CN103969367B - 一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 - Google Patents
一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103969367B CN103969367B CN201410187610.7A CN201410187610A CN103969367B CN 103969367 B CN103969367 B CN 103969367B CN 201410187610 A CN201410187610 A CN 201410187610A CN 103969367 B CN103969367 B CN 103969367B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blood clam
- polypeptide
- protein
- blood
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种毛蚶蛋白质的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，提供一种毛蚶蛋白质多肽的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测方法，具体涉及一种毛蚶蛋白质的鉴别方法，属药品技术领域。
技术背景
毛蚶肉含丰富的蛋白质、维生素及人体所必需的氨基酸，自古就有着食用、药用价值，《医林纂要》注“蚶肉补心血、散瘀血、除烦醒酒、破结消痰”，《日华子本草》注“蚶肉益血色”。近年来，研究报道显示毛蚶有抗肿瘤作用，具有清除体内自由基、提高机体免疫力的功效。毛蚶肉制剂对肺癌、肾癌、胃癌、肝癌等多种癌症具有较好的治疗作用，且安全性良好。
根据文献报道毛蚶蛋白质是毛蚶的主要生物活性成分之一，且富含人体所需的必需氨基酸，8种必需氨基酸占总氨基酸的36.5%。抗癌肽类具有很高的抗癌活性。现有文献动植物蛋白质的含量测定方法较多，但对动植物蛋白质的专属性报道很少，更未见对毛蚶蛋白质专属性鉴别方法的研究报道。无法在生产和使用中有效的保证产品质量，进而药品疗效得不到保证。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种毛蚶蛋白质多肽的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。
本发明是这样实现的：
一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，具体步骤如下：
色谱条件及***适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.01-0.10mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm；柱温：20-40℃；流速：0.1ml-1ml/min。理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于3000。
制备毛蚶多肽：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约5-20g的样品，加10-15倍水超声提取20-40min，离心5-15min，取上层液，滤过，滤液按体积分数50-70%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水5-10ml溶解，以0.5-2%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.5-2％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至20-100ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
测定：取毛蚶多肽供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
毛蚶多肽图谱中在保留时间15.6min左右有一尖锐的特征峰“峰S”，峰S保留时间差异应在±5%之内。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，色谱条件及***适应性优化为：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm；柱温：25℃；流速：0.4ml/min。理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于5000。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，制备毛蚶多肽优化为：
取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约10-12g，加10-12倍水超声提取30-35min，离心8-12min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60-65%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.8-1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至25-50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，制备毛蚶多肽进一步优化为：
毛蚶提取物溶液的制备取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物10g，加12倍水超声提取30min，离心10min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，测定优化为取毛蚶多肽供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，测定进一步优化为取毛蚶多肽试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，可用于毛蚶提取物各种制剂的鉴别。
上述的一种毛蚶多肽的鉴别方法，可用于魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝提取物及其各种制剂的鉴别。
本发明的有益效果在于：提供一种毛蚶多肽的鉴别方法，能准确的鉴别毛蚶近源物种魁蚶、泥蚶、扇贝、花蛤等来源的多肽。
下面通过试验例，进一步说明本发明的有益效果。
主要仪器与试药
岛津-20A高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱：TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）；流动相：0.05mol/l的磷酸盐缓冲液；柱温25℃；流速0.4ml/min；检测波长280nm；理论板数按蛋白质分子量100000计算为5000。
试验方法及结果
2.1方法分别制备毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多肽。
分别取干毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝肉，粉碎，过60目筛，加8倍量的水，加热提取2次，每次45分钟，合并提取液，过滤，取滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15（60℃）时，80℃以下，减压干燥，粉碎，分别制得毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝提取物。
分别取毛蚶提取物胶囊内容物、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒粉碎，分别得毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒粉。
分别制备多肽，分别取毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊粉、毛蚶提取物片剂粉、毛蚶提取物丸剂粉、毛蚶提取物颗粒粉、魁蚶肉提取物、泥蚶肉提取物、花蛤肉提取物、扇贝肉提取物10g，加12倍水超声提取30min，离心10min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，分别得毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多肽供试品。
分别取毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多肽供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
结果
不同多肽的图谱结果见表1。
表1不同多肽的图谱结果
注：tR：保留时间。
