CN103983730B - 阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法。特别地，本发明涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂中的杂质检查方法，所述阿奇霉素药用盐例如盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素，所述的杂质例如杂质a以及任选的与其有色谱关联的杂质。本发明还涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂。本发明方法使用GC法进行，包括步骤：(1)测试液的制备；(2)气相色谱条件；(3)气相色谱测定；(4)计算四个步骤。本发明方法可以有益地评价阿奇霉素药用盐或其制剂的品质。

Description

阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法。特别地，本发明涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂中的杂质检查方法，所述阿奇霉素药用盐例如盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素，所述的杂质例如3-甲基呋喃以及任选的与其有色谱关联的杂质。本发明还涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂。

背景技术

阿奇霉素(azithromycin)是15元环大环内酯类抗生素，阿奇霉素比红霉素具有更广泛的抗菌谱，对肺炎链球菌等革兰阳性病原菌及流感嗜血杆菌、β-内酰胺酶产生菌及粘膜炎莫拉菌有很强的抑制作用。阿奇霉素在偏酸性环境中有较高的稳定性，具有吸收好、生物利用度高、半衰期长等优点。

另外，由于阿奇霉素的溶解度低，为制成可用于注射的阿奇霉素制剂，通常将其形成酸加成盐，例如制成盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素等，再将其制成可注射的制剂例如冷冻干燥粉针剂。

但是，众所周知的，制剂中存在的杂质通常会影响制剂的品质。因此，提供一种有效监控阿奇霉素制剂例如注射用的阿奇霉素制剂质量的方法，同样是本领域技术人员迫切期待的。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法，期待该方法能够有效监控阿奇霉素或其制剂例如注射用的阿奇霉素制剂质量的方法。特别地，本发明目的在于提供可作为原料药的阿奇霉素药用盐或其制剂，以及它们中的杂质的检测方法。

为此，本发明第一方面提供了一种检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质的方法，该方法使用气相色谱法(即GC)进行检测，并且包括以下步骤：

(1)测试液的制备：

供试品溶液的制备：取作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂，精密称定，置20mL的顶空瓶中，加水5ml溶解，作为供试品溶液；

3-甲基呋喃对照品溶液的制备：取3-甲基呋喃对照品30mg，精密称定，置100mL的量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2mL置100mL的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5mL置20mL的顶空瓶中，作为3-甲基呋喃对照品溶液(相当于该溶液中的3-甲基呋喃浓度为0.03mg/5ml)；

