CN103992311B - Hedgehog信号通路抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的Hedgehog信号通路抑制剂及其立体异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物或医药上可接受的盐，其结构式如式(I)所示。本发明还提供了上述化合物的制备方法与用途。本发明提供的化合物结构新颖，由Hedgehog蛋白、Ptch、Gli和/或Smo调节的信号传导通路均可以通过式I化合物予以调节。

Description

Hedgehog信号通路抑制剂
技术领域
本发明提供了一种Hedgehog信号通路抑制剂，属于药物化学领域。
背景技术
Hedgehog信号通路最早在1980年发现于果蝇中，同时以一种高度保守的形式存在于人的细胞通路中，它主要参与调控一系列生物体形态和胚胎的形成。成年后Hedgehog信号通路除了参与组织的维持和修复外，其活动一直处于抑制状态，也正因如此，刚开始对Hedgehog信号通路的研究主要集中于Hedgehog信号通路中特定的调控因子。
目前在果蝇细胞中只发现了一种Hedgehog基因，但在脊椎动物细胞内却发现了三种Hedgehog基因：它们分别为Sonic Hedgehog(SHH)、India Hedgehog(IHH)和DesertHedgehog(DHH)。因此，在脊椎动物细胞内有三个Hedgehog同源体。在机体内Hedgehog信号通路的激活与否主要通过Hedgehog配体与Ptch相互作用的，Hedgehog配体与Ptch结合，解除了Ptch对Smo蛋白的抑制作用，激活了Gli基因，从而引发一系列的基因信号的表达，引起Hedgehog信号通路下游一系列的应答反应。Hedgehog信号通路的抑制状态主要是通过Ptch和Smo蛋白结合，抑制下游Gli蛋白基因的应答反应抑制Hedgehog信号通路的。有研究表明Smo蛋白基因的突变会引起下游基因的异常表达，会引起Hedgehog信号通路的异常激活。
Hedgehog信号通路异常激活涉及了一些个体表现型异常以及参与了某些肿瘤的发生，包括前脑无裂畸形、帕利斯特-霍尔综合征、基利头孢多指畸形、Rubinstein-Taybi综合征、痣样基底细胞癌综合症等等；其中由于Smo突变以及Hedgehog配体的过度表达会引起一些癌症的发生包括基底细胞癌以及髓母细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、***癌等。因此，能够调节Hedgehog信号通路活性的分子可以用于治疗此类疾病的治疗药物。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种Hedgehog信号通路抑制剂。
技术方案：本发明提供的Hedgehog信号通路抑制剂，其结构式如式(I)所示：
其中：
X1为-O-或-S-；
X2和X3独立选自-N-和-CR9-；其中R9选自氢、卤素、C1-6烷基、卤素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的-C1-6烷氧基；
R1、R2、R3、R4、R5独立选自氢、氰基、卤素、C1-6烷基、卤素取代的－C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的－C1-6烷氧基、C6-10芳基、二甲基-氨基、C1-6烷基-硫烷基和任选被至多2个C1-6烷基取代的C3-8杂环烷基；或者，R2和R3或R3和R4与他们所连接的苯基一起形成C5-10杂芳基；
Y为-C-或-N-；
R7和R8独立选自氢、氰基、卤素、C1-6烷基、卤素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的－C1-6烷氧基、-S(O)2-烷基；或者R7和R8与他们所连接的杂芳环一起形成C5-10环烷基或杂芳环；
R6选自-S(O)2R10、-C(O)R10和R10；其中R10选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基；
其中，所述R6的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基可任选被1-3个独立选自下列的基团所取代：C1-6烷基、卤素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的－C1-6烷氧基、C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10杂芳基-C0-4烷基、C3-12环烷基和C3-8杂环烷基。
作为优选，X2和X3独立选自-N-和-CR9-；其中R9选自氢、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基、三氟甲氧基。
作为另一种优选，R7和R8独立选自氢、氰基、氯、氟、甲基、三氟甲基、异丙氧基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基和甲基磺酰基；或者R7和R8与它们所连接的杂芳基一起形成的环戊烷、环己烷、环庚烷、环辛烷、芳环、含氮杂芳环、含氮和硫原子的杂芳环。
作为另一种优选，R1、R2、R3、R4、R5独立选自氰基、氯、氟、甲基、乙基、叔-丁基、丙基、异丁基、异丙基、异丙氧基、丁氧基、甲氧基、二甲基-氨基、乙氧基、甲基-硫烷基、苯基、三氟甲基、三氟甲氧基和任选被至多2个甲基取代的哌嗪基。
作为另一种优选，R6选自-S(O)2R10、-C(O)R10和R10；其中R10选自吗啉代、环己基、苯基、氮杂环庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1,4-氧杂氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基、四氢-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基和1,4-二氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基；
其中，所述R6的吗啉代、环已基、苯基、氮杂环庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1,4-氧杂氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基、四氢-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基或1,4-二氮杂环庚-1-基可任选被1-3个独立选自下列的基团所取代：甲基、乙基、甲氧基、苄基、噻吩基-甲基、吡啶基-甲基、苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-7-基；其中，所述R6的苯基或苄基取代基任选被1-3个独立选自下列的基团所取代：甲氧基、乙氧基、甲基哌嗪基、甲基、三氟甲氧基、氯代、氟和三氟甲基。
优选实施方案的表述：
在一个实施方案中，所述式I化合物具有如下定义：X2和X3独立选自-N-和-CR9-；其中R9选自氢、氟、氯和甲基
在另一个实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5独立选自氰基、氟、甲基、乙基、异丙基、异丙氧基、甲氧基、苯基、三氟甲基、三氟甲氧基和任选被至多2个甲基取代的哌嗪基；或者，R3和R2或R3和R4与它们所连接的苯基一起形成喹喔啉基。
在另一个实施方案中，R6选自-S(O)2R10、-C(O)R10和-R10；其中，R10选自吗啉代、环己基、苯基、氮杂环庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1,4-氧杂氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基、四氢-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基和1,4-二氮杂环庚-1-基；R11a和R11b独立选自异丁基和羟基-乙基；其中所述R6的吗啉代、环己基、苯基、氮杂环庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、l,4-氧杂氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基、四氢-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基或l,4二氮杂环庚-1-基可以被1-3个独立选自下列的基团所取代：甲基、乙基、甲氧基和苄基、；其中所述R6的苯基或苄基取代基任选被1-3个独立选自下列的基团所取代：甲氧基、乙氧基、甲基哌嗪基、甲基、三氟甲氧基、氯、氟和三氟甲基。
定义：
“烷基”作为基团以及作为其它基因(例如卤素取代的-烷基和烷氧基)的结构元素可以是直链的或支链的。C1-4－烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。卤素取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。
“芳基”指的是包含六至十个环碳原子的单环或稠合二环芳环。例如芳基可以是苯基或萘基，优选苯基。“亚芳基”指的是衍生自芳基的二价基团。
“杂芳基”被定义为其中一个或多个环原子为杂原子的上述芳基。例如C5-10杂芳基最少是5元的(由碳原子指定的)，但是这些碳原子可以被杂原子代替。因此，C5-10杂芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、恶唑基、异恶唑基、***基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
“环烷基”指的是包含指定数目的环原子的饱和的或部分不饱和的、单环、稠合二环或桥连多环。例如C3-10环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
“杂环烷基”指的是本申请书中所定义的环烷基，条件是指定的一个或多个环碳被选自－O－、－N＝、-NR-、－C(O)－、－S－、－S(O)，或－S(O)2－的基团所代替，其中R是氢、C1-4烷基或氮保护基。例如在本申请书中用于描述本发明化合物的C3-8杂环烷基包括吗啉代、吡咯烷基、，吡咯烷基－2－酮、哌嗪基、哌啶基、吡啶基酮、1,4－二氧杂－8－氮杂－螺[4.5]癸-8-基、硫代吗啉代、sulfanomorpholino、sulfonomorpholino。
“卤素”优选代表氯或氟，但也可以是溴或碘。
本发明还提供了所述Hedgehog信号通路抑制剂的N-氧化物、前药衍生物、被保护的衍生物、单一异构体及其异构体混合物、同位素变体、可药用盐和溶剂化物。
本发明还提供了式(I)所述化合物的制备方法，包括以下步骤：在-20℃至100℃的温度范围内，在适当的溶剂(例如，二氯甲炕、N,N-二甲基甲甲酰胺或无水四氢呋喃等)存在下，通过使得式2(或2’)化合物与式3式化合物反应，可以制备I化合物。反应可以进行至多约20小时直到完成。
反应式如下：
其中X1、X2、X3、Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如发明内容中式I所定义。
式(I)化合物的详细实例可以参见下文中的实施例。
制备本发明化合物的其它方法：
通过将游离碱形式的所述化合物与可药用的无机或有机酸反应，可以将本发明化合物制备为可药用的酸加成盐。或者，通过将游离酸形式的所述化合物与可药用的无机或有机碱反应，可以制备本发明化合物的可药用的碱加成盐。
或者，可以使用原料或中间体的盐制备本发明化合物的盐形式。
可以分别从相应的碱加成盐或酸加成盐形式制备本发明化合物的游离酸或游离碱形式。例如可以通过用合适的碱(例如氢氧化接溶液、氢氧化纳等)处理，使酸加成盐形式的本发明化合物转化为对应的游离碱。可以通过采用适当的酸(例如盐酸等)处理，使碱加成盐形式的本发明化合物转化为对应的游离酸。
在适当的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、二氧六环水溶液等)中，于0℃至80℃，通过用还原剂(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理，可以自本发明化合物的N-氧化物制备本发明化合物的未氧化形式。
可以通过那些本领域普通技术人员公知的方法来制备本发明化合物的前药衍生物。例如，通过使得非衍生化的本发明化合物与适当的氨甲酰化试剂反应，可以制备适当的前药。
可以通过那些本领域普通技术人员己知的方法来制备本发明化合物的被保护的衍生物。保护基团的产生及其去除的应用技术的详细描述可以参见T.W.Greene，“有机化学中的保护基团(Protecting Groups in OrganicChemistry)”，第3版，John Wiley andSons公司，1999。
可以在本发明的反应过程中方便地制成或形成本发明化合物的溶剂合物(例如水合物)。可以采用有机溶剂例如二恶英、四氢呋喃或甲醇，通过自水/有机溶剂混合物中重结晶来方便地制备本发明化合物的水合物。
可以将所述化合物的外消旋混合物与光学活性的拆分试剂反应来形成一对非对映异构体化合物，然后分离非对映异构体并回收光学纯的对映异构体，制备作为其单一立体异构体的本发明化合物。虽然可以使用本发明化合物的共价非对映异构的衍生物来进行对映异构体的拆分，但优选可解离的复合物(例如结晶的非对映异构的盐)。非对映异构体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解度、反应性等)，可以利用这些不同点容易地进行分离。可以通过色谱法或优选通过基于不同溶解度的分离/拆分技术来分离非对映异构体。然后通过不会导致外消旋化的任何实用方法回收光学纯的对映异构体与拆分试剂。
综上所述，式I化合物可以通过包括下列步骤的方法制备：
(a)反应流程I的方法：和
(b)任选将本发明化合物转化为药学上可接受的盐；
(c)任选将盐形式的本发明化合物转化为非盐形式；
(d)任选将非氧化形式的本发明化合物转化为药学上可接受的N-氧化物；
(e)任选将N-氧化物形式的本发明化合物转化为其非氧化形式；
(f)任选自异构体的混合物拆分本发明化合物的单一异构体；
(g)任选将非衍生化的本发明化合物转化为药学上可接受的前药衍生物；和
(h)任选将本发明化合物的前药衍生物转化为其非衍生化形式。
对于没有特别描述的原料的制备而言，所述化合物为己知的，或者可以根据本领域己知的方法制备，或者根据下文实施例中所公开的方法制备。
本领域技术人员可以理解，上述转化并非制备本发明化合物的唯一的代表性方法，也同样可以采用其它众所周知的方法。
在所述反应中，如果在终产物中需要反应性官能团(例如羟基、氨基、亚氨基、硫代基团或羧基)的存在，则有必要对其加以保护以避免其参与不需要的反应。根据标准实践，可以采用常规的保护基团，例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的《有机化学中的保护基团(Protee ti ve Groups in OrganicChemistry)》,John Wiley andSons,1991。
本发明还提供了一种药物组合物，包括一种或多种适合的赋形剂以及上述Hedgehog信号通路抑制剂或其N-氧化物、前药衍生物、被保护的衍生物、单一异构体及其异构体混合物、同位素变体、可药用盐和溶剂化物。
