CN103981177A - 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及其应用,该与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,其中分子标记InDel78和SCAR42与育性恢复基因的遗传距离分别为0.91cM和0.92cM,将育性恢复基因限定于大白菜A09染色体一个337kb的范围内。这两个分子标记不仅可应用于大白菜CMS7311育性恢复基因的分子标记辅助选择,提高选择效率,加快育种进程;也为进一步的育性恢复基因的图位克隆、揭示细胞质雄性不育及其育性恢复的分子机制奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于农业的植物分子标记辅助育种领域,涉及与一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及应用。
背景技术
大白菜(Brassica campestris L.ssp.pekinensis(Lour.)Olsson)是十字花科芸薹属白菜种中最重要的蔬菜作物之一,原产中国,是我国乃至世界性大宗蔬菜。早在上世纪90年代,陕西省农业科学院蔬菜花卉研究所就通过种间杂交及回交技术把甘蓝型油菜CMS中转育至大白菜育成CMS7311(张鲁刚,郝东方,结球白菜温度敏感细胞质雄性不育系CMS7311育性转化的研究,植物学报,2001,43(11):1123-1128),进一步研究确认该CMS也含有异常的开放阅读框ORF224,并带有部分温敏特性;并在大白菜找到可恢复CMS育性的恢复系,确定恢复基因为单基因遗传。由于传统的育性表型选择要等到开花,通过田间直接观察完成。对于携带恢复基因的优良材料,要将其转育为不育系,必须经过杂交,自交,同时用不育系测交判断其基因型等过程,操作起来费时费力,周期长,育种进程慢。为了加快大白菜胞质雄性不育育种速度,采用现代生物技术,进行分子标记辅助育种十分迫切。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其中:
(1)提供大白菜CMS7311育性恢复基因的InDel标记和SCAR标记各1个;
(2)提供InDel标记和SCAR标记的PCR引物序列;
(3)提供对大白菜细胞质雄性不育及其育性恢复基因进行辅助选择过程中对上述标记进行应用的方法。
为了实现上述任务,本发明采取如下的技术解决方案:
一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其特征在于,所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,其中,InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成;
所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp,具体序列如下:
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCAGATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCACCACCGGGAACAAAGCAGACAAACGGAACCGTTACTCCAACCAACGGTGCTTCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTATGGAGACAAAGACATCCACATCGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTAGAAAAGGAAGCTTCAGTCGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATAAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTTTTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAGCAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAACTGCCACCAGCATCATTTTGTAGTAATCTAATCTACCAGATGTTATTCAGTTAAAAAAAATATACTGTGGCAAAGAAAGAGAAA CCTATGTGCCTCGTTATAAC-3;
所述的不育系序列InDel78S大小为881bp,具体序列如下:
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTGCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTCTTTCTTCTCTTCTTCCTAAAGTCTACATTTTGATGAAAAAAGTTGCGGTCTTGATGAGGTCTTTTGTGCAGRTTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCATCACCGGGAACAAACAAGACAAACGGTGCTTCCAGTTTGGTCATTTCCCCTGCTTTCGCAATCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTGTGGAGACAAAGACATCCACATGGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTGGAAAAGGAAGCTTCAGTGGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATCAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTATTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAAGTGCCACCAGACATCATTTTGTAGTAATCTACCAGTTGTTATTCAGTTAAAACTAAGGTTTCTCTCTTTAGGTGTTAGTTATTCAGTTAAAAGAATATACTATGTGGCAAAGAAAGAGAAACCTATGTGCCCGTTATAACA-3
所述的恢复系序列SCAR42标记大小为长度458bp,具体序列如下:
5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAGATTGCTACGGAAACATTAGT-3。
所述的恢复系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢复系序列SCAR42标记的PCR特异性扩增引物的序列如下:
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3;
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3;
SC42F1:5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3;
P42R:5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
上述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记在辅助选择中的应用,具体方法是:
a、用CTAB法提取待测材料基因组DNA,具体参照王琦等(2006)的方法;
