CN103957903A - 用于治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法和组合物 - Google Patents

用于治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法和组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供了鉴别对抗血小板治疗有耐受性的对象的方法，所述治疗例如是采用氯吡格雷的治疗。所述方法包括确定所述对象是否为中链聚不饱和脂肪酸到长链聚不饱和脂肪酸的有效转化者。还提供了治疗对象对抗血小板治疗的耐受性的方法，所述对象为中链聚不饱和脂肪酸到长链聚不饱和脂肪酸的有效转化者，该方法包括向所述对象附加地施用有效量的包含ω-3长链聚不饱和脂肪酸的组合物。提供了抗血小板治疗的改进方法，其中改进包括附加地施用包含游离酸形式的ω-3长链聚不饱和脂肪酸的组合物。提供了包含至少一种抗血小板药剂和包含ω-3长链聚不饱和脂肪酸的组合物的剂型，所述组合物包括包含游离酸形式的ω-3长链聚不饱和脂肪酸的组合物。

Description

用于治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法和组合物
相关申请的交叉引用
根据35 U.S.C. § 119(e)，本申请要求2011年9月15日提交的美国临时申请No. 61/535,192和2011年10月21日提交的美国临时申请No. 61/549,907的权益，将这两篇临时申请的内容通过援引整体并入本文中。
2. 背景
氯吡格雷硫酸氢盐(Plavix®)是血小板聚集抑制剂，施用其以使具有心脏病、中风、外周动脉病变或急性冠状动脉综合症病史的患者免受致命性或非致命性的心脏病或中风。尽管其被广泛地应用并且是临床获益的，但已经观察到血小板对氯吡格列应答的重大个体性差异。Serebruany等, 2005, J. Am. Coll. Cardiol. 45(2):246-251。据估计，4%至30%的患者显示出“对氯吡格雷的耐受性”，即当用常规剂量的氯吡格雷治疗时，它们没有显示出充分的抗血小板应答。Nguyen等, 2005, J. Am. Coll. Cardiol. 45(8):1157-64。已经发现对氯吡格雷的耐受性增大了在患者的某些亚群中的复发心血管事件的风险。Nguyen等, 2005, J. Am. Coll. Cardiol. 45(8):1157-64; Matetzky et al., 2004, Circulation 109:3171-75。
已经发现编码肝细胞色素P450同工酶CYP2C19的基因中的多态性与健康对象和患有冠状动脉疾病或经历心脏介入术的患者对氯吡格雷的减弱的血小板响应有关。Hulot等, 2006, Blood 108(7):2244-47; Schulinder等, 2009, JAMA 302(8):849-858。在2C19基因中功能多态性的丧失与氯吡格雷到其活性代谢物的降低的转化以及更差的心血管结果有关。Schulinder等, 2009, JAMA 302(8):849-858; Pettersen 等, 2011, Thrombosis J. 9:4-11。考虑到CYP2C19中的遗传性变异是对氯吡格雷治疗的临床响应的重要预示是令人信服的证据，FDA已经发出警告，Plavix®可能已经降低了对弱代谢患者的效果。
Gladding等人的美国专利公开No. 2011/0045481和No. 2011/0060532记载了通过分析CYP2C19多态性预测或确定对象对抗血小板治疗的应答的方法，以及确定对象对与血小板聚集相关的疾病的治疗方案或介入的适应性的方法。Industry-University Cooperation Foundation Yonsei University的美国专利公开No. 2011/0159479记载了通过检测CYP2C19中的多态性预测人类对象对氯吡格雷的耐受性的方法。
然而，CYP基因中的多态性不是促成氯吡格雷耐受的唯一因素，因为一个研究发现没有CYP2C19*2多态性的22%患者是耐受性的，而具有多态性的约50%患者是响应者。Pettersen等., 2011, Thrombosis J. 9:4-11。
因此，对用于治疗需要抑制血小板聚集（“抗血小板治疗”）（如采用氯吡格雷的治疗和采用阿司匹林的治疗）的患者的组合物和方法存在需求，其提高了抗血小板治疗的效果，尤其是在耐受性对象中。
概述
本发明人已经发现升高的花生四烯酸("AA")的血浆水平与在对抗血小板治疗耐受的患者的亚群中对抗血小板治疗的耐受性有关；还发现在某些这样的患者中，升高的AA含量可以有助于提高中链聚不饱和脂肪酸(“mc-PUFA”)转化成长链聚不饱和脂肪酸(“lc-PUFA”)的能力；并且发现通过采用富含ω-3 lc-PUFA的组合物的治疗在这样的有效转化者中可以对抗血小板治疗的耐受性进行治疗、逆转、抑制或预防。下文中将更详细地描述，有效转化者是比非有效转化者的对象更有效地从饮食中链脂肪酸产生长链聚不饱和脂肪酸产物的对象。
本发明人已经进一步发现，包含游离酸形式的ω-3 lc-PUFA的组合物("n-3 FFA组合物")在降低的AA血浆含量中提供前所未有的功效。异常的功效使这样的n-3 FFA组合物被用于在使用临床相关剂量的有效转化者中治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性。高功效也使这样的n-3 FFA组合物能够在并非有效转化者的患者—具有升高的血浆AA含量的那些和具有平均AA血浆含量的那些—中以与辅助剂相同或更低的剂量施用于抗血小板治疗，其中n-3 FFA组合物的有效的AA-降低效果改善了几乎所有这样的患者中抗血小板治疗的效果。
因此，一方面提供了在为有效转化者并且对其而言抗血小板治疗是临床指示(clinically indicated)的对象中治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法。所述方法包括对所述对象施用有效量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物（“ω-3组合物”）。在某些实施方案中，所述方法进一步包括确定所述对象是否为有效转化者的在先步骤。
在某些实施方案中，确定所述对象是否为有效转化者包括在与选自FADS1, FADS2和FADS3的一种或多种的基因有关的一种或多种多态性方面确定所述对象的基因型。在各种实施方案中，确定所述对象是否为有效转化者包括测量来自所述对象的样品中的花生四烯酸的含量。