本发明还提供了式I化合物在制备治疗Hedgehog途径活性与疾病的病理学和/或症状学有关的疾病的药物中的用途。
本发明提供的式I化合物能够干扰Hedgehog蛋白、Ptch或Smo信号传导，同样能够抑制正常细胞和/或具有Ptch功能丧失表型、Hedgehog蛋白功能获得表型、Smo功能获得表型、Gli功能获得表型或Hedgehog蛋白配体表型过度表达的细胞中的增生(或它的生物学结果)。在某些实施方案中，它涉及这些化合物用于抑制正常细胞中Hedgehog蛋白活性，例如，所述细胞没有能够激活Hedgehog蛋白通路的基因突变。在优选的实施方案中，化合物能够抑制Hedgehog蛋白的至少某些生物学洁性，优选特别是在靶细胞中的Hedgehog蛋白。
在另一个实施方案中，本发明提供了式I化合物对多种细胞、组织和器官(包括正常细胞、组织和器官)以及具有Ptch功能丧失、Hedgehog蛋白功能获得、Smo功能获得或Gli功能获得表型的细胞、组织和器官的修复和/或功能表现的调节中，通过例如抑制Smo或信号通路下游成分的激洁，它能够激动刺猖蛋白信号的Ptch抑制。例如，所述方法具有治疗和美容用途，用途范围包括神经组织的调节，骨和软骨的形成和修复，***生成调节，平滑肌调节，肺、肝以及其它原肠器官的调节，造血功能调节，皮肤和毛发生长的调节等。而且，所述方法可以在培养的细胞(体外)中进行，或者在机体细胞(体内)中进行。
在另一个实施方案中，所述方法可以治疗具有Ptch功能丧失表型、Hedgehog蛋白功能获得表型、Smo功能获得表型或Gli功能获得表型的上皮细胞。例如，所述方法可以用于治疗或预防基底细胞癌或其它与刺猖蛋白通路相关的疾病。
在某些实施方案中，式I化合物可以通过与Smo或其下游蛋白结合而抑制Hedgehog蛋白通路的激活。在某些实施方案中，所述拮抗剂可以通过与Ptch结合而抑制Hedgehog蛋白通路的激活。
在另一个优选的实施方案中，所述方法可以作为恶性髓母细胞瘤和其它原发性CNS恶性神经外胚瘤治疗方案的一部分。
采用式I化合物、Ptch激动剂、Smo拮抗剂或下游Hedgehog蛋白通路蛋白拮抗剂的所述治疗对人类或动物患者均有效。本发明可适用的动物患者包括作为宠物或商业目的的驯养动物和家畜。实例包括犬、猫、牛、马、绵羊、猪和山羊。
本发明具体提供了式I化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述应用为：施用治疗有效量的式I化合物或其N-氧化物、前药衍生物、被保护的衍生物、单一异构体及其异构体混合物、同位素变体、可药用盐和溶剂化物，使肿瘤细胞(在体外或体内)与Hedgehog信号通路抑制剂(式I化合物)接触。
其中，所述肿瘤细胞包括基底细胞癌、成神经管细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质细胞癌、胰腺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、横纹肌肉瘤、食管癌、胃癌、胆道癌。
本发明提供了抑制肿瘤细胞生长的方法，例如淋巴瘤、骨髓瘤细胞。本发明提供了在患者中通过抑制肿瘤细胞生长而治淋巴瘤、骨髓瘤细胞的方法和组合物。该方法也用于预防患者的肿瘤形成。该方法包括给予需要治疗的患者药用组合物，该组合物含有Hedgehog信号拮抗成分(例如式I化合物)。本发明化合物下调Hedgehog信号通路成员的细胞水平或抑制其生物学活性。
本发明提供了预防或治疗血液癌症以及淋巴***癌症的方法，包括淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。该方法采用Hedgehog蛋白信号通路拮抗剂抑制淋巴瘤细胞、白血病细胞或骨髓瘤细胞的生长和增生。淋巴瘤衍生自B淋巴细胞的淋巴母细胞的恶性肿瘤。骨髓瘤为由通常发现于骨髓中的血浆细胞类组成的恶性肿瘤。白血病为与造血器官有关的急性或慢性疾病。非霍奇金病淋巴瘤的特征在于机体组织中白细胞数量的异常增加，伴有或不伴有循环血液中白细胞相应的增加，它可以根据其中占绝对优势的白细胞的类型进行分类。
除了淋巴瘤外，上述方法和组合物也适用于治疗骨髓瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质细胞癌等。
本发明化合物用于治疗与Hedgehog蛋白相关的疾病，例如基底细胞痣综合征(也称为Gorlin综合征和/或痣样基底细胞癌)，它是一种罕见的常染色体显性癌样遗传综合征。
本发明化合物用于治疗基底细胞癌(BCC或啮齿类动物溃殇)、源自皮层或肾上腺髓质的髓质部的肾上腺肿瘤和卵巢肿瘤。
本发明具体提供了式I化合物用于治疗骨过度生长疾病，包括但不限于肢端肥大症、巨头畸形、Sotos综合征、进行性骨干发育异常(PDD或Camurati-Engelmann疾病)、颅骨骨干发育异常(craniodiaphyseal dysplasia)和骨内膜骨质增生(endostealhyperostosis)疾病，包括Van Buchem疾病(I型和II型)和硬化性骨化病(sclerosteosis)。
本发明具体提供了式I化合物用于治疗不受欢迎的毛发生长(例如毛痣)以及脱毛后毛发再生长的美容预防。
本发明具体提供了式I化合物用于治疗肝纤维化。
因此，本发明方法包括本发明化合物在调节各类细胞、组织和器官的修复和/或功能表现中拮抗Hedgehog蛋白信号的Ptch抑制中的用途，例如抑制信号通路的Smo或下游成分的激活，所述细胞、组织和器官包括正常细胞、组织和器官以及那些具有表型Ptch功能丧失、刺猖蛋白功能获得、Smo功能获得或Gli功能获得的细胞、组织和器官。例如，所述方法为治疗和化妆品应用，包括神经组织的调节，骨和软骨的形成和修复，***生成调节，良性***增生调节，在湿性黄斑变性中的血管壁调节，银屑病调节，平滑肌调节，肺、肝和其它主要内脏器官的调节、造血功能的调节、皮肤和毛发生长的调节等。另外，所述方法可以在细胞上进行，可以是培养中的细胞(体外)或整个机体中的细胞(体内)。
综上所述，本发明还提供了在需要此类治疗的患者中预防或治疗上述任何疾病或病症的方法，该方法包括给予所述患者治疗有效量的(参见下文“给药和药用组合物”)式I化合物或其药学上可接受的盐。对于任何上述用途而言，需要的剂量取决于给药的模式、待治疗的特定疾病以及预期的效果。
给药和药用组合物
一般而言，通过任何本领域常用的和可接受的方法，本发明化合物可以以治疗有效量单独进行给药，或者与一种或多种治疗药物组合给药。治疗有效量可以在很大程度上进行变化，这取决于疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效能以及其它因素。一般情况下，日剂量约0.03-2.5mg/kg体重的全身给药可获得令人满意的结果。在大型哺乳动物例如人类中，推荐的日剂量范围为约0.5mg至约200mg，例如以最多每日四次的分剂量或以缓释形式方便地给药。用于口服给药的合适的单位剂型包含约1-50mg活性成分。
本发明的化合物可以作为药物组合物通过任何常规途径给药，特别是胃肠内(例如口服)途径，例如以片剂或胶囊剂形式给药；或者通过胃肠外途径，例如以可注射的溶液剂或混悬液形式给药；通过局部给途径，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或霜剂的形式给药；或者以经鼻形式或栓剂形式给药。含有游离形式或可药用盐形式的本发明化合物以及至少一种可药用的载体或稀释剂的药物组合物可以按常规方式通过混合、制粒或包衣的方法制备。例如，口服组合物可以是片剂或明胶胶囊，它包含泪性成分与a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如硅胶、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂而言，还包含c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯酮；如果需要的话，还可以包含d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸及其纳盐或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。可注射的组合物可以是等渗的水溶液或泪悬液，栓剂可以自脂肪乳剂或混悬剂制备。该组合物可以灭菌和/或包含辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以包含其它有治疗价值的物质。用于透皮给药的合适制剂包含有效量的本发明化合物和载体。载体可以包含可吸收的药理学可接受的溶剂以有助于通过宿主皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，它包括背衬、含有化合物以及任选载体的贮库、任选的速率控制屏障(它以可控的和预设的速率在延长的时期内向宿主皮肤传递所述化合物)以及将该装置固定于皮肤的工具。还可以采用基质型透皮制剂。用于局部使用(例如用于皮肤和眼睛)的合适的制剂优选本领域内众所周知的水溶液、软膏剂、霜剂或凝胶剂。此类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本发明化合物可以以治疗有效量与其它治疗方法联合应用，其它方法例如放疗、骨髓移植或激素治疗。
本发明的化合物可以以治疗有效量与一种或多种治疗药物组合给药(药物组合产品)。例如，与用于治疗淋巳瘤或骨髓瘤的免疫调节剂、抗炎物质、其它抗肿瘤治疗剂、化疗剂、切除术(ablation)或其它治疗激素类、抗肿瘤剂和/或单克隆抗体联合应用可以产生协同作用。
本发明提供了药物制剂，它含有作为洁性成分的例如本文中所述的Hedgehog蛋白信号调节剂(例如式I化合物)、Ptch激动剂、Smo拮抗剂或下游Hedgehog蛋白通路蛋白拮抗剂，该制剂的量应足以抑制体内Ptch功能丧失、Hedgehog蛋白功能获得、Smo功能获得或Gli功能获得的增生或其它生物学结果。
本发明还提供了药物组合产品，例如药盒，它包含a)第一种药物，为游离形式或可药用盐形式的如本文所公开的本发明化合物，以及时至少一种联合药物。该药盒可以包含用于其给药的说明书。
本文所用的术语“联合给药”或“组合给药”等的含义包括向单个患者给药所选择的治疗药物的给药，还包括其中所述药物不是必须在相同时间或通过相同给药途径给药的治疗方案。
本文所用的术语“药物组合产品”的含义是将一种以上的洁性成分混合或组合所获得的产品，包括活性成分的固定组合和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分(例如式I化合物)和联合药物以单一实体或剂型的形式同时给予患者。术语“非固定组合”是指洁性成分(例如式I化合物)和联合药物作为分离的实体同时或在没有特别时间限制下共同或先后给药于患者，其中此类给药方式在患者体内提供了这两种化合物的治疗有效水平。后者还应用于鸡尾酒疗法，例如用于3种或更多种活性成分的给药。
有益效果：本发明提供的化合物结构新颖，由Hedgehog蛋白、Ptch、Gli和/或Smo调节的信号传导通路均可以通过式I化合物予以调节。
附图说明
图1为1N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺对胶质瘤U251细胞抑制作用。
具体实施方式
通过以下实施例进一步阐述了本发明，并非对其加以限定。
实施例
步骤1：称取2-氯-5-硝基吡啶10g(0.063mol)以及1当量的顺式-2,6-二甲基吗啉(7.29g,0.063mol)于60mL的无水DMF中，充分溶解，再加入2当量的碳酸钾14.44g(0.13mol)，在55℃条件下搅拌反应6h。反应结束后，蒸干，然后加入一定量的乙酸乙酯溶解和水洗3次，合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥、浓缩得到黄色的产物(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)吗啉，收率96％。
反应式如下：
m.p.130℃；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):8.93(d,J＝2.7Hz,1H),8.21(dd,J1＝2.8Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.96(d,J＝9.6Hz,1H),4.42(d,J＝12.9Hz,2H),3.58(m,2H),2.64(m,2H),1.17(d,J＝6.2,6H)；
13C NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):160.19,146.23,134.69,133.09,71.26,49.97,18.89；
TOF-MS m/z238.2[M–H]+。
Anal.calcd for C11H15N3O3:C,55.69；H,6.37；N,17.71；found:C,55.82；H,6.49；N,17.89％。
步骤2：称取4.74g(0.02mol)的中间体(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)吗啉与100mL的茄型瓶中，加入32mL的MeOH溶解，然后加入0.1当量的FeO(OH)/C1.8g，加热回流，然后再慢慢滴加4mL的水合肼，滴加完毕继续回流2h。反应结束后冷却至室温，过滤、旋干滤液得到深褐色的油状粗品3-氨基-6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶供下一步使用。
TOF-MS m/z208.1[M+H]+。
实施例1
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲酰胺
步骤1：称取950mg(5.00mmol)的5-溴-2-糠酸溶于10mL的MeOH中，慢慢滴加2mL的SOCl2，滴加完毕回流3h，反应结束后冷却至室温、减压蒸干，并用一定量的甲苯溶解蒸干，反复重复3次得到中间体5-溴-2-糠酸甲酯1.0g，产率100％。
步骤2：称取500mg(2.45mmol)的中间体5-溴-2-糠酸甲酯、760mg(3.67mmol)的4-三氟甲氧基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入60mg(0.12mmol)的Pd(PPh3)4、530mg(4.91mmol)Na2CO3，在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到350mg中间体5-(4-三氟甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸甲酯，产率50％。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ(ppm):7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝8.3Hz,3H),6.73(d,J＝3.4Hz,1H),3.92(s,3H)；TOF-MS m/z287.1[M+H]+。
步骤3：称取260mg(1.11mmol)的中间体5-(4-三氟甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到230mg中间体5-(4-三氟甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸，产率96％。
步骤4：称取230mg(1.05mmol)的中间体5-(4-三氟甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸、180mg(1.33mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加210mg(1.35mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入180mg(0.87mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.29mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到300mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲酰胺，产率48％。
IR(KBr,cm–1)ν:3353,2975,2857,1651,1598,1546,1517,1489,1373,1253,1167,1107,1085,1018,800；
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ(ppm):8.33(d,J＝2.5Hz,1H),8.01(dd,J1＝2.6Hz,J2＝9.2Hz,2H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(m,3H),6.79(d,J＝3.6Hz,1H),6.68(d,J＝9.1,1H),4.01(m,2H),3.77-3.70(m,2H),2.54(q,2H),1.28(d,J＝6.3Hz,6H)；
TOF-MS m/z462.2[M+H]+。
实施例2
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-氰基苯基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：称取950mg(4.62mmol)的5-溴-2-羧基噻吩溶解于10mL的MeOH中，慢慢滴加2mL的SOCl2，滴加完毕回流3h，反应结束后冷却至室温、减压蒸干，并用一定量的甲苯溶解蒸干，反复重复3次得到中间体5-溴噻吩-2-甲酸甲酯1.0g，产率100％。
步骤2：称取500mg(2.28mmol)的中间体5-溴噻吩-2-甲酸甲酯、400mg(2.72mmol)的4-氰基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入7mL的甲苯以及4mL的MeOH溶解，混溶后加入130mg(0.11mmol)的Pd(PPh3)4、480mg(4.53mmol)Na2CO3,在氮气保护下96℃反应25h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到370mg中间体5-(4-(氰基苯基)噻吩)-2-甲酸甲酯，产率67％。
步骤3：称取370mg(1.52mmol)的中间体5-(4-(氰基苯基)噻吩)-2-甲酸甲酯于6mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液2mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到340mg中间体5-(4-(氰基苯基)噻吩-2-甲酸，产率92％。
步骤4：称取340mg(1.48mmol)的中间体5-(4-(氰基苯基)噻吩)-2-甲酸、250mg(1.85mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加290mg(1.87mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入250mg(1.21mmol)的中间体3-氨基-6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶和0.41mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束后用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析，柱层析得到的产物中加入一定量的甲醇搅拌，过滤，滤渣干燥得到150mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-氰基苯基)噻吩-2-甲酰胺，产率30％。
IR(KBr,cm–1)ν:3426,2975,2880,2223,1643,1604,1585,1537,1494,1448,1389,1249,1178,1111,1086,1003,810,736,608；
1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ(ppm):10.22(s,1H),8.41(s,1H),8.00(s,1H),7.93-7.86(m,5H),7.81(s,1H),6.88(d,J＝8.0,1H),4.08(d,J＝12.3Hz,2H),3.62(s,2H),2.36(t,J＝11.4Hz,2H),1.16(s,6H)；
TOF-MS m/z419.1[M+H]+。
实施例3
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲氧基苯基)呋喃-2-甲酰胺
步骤1：称取950mg(5.00mmol)的5-溴-2-糠酸溶于10mL的MeOH中，慢慢滴加2mL的SOCl2，滴加完毕回流3h，反应结束后冷却至室温、减压蒸干，并用一定量的甲苯溶解蒸干，反复重复3次得到中间体5-溴-2-糠酸甲酯1.0g，产率100％。
步骤2：称取500mg(2.45mmol)的中间体5-溴-2-糠酸甲酯、560mg(2.95mmol)的4-甲氧基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入60mg(0.05mmol)的Pd(PPh3)4、530mg(5mmol)Na2CO3，在氮气保护下96℃反应18h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到310mg中间体5-(4-三氟甲基)苯基)呋喃-2-甲酸甲酯，产率54％。
TOF-MS m/z233.1[M+H]+。
步骤3：称取310mg(1.11mmol)的中间体5-(4-甲氧基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到290mg中间体5-(4-三甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸，产率100％。
步骤4：称取900mg(0.87mmol)的中间体5-(4-三甲氧基)苯基)呋喃-2-甲酸、150mg(1.11mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加170mg(1.10mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入180mg(0.87mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.29mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到160mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三甲氧基苯基)呋喃-2-甲酰胺，产率53％。
