备方法包括如下步骤:
种子液的制备:将凝结芽孢杆菌HM-09于恒温箱中30-38℃,170转摇床培养20-24h;将植物乳杆菌HM-10与干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HM-09于恒温箱中30-38℃培养20-24h;
所述凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09的种子培养基为:蛋白胨2-5%,葡萄糖2-5%,加水至100%,pH7.0-7.2;
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵0-16h,再接种植物乳杆菌HM-10种子液与干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵12-36h,共计发酵时间12-52h,发酵过程中控制发酵温度为30-38℃,湿度为60-80%,发酵结束其游离氨基态氮含量在480umol/g以上;
所述固体培养基为:25-30%豆粕,25-30%麸皮,2-5%玉米粉,水分含量40-50%,初始pH 6.8-7.2。
所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的3-6%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的2-4%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的4-6%。
益生菌剂中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数(1.45-2.98)×109CFU/g,植物乳杆菌HM-10活菌数(1.55-2.65)×109CFU/g,干酪乳杆菌HM-09活菌数(3.31-9.98)×109CFU/g。
本发明产品在饲料中的添加量为25-60g/kg。
有益效果
本发明利用凝结芽孢杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10等为发酵菌剂对豆粕、麸皮和玉米粉进行混合固态发酵,降低了发酵生产成本,处理方便,污染小,并且设备结构简单、易操作,是一种可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术;采用凝结芽孢杆菌HM-09进行前期发酵,可以产生大量乳酸及乙酸等酸味小分子物质,这些小分子物质赋予产品特有的酸香味、色泽和口感等,提高了产品的适口性;本发明在固态发酵一段时间后添加了植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09进行混合发酵,能够高效利用干酪乳杆菌HM-09菌调节肠内菌群平衡、促进机体消化吸收的功能,同时还能够利用干酪乳杆菌促进细胞***的作用,产生抗体免疫,增强机体免疫;所述植物乳杆菌在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素,因此利用此特性,在养殖后期能很好的抑制底部粪便和残饵料的腐烂,降低氨氮和亚硝酸盐的产生,大量减少化工降解素的用量,使养殖成本降低;利用分段固态发酵的方法生产的益生菌制剂中含有大量的活菌,因此,协同各菌种的特性,能够有效调节动物肠道微生物菌群,促进肠道吸收、增强机体免疫力,改善断奶仔猪菌群失调性腹泻,提高饲料的利用率,降低整个养殖成本。
本发明产品用于早期断奶乳猪的饲喂时能有效降低乳猪的腹泻率30%以上,饲料的转化率提高了25-30%。
具体实施方式
下面结合实例,对本发明进一步说明,下述实例是说明性的,不是限定性的,不能以下述实例来限定本发明的保护范围。
本发明所提供的凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09于2012年10月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号分别为CGMCC No.6729、CGMCC No.6741和CGMCC No.6736;保藏地址为:北京市朝阳区大屯路,中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101;
实施例1
一种利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌制备的益生菌剂,其制备方法包括如下步骤:
种子液的制备:凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09从冻藏的甘油管中接种到装有液体种子的培养基中,所述凝结芽孢杆菌HM-09的种子培养条件:37℃,170转摇床培养24h;植物乳杆菌HM-10与干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中37℃培养24h;
其中种子培养基为:蛋白胨2%,葡萄糖2%,加水至100%,pH7.0-7.2。
固态发酵
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵12h,再接种植物乳杆菌HM-10种子液和干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵24h,共计发酵时间36h,发酵过程中控制发酵温度为37℃,湿度为70%,发酵结束其游离氨基态氮含量为489umol/g;
所述固体培养基为:29%豆粕,29%麸皮,2%玉米粉,水分含量40%,初始pH7.0,115℃高压灭菌25min。
所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的3%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%。
益生菌剂中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.98×109CFU/g,植物乳杆菌HM-10活菌数2.07×109CFU/g,干酪乳杆菌HM-09的活菌数5.98×109CFU/g。
本发明产品在饲料中的添加量为45g/kg。
实施例2:
一种利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌制备的益生菌剂,其制备方法包括如下步骤:
种子液的制备:将凝结芽孢杆菌HM-09于恒温箱中37℃,170转摇床培养24h;将植物乳杆菌HM-10与干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中37℃培养24h。
其中种子培养基为:蛋白胨2%,葡萄糖2%,加水至100%,pH7.0-7.2;
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵16h,再接种植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵15h,共计发酵时间31h,发酵过程中控制发酵温度为37℃,湿度为80%,发酵结束其游离氨基态氮含量在486umol/g;
固体培养基为:29%豆粕,29%麸皮,2%玉米粉,水分含量40%,初始pH 7.0,115℃高压灭菌25min。
凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的3%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的2%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的6%。
益生菌剂中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数1.45×109CFU/g,植物乳杆菌HM-10活菌数1.55×109CFU/g,干酪乳杆菌HM-09活菌数9.98×109CFU/g。
本发明产品在饲料中的添加量为30g/kg。
实施例3
一种利用凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌制备的益生菌剂,其制备方法包括如下步骤:
种子液的制备:将凝结芽孢杆菌HM-09于恒温箱中37℃,170转摇床培养24h;将植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中37℃培养24h。
凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09的种子培养基为:蛋白胨2%,葡萄糖2%,加水至100%,pH7.0-7.2;
