CN104013673A - 一种丹参提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了丹参的提取方法，它包括如下操作步骤：取丹参饮片，加水，减压条件下，70℃沸腾提取，合并提取液，即可。本发明还提供了丹参提取物及其制备方法。本发明还提供了丹参提取物的检测方法。本发明的丹参提取方法，所得提取物中丹酚酸B含量远高于高温回流提取物，其他成分和杂质含量较高温回流提取低，低温沸腾动态法制得的丹参提取物丹酚酸B纯度大于高温回流提取物。本发明检测方法，能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。

Description

一种丹参提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种丹参提取物及其制备方法。本发明还涉及丹参提取物的检测方法。

背景技术

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，始载于《神农本草经》，列为上品，为临床常用中药材。具有活血祛瘀，痛经止痛，清心除烦，凉血消痈等功效，临床广泛用于胸痹心痛、脘腹胁痛、癥瘕积聚、热痹疼痛、心烦不眠、***等证。

丹参含有脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的酚酸类化合物。水溶性酚酸是丹参主要的活性成分，包括丹参素、丹酚酸B、丹酚酸C及原儿茶醛等成分，以丹酚酸B含量最高。丹酚酸B对心血管***、大脑、肝脏、肾脏等都具有保护作用，是丹参的有效水溶性成分。

丹参提取多采用回流提取，提取温度为溶剂在大气压下的沸点，温度较高，丹酚酸B对热不稳定，长时间加热，丹酚酸B易被分解破坏，使其含量降低。因此，亟待一种可有效提取丹酚酸B，且对杂质提取较少的丹参提取方法。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种丹酚酸B含量较高的丹参提取物，本发明的另一技术方案是提供了丹参提取物的制备方法。

本发明提供了丹参的提取方法，它包括如下操作步骤：取丹参饮片，加水，减压条件下，70±5℃沸腾提取，合并提取液，即可。

上述提取温度，优选使用70℃。

本发明中所述的沸腾提取，即在减压条件下，使得水在相应的提取温度下达到沸腾状态，在此温度和压力条件下进行提取，其中，真空压力以满足在某一温度条件下保证水沸腾为基准。

其中，加水量为丹参干重的5～15倍，优选为12倍。

其中，提取1～3次，每次0.5～3h；优选提取3次，每次2h。

本发明还提供了一种丹参提取物的制备方法，它包括如下操作步骤：

（1）按上述方法提取；

（2）取步骤（1）的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得丹参提取物。

其中，所述减压回收溶剂的条件为：-0.05～-0.095MPa、40～90℃；优选70±5℃。

本发明还提供了一种丹参提取物，所述丹参提取物含有5～15%的丹酚酸B。

进一步地，所述丹参提取物的制备方法如上所述。

本发明还提供了丹参提取物的检测方法，它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下：

（1）取待测丹参提取物，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液；

（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶为固定相；

流动相：甲醇A-1.0%冰醋酸水溶液B，梯度洗脱，洗脱程序A：0min7%，10min7%，12min9%，31min33%，47min39%，60min58%，70min62%；

检测波长：286±5nm。

进一步地，所述高效液相色谱法中，以丹酚酸B、原儿茶醛或丹参素钠中的一种或两种以上为对照品，制备对照品溶液。

进一步地，检测柱温为30±5℃。

利用本发明提取方法，制得的丹参提取物中丹酚酸B含量远高于高温回流提取物，其他成分和杂质含量较高温回流提取低，低温沸腾动态法制得的丹参提取物丹酚酸B纯度大于高温回流提取物。

较高温回流提取而言，适宜低温提取既保证了酚酸类成分的最大溶出，还防止其在高温下被分解破坏，最大限度的提取出了丹参中的酚酸类成分；同时，由于低温，杂质及其他成分溶出量减少，使酚酸类成分被高效地从丹参中被分离出来的同时，提取液中杂质和其他成分的含量也降低，有利于后续的分离纯化工艺，提高了产品品质和附加值。