(2)气相色谱条件：

色谱柱：DB-624毛细管柱(其规格可以为30m×0.53mm×3.0μm，其例如可以是J&WScientific公司的产品)；

程序升温：柱初温40℃，保持5min；以5℃/min升温至60℃，保持5min；以7～9℃/min的速度升温至150℃，保持10min；

进样口温度为180℃；

载气为氮气，流量2.0mL/min，不分流模式进样；

顶空进样：顶空样品平衡温度为40℃～70℃，顶空样品平衡时间为5min～20min；

检测器为FID，温度250℃，氢气40mL/min，空气350mL/min，氮气25mL/min；

进样量：1min；

(色谱仪器可以是任意型号的气相色谱仪，例如在本发明中可以使用Agilent7890A气相色谱仪，还可以使用Agilent7697A顶空进样***)；

(3)气相色谱测定：

照2010年版《中华人民共和国药典》二部附录V E所载的气相色谱法，用上述气相色谱条件进行测定；

取3-甲基呋喃对照品溶液测定，得到色谱图1；另外取供试品溶液测定，得到色谱图2；

(4)计算：

读取色谱图1中主峰3-甲基呋喃的保留时间(其在本发明中可标记为t1)和峰面积(其在本发明中可标记为A1)；

读取色谱图2中各色谱峰的保留时间及峰面积；

该色谱图2中，与色谱图1中主峰3-甲基呋喃保留时间一致的色谱峰为3-甲基呋喃峰，该色谱峰在图1中记为峰a，其保留时间记为ta(与t1相当)，其峰面积记为Aa；

该色谱图2中，在保留时间tb处若存在色谱峰，其记为峰b，该峰b的峰面积记为Ab，其中tb是ta的1.8～2.2倍；

按外标法以峰面积计算供试品中3-甲基呋喃相对于阿奇霉素药用盐的含量(％)；

计算峰b峰面积与峰a峰面积的比值，即Ab/Aa值。

在本发明中，上述气相色谱法的一些典型实施方案，特别是其中的个别典型测定条件和测定方法，是特别优选的。例如在本发明具体实施方式部分的方法例1中提供的典型测定条件和测定方法，其在本发明中可称为【气相色谱法A】，并且优选作为本发明测定的具体方法。

根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。

根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。

根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂。

根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂，其选自：冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。

根据本发明第一方面的方法，其中所述3-甲基呋喃对照品是使用所述【气相色谱法A】测定，其色谱纯度大于98％的样品。

根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.85～2.15倍。

根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.9～2.1倍。

根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.95～2.05倍。

根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为70℃，样品平衡时间为5min，同时以200rpm的转速震荡。

根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为60℃，样品平衡时间为10min，同时以200rpm的转速震荡。

根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为50℃，样品平衡时间为15min，同时以200rpm的转速震荡。

根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为40℃，样品平衡时间为20min，同时以200rpm的转速震荡。

根据本发明第一方面的方法，其中供试品中的3-甲基呋喃是作为杂质存在的，该3-甲基呋喃在本发明中亦可称为杂质a，而供试品气相色谱图中的峰b亦是供试品中存在的一种杂质，其在本发明中亦可称为杂质b。

根据本发明第一方面的方法，其中供试品中的3-甲基呋喃是作为杂质存在的，其在供试品中的含量(％)可以通过本领域技术人员公知的外标法计算得到，即通过色谱图1峰面积A1和3-甲基呋喃对照品溶液中溶质浓度以及色谱图2峰面积Aa三者的关系计算得到。例如供试品取样中包含200mg的阿奇霉素药用盐，如果该取样的供试品中测定得到含有0.03mg杂质3-甲基呋喃，则杂质在供试品中的含量为0.015％。在本发明中作为对照品的3-甲基呋喃可以从市场上容易购得，例如本发明使用的3-甲基呋喃购自Sigma-Aldrich公司，其纯度在99.5％以上。

根据本发明第一方面的方法，其中供试品中峰b作为一种杂质，即杂质b，其在供试品中的含量，可以通过参考同一供试品中所含的杂质3-甲基呋喃的量计算，即以上文所述Ab/Aa值计算。即，对于一批供试品物料，不论其是作为原料药的阿奇霉素药用盐，还是作为药物制剂的阿奇霉素药用盐制剂，其中杂质3-甲基呋喃(相对于该批物料中阿奇霉素药用盐)的含量(％)可通过本发明所述【气相色谱法A】测定得到，而在此基础上，可以测定得到Ab/Aa值，并且杂质b的相对含量可以通过Ab/Aa值来表征。

总体上讲，根据本发明第一方面的方法，可以有效地评价阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质特别是杂质a和杂质b的存在状况。当然，对于品质非常理想的阿奇霉素药用盐或其制剂，其中的杂质a可能不存在或者低于方法的检测限而检测不到，此时可以向该阿奇霉素药用盐或其制剂中定量添加一定量的杂质a，从而仍然可以使用Ab/Aa值来有效地评价杂质b的存在状况。

因此，根据本发明第一方面的方法，当阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a低于方法的检测限而检测不到，向该阿奇霉素药用盐或其制剂中定量添加一定量的杂质a对照品，以计算并使用Ab/Aa值来评价杂质b的存在情况。这样，在一个实施方案中，将杂质a对照品添加到阿奇霉素药用盐或其制剂中的方法是，或者制备供试品溶液的方法是：将作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂精密称定，置20mL的顶空瓶中，加5mL的3-甲基呋喃对照品溶液溶解，作为供试品溶液。