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵6h,再接种干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10种子液继续发酵36h,共计发酵时间42h,发酵过程中控制发酵温度为37℃,湿度为60%,发酵结束其游离氨基态氮含量在460umol/g;
固体培养基为:29%豆粕,29%麸皮,2%玉米粉,水分含量40%,初始pH 7.0,115℃高压灭菌25min。
凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的6%,植物乳杆菌HM-10的种子液添加量为固体培养基总重量的4%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的4%。
益生菌剂中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数3.18×109CFU/g,植物乳杆菌HM-10活菌数2.65×109CFU/g,干酪乳杆菌HM-09活菌数3.31×109CFU/g。
本发明产品在饲料中的添加量为60g/kg。
使用效果实验
应用本发明实施例1的益生菌剂在断奶仔猪中的使用效果试验:
试验动物选择养殖场平均体重为(10.5±0.45)kg的健康乳猪120头,经统计分析体重差异不显著。采用单因子随机化设计,将120头健康乳猪,按公母各半,随机分成2组(对照组和试验组),每组6个重复,每个重复10头猪。试验组添加实施例1制得的本发明产品45g/kg,对照组不添加本发明产品。连续饲喂20天,与对照组相比,使用发明饲料添加剂可获得如下效果:
项目 | 试验组 | 对照组 |
始重(kg) | 10.45 | 10.65 |
末重(kg) | 20.57 | 19.59 |
日采食量(g) | 720.1 | 705.2 |
日增重(g) | 506 | 447 |
料肉比 | 1.42 | 1.58 |
腹泻率(头) | 6 | 24 |
试验结果表明:乳猪饲喂含有本发明益生菌剂的饲料后,日采食量增加,日增重提高了,同时还降低了乳猪的料肉比,腹泻率也显著降低了。
Claims (7)
1.一种凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂,由以下方法制备:
种子液的制备:将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)HM-09于恒温箱中30-38℃,170转摇床培养20-24h;将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HM-10与干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HM-09于恒温箱中30-38℃培养20-24h;
所述凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09的种子培养基为:蛋白胨2-5%,葡萄糖2-5%,加水至100%,pH7.0-7.2;
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵0-16h,再接种植物乳杆菌HM-10种子液与干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵12-36h,共计发酵时间12-52h,发酵过程中控制发酵温度为30-38℃,湿度为60-80%,发酵结束其游离氨基态氮含量在480umol/g以上;
所述固体培养基为:25-30%豆粕,25-30%麸皮,2-5%玉米粉,水分含量40-50%,初始pH 6.8-7.2;
所述凝结芽孢杆菌HM-09保藏编号为CGMCCNo.6729,植物乳杆菌HM-10保藏编号为CGMCC No.6741,干酪乳杆菌HM-09保藏编号为CGMCC No.6736。
2.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的3-6%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的2-4%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的4-6%。
3.根据权利要求2所述的凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的3%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%。
4.一种凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂的制备方法,包括如下步骤:
种子液的制备:将凝结芽孢杆菌HM-09于恒温箱中30-38℃,170转摇床培养20-24h;将植物乳杆菌HM-10与干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中30-38℃培养20-24h;
所述凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09的种子培养基为:蛋白胨2-5%,葡萄糖2-5%,加水至100%,pH7.0-7.2;
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵0-16h,再接种植物乳杆菌HM-10种子液与干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵12-36h,共计发酵时间12-56h,发酵过程中控制发酵温度为30-38℃,湿度为60-80%,发酵结束其游离氨基态氮含量在480umol/g以上;
所述固体培养基为:25-30%豆粕,25-30%麸皮,2-5%玉米粉,水分含量40-50%,初始pH 6.8-7.2;
所述凝结芽孢杆菌HM-09保藏编号为CGMCC No.6729,植物乳杆菌HM-10保藏编号为CGMCC No.6741,干酪乳杆菌HM-09保藏编号为CGMCC No.6736。
5.根据权利要求4所述的凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂的制备方法,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的3-6%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的2-4%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的4-6%。
6.根据权利要求5所述的凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂的制备方法,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的3%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%。
7.根据权利要求4所述的凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
种子液的制备:凝结芽孢杆菌HM-09、植物乳杆菌HM-10和干酪乳杆菌HM-09从冻藏的甘油管中接种到装有液体种子的培养基中,所述凝结芽孢杆菌HM-09的种子培养条件:37℃,170转摇床培养24h;植物乳杆菌HM-10与干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中37℃培养24h;
其中种子培养基为:蛋白胨2%,葡萄糖2%,加水至100%,pH7.0-7.2;
固态发酵
发酵培养条件:将凝结芽孢杆菌HM-09种子液添加到固体培养基中进行混合后发酵12h,再接种植物乳杆菌HM-10种子液和干酪乳杆菌HM-09种子液继续发酵24h,共计发酵时间36h,发酵过程中控制发酵温度为37℃,湿度为70%,发酵结束其游离氨基态氮含量为489umol/g;
所述固体培养基为:29%豆粕,29%麸皮,2%玉米粉,水分含量40%,初始pH7.0,115℃高压灭菌25min;
所述凝结芽孢杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%,植物乳杆菌HM-10种子液的添加量为固体培养基总重量的3%,干酪乳杆菌HM-09种子液的添加量为固体培养基总重量的5%。
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