IR(KBr,cm–1)ν:3374,3243,3090,2976,2926,1638,1595,1541,1492,1480,1448,1328,1278,1251,1176,1087,1026,794；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.04(s,1H),8.44(d,J＝2.5Hz,1H),7.92-7.86(m,3H),7.31(d,J＝3.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,2H),7.00(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(d,J＝9.2Hz,1H),4.08(m,2H),3.82(s,3H),3.62(m,2H),2.37(q,2H),1.16(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z408.2[M+H]+。
实施例4
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺
步骤1：称取500mg(2.45mmol)的中间体5-溴-2-糠酸甲酯、500mg(3.67mmol)的4-甲基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入140mg(0.12mmol)的Pd(PPh3)4、520mg(4.91mmol)Na2CO3,在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到320mg中间体5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯，产率60％。
TOF-MS m/z217.1[M+H]+。
步骤2：称取320mg的中间体5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到270mg中间体5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酸，产率90％。
步骤3：称取270mg(1.48mmol)的中间体5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酸、230mg(1.70mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加260mg(1.67mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入230mg(1.11mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.39mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到210mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺，产率49％。
IR(KBr,cm–1)ν:3475,3399,3245,2979,2932,1643,1591,1540,1491,1481,1452,1393,1321,1252,1178,1142,1083,807,747,669；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.08(s,1H),8.44(d,J＝2.5Hz,1H),7.91-7.85(m,3H),7.33(d,J＝3.4Hz,1H),7.31(d,J＝9.5Hz,2H),7.09(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(d,J＝9.2Hz,1H),4.08(m,2H),3.63(m,2H),2.36(s,3H),2.36(m,2H),1.16(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z392.2[M+H]+。
实施例5
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺
步骤1、称取500mg(2.45mmol)的中间体5-溴-2-糠酸甲酯、560mg(2.95mmol)的4-三氟甲基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入140mg(0.12mmol)的Pd(PPh3)4、520mg(4.91mmol)Na2CO3，在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到300mg中间体5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯，产率45％。
TOF-MS m/z271.2[M+H]+。
步骤2：称取300mg(1.11mmol)的中间体5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到270mg中间体5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酸，产率96％。
步骤3：称取270mg(1.05mmol)的中间体5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酸、180mg(1.33mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加210mg(1.35mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入180mg(0.87mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.29mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到190mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺，产率48％。
IR(KBr,cm–1)ν:3345,2974,2924,2848,1649,1616,1598,1584,1549,1496,1452,1323,1274,1250,1171,1133,1124,1110,1074,1019,847,806,745；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.21(s,1H),8.44(d,J＝2.3Hz,1H),8.19(d,J＝8.2Hz,2H),7.88(m,3H),7.39(m,2H),6.90(d,J＝9.1Hz,1H),4.09(m,2H),3.62(m,2H),2.38(m,2H),1.17(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z446.1[M+H]+。
实施例6
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酰胺
步骤1：称取700mg(3.43mmol)的中间体5-溴-2-糠酸甲酯、600mg(4.08mmol)的4-氰基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入7mL的甲苯以及4mL的MeOH溶解，混溶后加入200mg(0.17mmol)的Pd(PPh3)4、730mg(6.87mmol)Na2CO3,在氮气保护下96℃反应48h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到450mg中间体5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯，产率58％。
TOF-MS m/z251.0[M+Na]+.