本发明检测方法，能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。

附图说明

图1：不同提取温度丹酚酸B含量图

图2：丹参提取液表面张力

图3：丹参提取液Zeta电位

图4：丹参提取液粒径分布

图5：丹参提取液指纹图谱色谱图

图6：10批丹参提取液指纹图谱叠加图

图7：丹参提取物粒径分布图

图8：丹参提取物吸湿百分率曲线

图9：10批丹参提取物指纹图谱叠加图

具体实施方式

实施例1丹参提取方法

取丹参饮片，加丹参干重的12倍量水，减压条件下，70℃沸腾提取3次，每次2h，合并提取液，即可。

实施例2丹参提取方法的研究

1仪器与试药

岛津LC-10A高效液相色谱仪，SCL-6A***控制器，N2000色谱数据工作站，TC-100恒温箱（日本岛津公司）；Agilent1200高效液相色谱仪系列（美国Agilent公司）；Mettler AE240十万分之一电子天平（德国Mettler公司）；FA1104万分之一电子天平（上海天平仪器厂）；KQ3200型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；RE-2000型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），ALPHA1-4LSC冷冻干燥器（CHRIST公司），PHS-3E型PH计（上海精密科学仪器有限公司）；OCAT21表面/界面张力仪（德国Dataphysics公司）；电导率仪（雷磁DDS‐307A，上海精科）Malvern纳米粒度仪（型号Nano-ZS）。

丹参药材（四川科伦天然药业有限公司）；丹酚酸B对照品（批号：MUST-12020104，成都曼斯特生物科技有限公司），丹参素钠对照品（批号：MUST-12020803，成都曼斯特生物科技有限公司），原儿茶醛对照品（批号：110810-200205，中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯，水为重蒸水（自制），其他试剂均为分析纯。

2丹酚酸B含量测定方法学的建立

色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；Agilent TC-C18（250mm×4.6mm）色谱柱，5μm；乙腈-0.5%磷酸水（28:72）为流动相，检测波长286nm，流速1.0mL/min；柱温：30℃。

对照品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品14.08mg于10mL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，作为贮备液；精密量取1mL于10mL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，即得0.1408mg/mL丹酚酸B对照品溶液。

供试品溶液的制备精密吸取提取液适量于25mL量瓶中，75%甲醇溶液定容，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

线性范围试验取对照品溶液，分别精密进样2、4、8、16、20μL，照上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积对进样量进行回归，得回归方程：Y=131290X+46157，R=0.9991。结果表明，在丹酚酸B含量为0.2816mg～2.8160mg范围内，线性关系良好。

精密度试验精密吸取对照品溶液10uL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD为1.16%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验精密吸取供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h进样5uL，记录峰面积，RSD为1.08%，表明样品在8h内稳定性良好。

重复性试验按“供试品溶液的制备”制备6份供试品溶液，分别精密吸取5uL注入液相色谱仪，记录峰面积，RSD为2.14%，表明该法重复性良好

回收率试验精密称取已知含量的丹参粉末0.1g，精密加入丹酚酸B对照品3.8016mg，75％甲醇定容至50mL，称定重量，超声1h，取出，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样5μL测定含量，计算回收率，平均回收率为101.77%，RSD为2.89%(n=6)。

丹参药材中丹酚酸B含量测定取丹参粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50mL，称定重量，超声1h，取出，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样5μL测定含量，测得丹参药材中丹酚酸B含量为3.81%。

3正交试验设计

称取丹参饮片30g，以水为溶剂，于抽真空70℃下沸腾提取温度下对提取次数、溶剂用量、提取时间三个因素进行L₉(3⁴)正交实验，制备样品溶液，测定丹酚酸B含量，结果如下：

表1正交试验设计及结果

表2方差分析

注：P＜0.05表示有显著性，P＜0.01表示有极显著性

结果表明，各因素作用主次为A>C>B，A对丹参酚酸提取影响最大，其次为C因素，B因素影响最小。方差分析结果为：A、B、C因素对提取效果都有显著影响。综合直观分析和方差分析的结果，确定优化工艺为A₃B₃C₃，即加12倍量水，于低温70℃沸腾回流提取3次，每次2h。

正交试验的验证根据以上正交试验的结果，对优选出来的最佳工艺条件A₃B₃C₃进行验证试验，重复三次，丹酚酸B和干膏收率分别为3.11%、40.36%。

不同提取温度的差异称取丹参饮片30g，采用正交试验优化的工艺条件，于50、60、70、80、90、100℃下制备丹参提取液，测定丹酚酸B含量和干膏收率。结果如表3、图1：

表3不同提取温度的影响（n=3）

以上数据表明，随着提取温度的升高，丹酚酸B含量先增大后减小，70℃含量最高为3.14%，100℃含量最低为2.46%；干膏收率随温度升高逐渐增大，50℃最低为38.95%，100℃最高为48.50%。提取温度低于70℃时，丹酚酸B不能有效溶出；高于70℃时，随着加热时间延长，丹酚酸B被分解破坏；故70℃为丹酚酸B适宜提取温度。由于物质溶剂中溶解度一般随着温度升高而增大，因而，低温时物质溶出少，干膏收率低，随着温度升高，物质溶出量增大，干膏收率增加。70℃时，丹酚酸B既能有效溶出，不被破坏，溶液中其他成分和杂质溶解量也较高温低，有利于后续分离纯化。

4提取液物理参数测定

（1）丹参提取液表面张力的测定

采用OCAT21表面/界面张力仪测定丹参高温与低温提取液的表面张力，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果如表4、图2。

表4丹参高温提取液与低温提取液的表面张力测定（单位：mN）

与高温提取液比较，*P＜0.05

统计分析结果显示，两组数据方差不齐，双侧检验P=0.027＜0.05，高温提取液与低温提取液的表面张力有显著性差异，低温提取液表面张力显著大于高温提取液表面张力，这可能与提取工艺有关。

（2）丹参提取液电导率的测定

采用电导率仪测定丹参高温与低温提取液的电导率，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表5。

表5丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定（单位：μs/cm）

经统计分析，两组数据方差齐，双侧检验P=0.190＞0.05，表明高温提取液与低温提取液电导率没有显著差异。

（3）丹参提取液pH值测定

采用pHS-3C精密pH计测定丹参高温与低温提取液的pH，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表6。

表6丹参高温提取液与低温提取液的pH测定

与高温提取液比较，*P＜0.05

统计结果显示，两组数据方差齐，双侧检验P=0.000＜0.05，两者有显著统计学差异，低温提取液pH值显著低于高温提取液；由于两者提取温度不同，物质在两者中的溶出不同，提取液所含化合物种类与数量有差异，故提取液的pH值不同。

（4）丹参提取液Zeta电位的测定

采用Zeta电位仪测定丹参高温与低温提取液Zeta电位，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表7、图3。

表7丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定（单位：vm）

与高温提取液比较，*P＜0.05

统计分析显示，两组数据方差齐，双侧检验P=0.008＜0.05，两者具有显著的统计学差异，低温提取液Zeta电位显著低于高温提取液Zeta电位，表明高温提取液稳定性比低温提取液好。

（5）丹参提取液纳米粒径的测定

采用Malvern纳米粒度仪测定丹参高温与低温提取液纳米粒径，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表8、图4。

表8丹参高温提取液与低温提取液的电导率测定（单位：d.nm）

与高温提取液比较，*P＜0.05

统计结果显示，两组数据方差齐，双侧检验P=0.000＜0.05，两者有显著统计学差异，低温提取液纳米粒径平均值显著大于高温提取液纳米粒径平均值。由光强分布图可知，高温提取液粒径分布在400～800nm，低温提取液粒径分布在2000～6000nm，均为粗分散体系，低温提取液纳米粒径远大于高温提取液。

实施例3提取液的指纹图谱研究

供试品溶液的制备称取丹参药材30g，加12倍水，于70℃回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，定容至1000mL，精密吸取5mL于量瓶中，甲醇定容至25ml，摇匀，即得丹参低温提取液供试品溶液。