药材、毛蚶提取物结果发现，毛蚶肉、毛蚶提取物及其制剂样品HPLC图中均在保留时间15.6min左右有一尖锐的特征峰“峰S”（平均保留时间15.593min，RSD：1.3%），为毛蚶多肽样品所特有，可用于毛蚶肉、毛蚶提取物及制剂多糖的专属性鉴别；在取样量和处理过程一致的前提下，魁蚶色谱图（图4）中未出现峰S。在取样量和处理过程一致的前提下，泥蚶、花蛤和扇贝谱图（图5～图7）中与峰S对应保留时间范围内的其他色谱的峰高远远低于峰S，提示与峰S相关的蛋白质组分在这三种药材中含量极少，故也忽略不计。综上所述，峰S为毛蚶对照药材及海生素丸区别于其它药材的专属性色谱峰。
附图说明
图1：毛蚶肉HPLC图谱：图中峰S为毛蚶蛋白值多肽的特征峰，S峰的保留时间为15.587min。
图2：毛蚶提取物HPLC图谱：图中峰S为毛蚶蛋白质多肽的特征峰，S峰的保留时间为15.590min。
图3：毛蚶提取物胶囊HPLC图谱：图中峰S为毛蚶蛋白质多肽的特征峰，S峰的保留时间为15.602min。
图4：魁蚶HPLC图谱：图中魁蚶无毛蚶蛋白质多肽特征峰。
图5：泥蚶HPLC图谱：图中泥蚶无毛蚶蛋白质多肽特征峰。
图6：花蛤HPLC图谱：图中花蛤无毛蚶蛋白质多肽特征峰。
图7：扇贝HPLC图谱：图中扇贝无毛蚶蛋白质多肽特征峰。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
色谱条件及***适应性：用岛津-20A高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱：TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）；流动相：0.01mol/l的磷酸盐缓冲液；柱温22℃；流速0.1ml/min；检测波长280nm，理论板数按蛋白质分子量100000计算为5000。
制备毛蚶提取物：取毛蚶肉，破碎，过40目筛，加入1.5倍量水，在10℃以下搅拌提取4小时，提取液过滤，离心。取上述离心液冻干，得毛蚶提取物。
制备毛蚶多肽：取毛蚶提取物适量，研细，称取10g，加12倍水超声提取35min，离心8min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以0.5%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.8％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至25ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
取毛蚶多肽供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中在保留时间15.323min有一尖锐的特征峰“峰S”。
实施例2
色谱条件及***适应性试验：用岛津-20A高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱：TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）；流动相：0.05mol/l的磷酸盐缓冲液；柱温35℃；流速0.5ml/min；检测波长280nm，理论板数按蛋白质分子量100000计算为8000。
制备毛蚶提取物：取干毛蚶肉，粉碎，过80目筛，加10倍量的水，加热提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，取滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15（60℃）时，80℃以下，减压干燥，粉碎，得毛蚶提取物。
制备多肽：取毛蚶提取物制备的片剂研细，称取6g，含毛蚶提取物约5g，加50ml水超声提取20min，离心10min，取上层液，滤过，滤液按体积分数50%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水5ml溶解，以1.2%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用1％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
取毛蚶多肽供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中在保留时间15.847min有一尖锐的特征峰“峰S”。
实施例3
色谱条件及***适应性试验：用岛津-20A高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱：TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）；流动相：0.1mol/l的磷酸盐缓冲液；柱温40℃；流速1ml/min；检测波长280nm，理论板数按蛋白质分子量100000计算为7000。
取鲜毛蚶肉，破碎，过40目筛，加入1倍量水，在10℃以下搅拌提取4小时，提取液过滤，离心。取上述离心液冻干，得毛蚶提取物。
制备多肽：取毛蚶提取物制备的胶囊内容物研细，称取5.5g，含毛蚶提取物约5g，加12倍水超声提取40min，离心12min，取上层液，滤过，滤液按体积分数70%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水8ml溶解，以1.5%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用1.8％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至100ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
取毛蚶多肽供试品溶液40μl，注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中在保留时间15.652min有一尖锐的特征峰“峰S”。
实施例4：
按照实施例3中的毛蚶提取物制备方法指标毛蚶提取物。
制备多肽：取毛蚶提取物制备的颗粒剂研细，称取22g，含毛蚶提取物约20g，加15倍水超声提取30min，离心15min，取上层液，滤过，滤液按体积分数65%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水6ml溶解，以2%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用2％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至100ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
取毛蚶多肽供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中在保留时间15.247min有一尖锐的特征峰“峰S”。
实施例5：
按照实施例3中的毛蚶提取物制备方法制备毛蚶提取物。
制备多肽：取毛蚶提取物制备的丸剂研细，称取11g，含毛蚶提取物约10g，加13倍水超声提取1min，离心25min，取上层液，滤过，滤液按体积分数55%（w/v）加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水7ml溶解，以0.8%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析（用0.5％的BaCl2溶液检查硫酸根离子是否透析完全），将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
取毛蚶多肽供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中在保留时间15.692min有一尖锐的特征峰“峰S”。
Claims (6)
1.一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，具体步骤如下：
色谱条件及***适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.01-0.10mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm；柱温：20-40℃；流速：0.1ml-1ml/min；理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于3000；
制备毛蚶多肽：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物5-20g的样品，加10-15倍水超声提取20-40min，离心5-15min，取上层液，滤过，滤液按体积分数50-70%加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水5-10ml溶解，以0.5-2%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析，将透析膜内溶液转移至20-100ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品；
测定：取毛蚶多肽供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定；
毛蚶多肽图谱中在保留时间15.6min左右有一尖锐的特征峰“峰S”，峰S保留时间差异应在±5%之内。