另外，已经发现，适当调节程序升温曲线，将会改变峰a和峰b的保留时间，但是二者的相对保留时间(即，在本发明中为tb/ta，或者称为tb是ta的倍数)基本保持不变。尽管这种现象是药物分析领域技术人员可以预期的，但是已经出人意料地发现：当将供试品溶液重复进样测定(至少10次)时，使用本发明上述程序升温曲线时，其中的峰b峰面积即Ab的相对标准偏差RSD非常小，小于1.3％；但是，当从60℃升温至150℃的过程中升温速度在7.8～8.2℃/min时RSD仍然可以维持在小于1.5％的范围；但是，当升温速度低于7.5℃/min时RSD大于5.5％，并且升温速度越低RSD越大，例如升温速度为6.5℃/min时RSD达9.52％；而升温速度大于8.5℃/min时RSD大于6.2％，并且升温速度越高RSD越大，例如升温速度为9.5℃/min时RSD达8.23％。另外，如果改变升温程序的其它阶段将更加明显地影响上述Ab的RSD值，例如将60℃平衡时间延长到8分钟或者缩短到3分钟，RSD分别达到7.34％和8.16％。上述Ab的相对标准偏差RSD越小则表明测定方法越稳定、越准确、越可靠，否则方法不准确。这种升温程序的变化会影响色谱峰面积是现有技术未曾有过教导的，申请人尝未找到任何理论能够解释此现象。

因此，在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以7.5～8.5℃/min的速度从60℃升温至150℃。在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以7.8～8.2℃/min的速度从60℃升温至150℃。在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以8℃/min的速度从60℃升温至150℃。

根据本发明第一方面的方法，所述DB-624毛细管柱为中等极性色谱柱。

进一步地，本发明第三方面提供了阿奇霉素药用盐的原料药，其中含有96.0％以上的阿奇霉素药用盐。

根据本发明第三方面的原料药，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。

根据本发明第三方面的原料药，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。

进一步地，本发明第四方面提供了阿奇霉素药用盐的药物组合物，其中包含本发明第三方面任一实施方案所述的阿奇霉素药用盐的原料药，以及任选的药用辅料。

根据本发明第四方面的药物组合物，其中阿奇霉素药用盐占组合物总重量的1～100％，余量的是药用辅料。

根据本发明第四方面的药物组合物，其是供注射用的制剂。

根据本发明第四方面的药物组合物，其是供注射用的制剂，选自：冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。

根据本发明第四方面的药物组合物，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。

根据本发明第四方面的药物组合物，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。

进一步地，本发明第五方面提供了制备包含阿奇霉素药用盐的药物组合物的方法，该方法包括将本发明第三方面任一实施方案所述的阿奇霉素药用盐的原料药，以及任选的药用辅料，按常规药物制剂的制备工艺，制成呈药物制剂形式的药物组合物。

根据本发明第五方面的方法，其中所述的药物组合物是如本发明第四方面任一实施方案所述的药物组合物。

根据本发明第五方面的方法，其中阿奇霉素药用盐占组合物总重量的1～100％，余量的是药用辅料。

根据本发明第五方面的方法，其中所述药物组合物是供注射用的制剂。

根据本发明第五方面的方法，其中所述药物组合物是供注射用的制剂，选自：冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。

根据本发明第五方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。

根据本发明第五方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

下面对本发明的各个方面作进一步描述。

阿奇霉素(azithromycin)是15元环大环内酯类抗生素，其化学结构式如下：

阿奇霉素有无水物、一水合物、二水合物等形式，例如中国药典2010年版收载的、美国药典USP35版收载的。其在甲醇、丙酮、三氯甲烷、无水乙醇或稀盐酸中易溶，在乙腈中溶解，在水中几乎不溶。鉴于其水溶性不足的问题，在制备成注射用制剂时存在技术壁垒。为此人们常将游离碱形式的阿奇霉素制备成满足制剂溶解性要求的药用盐，再用该药用盐来制备制剂例如冷冻干燥粉针剂。