b、PCR扩增:其中反应体系为25ul体系,各组分物质的含量分别为:20ng模板DNA;2.5ul10×buffer;1.8mM MgCl2;0.25mmol/L dNTP;1pmol/L引物:1.5U Taq DNA聚合酶;ddH2O补齐至25ul,混匀,离心;扩增程序:预变性94℃/5min,然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min,35个循环后,72℃延伸5min;
c、电泳:取6ul PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀,点入0.8%的琼脂糖凝胶中,150V电压下电泳25min,经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照;
d、判断:
在使用引物ID78F/ID78R扩增出1146bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09%;
在使用引物SC42F1/R扩增出458bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08%以上;
如果两对引物分别同时扩增出目的条带,则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100%。
本发明的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其中分子标记InDel78和SCAR42与育性恢复基因的遗传距离分别为0.91cM和0.92cM,将育性恢复基因限定于大白菜A09染色体一个337kb的范围内。不仅可应用于大白菜CMS7311育性恢复基因的分子标记辅助选择,提高选择效率,加快育种进程,也为进一步的育性恢复基因的图位克隆、揭示细胞质雄性不育及其育性恢复的分子机制奠定基础。
附图说明
图1是InDel78标记在F2个体上的扩增结果;
图2是SCAR42标记的鉴定及不育株验证。
图1和2中符号分别表示为:
F:可育单株;S:不育单株;M:DL2000DNA Marker;星号*表示标记检测结果和田间育性表型不一致。
图3是育性恢复基因BcRfp与两个标记之间的连锁遗传图。该图是三引物(SC42F1、P42F和P42R)PCR扩增结果;其中,458bp的目的片段为SC42F1和P42R的扩增结果;作为对照,大约750bp的较大片段为P42F和P42R扩增结果,可用来指示PCR过程中模板DNA的有无。
图中,F:可育单株;S:不育单株;M:DL2000DNA Marker;星号表示标记检测结果和田间育性表型不一致。
以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
具体实施方式
实施例1:与大白菜CMS7311育性恢复基因BcRfp连锁的InDels标记发掘
(一)分离群体的构建
以由83~2大白菜(见向平,1996,“稻田种秋蔬菜组合模式”,蔬菜,01:28页)自交5代育成的大白菜雄性不育恢复系01S325作为父本,给雄性不育系CMS7311授粉,所获得F1植株全部表现为可育。通过单株自交构建F2代分离群体,在播种的258株个体中,田间育性调查显示,186株为雄性可育,72株为雄性不育单株,经x2测验表明育性分离比例符合3:1(x0 2=1.013,x0.05,1 2=3.841),表明该雄性不育系的育性恢复由单基因控制的显性基因。
(二)DNA提取及标记筛选
(1)用CTAB法提取待测材料基因组DNA,具体参照王琦等(2006)的方法;
(2)引物设计:实验室前期研究结果已将育性恢复基因定位于白菜基因组A09染色体上大约1M的物理距离上。本研究基于已有定位结果及相关白菜基因组序列,设计并合成一系列引物,通过不育和可育材料PCR扩增、测序鉴定,发现一系列InDel标记,分别为:InDel37、InDel55、InDel78、InDel42、InDel55、InDel60等。遗传学分析表明,两个标记InDel78和InDel42分布于雄性不育恢复基因Rf两端,遗传距离分别为0.91cM和0.92cM,且将目的基因限定在大约337Kb的范围内。其中InDel78在不育和可育材料间目的片段大小相差约265bp左右,采用普通的0.8%琼脂糖凝胶电泳完全可以分离,因此可直接用于育性恢复基因的分子标记。其中InDel78和InDel42所用引物序列如下:
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3;
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3;
P42F:5-ATGGAAGAAGCCCTAAGAAAGT-3;
P42R:5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
实施例2:标记InDel42的SCAR转化及鉴定
(一)SCAR标记的转化
由于标记InDel42在不育材料中的PCR产物比可育材料缺少12bp,采用0.8%琼脂糖凝胶电泳很难将两者有效分离,只能将该标记转化为SCAR42标记,方可区分开来。可育植株中的序列如下(划线部分为不育材料缺失序列):
ATGGAAGAAGCCCTAAGAAAGTTCAACGAATCTACCTACTCCTTCATACCCGGTTACGAACCCGACCCGATTCCTCTAACGAGAATCTTTGCCAATGATGCAAACTCCCCGCAGGTTAACAACACACCGTCTTCAAAGGAGGCAATAGTGACCATCACCGGATCTGGCAGGACAAGGTACCGTGGCGTTCGCCGAAGGCCGTGGGGACGTTACGCGGCGGAGATACGTGATCCCACGTCGAAGGAGAGACGTTGGCTCGGAACGTTCGATACGGCGGAGCAAGCCGCTTGTGCTTACGACTGTGCAGCTCGTGAGTTTCGTGGATCTAAGGCTCGGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAG ATTGCTACGGAAACATTAGT。
基于以上缺失序列,重新设计SCAR引物SC42F1,用于和原来的P42R引物组合扩增目的条带。
SC42F1引物序列为:5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3。
(二)SCAR标记的鉴定
为了验证该SCAR42标记的可靠性,申请人对F2代分离群单株进行了扩增。扩增结果表明,其在不育中不能扩增出条带,而在可育材料中,不管是杂合可育材料还是纯和可育材料,均可扩增出目的条带。
实施例3:InDel78和SCAR42两个标记在对带有大白菜CMS7311育性恢复基因的辅助选择中的应用
(一)用CTAB法提取待测材料基因组DNA,具体方法同前;
(二)PCR反应
(1)PCR反应体系:25ul体系,各组分物质的含量分别为:20ng模板DNA;2.5ul10×buffer;1.8mM MgCl2;0.25mmol/L dNTP;1pmol/L引物:1.5U Taq DNA聚合酶;ddH2O补齐至25ul,混匀,离心;
(2)PCR扩增程序:预变性94℃/5min,然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min,35个循环后,72℃延伸5min;
(3)电泳:取6ul PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀,点入0.8%的琼脂糖凝胶中,150V电压下电泳25min,经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照;