称取450mg(1.98mmol)的中间体5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酸甲酯于6mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液2mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到400mg中间体5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酸，产率95％。
称取240mg(1.13mmol)的中间体5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酸、190mg(1.41mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加220mg(1.42mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入190mg(0.92mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.31mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥、蒸干、柱层析得到180mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-氰基苯基)呋喃-2-甲酰胺，产率50％。
IR(KBr,cm–1)ν:3494,2923,2850,2226,1644,1609,1580,1514,1496,1452,1398,1283,1249,1178,1141,1087,1031,1000,809,798,679,661；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.21(s,1H),8.44(d,J＝2.5Hz,1H),8.18(d,J＝8.5Hz,2H),7.97(m,2H),7.88(dd,J1＝2.6Hz,J2＝9.1Hz,1H),7.43(d,J＝3.6Hz,1H),7.39(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(d,J＝9.1Hz,1H),4.09(m,2H),3.63(m,2H),2.37(q,2H),1.17(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z403.2[M+H]+。
实施例7
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：称取530mg(2.41mmol)的中间体5-溴-噻吩-2-甲酸甲酯、760mg(3.69mmol)的4-三氟甲氧基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入140mg(0.12mmol)的Pd(PPh3)4、530mg(5.00mmol)Na2CO3,在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到400mg中间体5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酸甲酯，产率56％。
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):7.89(d,J＝8.8Hz,2H),7.83(d,J＝4.0Hz,1H),7.66(d,J＝4.0Hz,1H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),3.85(s,1H)；
TOF-MS m/z303.0[M+H]+。
步骤2：称取400mg(1.32mmol)的中间体5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液2mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到370mg中间体5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酸，产率97％。
步骤3：称取250mg(0.87mmol)的中间体5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酸、150mg(1.13mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加200mg(1.29mmol)的EDC在室温下活化1h左右，再加入150mg(0.72mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.3mL的NMM。室温下反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到200mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噻吩-2-甲酰胺，产率57％。
IR(KBr,cm–1)ν:3266,3095,2974,2871,1627,1587,1541,1505,1491,1451,1323,1254,1205,1157,1087,1002,802,721,603；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.21(s,1H),8.42(d,J＝2.5Hz,1H),7.98(d,J＝3.9Hz,1H),7.89(m,3H),7.66(d,J＝3.9Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(d,J＝9.2,1H),4.08(m,2H),3.62(m,2H),2.37(m,2H),1.16(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z478.2[M+H]+。
实施例8
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺
147、步骤1：称取500mg(2.27mmol)的中间体5-溴-噻吩-2-甲酸甲酯、410mg(2.70mmol)的4-甲氧基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入130mg(0.11mmol)的Pd(PPh3)4、480mg(4.53mmol)Na2CO3,在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到330mg中间体5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯，产率59％。
步骤2：称取310mg(1.25mmol)的中间体5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液2mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到290mg中间体5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酸，产率100％。
步骤3：称取290mg(1.24mmol)的中间体5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酸、220mg(1.65mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加250mg(1.61mmol)的EDC在室温下活化1h左右，再加入220mg(1.06mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.35mL的NMM。室温下反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到210mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-甲酰胺，产率47％。
IR(KBr,cm–1)ν:3318,2973,2932,2881,2834,1625,1577,1536,1503,1485,1448,1438,1390,1282,1246,1176,1082,1036,999,811,737,609；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.11(s,1H),8.41(d,J＝2.5Hz,1H),7.93(d,J＝4.0Hz,1H),7.88(dd,J1＝2.6Hz,J2＝9.1Hz,1H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.48(d,J＝3.9Hz,1H),7.03(d,J＝8.8,2H),6.87(d,J＝9.1Hz,1H),4.08(m,2H),3.81(s,3H),3.62(m,2H),2.66(m,2H),1.16(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z424.2[M+H]+。
实施例9
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：称取600mg(2.73mmol)的中间体5-溴-噻吩-2-甲酸甲酯、450mg(3.31mmol)的4-甲基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入160mg(0.14mmol)的Pd(PPh3)4、500mg(4.72mmol)Na2CO3，在氮气保护下96℃反应18h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到330mg中间体5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯的合成，产率52％。