在本发明中，制备阿奇霉素药用盐的制剂特别是冷冻干燥粉针剂，可以通过本领域技术人员公知的方式来制备，冷冻干燥方法是《药剂学》教科书中有详细记载的，而作为冷冻干燥粉针剂的辅料，可以添加，亦可以不添加，当添加时，乳糖、甘露醇、右旋糖酐等是常用的，它们的用量通常是根据工艺要求确定，例如通常使冷冻干燥前的溶液中固形物的含量在2～20％范围内。

本发明技术特点：本发明采用顶空气相色谱法，能快速、准确、简便的测定注射用阿奇霉素中的杂质例如3-甲基呋喃和杂质b，并且能够同时测定阿奇霉素制剂中常见的残留溶剂(例如但不限于二氯甲烷、甲醇、乙醇和丙酮等)，各色谱峰之间的分离度均符合要求。

综上所述，采用本发明所述顶空气相色谱法检查阿奇霉素原料药或注射用阿奇霉素制剂中3-甲基呋喃等杂质，实现了阿奇霉素原料药和制剂的有效控制。

附图说明

图1为使用本发明【气相色谱法A】测定的3-甲基呋喃对照品色谱图，其中色谱峰a为3-甲基呋喃，其保留时间为11.354min。

图2为使用本发明【气相色谱法A】测定的盐酸阿奇霉素冷冻干燥粉针剂(粉针1F1-1)的供试品色谱图，其中在保留时间11.358min处出现3-甲基呋喃杂质峰(即峰a)；另外，该供试品在保留时间22.644min处出现另一杂质峰(即峰b)；tb是ta的1.99倍(在本发明中，该参数亦可表述为tb/ta＝1.99)。

具体实施方式

所提供的以下实施例仅用于解释目的而不是用于，也不应被解释为以任何方式限制本发明。本领域那些技术人员将会认识到在不超越本发明的精神或范围的情况下可对以下实施例做出常规变化和修改。

A、方法例部分

方法例1：杂质检测方法

提供以下在本发明中可称为【气相色谱法A】的气相色谱方法，其在本发明的具体实例中，用于检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质，其具体步骤有：

(1)测试液的制备：

供试品溶液的制备：取作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂，精密称定，置20mL的顶空瓶中，加水5ml溶解，作为供试品溶液；

3-甲基呋喃对照品溶液的制备：取3-甲基呋喃对照品30mg，精密称定，置100mL的量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2mL置100mL的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5mL置20mL的顶空瓶中，作为3-甲基呋喃对照品溶液(相当于该溶液中的3-甲基呋喃浓度为0.03mg/5ml)；