2.根据权利要求1的一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于色谱条件及***适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm；柱温：25℃；流速：0.4ml/min；理论板数按蛋白质分子量100000计算应不低于5000。
3.根据权利要求1的一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多肽为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物10-12g，加10-12倍水超声提取30-35min，离心8-12min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60-65%加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析，将透析膜内溶液转移至25-50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
4.根据权利要求1或权利要求3的一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法其特征在于制备毛蚶多肽为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物10g，加12倍水超声提取30min，离心10min，取上层液，滤过，滤液按体积分数60%加入硫酸铵，0～4℃放置过夜，离心，取沉淀，加水10ml溶解，以1%的碳酸氢铵溶液为透析液，用截留分子量为3500的透析膜，0～4℃条件下充分透析，将透析膜内溶液转移至50ml量瓶内，用水定容，0～4℃保存，即得毛蚶多肽供试品。
5.根据权利要求1的一种毛蚶蛋白质多肽的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多肽供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。
6.根据权利要求1或权利要求5的一种毛蚶多肽的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多肽供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410187610.7A CN103969367B (zh) | 2014-05-06 | 2014-05-06 | 一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410187610.7A CN103969367B (zh) | 2014-05-06 | 2014-05-06 | 一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103969367A CN103969367A (zh) | 2014-08-06 |
| CN103969367B true CN103969367B (zh) | 2015-12-09 |
Family
ID=51239117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410187610.7A Active CN103969367B (zh) | 2014-05-06 | 2014-05-06 | 一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103969367B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104825496A (zh) * | 2015-04-19 | 2015-08-12 | 青岛大学 | 麻蚶子提取物及其在促进产后子宫收缩药物中的应用 |
| CN110618229B (zh) * | 2018-06-20 | 2022-10-28 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种蛋白的非还原肽图分析方法 |
-
2014
- 2014-05-06 CN CN201410187610.7A patent/CN103969367B/zh active Active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Fingerpr int Ana lysis of Anti2tumor Active Polypeptides from A rca subcrena ta by HPLC;REN Sheng-fang 等;《Journal of Chinese Medicinal Materials》;20080831;第31卷(第8期);1134-1138 * |
| HPLC无孔径载体柱用于快速分离蛋白质和多肽;张丽华等;《高技术通讯》;19951231(第2期);45-47 * |
| 反相液相色谱在蛋白质及多肽分离分析中的应用;朱晓囡等;《分析化学》;20040229;第32卷(第2期);248-254 * |
| 应用于蛋白质、多肽、氨基酸快速分离的不同孔径硅胶聚合物键合相;魏芸等;《分析测试技术与仪器》;19970630;第3卷(第2期);93-97 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103969367A (zh) | 2014-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103257188B (zh) | 一种复方血栓通制剂生物活性色谱指纹图谱的构建方法 | |
| CN101340921A (zh) | 一种预防或治疗血栓性疾病的提取物 | |
| CN103884811B (zh) | 一种生物色谱比较筛选***及其应用 | |
| CN102008533B (zh) | 一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法 | |
| CN106924406B (zh) | 一种用于治疗艾滋病的辅助用药的药物组合物及其制备方法 | |
| CN103969367B (zh) | 一种毛蚶蛋白质的鉴别方法 | |
| CN103387610B (zh) | 双离子交换层析分离纯化眼镜蛇神经毒蛋白的方法及制剂 | |
| CN102507834B (zh) | 一种八味沉香制剂的检测方法 | |
| CN102579734A (zh) | 骨愈灵中药组合物及其制备方法和检测方法 | |
| CN105572261A (zh) | 建立仙灵骨葆胶囊的指纹图谱的方法及其质量检测方法 | |
| CN103954704B (zh) | 一种毛蚶蛋白质的含量测定方法 | |
| CN102357231B (zh) | 一种复方藤果痔疮栓制剂的检测方法 | |
| CN104277086A (zh) | 一种半枝莲中野黄芩苷提取方法 | |
| CN102319420B (zh) | 甲鱼肽在制药中的应用 | |
| CN104297360B (zh) | 一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法 | |
| CN103954718B (zh) | 一种毛蚶多糖的鉴别方法 | |
| CN101816693A (zh) | 一种紫锥菊提取物散剂及其制备方法和应用 | |
| CN101433564B (zh) | 菱角提取物在制备治疗白血病药物中的应用 | |
| CN107389827A (zh) | 益母草或其复方制剂中盐酸水苏碱含量的测定方法 | |
| TW200940072A (en) | Pharmaceutical composition and extract of Poria for enhancing uptake of nutrients | |
| CN110568120B (zh) | 基于双物质成分的桑寄生质量控制方法 | |
| CN103969384B (zh) | 一种毛蚶多糖的含量测定方法 | |
| CN102641342A (zh) | 一种治疗肾病的中药提取物和制备方法 | |
| CN105377280B (zh) | 一种用于补血的药物及其制备方法 | |
| CN102631386A (zh) | 柴胡解热镇痛制剂及其制备工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 250014 81 thousand Buddha Shandong Road, Lixia District, Ji'nan, Shandong Patentee after: Shandong Zhonghong Kang Pharmaceutical Technology Development Co Ltd Address before: 250014 No. 4, West building, Shandong Academy of Sciences, 19 Shandong Road, Lixia Road, Lixia District, Shandong Patentee before: Jinan Kangzhong Medicin Science & Technology Co., Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |