CN103981177A - 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 - Google Patents
大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103981177A CN103981177A CN201410165808.5A CN201410165808A CN103981177A CN 103981177 A CN103981177 A CN 103981177A CN 201410165808 A CN201410165808 A CN 201410165808A CN 103981177 A CN103981177 A CN 103981177A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sequence
- gene
- cabbage
- restorer
- mark
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 title claims abstract description 20
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 title abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 claims description 26
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 claims description 26
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 claims description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 25
- 101000708283 Oryza sativa subsp. indica Protein Rf1, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 17
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 15
- 102220427212 c.125C>G Human genes 0.000 claims description 8
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 3
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 14
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 abstract description 8
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 abstract description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 abstract description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 10
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 108700003861 Dominant Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 101100374343 Acidianus filamentous virus 1 (isolate United States/Yellowstone) ORF224 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000060924 Brassica campestris Species 0.000 description 1
- 235000005637 Brassica campestris Nutrition 0.000 description 1
- 241000219193 Brassicaceae Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000028284 monogenic inheritance Diseases 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及其应用，该与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记，其中分子标记InDel78和SCAR42与育性恢复基因的遗传距离分别为0.91cM和0.92cM，将育性恢复基因限定于大白菜A09染色体一个337kb的范围内。这两个分子标记不仅可应用于大白菜CMS7311育性恢复基因的分子标记辅助选择，提高选择效率，加快育种进程；也为进一步的育性恢复基因的图位克隆、揭示细胞质雄性不育及其育性恢复的分子机制奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于农业的植物分子标记辅助育种领域，涉及与一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及应用。
背景技术
大白菜(Brassica campestris L.ssp.pekinensis(Lour.)Olsson)是十字花科芸薹属白菜种中最重要的蔬菜作物之一，原产中国，是我国乃至世界性大宗蔬菜。早在上世纪90年代，陕西省农业科学院蔬菜花卉研究所就通过种间杂交及回交技术把甘蓝型油菜CMS中转育至大白菜育成CMS7311(张鲁刚，郝东方，结球白菜温度敏感细胞质雄性不育系CMS7311育性转化的研究，植物学报，2001，43(11)：1123-1128)，进一步研究确认该CMS也含有异常的开放阅读框ORF224，并带有部分温敏特性；并在大白菜找到可恢复CMS育性的恢复系，确定恢复基因为单基因遗传。由于传统的育性表型选择要等到开花，通过田间直接观察完成。对于携带恢复基因的优良材料，要将其转育为不育系，必须经过杂交，自交，同时用不育系测交判断其基因型等过程，操作起来费时费力，周期长，育种进程慢。为了加快大白菜胞质雄性不育育种速度，采用现代生物技术，进行分子标记辅助育种十分迫切。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记，其中：
(1)提供大白菜CMS7311育性恢复基因的InDel标记和SCAR标记各1个；
(2)提供InDel标记和SCAR标记的PCR引物序列；
(3)提供对大白菜细胞质雄性不育及其育性恢复基因进行辅助选择过程中对上述标记进行应用的方法。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：
一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记，其中，InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成；
所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp，具体序列如下：