(2)气相色谱条件：

色谱柱：DB-624毛细管柱(其规格为30m×0.53mm×3.0μm，J&W Scientific公司的产品)；

程序升温：柱初温40℃，保持5min；以5℃/min升温至60℃，保持5min；以8℃/min的速度升温至150℃，保持10min；

进样口温度为180℃；

载气为氮气，流量2.0mL/min，不分流模式进样；

顶空进样：顶空样品平衡温度为60℃，顶空样品平衡时间为10min，同时以200rpm的转速震荡；

检测器为FID，温度250℃，氢气40mL/min，空气350mL/min，氮气25mL/min；

进样量：1min；

(色谱仪器使用Agilent7890A气相色谱仪，Agilent7697A顶空进样***)；

(3)气相色谱测定：

照2010年版《中华人民共和国药典》二部附录V E所载的气相色谱法，用上述气相色谱条件进行测定；

取3-甲基呋喃对照品溶液测定，得到色谱图1；另外取供试品溶液测定，得到色谱图2；

(4)计算：

读取色谱图1中主峰3-甲基呋喃的保留时间(其在本发明中可标记为t1)和峰面积(其在本发明中可标记为A1)；

读取色谱图2中各色谱峰的保留时间及峰面积；

该色谱图2中，与色谱图1中主峰3-甲基呋喃保留时间一致的色谱峰为3-甲基呋喃峰，该色谱峰在图1中记为峰a，其保留时间记为ta(与t1相当)，其峰面积记为Aa；

该色谱图2中，在保留时间tb处若存在色谱峰，其记为峰b，该峰b的峰面积记为Ab，其中tb是ta的1.9～2.1倍；

按外标法以峰面积计算供试品中3-甲基呋喃相对于阿奇霉素药用盐的含量(％)；

计算峰b峰面积与峰a峰面积的比值，即Ab/Aa值。

方法例2：稳定性考察方法

对于阿奇霉素药用盐的原料药，将其密封在玻璃瓶中；对于冷冻干燥粉针剂将其呈原始包装即密封在玻璃瓶中；对于其它形式的原料或制剂，使它们用适宜的材料包裹。接着将这些试样用遮光袋子包裹，再将它们放置在42℃的恒温箱中，放置3个月。考察/测试各试样在0月时以及3月时的性能，例如使用方法例1之【气相色谱法A】测定各种试样中杂质3-甲基呋喃含量以及杂质b相对(于3-甲基呋喃的)量。

还可以使用方法例3之方法测定各试样在0月和3月时的有关物质或含量。

方法例3：产品性质测试方法

参照中国药典2010年版二部395页“阿奇霉素”品种之有关物质检查项下关于“供注射用”的测定方法和质量指标，考察本发明具体实例中涉及的原料药的有关物质。

参照中国药典2010年版二部395页“阿奇霉素”品种之含量测定项下的测定方法和关于该品种按无水物计算含C38H72N2O12应为96.0％～102.0％的指标，考察本发明具体实例中涉及的原料药的含量。

参照中国药典2010年版二部396页“阿奇霉素干混悬剂”品种之有关物质检查项下的测定方法和质量指标，考察本发明具体实例中涉及的各种组合物(制剂)的有关物质。

对于各种组合物(制剂)，参照中国药典2010年版二部396页“阿奇霉素干混悬剂”品种之含量测定项下的测定方法和关于该品种按阿奇霉素(C38H72N2O12)计的相对于该组合物的理论标示量百分数的指标，考察本发明具体实例中涉及的各种组合物(制剂)的含量。

B、原料药制备例部分

制备例1：制备盐酸阿奇霉素原料药

可以参照CN1803821A(中国专利申请号200610037900.9，长澳)说明书实施例1的方法，制备得到盐酸阿奇霉素，记为Y1。

制备例2：制备盐酸阿奇霉素原料药

可以参照CN102746350A(中国专利申请号201110101256.8，泰康)说明书实施例1的方法，制备得到盐酸阿奇霉素，记为Y2。

制备例3：制备门冬氨酸阿奇霉素原料药

可以参照CN1861623A(中国专利申请号200610083980.1，斯达)说明书实施例1的方法，制备得到门冬氨酸阿奇霉素，记为Y3。

制备例4：制备苹果酸阿奇霉素原料药

可以参照CN101193904A(中国专利申请号200680020147.0，韩美)说明书实施例1的方法，制备得到苹果酸阿奇霉素，记为Y4。

制备例5：制备乳糖酸阿奇霉素原料药

可以参照CN101381386A(中国专利申请号200810215777.4，刘力)说明书实施例1的方法，制备得到乳糖酸阿奇霉素，记为Y5。

制备例6：制备硫酸阿奇霉素原料药

可以参照CN101092440A(中国专利申请号200710070087.X，尖峰)说明书实施例1的方法，制备得到硫酸阿奇霉素，记为Y6。

制备例7：马来酸阿奇霉素原料药

可以是直接购自天津某药厂产的马来酸阿奇霉素，记为Y7。

C、冷冻干燥粉针剂的实施例部分

实施例1：制备阿奇霉素药用盐的冷冻干燥粉针剂

分别使用制备例1～制备例7所获得的各种阿奇霉素盐为原料，照CN101327191A(中国专利申请号200810126746.1，锦瑞)说明书实施例1的配方和工艺，制备成冷冻干燥粉针剂，每瓶活性成分装量0.25g。