在典型的实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆中花生四烯酸(AA)浓度降低了至少约5%。在某些实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低了至少约10%。在一系列实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低了至少约20%。
在各种实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低了至少约50 µg/mL，甚至至少约75 µg/mL。
在各种实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25，并且在一些实施方案中，有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.50，甚至至少约0.65。
在某些实施方案中，所述聚不饱和脂肪酸以游离酸形式存在于所述组合物中（"n-3 FFA 组合物"）。在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少50% EPA，以所述组合物中所有脂肪酸的GC色谱图的面积计("50% (a/a)")。在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。在仍进一步的实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
在特定的实施方案中，ω-3组合物的量不大于4g/天。在特定的实施方案中，ω-3组合物的量不大于2 g/天。
另一方面，提供了对有需要的对象提供抗血小板治疗的方法。所述方法包括(a) 确定所述对象是否为有效转化者；和(b) 在被确定为有效转化者的那些对象中，附加地施用(i) 有效量的ω-3组合物，和(ii) 有效量的抗血小板药剂。
在相关方面，提供了对有需要的对象提供抗血小板治疗的改进方法，其中改进包括(a) 确定所述对象是否为有效转化者；和(b) 在被确定为mc-PUFA至lc-PUFA的有效转化者的那些对象中，附加地施用有效量的ω-3组合物。
在这些方法的各种实施方案中，确定所述对象是否为有效转化者包括在与选自FADS1、FADS2和FADS3的一种或多种基因有关的一种或多种多态性方面确定所述对象的基因型。在某些实施方案中，确定所述对象是否为有效转化者包括测量来自所述对象的样品中的花生四烯酸的含量。
这些方法的实施方案包括其中ω-3组合物的量有效地使血浆中的花生四烯酸(AA)浓度降低至少约5%、至少约10%和至少约20%的那些。在某些实施方案中，ω-3组合物的量能有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约50 µg/mL，甚至至少约75 µg/mL。在各种实施方案中，ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25、到至少约0.50、甚至到至少约0.65。
在目前优选的实施方案中，ω-3组合物为n-3 FFA组合物。在某些实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。在特定实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。在具体实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
在这些方法的实施方案中，ω-3组合物的量不大于4g/天。在特定的实施方案中，ω-3组合物的量不大于2 g/天。
在某些实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐或阿司匹林，或其组合。在特定实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
另一方面，提供了使用抗血小板药剂治疗患者的方法。所述方法包括(a) 施用治疗有效量的血小板聚集抑制剂；和(b) 附加地施用有效量的n-3 FFA组合物。在相关方面，提供了采用抗血小板治疗来治疗患者的改进方法，其中所述改进包括附加地施用有效量的n-3 FFA组合物。
在某些实施方案中，n-3 FFA组合物的量有效地将血浆中花生四烯酸(AA)的浓度降低了至少约5%、至少约10%、至少15%、至少20%、甚至至少25%。
在各种实施方案中，n-3 FFA组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低了至少约10 µg/mL、至少约15 µg/mL、至少约20 µg/mL、和至少约25 µg/mL。在特定实施方案中，n-3 FFA组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低了至少约50 µg/mL，甚至至少约75 µg/mL。
在某些实施方案中， n-3 FFA组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25、至少约0.50、甚至至少约0.65。
在目前优选的实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。在某种实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。在特定实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。在特定实施方案中，n-3 FFA组合物包含约55% EPA (a/a)、约20% DHA (a/a)、和约5% DPA (a/a)。
在一些实施方案中，所述方法包括施用不多于4g n-3 FFA组合物/天。在一些实施方案中，施用不多于2 g/天。
在典型的实施方案中，所述抗血小板药剂选自氯吡格雷硫酸氢盐和阿司匹林，并且在具体实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
在另一方面，提供了一种单位剂型。所述单位剂型包含ω-3组合物和抗血小板药剂两者。在典型的实施方案中，ω-3组合物包含在胶囊中，并且将该抗血小板药剂包衣在所述胶囊的外部。
在典型的实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐或阿司匹林。在具体实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
在各种实施方案中，在所述单位剂型中包囊至少0.5 g的ω-3组合物。在某些实施方案中，包囊至少1 g的ω-3组合物。
在目前优选的实施方案中，在所述单位剂型中包囊的ω-3组合物为n-3 FFA组合物。在典型的实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。在特定实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。在某些实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
在各种实施方案，并且尤其是在其中ω-3组合物为n-3 FFA组合物的实施方案中，单位剂型的胶囊为猪A型软明胶胶囊。
在某些实施方案中，所述胶囊进一步包含置于明胶和包含抗血小板药剂的包衣之间的包衣。在典型的此类实施方案中，该置于明胶和包含抗血小板药剂的包衣之间的包衣能够在37ºC体外含水介质中缓释n-3 FFA组合物至少30 min。在具体实施方案中，所述置于明胶和包含抗血小板药剂的包衣之间的包衣为中性聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯) 聚合物。
本公开的特征和优点将从附图和下文中其实施方案的详细描述而变得更清楚。
附图简述
图1示出在人体中饮食脂肪酸亚油酸（ω-6脂肪酸）和α-亚麻酸（ω-3脂肪酸）转化成长链聚不饱和脂肪酸(“lc-PUFA”)的已知代谢途径。
图2-24描绘了在实施例2中进一步描述的临床试验中对象的花生四烯酸(AA)血浆含量，在(A) 基线(以µg/mL计)和(B) 用n-3 FFA组合物（在本文下文中定义）治疗的第15天根据分别鉴定的SNP下的基因型分组（从基线开始的百分比变化）。对于各基因型，方块表示四分位差（interquartile）范围，四分位差方块的内部的水平线表示中值，菱形表示平均值。开环表示异常值（outlier）。横条(whisker)延伸至非异常值的最小值和最大值。分数1表示在主要等位基因是纯合的对象；分数3表示在次要等位基因是纯合的对象；并且分数2表示杂合体。
图25是在实施例2中进一步描述的试验中，对于SNP rs174537下的各基因型，基线和第15天AA含量(µg/mL)的柱状图。
图26是在Epanova®和华法林的相互作用的临床研究中，对于SNP rs174546下的各基因型，基线和治疗终点("EOT")的EPA含量(µg/mL)的柱状图，其中基线EPA为7个给药前血浆浓度值的平均值，对于华法林/Epanova分支(arm)而言，是第7天和第8天，对于Lovaza分支而言，是第-1天和第1天。治疗EPA的终点是3个给药前血浆浓度值的平均值，对于华法林/Epanova分支而言，是第18天、第19天和第20天，对于Lovaza分支，是第11天、第12天和第13天。
图27提供了在实施例3中进一步描述的阐明EVOLVE研究设计的治疗流程图。
图28更详细地概述了EVOLVE试验设计，进一步确定了研究访问的时间。
图29示出在EVOLVE试验中对象的安排过程。
图30A - 30E显示对于EVOLVE试验中的各治疗分支而言，对于EPA (图30A)、DHA (图30B)、DPA (图30C)和AA (图30D)的平均基线和治疗终点("EOT")血浆含量(以µg/mL计)。图30E比较了对于实施例3中描述的EVOLVE试验的各治疗分支、实施例3中描述的EVOLVE试验的对照（橄榄油）分支的平均基线和EOT EPA含量，以及在不相关的JELIS试验("JELIS")的文献中早期报道的值。
图31A - 31D绘制了对于EPA (图31A)、DHA (图31B)、DPA (图31C)和AA (图31D)而言的中值基线和治疗终点("EOT")血浆含量(以µg/mL计)的图。
图32A和32B绘制了对于EVOLVE试验的各治疗分支而言，在AA、DHA、EPA和DPA的绝对值血浆含量(以µg/mL计)中从基线到EOT变化的图，其中图32A绘制了平均值变化图，图32B示出从基线的中值变化。
图33A绘制了对于在EVOLVE试验的各治疗分支中的AA、DHA、EPA和DPA而言，从基线到EOT的平均值变化（作为基线值的百分比），其中图33B绘制了从基线到EOT的中值百分比变化图。
图34绘制了2g和4g剂量的EPANOVA的EPA、DHA、DPA和AA的血浆含量中，从基线开始的中值百分比变化速率（斜率的绝对值）。
具体描述
本发明人已经发现在对抗血小板治疗的耐受性的患者亚群中升高的花生四烯酸("AA")的血浆含量与对抗血小板治疗的耐受性有关；还发现在某些这样的患者中，升高的AA含量可以有助于提高中链聚不饱和脂肪酸(“mc-PUFA”)转化成长链聚不饱和脂肪酸(“lc-PUFA”)的能力；并且发现通过采用富含ω-3 lc-PUFA的组合物的治疗可以对这样的有效转化者治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性。下文中更详细描述的有效转化者是比并非有效转化者的对象更有效地从饮食中链脂肪酸产生长链聚不饱和脂肪酸产物的对象。
本发明人已经进一步发现，包含游离酸形式的ω-3 lc-PUFA的组合物("n-3 FFA组合物")提供了前所未有的降低AA血浆含量的功效。异常的功效使这样的n-3 FFA组合物能够用于在有效转化者中使用临床相关剂量治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性。高功效也使这样的n-3 FFA组合物能够在并非有效转化者的患者—具有升高的血浆AA含量的那些和具有平均AA血浆含量的那些—中以与辅助剂相同或更低的剂量施用于抗血小板治疗，其中n-3 FFA组合物的有效的AA-降低效果改善了几乎所有这样的患者中抗血小板治疗的效果。
5.1. 确定“有效转化者”身份
因此，在第一方面，本文中提供了用于鉴别对（或将证明对）抗血小板治疗（例如用氯吡格雷或阿司匹林的治疗）耐受的对象的方法。所述方法包括在对其而言血小板治疗为临床指示的对象中，确定所述对象是否为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者。有效转化者身份可以是表型地、基因型地或通过合并表型和基因型的确定而确定。
本文中使用的术语“聚不饱和脂肪酸”是指具有下式的化合物：
其中R代表具有两个或更多个双键的C18至C24碳链。mc-PUFA是具有最高达18个碳的碳链(R)的脂肪酸。lc-PUFA是具有20个或更多个碳的碳链(R)的脂肪酸。聚不饱和脂肪酸可以表示为“Ca:b”，其中“a”为表示碳原子总数的整数，“b”为表示碳链中双键数的整数。
在本文中的两个系列的聚不饱和脂肪酸是相关的： ω-3聚不饱和脂肪酸和ω-6聚不饱和脂肪酸。本文中使用的术语“ω-3脂肪酸”或“ω-3 PUFA”是指其中第一双键位于碳链(R)中第三个碳之后的聚不饱和脂肪酸，从R的游离甲基端编号。ω-3脂肪酸也可以命名为“n-3”或“ω-3”脂肪酸。本文中使用的术语“ω-6脂肪酸”是指其中第一双键位于碳链(R)中第六个碳之后的聚不饱和脂肪酸，从R的游离甲基端计数。ω-6脂肪酸也可以称为“n-6”或“ω-6”脂肪酸。