步骤2：称取330mg(1.42mmol)的中间体5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到290mg中间体5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酸，产率94％。
步骤3：称取290mg(1.33mmol)的中间体5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酸、230mg(1.70mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加260mg(1.67mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入230mg(1.11mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.39mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到230mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-甲基苯基)噻吩-2-甲酰胺，产率51％。
IR(KBr,cm–1)ν:3316,2971,2930,2869,2361,1729,1626,1577,1485,1444,1390,1307,1242,1175,1147,1083,998,814,801,737,609；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.14(s,1H),8.42(d,J＝2.5Hz,1H),7.95(d,J＝3.9Hz,1H),7.88(dd,J1＝2.6Hz,J2＝9.1Hz,1H),7.63(d,J＝8.1Hz,2H),7.56(d,J＝3.9Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,1H),4.07(m,2H),3.63(m,2H),2.34(s,3H),2.40-2.32(m,2H),1.16(d,J＝6.2Hz,6H)；
TOF-MS m/z408.2[M+H]+。
实施例10
N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：称取600mg(2.73mmol)的中间体5-溴-噻吩-2-甲酸甲酯、620mg(3.26mmol)的4-三氟甲基苯硼酸于25mL的茄型瓶中，加入6mL的甲苯以及3mL的MeOH溶解，混溶后加入160mg(0.14mmol)的Pd(PPh3)4、580mg(5.47mmol)Na2CO3，在氮气保护下96℃反应16h。反应结束后冷却至室温，旋干，残余物用乙酸乙酯和水洗3次合并有机相，再用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到400mg中间体5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯，产率51％。
步骤2：称取260mg(0.91mmol)的中间体5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酸甲酯于5mL的甲醇中，滴加4mol/L的NaOH溶液1mL，回流3h，反应结束冷至室温，蒸干，加水溶解后用10％的稀盐酸调节pH值至1左右，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥蒸干得到240mg中间体5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酸，产率96％。
步骤3：称取250mg(0.92mmol)的中间体5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酸、160mg(1.18mmol)HOBt于5mL的无水DMF中，再滴加190mg(1.22mmol)的EDC在室温下活化1h左右，然后加入170mg(0.82mmol)的中间体6-((2S,6R)-二甲基吗啉)吡啶-3-氨基和0.26mL的NMM。室温下搅拌反应过夜，反应结束用水和乙酸乙酯洗，合并有机相用饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥蒸干柱层析得到200mg的目标产物N-(6-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)吡啶-3-基)-5-(4-三氟甲基苯基)噻吩-2-甲酰胺，产率53％。
IR(KBr,cm–1)ν:3432,3264,2974,2871,1628,1587,1533,1491,1449,1412,1377,1323,1305,1249,1172,1133,1112,1070,1003,841,811,722,603；
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ(ppm):10.23(s,1H),8.43(d,J＝2.6Hz,1H),8.01(d,J＝4.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,2H),7.89(dd,J1＝2.6Hz,J2＝9.1Hz,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,2H),7.78(d,J＝4.0Hz,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,1H),4.10(m,2H),3.62(m,2H),2.37(m,2H),1.17(d,J＝6.3Hz,6H)；
TOF-MS m/z462.2[M+H]+.
实施例11
采用实施例1类似的方法，制得一批Hedgehog信号通路抑制剂，其结构式及氢谱、质谱数据见表1。
表1Hedgehog信号通路抑制剂
实施例11
合成的小分子抑制剂对hedgehog信号通路高表达胶质瘤U251细胞生长的直接抑制作用。
按每孔3×103的密度将胶质瘤U251细胞接种于96孔培养板中，使用100μlDMEM+10％胎牛血清培养液，在37℃含5％CO2浓度的培养箱中过夜培养。
在96孔板培养液中加入不同浓度的化合物，37℃下培养24h，之后使用新型细胞毒试剂盒检验细胞活性，并计算该化合物的细胞生长抑制作用。它们对神经胶质瘤细胞的抑制活性的IC50值见表1。
表1神经胶质瘤细胞的抑制活性的IC50值

Claims (7)

1.Hedgehog信号通路抑制剂，其结构式如式(I)所示：
其中：X1为-O-或-S-；
X2和X3独立选自-N-和-CR9-；其中R9选自氢、卤素、C1-6烷基、卤素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的-C1-6烷氧基；
R1、R2、R3、R4、R5独立选自氰基、氯、氟、甲基、乙基、叔-丁基、丙基、异丁基、异丙基、异丙氧基、丁氧基、甲氧基、二甲基-氨基、乙氧基、苯基、三氟甲基、三氟甲氧基。
Y为-C-或-N-；
R7和R8独立选自氢、氰基、卤素、C1-6烷基、卤素取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的-C1-6烷氧基；或者R7和R8与他们所连接的杂芳环一起形成C5-10环烷基或C5-10杂芳环；
R6选自-S(O)2R10和R10；其中R10选自吗啉代、环己基、苯基、氮杂环庚-1-基、2-氧代哌嗪-1-基、1,4-氧杂氮杂环庚-4-基、哌啶-1-基、四氢-2H-吡喃-4-基、哌啶-3-基、哌嗪基、吡咯烷基和1,4-二氮杂环庚-4-基。
2.根据权利要求1所述的Hedgehog信号通路抑制剂，其特征在于：X2和X3独立选自-N-和-CR9-；其中R9选自氢、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基、三氟甲氧基。
3.根据权利要求1所述的Hedgehog信号通路抑制剂，其特征在于：R7和R8独立选自氢、氰基、氯、氟、甲基、三氟甲基、异丙氧基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基和甲基磺酰基；或者R7和R8与它们所连接的杂芳基一起形成的环戊烷、环己烷、环庚烷、环辛烷、含氮杂芳环、含氮和硫原子的杂芳环。
4.权利要求1至3任一项所述的Hedgehog信号通路抑制剂的单一异构体及其异构体混合物、同位素变体、可药用盐。
5.权利要求1至3任一项所述的Hedgehog信号通路抑制剂应用于制备治疗Hedgehog途径活性与疾病的病理学和/或症状学有关的疾病的药物。
6.权利要求1至3任一项所述的Hedgehog信号通路抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，所述肿瘤包括基底细胞癌、成神经管细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质细胞癌、胰腺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、横纹肌肉瘤、食管癌、胃癌、胆道癌。
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