称取丹参药材30g，加12倍水，回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，定容至1000mL，精密吸取5mL于量瓶中，甲醇定容至25ml，摇匀，即得丹参高温提取液供试品溶液。

对照品溶液的制备精密称定丹酚酸B、原儿茶醛、丹参素钠对照品适量于10mL量瓶中，甲醇定容，即得含丹酚酸B0.1466mg·mL^-1、原儿茶醛8.533μg·mL^-1、丹参素钠33.4μg·mL^-1的混合对照品溶液。

（1）色谱条件的选择

检测波长的选择为了保证指纹图谱的最大信息量化，尽可能多地反映样品全貌，采用甲醇-1.0%冰醋酸水溶液二元梯度洗脱，30℃柱温下，记录254、270、280、286、310nm波长下丹参提取液色谱图，并结合3D-plot图确定出检测波长。结果表明，286nm波长下色谱峰分离效果较好，所有色谱峰都能够体现，可充分反映丹参样品的情况，因此，选择286nm为检测波长。

流动相种类的选择在30℃柱温下，以甲醇-0.5%磷酸水溶液、甲醇-1.0%冰醋酸水溶液、甲醇-1.0%甲酸水溶液、乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相，进行梯度洗脱，记录色谱图。结果表明，以甲醇-1.0%冰醋酸水溶液梯度洗脱基线平稳，分离较好，故以甲醇-1.0%冰醋酸水溶液为流动相。

梯度洗脱程序的选择以甲醇-1.0%冰醋酸水溶液为流动相，在30℃柱温下，采用不同梯度洗脱程序，测定指纹图谱，结果表明在梯度洗脱程序（A：0min7%，10min7%，12min9%，31min33%，47min39%，60min58%，70min62%）下分离度较好，特征峰明显，故以该梯度洗脱程序进行洗脱。

色谱柱的选择以甲醇(A)-1.0%冰醋酸水溶液(B)为流动相，在286nm下，分别采用Agilent TC-C18、Dikma Kromasil100A C18、Scienhome KromasilC18色谱柱测定指纹图谱，结果以Agilent TC-C18色谱柱分离效果较好，故选择Agilent TC-C18色谱柱进行测定。

结果表明，丹参指纹图谱色谱条件为：色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱；流动相为甲醇(A)-1.0%冰醋酸水溶液(B)，二元梯度洗脱，洗脱程序A：0min7%，10min7%，12min9%，31min33%，47min39%，60min58%，70min62%；柱温为30℃,；体积流量为1.0mL·min^-1，检测波长为286nm，分析时间70min，供试品、对照品溶液进样量均为15μL。

（2）方法学考察

精密度试验取1号丹参常压提取液供试品溶液连续进样5次，记录指纹图谱，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积及RSD值，均小于＜3%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验取精密度试验供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、16h、36h测定指纹图谱，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积及RSD值，均小于＜3%，表明样品36h内稳定性良好。

重复性试验取同一批次6份丹参药材，精密称定，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，测定指纹图谱，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积及RSD值。结果表明，共有指纹峰相对保留时间、相对峰面积RSD＜3%，该测定方法重复性良好。

（3）丹参指纹图谱的建立

丹参指纹图谱的检测分别取10个批次丹参药材，精密称定，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，按试验色谱条件制备检测，记录70min内色谱图，通过比较各峰的保留时间选择每一个图谱都产生的共有峰，记录共有峰峰面积，见表9、表10、图5、图6。

表9丹参低温提取液峰面积

表10丹参高温提取液峰面积

指纹图谱相似度计算采用中国药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度计算，见表11。

表11丹参提取液相似度计算结果

从提取液指纹图谱来看，两者差异较大；丹参高温提取液指纹图谱色谱峰数量较多，丹参低温提取液指纹图谱色谱峰数量较少，表明丹参高温提取液所含化合物种类较低温提取液多，一些成分在低温提取时溶出减少。高温提取液与低温提取液有6个共有峰，13min左右色谱峰为丹参素钠，21min左右色谱峰为原儿茶醛，56min左右色谱峰为丹酚酸B。从共有峰峰面积来看，两者也有差异；低温提取液丹参素钠、原儿茶醛峰面积远小于高温提取液，丹酚酸B色谱峰峰面积远大于高温提取液。以上试验，丹参低温提取液丹酚酸B含量高，杂质和其他成分少，提取液中丹酚酸B纯度较高。