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCAGATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCACCACCGGGAACAAAGCAGACAAACGGAACCGTTACTCCAACCAACGGTGCTTCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTATGGAGACAAAGACATCCACATCGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTAGAAAAGGAAGCTTCAGTCGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATAAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTTTTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAGCAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAACTGCCACCAGCATCATTTTGTAGTAATCTAATCTACCAGATGTTATTCAGTTAAAAAAAATATACTGTGGCAAAGAAAGAGAAA CCTATGTGCCTCGTTATAAC-3；
所述的不育系序列InDel78S大小为881bp，具体序列如下：
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTGCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTCTTTCTTCTCTTCTTCCTAAAGTCTACATTTTGATGAAAAAAGTTGCGGTCTTGATGAGGTCTTTTGTGCAGRTTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCATCACCGGGAACAAACAAGACAAACGGTGCTTCCAGTTTGGTCATTTCCCCTGCTTTCGCAATCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTGTGGAGACAAAGACATCCACATGGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTGGAAAAGGAAGCTTCAGTGGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATCAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTATTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAAGTGCCACCAGACATCATTTTGTAGTAATCTACCAGTTGTTATTCAGTTAAAACTAAGGTTTCTCTCTTTAGGTGTTAGTTATTCAGTTAAAAGAATATACTATGTGGCAAAGAAAGAGAAACCTATGTGCCCGTTATAACA-3
所述的恢复系序列SCAR42标记大小为长度458bp，具体序列如下：
5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAGATTGCTACGGAAACATTAGT-3。
所述的恢复系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢复系序列SCAR42标记的PCR特异性扩增引物的序列如下：
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3；
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3；
SC42F1:5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3；
P42R:5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
上述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记在辅助选择中的应用，具体方法是：
a、用CTAB法提取待测材料基因组DNA，具体参照王琦等(2006)的方法；
b、PCR扩增：其中反应体系为25ul体系，各组分物质的含量分别为：20ng模板DNA；2.5ul10×buffer；1.8mM MgCl2；0.25mmol/L dNTP；1pmol/L引物：1.5U Taq DNA聚合酶；ddH2O补齐至25ul，混匀，离心；扩增程序：预变性94℃/5min，然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min，35个循环后，72℃延伸5min；
c、电泳：取6ul PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀，点入0.8％的琼脂糖凝胶中，150V电压下电泳25min，经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照；
d、判断：
在使用引物ID78F/ID78R扩增出1146bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09％；
在使用引物SC42F1/R扩增出458bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08％以上；
如果两对引物分别同时扩增出目的条带，则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100％。
本发明的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记，其中分子标记InDel78和SCAR42与育性恢复基因的遗传距离分别为0.91cM和0.92cM，将育性恢复基因限定于大白菜A09染色体一个337kb的范围内。不仅可应用于大白菜CMS7311育性恢复基因的分子标记辅助选择，提高选择效率，加快育种进程，也为进一步的育性恢复基因的图位克隆、揭示细胞质雄性不育及其育性恢复的分子机制奠定基础。
附图说明
图1是InDel78标记在F2个体上的扩增结果；
图2是SCAR42标记的鉴定及不育株验证。
图1和2中符号分别表示为：
F：可育单株；S：不育单株；M：DL2000DNA Marker；星号*表示标记检测结果和田间育性表型不一致。
图3是育性恢复基因BcRfp与两个标记之间的连锁遗传图。该图是三引物(SC42F1、P42F和P42R)PCR扩增结果；其中，458bp的目的片段为SC42F1和P42R的扩增结果；作为对照，大约750bp的较大片段为P42F和P42R扩增结果，可用来指示PCR过程中模板DNA的有无。
图中，F：可育单株；S：不育单株；M：DL2000DNA Marker；星号表示标记检测结果和田间育性表型不一致。
以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
具体实施方式
实施例1：与大白菜CMS7311育性恢复基因BcRfp连锁的InDels标记发掘
(一)分离群体的构建
以由83～2大白菜(见向平，1996，“稻田种秋蔬菜组合模式”，蔬菜，01：28页)自交5代育成的大白菜雄性不育恢复系01S325作为父本，给雄性不育系CMS7311授粉，所获得F1植株全部表现为可育。通过单株自交构建F2代分离群体，在播种的258株个体中，田间育性调查显示，186株为雄性可育，72株为雄性不育单株，经x2测验表明育性分离比例符合3:1(x0 2＝1.013，x0.05，1 2＝3.841)，表明该雄性不育系的育性恢复由单基因控制的显性基因。
(二)DNA提取及标记筛选
(1)用CTAB法提取待测材料基因组DNA，具体参照王琦等(2006)的方法；
(2)引物设计：实验室前期研究结果已将育性恢复基因定位于白菜基因组A09染色体上大约1M的物理距离上。本研究基于已有定位结果及相关白菜基因组序列，设计并合成一系列引物，通过不育和可育材料PCR扩增、测序鉴定，发现一系列InDel标记，分别为：InDel37、InDel55、InDel78、InDel42、InDel55、InDel60等。遗传学分析表明，两个标记InDel78和InDel42分布于雄性不育恢复基因Rf两端，遗传距离分别为0.91cM和0.92cM，且将目的基因限定在大约337Kb的范围内。其中InDel78在不育和可育材料间目的片段大小相差约265bp左右，采用普通的0.8％琼脂糖凝胶电泳完全可以分离，因此可直接用于育性恢复基因的分子标记。其中InDel78和InDel42所用引物序列如下：
ID78F：5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3；
ID78R：5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3；
P42F：5-ATGGAAGAAGCCCTAAGAAAGT-3；
P42R：5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
实施例2：标记InDel42的SCAR转化及鉴定
(一)SCAR标记的转化
由于标记InDel42在不育材料中的PCR产物比可育材料缺少12bp，采用0.8％琼脂糖凝胶电泳很难将两者有效分离，只能将该标记转化为SCAR42标记，方可区分开来。可育植株中的序列如下(划线部分为不育材料缺失序列)：
ATGGAAGAAGCCCTAAGAAAGTTCAACGAATCTACCTACTCCTTCATACCCGGTTACGAACCCGACCCGATTCCTCTAACGAGAATCTTTGCCAATGATGCAAACTCCCCGCAGGTTAACAACACACCGTCTTCAAAGGAGGCAATAGTGACCATCACCGGATCTGGCAGGACAAGGTACCGTGGCGTTCGCCGAAGGCCGTGGGGACGTTACGCGGCGGAGATACGTGATCCCACGTCGAAGGAGAGACGTTGGCTCGGAACGTTCGATACGGCGGAGCAAGCCGCTTGTGCTTACGACTGTGCAGCTCGTGAGTTTCGTGGATCTAAGGCTCGGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAG ATTGCTACGGAAACATTAGT。
基于以上缺失序列，重新设计SCAR引物SC42F1，用于和原来的P42R引物组合扩增目的条带。
SC42F1引物序列为：5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3。
(二)SCAR标记的鉴定
为了验证该SCAR42标记的可靠性，申请人对F2代分离群单株进行了扩增。扩增结果表明，其在不育中不能扩增出条带，而在可育材料中，不管是杂合可育材料还是纯和可育材料，均可扩增出目的条带。
实施例3：InDel78和SCAR42两个标记在对带有大白菜CMS7311育性恢复基因的辅助选择中的应用
(一)用CTAB法提取待测材料基因组DNA，具体方法同前；
(二)PCR反应
(1)PCR反应体系：25ul体系，各组分物质的含量分别为：20ng模板DNA；2.5ul10×buffer；1.8mM MgCl2；0.25mmol/L dNTP；1pmol/L引物：1.5U Taq DNA聚合酶；ddH2O补齐至25ul，混匀，离心；
(2)PCR扩增程序：预变性94℃/5min，然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min，35个循环后，72℃延伸5min；
(3)电泳：取6ul PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀，点入0.8％的琼脂糖凝胶中，150V电压下电泳25min，经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照；
(4)结果分析：
在使用引物ID78F/R扩增出1146bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09％；在使用引物SC42F1/R扩增出约458bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08％以上；如果两对引物分别同时扩增出目的条带，则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100％。
Claims (4)
1.一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记，其中，InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成；
所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp，具体序列如下：
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCAGATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCACCACCGGGAACAAAGCAGACAAACGGAACCGTTACTCCAACCAACGGTGCTTCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTATGGAGACAAAGACATCCACATCGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTAGAAAAGGAAGCTTCAGTCGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATAAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTTTTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAGCAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAACTGCCACCAGCATCATTTTGTAGTAATCTAATCTACCAGATGTTATTCAGTTAAAAAAAATATACTGTGGCAAAGAAAGAGAAA CCTATGTGCCTCGTTATAAC-3；
所述的不育系序列InDel78S大小为881bp，具体序列如下：
5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTGCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTCTTTCTTCTCTTCTTCCTAAAGTCTACATTTTGATGAAAAAAGTTGCGGTCTTGATGAGGTCTTTTGTGCAGRTTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCGCTAGGTAACTAATGATCACTAACACAAACCTAAGCCTAACTCATTTACATGGATATGACTTATAAAAAGTTTGGTGTGTGTATTAACAGCTCTCCAGGGTCGCTTCCTTCAACTACACCATCACCGGGAACAAACAAGACAAACGGTGCTTCCAGTTTGGTCATTTCCCCTGCTTTCGCAATCTGTTTATCAACACTAGCGCTTCTGATGTAACGTTCGTGTGGAGACAAAGACATCCACATGGGTCCGTCTTTGGTTCCCTTTTGGGTGGAAAAGGAAGCTTCAGTGGTCATTGTGGTTTATATTTCTGTTGTTGCATTTATGTGAAAGTTGCTCTAATTAGAATCTTGAGTAAATAAATAAAATCAAAACAGAGCATTATGATAAAGACTTGTCAATAAAAAGATACCATATTATTATAATTTCTAATGATCAATCATATAGACTAAAAATTTATTCACCATTTTAGTAGCTTCAACATCCAATTTAGATTATTGTTCTACAACTTCAACAACGCAAGTGCCACCAGACATCATTTTGTAGTAATCTACCAGTTGTTATTCAGTTAAAACTAAGGTTTCTCTCTTTAGGTGTTAGTTATTCAGTTAAAAGAATATACTATGTGGCAAAGAAAGAGAAACCTATGTGCCCGTTATAACA-3；
所述的恢复系序列SCAR42标记大小为长度458bp，具体序列如下：
5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACTAATCCTGTTGCCGAGCCTAGATTCTCTTTCTCCTCAAAGAAATCTATGAAGGCCGTTCGTTCTCCTATACCGTCACCTCTGAAGATGAACACACAGCCTCTCTTATGGTATTCCTCTCACGAAACAGCGACTAACGGCTCCTCTTCTCCTTCTTGCTCCTTGACAAAAACGGCAAGCATTTCCTCTTCCGCTGATGAAAACTACACGGAGTTTTTCCCGCAAGAACATTCTGATTCTGGTCTCTTGCAAGATATCGTTCAAGAGTTCTTGAAGAAGAAACGCAACCAGCCTCCGCCACTGATACCACCACCACCACCACCGCCATCTCCACCGATGGTTGGACATCTTGAAAACTTCCGTGAATTCTCCGCCAACAGTTTGTTTCAACCGATGGTGGAGACATCAAAATTAGATTGCTACGGAAACATTAGT-3。
2.如权利要求1所述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述的恢复系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢复系序列SCAR42标记的PCR特异性扩增引物的序列如下：
ID78F：5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3；
ID78R：5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3；
SC42F1：5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3；
P42R：5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
3.权利要求1或2所述的大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记在辅助选择中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，具体方法是：
(1)用CTAB法提取待测材料基因组DNA；
(2)PCR扩增：
a、反应体系为25ul体系，各组分物质的含量分别为：20ng模板DNA；2.5ul10×buffer；1.8mM MgCl2；0.25mmol/L dNTP；1pmol/L引物：1.5U TaqDNA聚合酶；ddH2O补齐至25ul，混匀，离心；
b、PCR扩增程序：预变性94℃/5min，然后94℃/60s、56℃/45s、72℃/1min，35个循环后，72℃延伸5min；
c、电泳：取6ul的PCR扩增产物与2ul的6×loading buffer混匀，点入0.8％的琼脂糖凝胶中，150V电压下电泳25min，经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照；
d、判断：
在使用引物ID78F/ID78R扩增出1146bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.09％；
在使用引物SC42F1/P42R扩增出458bp的目的条带，则该材料带有大白菜CMS育性恢复基因的概率为99.08％以上；
如果两对引物分别同时扩增出目的条带，则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410165808.5A CN103981177B (zh) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410165808.5A CN103981177B (zh) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103981177A true CN103981177A (zh) | 2014-08-13 |
| CN103981177B CN103981177B (zh) | 2016-08-17 |
Family
ID=51273351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410165808.5A Expired - Fee Related CN103981177B (zh) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103981177B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104561062A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-29 | 岭南师范学院 | 一种栽培稻种间杂种不育基因s1及其应用 |
| CN106434696A (zh) * | 2016-11-19 | 2017-02-22 | 西北农林科技大学 | 一个大白菜polCMS育性恢复基因及其检测方法和应用 |
| CN107312870A (zh) * | 2017-09-04 | 2017-11-03 | 河南省农业科学院园艺研究所 | 与辣椒不育恢复基因紧密连锁的分子标记、方法及应用 |
| CN108913800A (zh) * | 2018-07-24 | 2018-11-30 | 信阳师范学院 | 一种白菜hau CMS不育胞质特异分子标记及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1849881A (zh) * | 2006-06-05 | 2006-10-25 | 华中农业大学 | 一种大白菜细胞质雄性不育系的选育方法 |
| CN101575603A (zh) * | 2009-03-31 | 2009-11-11 | 沈阳农业大学 | 大白菜核不育复等位基因Ms的SCAR标记及应用 |
-
2014
- 2014-04-22 CN CN201410165808.5A patent/CN103981177B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1849881A (zh) * | 2006-06-05 | 2006-10-25 | 华中农业大学 | 一种大白菜细胞质雄性不育系的选育方法 |
| CN101575603A (zh) * | 2009-03-31 | 2009-11-11 | 沈阳农业大学 | 大白菜核不育复等位基因Ms的SCAR标记及应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ZHANGLU GANG，ET AL: "investigation on the sterility changeover of male sterility line CMS7311 in heading chinese Cabbage", 《ACTA BOTANICA SINICA》 * |
| 许小勇: "大白菜CMS7311不育发生相关基因表达研究及育性恢复基因定位", 《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104561062A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-29 | 岭南师范学院 | 一种栽培稻种间杂种不育基因s1及其应用 |
| CN106434696A (zh) * | 2016-11-19 | 2017-02-22 | 西北农林科技大学 | 一个大白菜polCMS育性恢复基因及其检测方法和应用 |
| CN106434696B (zh) * | 2016-11-19 | 2022-02-08 | 西北农林科技大学 | 一个大白菜polCMS育性恢复基因及其检测方法和应用 |
| CN107312870A (zh) * | 2017-09-04 | 2017-11-03 | 河南省农业科学院园艺研究所 | 与辣椒不育恢复基因紧密连锁的分子标记、方法及应用 |
| CN107312870B (zh) * | 2017-09-04 | 2021-01-08 | 河南省农业科学院园艺研究所 | 与辣椒不育恢复基因紧密连锁的分子标记、方法及应用 |
| CN108913800A (zh) * | 2018-07-24 | 2018-11-30 | 信阳师范学院 | 一种白菜hau CMS不育胞质特异分子标记及其应用 |
| CN108913800B (zh) * | 2018-07-24 | 2021-12-28 | 信阳师范学院 | 一种白菜hau CMS不育胞质特异分子标记及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103981177B (zh) | 2016-08-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Collection and evaluation of genetic diversity and population structure of potato landraces and varieties in China | |
| Tanweer et al. | Current advance methods for the identification of blast resistance genes in rice | |
| Barchi et al. | A high-resolution, intraspecific linkage map of pepper (Capsicum annuum L.) and selection of reduced recombinant inbred line subsets for fast mapping | |
| CN104073487B (zh) | 水稻抗稻瘟病基因Pi2的分子标记及其应用 | |
| Foulongne-Oriol et al. | Comparative linkage mapping in the white button mushroom Agaricus bisporus provides foundation for breeding management | |
| CN104877996A (zh) | 簇毛麦6vs染色体特异性分子标记6vs-bh1及其用途 | |
| CN104152450B (zh) | 与黄瓜白粉病抗性主效基因共分离的InDel分子标记 | |
| CN104450932B (zh) | 稻瘟病抗性基因Pi2基因特异性分子标记Pi2SSR及其制备方法和应用 | |
| CN103981177A (zh) | 大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用 | |
| CN102220316B (zh) | 一种油菜雄性不育恢复基因分子标记的制备方法及应用 | |
| CN104178560A (zh) | 水稻柱头外露主效qtl位点的分子标记方法 | |
| Kanno et al. | Conversion of a male-specific RAPD marker into an STS marker in Asparagus officinalis L. | |
| CN105132570B (zh) | 一种辅助筛选抗条锈病小麦的引物组及其应用 | |
| Honma et al. | Molecular mapping of restorer-of-fertility 2 gene identified from a sugar beet (Beta vulgaris L. ssp. vulgaris) homozygous for the non-restoring restorer-of-fertility 1 allele | |
| Mihovilovich et al. | An RGA-derived SCAR marker linked to PLRV resistance from Solanum tuberosum ssp. andigena | |
| CN110499389B (zh) | 与烟草抗斑萎病位点rtsw紧密连锁的共显性标记引物、鉴别方法及其应用 | |
| CN105647920A (zh) | 基于番茄黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-3的InDel分子标记 | |
| Cao et al. | Inheritance and molecular mapping of an alien stripe-rust resistance gene from a wheat-Psathyrostachys huashanica translocation line | |
| CN105441544B (zh) | 利用snp和ssr技术共同筛选不结球白菜隐性核不育系育性相关分子标记的方法及应用 | |
| CN105176978B (zh) | 番茄黄化曲叶病抗病基因ty‑5的分子标记引物及其应用 | |
| CN103789419A (zh) | 鉴别水稻光温敏核不育基因p/tms12-1等位基因类型的共显性标记引物组及其应用 | |
| CN110499390B (zh) | 用于烟草抗斑萎病rtsw基因辅助选择的分子标记引物、辅助选择的方法及其应用 | |
| CN110551843B (zh) | 可区分烟草抗斑萎病位点rtsw纯合杂合基因型的共显性标记引物、区分方法及其应用 | |
| CN110184378B (zh) | 三裂棉细胞质雄性不育恢复基因的分子鉴定方法 | |
| CN103937890A (zh) | 一种鉴定稻瘟病抗性基因Pi-ta和Pi-b的多重PCR方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160817 |