不同粉针剂的编号使用以下方式与其原料编号相对应：对于使用原料Y1制备的粉针剂编号为F1，使用原料Y2制备的粉针剂编号为F2；其余类推。

D、考察本发明方法和试样的试验例部分

试验例1：考察本发明GC方法

(1)在上文B关于原料药制备例部分以及上文C关于冷冻干燥粉针剂的实施例部分，使用【气相色谱法A】测定的全部样品，当检测到杂质a和杂质b时，它们的tb/ta均在1.9～2.1范围内，表明两个杂质在本发明方法中的相对保留时间是恒定的。

(2)针对原料药Y1、原料药Y2、粉针剂F1、粉针剂F2这四个试样，参考本发明方法例1关于【气相色谱法A】的条件测定，但是其中的顶空进样的处理方式改为：样品平衡温度为70℃，样品平衡时间为5min，同时以200rpm的转速震荡。结果四个试样测定的结果与【气相色谱法A】测定的结果相同，例如：tb/ta均在1.9～2.1范围内，杂质a含量和Ab/Aa值与【气相色谱法A】测定结果相差分别均不超过5％。

(3)针对原料药Y1、原料药Y2、粉针剂F1、粉针剂F2这四个试样，参考本发明方法例1关于【气相色谱法A】的条件测定，但是其中的顶空进样的处理方式改为：样品平衡温度为50℃，样品平衡时间为15min，同时以200rpm的转速震荡。结果四个试样测定的结果与【气相色谱法A】测定的结果相同，例如：tb/ta均在1.9～2.1范围内，杂质a含量和Ab/Aa值与【气相色谱法A】测定结果相差分别均不超过5％。

(4)针对原料药Y3、原料药Y4、粉针剂F3、粉针剂F4这四个试样，参考本发明方法例1关于【气相色谱法A】的条件测定，但是其中的顶空进样的处理方式改为：样品平衡温度为40℃，样品平衡时间为20min，同时以200rpm的转速震荡。结果四个试样测定的结果与【气相色谱法A】测定的结果相同，例如：tb/ta均在1.9～2.1范围内，杂质a含量和Ab/Aa值与【气相色谱法A】测定结果相差分别均不超过5％。

(5)针对原料药Y5、原料药Y6、粉针剂F5、粉针剂F6这四个具有试样，参考本发明方法例1关于【气相色谱法A】的条件测定，但是其中的程序升温曲线改为：(i)从60℃升温至150℃的过程中升温速度在7.8℃/min，或者(ii)从60℃升温至150℃的过程中升温速度在8.2℃/min，将这些试样分别在此(i)和(ii)条件下重复进样测定10次时，使用本发明上述程序升温曲线时，其中Ab的RSD均在0.06％～1.21％范围内。参考此试验方法改变程序升温曲线所得的结果参见上文所详述的。可见，在本发明气相色谱法中，从60℃升温至150℃的过程中升温速度在7.8～8.2℃/min是极其有益的。

试验例4：产品性质考察

照本发明方法例3的方法，测试制备例1～制备例7以及实施例的各种阿奇霉素药用盐原料药和阿奇霉素药用盐粉针剂的性质。结果显示，使用HPLC测定，各种原料药的有关物质均能满足药典规定，含量按无水物计算含C38H72N2O12均在96.5％～101.0％范围内；各种粉针剂的有关物质均能满足上述方法学规定，含量均在标示量的96％～104％范围内。对于在本发明试验例2中经42℃-3月处置的各种原料药和粉针剂试样，它们使用HPLC测定亦同样能够满足上述质量规范的要求；但是这些经高温处置的试样使用【气相色谱法A】测定时，显示杂质a会有显著的增加。这表明使用HPLC不足以准确评判阿奇霉素药用盐原料药和制剂的品质，使用本发明GC法是有益的。