实施例4丹参提取物的参数测定

取低温（实施例1）、高温提取液于旋转蒸发仪70℃下浓缩至200mL，浓缩液于-5℃下冷藏12小时，结成冰块，于冷冻干燥器干燥24h，取出，称重，于干燥器内避光保存，测定丹酚酸B的含量，低温提取物为7.38%，高温提取物为5.62%，低温提取物丹酚酸B含量显著高于高温提取物。

1提取物物理参数的测定

（1）丹参提取物比表面积的测定

取提取物粉末适量，采用比表面积测定仪测定丹参高温与低温提取物的比表面积，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表12

表12丹参高温提取物与低温提取物的比表面积测定（单位：m²/g）

与高温提取物比较，*P＜0.05

经统计分析，两组数据方差齐，双侧检验的P＜0.05，不能认为两种丹参提取物的比表面积相同，因低温提取物的比表面积均值大于高温提取物，故低温提取物的比表面积显著大于高温提取物比表面积，提示低温提取物的表面吸附能力可能比高温提取物强。

（2）丹参提取物孔隙率测定

取提取物粉末适量，采用比表面积测定仪测定丹参高温与低温提取物的比表面积，运用SPSS17.0统计软件对试验数据进行独立样本t检验对比分析，测定结果见表13。

表13丹参高温提取物与低温提取物的孔隙率测定（单位：cm²/g）

与高温提取物比较，*P＜0.05

经统计分析，两组数据方差齐，双侧检验的P＜0.05，两者有显著统计学差异，低温提取物的孔隙率显著大于高温提取物孔隙率。

（3）丹参提取物的粒径测定

采用粉体干法测定丹参提取物粒径，测定结果见表14、图7。

表14丹参高温提取物与低温提取物的粒径测定（单位：μm）

结果显示，低温提取物d(0.1)、d(0.9)粒径小于高温提取物，低温提取物d(0.5)粒径大于高温提取物，丹参高温提取物粒径分布在0.8～2000nm，丹参低温提取物粒径分布在0.8～700nm，低温提取物较高温提取物粒径分布更集中。

（4）丹参提取物休止角的测定

采用固定漏斗法测定丹参提取物休止角，将漏斗固定于水平放置的绘图纸的上方一定距离，小心地将制备好的提取物粉体倒入漏斗中，在坐标纸上堆积成圆锥体，测量圆锥体的直径2R和高度H，根据tanθ=H/R，计算出休止角θ，见表15。

表15丹参高温提取物与低温提取物的休止角测定（单位：度）

运用SPSS17.0统计软件对以上数据进行独立样本t检验对比分析，两主数据方差齐，双侧检验P=0.067＞0.05，两者无显著统计学差异，高温与低温提取物休止角小于40°，流动性较好，可满足生产需要，低温提取物流动性好于高温提取物。

（5）丹参提取物堆密度和振实密度测定

称取丹参提取物粉体10g，置于25mL量筒中，轻轻刮平后读取体积V₀，振动量筒至粉体体积不在变化，读取体积V_f，计算出堆密度，振实密度，结果见表16。

表16丹参高温提取物与低温提取物的堆密度和振实密度测定（单位：g/mL）

与高温提取物比较，*P＜0.05

运用SPSS17.0统计软件对以上数据进行独立样本t检验对比分析，方差齐，双侧检验堆密度与振实密度P值均为0.000＜0.05，有显著统计学差异，低温提取物堆密度与振实密度显著小于高温提取物。

（6）丹参提取物吸湿百分率测定

取洗净的称量瓶恒重称重，取丹参提取物平铺（厚度1～2mm）于称量瓶中，于60℃干燥6h，取出，放于盛有变色硅胶的干燥器中脱水12h，称重，将称量瓶放于盛有过饱和氯化钠溶液（相对湿度为75%）的干燥器中，密闭干燥器，置于室温下，分别于0.5、1、2、4、8、12、24、48、72、96、120、144、168h取出称重，按吸湿率（%）=（吸湿后提取物重量-吸湿前提取物重量）/吸湿前提取物重量×100%公式，计算吸湿百分率，以吸湿百分率对时间作图，得吸湿平衡曲线，见图8：

数据显示，0～120h时，随着时间延长，丹参提取物吸湿百分率显著增大，当时间超过120h后，随着时间延长，吸湿百分率缓慢增大，表明丹参提取物在120h达到吸湿平衡。丹参提取物吸湿后颜色变深，并液化。提取物平衡吸湿百分率均大于15%，说明丹参提取物极具引湿性。低温提取物平衡吸湿百分率大于高温提取物平衡吸湿百分率，低温提取物较高温提取物更易吸湿，可能是两种提取物所含成分的不同，导致其吸湿性发生变化。

实施例5丹参提取物指纹图谱研究

供试品溶液的制备精密称取相当于生药量0.15g的丹参提取物于25mL量瓶中，甲醇定容，超声30min溶解，滤过，去续滤液，即得丹参提取物供试品溶液。

对照品溶液按“提取液指纹图谱研究”下对照品溶液的制备方法制备。

（1）指纹图谱的建立

取供试品溶液与对照品溶液，按提取液指纹图谱试验色谱条件制备检测，记录70min内色谱图，通过比较各峰的保留时间选择每一个图谱都产生的共有峰，计算共有峰的峰面积，见表17、表18、图9。

表17丹参低温提取物峰面积

表18丹参高温提取物峰面积

（2）指纹图谱相似度计算

采用中国药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度计算，见表19。

表19丹参提取物相似度计算结果

由上可知，丹参提取物指纹图谱差异较大。高温提取物指纹图谱色谱峰较多，低温提取物色谱峰较少，高温提取物所含成分种类较低温提取物多；高温提取物丹参素与原儿茶醛色谱峰峰面积大于低温提取物，丹酚酸B峰面积小于低温提取物。表明，丹参低温提取物中丹酚酸B含量大于高温提取物，杂质和其他成分含量较高温提取物少，低温提取物丹酚酸B纯度高于高温提取物。

9结论

通过以上试验，丹参低温沸腾动态提取，丹酚酸B可最大限度溶出，防止被高温分解破坏，杂质和其他成分溶出减少；较高温提取，低温提取丹酚酸B含量高，纯度大。由于提取温度不同，化合物种类与数量不同，提取液物理参数和提取物粉体性质也有差异。

本发明检测方法，能够有效将丹参提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为丹参提取物的质量控制提供了可靠的基础。

Claims (10)

1.丹参的提取方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：取丹参饮片，加水，减压条件下，70±5℃沸腾提取，合并提取液，即可。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：加水量为丹参干重的5～15倍，优选为12倍。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：提取1～3次，每次0.5～3h；优选提取3次，每次2h。

4.一种丹参提取物的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

（1）按权利要求1-3任意一项所述方法提取；

（2）取步骤（1）的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得丹参提取物。

5.根据权利要求4所述丹参提取物的制备方法，其特征在于：所述减压回收溶剂的条件为：-0.05～-0.095MPa、40～90℃；优选70±5℃。

6.权利要求4或5所述方法制备的丹参提取物，其特征在于：所述丹参提取物含有5～15%的丹酚酸B。

7.丹参提取物的检测方法，其特征在于：它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下：

（1）取待测丹参提取物，制备供试品溶液；

（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶为固定相；

流动相：甲醇A-1.0%冰醋酸水溶液B，梯度洗脱，洗脱程序A：0min7%，10min7%，12min9%，31min33%，47min39%，60min58%，70min62%；

检测波长：286±5nm。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）中，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱法中，以丹酚酸B、原儿茶醛或丹参素钠中的一种或两种以上为对照品，制备对照品溶液。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：检测柱温为30±5℃。