(4)结果分析:
在使用引物ID78F/R扩增出1146bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09%;在使用引物SC42F1/R扩增出约458bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08%以上;如果两对引物分别同时扩增出目的条带,则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100%。
Claims (4)
1.一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其特征在于,所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,其中,InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成;
所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp,具体序列如下:
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCAGATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCACCACCGGGAACAAAGCAGACAAACGGAACCGTTACTCCAACCAACGGTGCTTCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTATGGAGACAAAGACATCCACATCGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTAGAAAAGGAAGCTTCAGTCGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATAAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTTTTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAGCAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAACTGCCACCAGCATCATTTTGTAGTAATCTAATCTACCAGATGTTATTCAGTTAAAAAAAATATACTGTGGCAAAGAAAGAGAAA CCTATGTGCCTCGTTATAAC-3;
所述的不育系序列InDel78S大小为881bp,具体序列如下:
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTGCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTCTTTCTTCTCTTCTTCCTAAAGTCTACATTTTGATGAAAAAAGTTGCGGTCTTGATGAGGTCTTTTGTGCAGRTTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCATCACCGGGAACAAACAAGACAAACGGTGCTTCCAGTTTGGTCATTTCCCCTGCTTTCGCAATCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTGTGGAGACAAAGACATCCACATGGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTGGAAAAGGAAGCTTCAGTGGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATCAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTATTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAAGTGCCACCAGACATCATTTTGTAGTAATCTACCAGTTGTTATTCAGTTAAAACTAAGGTTTCTCTCTTTAGGTGTTAGTTATTCAGTTAAAAGAATATACTATGTGGCAAAGAAAGAGAAACCTATGTGCCCGTTATAACA-3;
所述的恢复系序列SCAR42标记大小为长度458bp,具体序列如下:
5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAGATTGCTACGGAAACATTAGT-3。
2.如权利要求1所述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其特征在于,所述的恢复系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢复系序列SCAR42标记的PCR特异性扩增引物的序列如下:
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3;
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3;
SC42F1:5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3;
P42R:5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
3.权利要求1或2所述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记在辅助选择中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,具体方法是:
(1)用CTAB法提取待测材料基因组DNA;
(2)PCR扩增:
a、反应体系为25ul体系,各组分物质的含量分别为:20ng模板DNA;2.5ul10×buffer;1.8mM MgCl2;0.25mmol/L dNTP;1pmol/L引物:1.5U TaqDNA聚合酶;ddH2O补齐至25ul,混匀,离心;
b、PCR扩增程序:预变性94℃/5min,然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min,35个循环后,72℃延伸5min;
c、电泳:取6ul的PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀,点入0.8%的琼脂糖凝胶中,150V电压下电泳25min,经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照;
d、判断:
在使用引物ID78F/ID78R扩增出1146bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09%;
在使用引物SC42F1/P42R扩增出458bp的目的条带,则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08%以上;
如果两对引物分别同时扩增出目的条带,则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100%。
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