Claims (15)

1.检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，所述杂质a是3-甲基呋喃，所述杂质b是由以下气相色谱法确定的保留时间tb处的峰b；该方法使用气相色谱法进行检测，并且包括以下步骤：

(1)测试液的制备：

供试品溶液的制备：取作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂，精密称定，置20mL的顶空瓶中，加水5ml溶解，作为供试品溶液；

3-甲基呋喃对照品溶液的制备：取3-甲基呋喃对照品30mg，精密称定，置100mL的量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2mL置100mL的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5mL置20mL的顶空瓶中，作为3-甲基呋喃对照品溶液，其相当于该溶液中的3-甲基呋喃浓度为0.03mg/5ml；

(2)气相色谱条件：

色谱柱：DB-624毛细管柱，其为30m×0.53mm×3.0μm，是J&W Scientific公司的产品；

程序升温：柱初温40℃，保持5min；以5℃/min升温至60℃，保持5min；以7.5～8.5℃/min的速度升温至150℃，保持10min；

进样口温度为180℃；

载气为氮气，流量2.0mL/min，不分流模式进样；

顶空进样：顶空样品平衡温度为40℃～70℃，顶空样品平衡时间为5min～20min；

检测器为FID，温度250℃，氢气40mL/min，空气350mL/min，氮气25mL/min；

进样量：1min；

(3)气相色谱测定：

照2010年版《中华人民共和国药典》二部附录V E所载的气相色谱法，用上述气相色谱条件进行测定；

取3-甲基呋喃对照品溶液测定，得到色谱图1；另外取供试品溶液测定，得到色谱图2；

(4)计算：

读取色谱图1中主峰3-甲基呋喃的保留时间和峰面积，该保留时间标记为t1，该峰面积记为A1；

读取色谱图2中各色谱峰的保留时间及峰面积；

该色谱图2中，与色谱图1中主峰3-甲基呋喃保留时间一致的色谱峰为3-甲基呋喃峰，该色谱峰在图2中记为峰a，其保留时间记为ta，并且其与t1相当，其峰面积记为Aa；

该色谱图2中，在保留时间tb处若存在色谱峰，其记为峰b，该峰b的峰面积记为Ab，其中tb是ta的1.8～2.2倍；

对于杂质a，按外标法以峰面积计算供试品中3-甲基呋喃相对于阿奇霉素药用盐的含量(％)；

对于杂质b，计算峰b峰面积与峰a峰面积的比值，即Ab/Aa值。

2.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。

3.根据权利要求2所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。

4.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂。

5.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂，其选自：冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。

6.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中tb是ta的1.85～2.15倍。

7.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中tb是ta的1.9～2.1倍。

8.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中tb是ta的1.95～2.05倍。

9.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为70℃，样品平衡时间为5min，同时以200rpm的转速震荡。

10.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为60℃，样品平衡时间为10min，同时以200rpm的转速震荡。

11.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为50℃，样品平衡时间为15min，同时以200rpm的转速震荡。

12.根据权利要求1所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，其中顶空进样的处理方式为：样品平衡温度为40℃，样品平衡时间为20min，同时以200rpm的转速震荡。

13.根据权利要求1至12任一项所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，在气相色谱法的程序升温中，以7.8～8.2℃/min的速度从60℃升温至150℃。

14.根据权利要求1至12任一项所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，在气相色谱法的程序升温中，以8℃/min的速度从60℃升温至150℃。

15.根据权利要求1至12任一项所述的检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a和杂质b的方法，所述DB-624毛细管柱为中等极性色谱柱。