lc-PUFA直接从饮食获得并且也从某些必要的mc-PUFA代谢合成。参照图1，中链C18:2 ω-6脂肪酸亚油酸("LA")充当合成C20:4 ω-6花生四烯酸("AA")的前体，并且中链C18:3 ω-3脂肪酸α-亚麻酸("ALA")充当合成C20:5 ω-3 lc-PUFA二十碳五烯酸("EPA")的前体。如图1中所示，lc-PUFA的合成通过特定延长酶和去饱和酶催化的延长和去饱和步骤进行。
如本文中使用的，术语“有效转化者”是指比平均个体更有效地从mc-PUFA前体合成lc-PUFA产物的个体。有效转化者身份可以表型地、通过评价酶转化有效性的一个或多个测量值、基因型地、或通过确定表型和基因型确定。
5.1.1. 通过表型确定
由于在mc-PUFA至lc-PUFA的生物合成转化中提高的酶促效果，因此有效的转化者具有lc-PUFA产物到相应的mc-PUFA前体的更高的比率（相反地，mc-PUFA前体到相应的lc-PUFA产物的更低的比率），并且有时还将具有比并非有效转化者的个体更高的lc-PUFA产物的绝对值含量。有效转化者身份的表型确定因此可以通过确定并比较mc-PUFA前体与相应的lc-PUFA产物的含量，通过确定lc-PUFA产物的绝对值含量，通过确定并比较ω-6和ω-3 lc-PUFA的含量和/或通过确定ω-3指数（下文定义）进行。由于ω-6和ω-3脂肪酸合成路线都有延长酶和去饱和酶（见图1），因此有效的转化者身份的表型确定可以通过确定ω-6 mc-PUFA前体和其lc-PUFA产物、ω-3 mc-PUFA前体和其lc-PUFA产物的含量或这两者进行。在典型的实施方案中，表型确定通过测量ω-6系列中的产物和前体进行。
饮食脂肪酸到AA、EPA和其他lc-PUFA的转化中的速率限制酶为Δ5-和Δ6-脂肪酸去饱和酶，其分别通过人类染色体11q12-13上的脂肪酸去饱和酶(FADS) 1和脂肪酸去饱和酶(FADS) 2基因编码（见图1）。在某些实施方案中，因此Δ5-和Δ6-脂肪酸去饱和酶之一或两者的更有效活性赋予了有效转化者表型。
因此，在某些实施方案中，有效转化者身份通过确定并比较产物与前体的含量而有效地确定，其中Δ5-和Δ6-脂肪酸去饱和酶的至少之一是测量的前体到测量的产物的合成转化所需要的。在一些实施方案中，例如可以通过测量并比较Δ5-脂肪酸去饱和酶产物AA和其立即的Δ5-脂肪酸去饱和酶前体二高-γ-亚麻酸(C20:3 n-6) ("DGLA")确定身份。在某些实施方案中，测量lc-PUFA产物AA并将其与生物合成途径中较早的前体如γ-亚麻酸("GLA")和/或亚油酸("LA")的含量比较。在某些实施方案中，有效的转化者身份可以通过测量和比较Δ6-去饱和酶脂肪酸产物GLA和其直接的Δ6-脂肪酸去饱和酶前体LA的含量有效地确定。
在ω-3系列中，替代性地或附加地可以进行类似的确定。因此，在一些实施方案中，所测量的产物：前体比率是EPA与二十碳四烯酸(C20:4 n-3) ("ETA")的比率。在一些实施方案中，所测量的产物：前体比率是EPA与十八碳四烯酸(C18:4 n-3) ("STA")的比率。在一些实施方案中，所测量的产物：前体比率是EPA与α-亚麻酸(C18:3 n-3) ("ALA")的比率。在一些实施方案中，所测量的产物：前体比率是STA对ALA的比率。
在某些实施方案中，如果产物对前体比率大于1，则对象鉴定为有效转化者。因此，在一些实施方案中，如果对象的产物：前体比率为至少约1.5:1, 至少约2:1, 至少约2.5:1, 至少约3:1, 至少约3.5:1, 至少约4:1, 至少约4.5:1, 至少约5:1, 至少约5.5:1, 至少约6:1, 至少约6.5:1, 至少约7:1, 至少约7.5:1, 至少约8:1, 至少约8.5:1, 至少约9:1, 至少约9.5:1 至少约10:1, 至少约11:1, 至少约12:1, 至少约13:1, 至少约14:1, 或至少约15:1，则对象确定为有效转化者。在某些实施方案中，如果产物：前体比率在任何前述值之间的范围内例如2-6.5、5-10、6-8.5等，则所述对象被确定为有效转化者。在某些实施方案中，如果产物：前体比率为至少约6:1, 至少约6.5:1, 至少约7:1, 至少约7.5:1, 至少约8:1, 至少约8.5:1, 至少约9:1, 至少约9.5:1, 至少约10:1, 至少约11:1, 至少约12:1, 至少约12:1, 至少约13:1, 至少约14:1, 或至少约15:1，则对象被鉴定为有效转化者。
在各种实施方案中，通过测量有效转化者组织中的脂肪酸前体对产物比率（“前体：产物比率”）来确定对象为有效转化者。因此，在一些实施方案中，所测量的前体：产物比率是DGLA：AA的比率。在其他实施方案中，所测量的前体：产物比率是LA：GLA的比率。在其他实施方案中，所测量的前体：产物比率是LA：AA的比率。在其他实施方案中，所测量的前体：产物比率是GLA：AA的比率。在各种实施方案中，所测量的前体：产物比率是ETA：EPA的比率。在一些实施方案中，所测量的前体：产物比率是ALA：STA的比率。在一些实施方案中，所测量的前体：产物比率是ALA：EPA的比率。在一些实施方案中，所测量的前体：产物比率是STA：EPA的比率。
在某些实施方案中，如果前体：产物比率小于1，则对象被鉴定为有效转化者。因此，在一些实施方案中，如果前体：产物比率为至少约1:1.5，至少约1:2，至少约1:2.5，至少约1:3，至少约1:3.5，至少约1:4，至少约1:4.5，至少约1:5，至少约1:5.5, 至少约1:6，至少约1:6.5，至少约1:7，至少约1:7.5，至少约1:8, 至少约1:8.5，至少约1:9，至少约1:9.5，至少约1:10，至少约1:11，至少约1:12，至少约1:13，至少约1:14, 或至少约1:15，则对象被确定为有效转化者。在某些实施方案中，如果前体：产物比率在任何上述值之间的范围内则所述对象被确定为有效转化者。在某些实施方案中，如果前体：产物比率为至少约1:6，至少约1:6.5，至少约1:7，至少约1:7.5，至少约1:8，至少约1:8.5，至少约1:9，至少约1:9.5，至少约1:10，至少约1:11，至少约1:12，至少约1:13，至少约1:14，或至少约1:15，则对象被鉴定为有效转化者。
在某些实施方案中，通过测量在对象的一种或多种组织（例如全血、红血细胞、血浆或血清）中AA的绝对值含量，确定对象为有效转化者。在各种实施方案中，如果AA在一种或多种组织中以相应的组织中的总脂肪酸重量的大于约5%，大于约6%，大于约7%，大于约8%，大于约9%，大于约10%，大于约11%，大于约12%，大于约13%，大于约14%或大于约15%的量存在，则对象被鉴定为有效转化者。在各种实施方案中，如果AA在所述组织中以所述组织中总脂肪酸重量的约10%或更大的量存在，则对象被确定为有效转化者。
尽管在ω-3和ω-6系列中都将存在mc-PUFA至lc-PUFA的转化效率的提高，但有效的转化表型将通常突出ω-3和ω-3 PUFA及其相应前体的饮食消耗中的差异导致的EPA和AA含量的差异。因此，在一些实施方案中，通过EPA:AA比率，鉴定对象为有效转化者。在这些实施方案中，如果EPA:AA比率小于约1:10 (0.10)，则鉴定对象为有效转化者。因此，在某些实施方案中，如果EPA:AA比率小于约1:15、小于约1:20、并甚至更低，则鉴定所述对象为有效转化者。
在某些实施方案中，通过ω-3指数鉴定对象为有效转化者。本文中使用的术语“ω-3指数”是指在红血细胞样品中EPA和DHA的量，其表示成红血细胞样品中总脂肪酸的百分比。因此，在一些实施方案中，如果ω-3指数为总脂肪酸的小于约8%，小于约7.5%，小于约7%，小于约6.5%，小于约6%，小于约5.5%，小于约5%，小于约4.5%，小于约4%，小于约3.5%，小于约3%，小于约2.5%，小于约2%，小于约1.5%或小于约1%，则确定对象为有效转化者。在特定实施方案中，如果ω-3指数小于约总脂肪酸的约4%，则鉴定所述对象为有效转化者。在某些实施方案中，如果ω-3指数的范围在任何上述值之间，则所述对象被确定为有效转化者。
脂肪酸含量可以在任何身体样品中测量，包括但不限于全血、血浆、血清、红血细胞膜或脂肪组织的样品。在一些实施方案中，特定脂肪酸的量表示成样品中总脂肪酸的百分比。可以通过本领域中已知的任何方法测量脂肪酸含量。在某些实施方案中，通过色谱法测量脂肪酸含量，包括但不限于气相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法。在其他实施方案中，通过光谱法包括但不限于核磁共振法和傅里叶变换红外光谱法测量脂肪酸含量。
5.1.2. 通过基因型确定
分别通过人类染色体11q12-13上的脂肪酸去饱和酶(FADS) 1和脂肪酸去饱和酶(FADS) 2基因编码Δ5-和Δ6-脂肪酸去饱和酶（参见图1）。本文中使用的术语“脂肪酸去饱和酶基因”或“FADS”是指编码人类或非人类动物中合成lc-PUFA所必需的脂肪酸去饱和酶蛋白的基因。脂肪酸去饱和酶基因包括人类FADS基因FADS 1，其编码Δ5去饱和酶 (基因库登录号NM_013402.4)；FADS 2，其编码Δ6-去饱和酶(基因库登录号NM_004265.2) 和FADS 3 (基因库登录号NM_021727.3)。非人类动物的脂肪酸去饱和酶基因和酶可从基因库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)容易地确定。
某些有效转化者在导致mc-PUFA至lc-PUFA的更有效转化的一种或多种脂肪酸去饱和酶基因中具有一种或多种多态性。参见图1，在一些实施方案中，所述多态性在编码Δ6-去饱和酶的FADS2基因中，并导致LA到γ-亚麻酸("GLA")的更有效转化和/或ALA到STA的更有效转化。在其他实施方案中，所述多态性在编码Δ5-去饱和酶的FADS1基因中，并导致DGLA到AA的更有效转化和/或二十碳四烯酸到EPA的更有效转化。
本文中使用的“脂肪酸去饱和酶基因中的”多态性可以为基因的编码区域（内含子）中或基因调节区域上游或下游的多态性。在实施方案中，所述多态性为单核苷酸多态性("SNP")。当特异性等位基因变体在本文中未指定时，则SNP是指次要变体（即在总体中具有最少普遍性的等位基因）。
如下文的实施例2中更加详细讨论的，在这些单核苷酸多态性位点的某些处的基因型与更高的基线AA含量一致，并且还与对用包含ω-3 PUFA的药学组合物治疗AA血浆含量提高的应答能力一致。
如图2A中所示，例如在Fads1 SNP rs174537 (基因型: GG)次要等位基因为纯合的对象具有更高的中值和平均值基线AA含量，并因此具有对抗血小板治疗耐受的更大的潜力。如图2B中所示，在用n-3 FFA组合物治疗两周之后，相比于其他基因型，这些个体具有更大的AA含量的百分比降低。绝对值基线和EOT含量显示于图25中。对于Fads1 SNPs rs174554 (图3A和3B)、rs174546 (图4A和4B)、和rs102275 (图5A和5B)观察到类似的结果。如在实施例2中进一步讨论的和在图6A中所示的，在Fads2 SNP rs174568 (基因型: CC)次要等位基因为纯合的对象具有更高的中值和平均值基线AA含量，并因此具有对抗血小板治疗耐受的更大的潜力。如图6B中所示，相比于其他基因型，采用n-3 FFA组合物治疗，这些个体具有更大的AA含量的百分比降低。针对Fads2 SNP rs1535 (图7A和7B)和rs174583 (Fads2内合子) (图8A和8B)观察到类似的结果。
图12(rs174575, FADS2)和图13 (rs174579, FADS2)表明对于某些SNP，对主要等位基因而不是次要等位基因为纯合的对象具有更高的平均值和中值基线AA含量。与杂合体或在次要等位基因为纯合的那些（其中基线血浆含量较低的那些基因型）的血浆含量相比，在这两种多态性位点处主要等位基因为纯合的个体中AA的血浆含量对用n-3 FFA组合物的14天治疗应答性更强。
对于其它SNP，对基线和治疗后AA含量的基因型贡献在变化，如图14 - 24中所示。
因此，在某些实施方案中，基因型地有效地确定有效转化者身份，例如通过确定与在基线处增大的花生四烯酸含量相关的一种或多种多态性的存在。在各种实施方案中，通过确定从mc-PUFA到lc-PUFA的生物合成途径中一种或多种去饱和酶的酶促效果的增加相关的一种或多种多态性的存在有效地确定有效转化者身份。
在某些实施方案中，在赋予有效转化者表型的多态性位点的等位基因为次要等位基因。在某些实施方案中，在赋予有效转化者表型的多态性位点的等位基因为主要等位基因。在各种实施方案中，多态性是在FADS1基因中的SNP，例如rs174537、rs174554、rs174546、或rs102275。在一些实施方案中，多态性是在FADS2基因中的SNP，如rs174568或rs1535。在一些实施方案中，多态性为SNP，如rs174556、rs174549、rs174555、rs174556、rs174576、rs174579、rs968567、rs173534、rs174567，或图2-24中确认的那些。在人类和非人类动物的FADS1和FADS2基因中发现的其他单核苷酸多态性可以在NCBI SNP数据库“dbSNP”中找到，可以在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/上获得。
多态性，包括单核苷酸多态性，可以通过本领域中已知的任何方法在样品，例如含有成核血细胞的样品中，检测到。检测SNP的方法包括DNA测序；需要引物或探针的等位基因特异性杂交（例如动态等位基因特异性杂交(DASH)）、使用分子信标和SNP微数列（例如Affymetrix Human SNP Array 6.0）的方法；核苷酸等位基因特异性并入与多态性紧密结合或与其相邻的引物（“单碱基延伸”或“微测序”）、寡核苷酸的等位基因特异性（连接链式反应或连接挂锁探针）、通过限制性内切酶或化学或其他试剂得到的寡核苷酸或PCR产物的等位基因特异性***（限制性片段长度多态性分析或RFLP）、由于结构特异性酶包括侵入式结构特异性酶导致的电泳或色谱迁移率中或质谱分析仪中等位基因相关的差异性解析。还可以使用氨基酸变化的分析 ，其中SNP在编码区域中并导致氨基酸改变。
5.1.3. 通过表型和基因型二者确定
在某些实施方案中，通过表型和基因型确定来鉴定对象为有效转化者，如上所述。
在某些实施方案中，例如通过确定AA:DGLA比率和通过检测在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs174554、rs174546、rs102275、rs174568、rs1535、和rs174583或其组合。在一些实施方案中，通过确定AA:DGLA比率和通过借助于基因型分型检测（genotyping）在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs102275、rs174546、rs174556、rs1535、rs174576、rs174579、rs968567、rs173534、rs174549、rs174555、rs174556、rs174568、rs174567和其组合。在特定实施方案中，AA:DGLA比率大于约6。
在某些实施方案中，通过确定在对象的体组织中的AA的绝对值含量和通过检测在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs174554、rs174546、rs102275、rs174568、rs1535、和rs174583或其组合。在一些实施方案中，通过确定在体组织中的AA含量和通过检测在脂肪酸去饱和酶基因中在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs102275、rs174546、rs174556、rs1535、rs174576、rs174579、rs968567、rs173534、rs174549、rs174555、rs174556、rs174568、rs174567和其组合。在特定实施方案中，所述AA含量为所述样品中总脂肪酸的大于约10重量%。
在其他实施方案中，通过确定EPA:AA比率和通过检测有效转化者等位基因在SNP位点的存在鉴定对象为有效转化者，所述SNP位点选自rs174537、rs174554、rs174546、rs102275、rs174568、rs1535、和rs174583或其组合。在一些实施方案中，通过确定EPA:AA比率和通过检测在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs102275、rs174546、rs174556、rs1535、rs174576、rs174579、rs968567、rs173534、rs174549、rs174555、rs174556、rs174568、rs174567和其组合。在某些实施方案中，EPA:AA比率小于约0.10。
在其他实施方案中，通过确定ω-3指数和通过检测在单核苷酸多态性位点存在有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点选自rs174537、rs174554、rs174546、rs102275、rs174568、rs1535、和rs174583或其组合。在一些实施方案中，通过确定ω-3指数和通过借助于基因型分型检测在单核苷酸多态性位点的有效转化者等位基因鉴定对象为有效转化者，所述单核苷酸多态性位点基因选自rs174537、rs102275、rs174546、rs174556、rs1535、rs174576、rs174579、rs968567、rs173534、rs174549、rs174555、rs174556、rs174568、rs174567和其组合。在特定实施方案中，如果ω-3指数小于总脂肪酸的约4%，则所述对象被鉴定为有效转化者。
5.2. 治疗方法
5.2.1. 在有效转化者中治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法
如上文所述和下文实施例2中详细讨论的，和如图2 – 25中进一步示例的，具有与升高的血浆花生四烯酸含量相关的基因型的对象也具有对血浆花生四烯酸含量增强的应答能力以采用包含ω-3 PUFA的药物组合物治疗。
因此，在其他方面，本文中提供了用于治疗、逆转、抑制或预防对象对抗血小板治疗的耐受性的方法，所述对象为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者并且对其而言抗血小板治疗是临床指示的。所述方法包括对已经被确定为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者并且对其而言抗血小板治疗是临床指示的对象施用有效治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物（“ω-3组合物”）。
在典型的实施方案中，根据上述方法确定对象为有效转化者。在某些实施方案中，所述方法进一步包括确定所述对象是否具有弱氯吡格雷代谢基因型。如本文中使用的，具有“弱氯吡格雷代谢基因型”的对象是指在编码赋予弱氯吡格雷代谢表型的细胞色素P450同工酶基因的基因中具有多态性的对象。在某些实施方案中，所述基因编码选自CYP2C19、CYP3A5、CYP2C9和CYP2B6的细胞色素P450同工酶。在特定实施方案中，所述多态性为选自rs4244285、rs4986893、rs28399504、rs12248560、rs776746、rs1057910、rs3745274和其组合的单核苷酸多态性。
在下文的第5.3节中描述了适合用于所述方法的包含ω-3 lc PUFA的组合物。在下文第5.2.4节中描述了使用的有效量，并在下文第5.2.5节中描述了剂量安排。
5.2.2. 采用抗血小板疗法治疗有效转化者的方法
另一方面，提供了用于对有需要的对象提供抗血小板治疗的方法，包括(a) 确定所述对象是否为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者，和(b) 在被确定为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者的那些对象中，附加地施用(i) 有效治疗、逆转、或预防对抗血小板治疗的耐受性的量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物，和(ii) 有效量的抗血小板药剂。
在其他方面中，提供了对有需要的患者提供抗血小板治疗的改进方法。所述改进包括确定所述对象是否为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者，和在被确定为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者的那些对象中，附加地施用有效治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物。
在典型的实施方案中，根据上述方法确定对象为有效转化者。在某些实施方案中，所述方法进一步包括确定所述对象是否具有弱氯吡格雷代谢基因型。如本文中使用的，具有“弱氯吡格雷代谢基因型”的对象是指在编码赋予弱氯吡格雷代谢表型的细胞色素P450同工酶基因的基因中具有多态性的对象。在某些实施方案中，所述基因编码选自CYP2C19、CYP3A5、CYP2C9和CYP2B6的细胞色素P450同工酶。在特定实施方案中，所述多态性为选自rs4244285、rs4986893、rs28399504、rs12248560、rs776746、rs1057910、rs3745274和其组合的单核苷酸多态性。
在下文的第5.3节描述了适合用于所述方法的包含ω-3 lc PUFA的组合物。在某些实施方案中，包含ω-3 lc-PUFA的组合物包含在第5.3.4节中描述的类型的双剂型中。在下文第5.2.4节中描述了包含lc-ω-3 PUFA和抗血小板药剂的有效量的组合物，并且在下文第5.2.5 节中描述了剂量安排。
包含ω-3 lc-PUFA的组合物伴随或附加于有效量的抗血小板治疗施用。对于“伴随”或“附加于”施用，意指在某一时间施用包含ω-3 lc-PUFA的组合物并持续一段时间，从而足以确保血浆AA含量降低并且同时在血液中存在抗血小板药剂。因此，可以与施用抗血小板治疗的同时施用ω-3 lc-PUFA的组合物，并且可以在抗血小板治疗停止之前和/或持续到抗血小板治疗停止之后开始。
本文中使用的术语“抗血小板治疗”或“血小板抑制剂治疗”是指干扰血小板聚集能力的一种或多种药剂的施用。
用于抗血小板治疗的药剂（“抗血小板药剂”）是已知的。在某些实施方案中，抗血小板治疗药剂是二磷酸腺苷(ADP)受体抑制剂，例如氯吡格雷(Plavix®)、噻氯吡啶(Ticlid®)、普拉格雷(Effient®)、和替卡格雷(Brilinta®); 磷酸二酯酶抑制剂，例如西洛他唑(Pletal®); 糖蛋白IIb/IIIa抑制剂，例如阿昔单抗(ReoPro®)、依替巴肽(Integrilin®)和替罗非班(Aggrastat®)。在各种实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为腺苷再摄取抑制剂，例如双嘧达莫(Persantine®)；凝血噁烷抑制剂，例如凝血噁烷合酶抑制剂或凝血噁烷受体拮抗剂例如terutroban，和其组合。
在某些实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为非甾族抗炎性药物，选自阿司匹林、阿洛普令、贝诺酯、二氟尼柳、乙水杨胺、水杨酸镁、水杨酸甲酯、双水杨酯、水杨苷、水杨酰胺、水杨酸钠、芳基烷酸类、醋氯芬酸、乙酰氯酚酸、阿西美辛、阿氯芬酸、溴酚酸、依托度酸、吲哚美辛、吲哚美辛法尼酯（indometacin farnesil）、纳布美通（mabumetone）、奥沙美辛、丙谷美辛、舒林酸、托美丁、布洛芬、阿明洛芬、苯噁洛芬、卡洛芬、右部洛芬、右酮洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟诺洛芬、 氟比洛芬、异丁普生、吲哚洛芬、酮洛芬、酮咯酸、氯索洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡洛芬、舒洛芬、tarenflurbil、噻洛芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、甲氧芬那酸、托芬那酸、保泰松、氨基安替比林、阿扎丙宗、氯非宗、凯布宗、安乃近、莫非布宗、羟布宗、安替比林、磺吡酮、吡罗昔康、屈噁昔康、氯诺昔康、美洛昔康、替诺昔康、安吡昔康、塞来考昔、地拉昔布、艾托考昔、非罗考昔、芦米考昔、帕瑞考昔、罗非考昔、伐地考昔、尼美舒利、耐普西诺（naproxcinod）、氟丙喹宗、及其组合。
在特定实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷。在一些实施方案中，所述抗血小板药剂为阿司匹林。在某些实施方案，所述抗血小板药剂为氯吡格雷和阿司匹林的组合。
采用抗血小板治疗或对其而言抗血小板治疗是有临床指示的对象可能遭受导致血管损伤的一种或多种临床指示。
因此，在某些实施方案中，所述方法包括(a) 确定遭受导致血管损伤的一种或多种临床指示的对象是否为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者，和(b) 在被确定为mc-PUFA到lc-PUFA的有效转化者的那些对象中，附加地施用(i) 有效治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物和(ii) 有效量的抗血小板药剂。
在一些实施方案中，例如所述方法包括确定对象是否具有临床指示，所述临床指示选自急性冠状动脉综合症(“ACS”)，包括非-ST-段抬高ACS（不稳定性心绞痛/非-ST-段抬高心肌梗死(NSTEMI)）和急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)、动脉硬化血管疾病、心肌梗死(MI)、脑血管意外事件，例如近期中风(recent stroke)和确立的外周动脉阻塞性疾病。
在某些实施方案中，所述方法包括确定对象是否具有选自如下的临床指示：短暂性脑缺血、冠状血管形成术、支架植入术、下肢动脉移植、颈动脉内膜切除术、冠状动脉旁路、心房纤颤、心瓣膜置换术的手术后血栓栓塞并发症、继发于骨髓及外骨髓增生性疾病的凝血细胞增多症、和间歇性跛行。在某些实施方案中，所述对象具有发生心血管疾病的高危险。
5.2.3. 抑制血小板聚集的改进方法
如实施例3中进一步描述的，本发明人已经发现，包含游离酸形式的lc-ω-3 PUFA的组合物("n-3 FFA组合物")在降低AA血浆含量中提供了前所未有的功效。异常的功效使这样的n-3 FFA组合物能够用来不仅治疗、逆转、抑制或预防有效转化的对抗血小板治疗的耐受性，还另外使这样的n-3 FFA组合物能够以与辅助剂相同或更低的剂量施用以辅助在并非有效转化者—包括具有升高的血浆AA含量的那些和具有平均值AA血浆含量的那些—的患者中进行抗血小板治疗，其中n-3 FFA组合物的有效AA降低效果在几乎所有此类患者中改善了抗血小板治疗的效果。
因此，另一方面，提供了用抗血小板药剂治疗患者的改进方法，其中所述改进包括以足以改进抗血小板治疗功效的量附加地施用n-3 FFA组合物。在相关方面，提供了采用抗血小板药剂治疗患者的方法。所述方法包括(a) 施用治疗有效量的血小板聚集抑制剂；和(b) 附加地施用有效改善抗血小板治疗的效果的量的n-3 FFA组合物。
适合在这个分段中描述的方法中使用的n-3 FFA组合物在第5.3.2节中描述。在某些实施方案中，n-3 FFA组合物包含在第5.3.4节中描述的类型的双剂型中。在第5.2.4节中描述了有效量的n-3 FFA和抗血小板药剂。在第5.2.5节中描述了n-3 FFA组合物剂量安排。
n-3 FFA组合物伴随或附加于有效量的抗血小板治疗施用。在某些实施方案中，抗血小板治疗药剂是二磷酸腺苷(ADP)受体抑制剂，如氯吡格雷(Plavix®)、噻氯吡啶(Ticlid®)、普拉格雷(Effient®)、和替卡格雷(Brilinta®); 磷酸二酯酶抑制剂如西洛他唑(Pletal®); 糖蛋白IIb/IIIa抑制剂，如阿昔单抗(ReoPro®)、依替巴肽(Integrilin®)和替罗非班(Aggrastat®)。在各种实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为腺苷再摄取抑制剂，如双嘧达莫(Persantine®); 凝血噁烷抑制剂，例如凝血噁烷合酶抑制剂或凝血噁烷受体拮抗剂如terutroban，和其组合。
在某些实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为非甾族抗炎性药物，选自阿司匹林、阿洛普令、贝诺酯、二氟尼柳、乙水杨胺、水杨酸镁、水杨酸甲酯、双水杨酯、水杨苷、水杨酰胺、水杨酸钠、芳基烷酸类、醋氯芬酸、乙酰氯酚酸、阿西美辛、阿氯芬酸、溴酚酸、依托度酸、吲哚美辛、吲哚美辛法尼酯（indometacin farnesil）、纳布美通（mabumetone）、奥沙美辛、丙谷美辛、舒林酸、托美丁、布洛芬、阿明洛芬、苯噁洛芬、卡洛芬、右部洛芬、右酮洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟诺洛芬、 氟比洛芬、异丁普生、吲哚洛芬、酮洛芬、酮咯酸、氯索洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡洛芬、舒洛芬、tarenflurbil、噻洛芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、甲氧芬那酸、托芬那酸、保泰松、氨基安替比林、阿扎丙宗、氯非宗、凯布宗、安乃近、莫非布宗、羟布宗、安替比林、磺吡酮、吡罗昔康、屈噁昔康、氯诺昔康、美洛昔康、替诺昔康、安吡昔康、塞来考昔、地拉昔布、艾托考昔、非罗考昔、芦米考昔、帕瑞考昔、罗非考昔、伐地考昔、尼美舒利、耐普西诺（naproxcinod）、氟丙喹宗、及其组合。
在特定实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷。在一些实施方案中，所述抗血小板药剂为阿司匹林。在某些实施方案，所述抗血小板药剂为氯吡格雷和阿司匹林的组合。
在某些实施方案中，施用有效地使血浆花生四烯酸含量降低了至少5%（与施用前的含量相比）的量的n-3 FFA组合物。在一些实施方案中，所述量有效地将血浆AA含量降低了至少10%、15%、甚至至少20%、25%或更多。在某些实施方案，包含ω-3 lc-PUFA的组合物的量足以将血浆AA降低到并非对抗血小板治疗耐受的个体的平均值。在各种实施方案中，施加有效地将血浆花生四烯酸含量降低了至少25 µg/mL，至少50 µg/mL，至少75 µg/mL，甚至至少100 µg/mL的量的n-3 FFA组合物。在各种实施方案中，以足以提供至少约0.30、至少约0.40、至少约0.50、至少约0.60、至少约0.65、甚至至少约0.70的EPA/AA比例的量施用n-3 FFA组合物。
5.2.4. 有效量
本文中描述的方法包括施用有效治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物。
在某些实施方案中，所述有效量为预先确定的。
在其他实施方案中，所述方法进一步包括滴定剂量以实现抗血小板治疗的希望程度的效果。任选地，所述方法进一步包括在测量抗血小板治疗的效果之后调节包含ω-3 lc-PUFA的组合物的剂量。
可以通过本领域中已知的任何方法测量对血小板功能的抗血小板治疗的效果。
在某些实施方案中，可以通过非生物化学方法，例如透光系数或电阻抗，测量血小板功能以测量血小板聚集。在特定实施方案中，通过借助于LTA测量二磷酸腺苷(ADP)-诱导的血小板聚集来测量耐受性，例如在采用抗血小板药剂之前或之后测量的。“LTA”是可见光集合度测定，其中通过光透射随时间增加测量其中聚集血小板的富血小板血浆样品的降低的浊度。在某些实施方案中，血小板聚集降低大于或等于30%是抗血小板药剂效果的证据。在其他实施方案中，由LTA得到耐受性为从ADP-诱导的聚集小于10%的降低到聚集小于20%的降低。
在其他实施方案中，通过生物化学方法测量血小板功能。生物化学测定的实例包括但不限于使用例如ELISA测定测量血清或尿血栓烷B2并使用例如流式细胞术测量血管舒张剂刺激的磷蛋白血小板反应性指数(VASP-PRI)。可商用的定点照护血小板功能装置也可以用于在对象中测量血小板应答。定点照护装置包括血小板功能分析仪-100 (PFA-100, Dade-Behring, Miami, FL)（其在高剪切应力下通过抽血通过小孔并测量该孔多快被血小板栓“关闭”来测量血小板功能）、VerifyNow™测定(Accumetrics, San Diego, CA)（其使用光基全血集合度测定）、和Thromboelastograph (TEG™)（其测量凝块拉伸强度）。
在一些实施方案中，本文中描述的有效量的ω-3 lc-PUFA组合物为使血管舒张药刺激的磷蛋白血管反应性指数(VASP-PRI)从大于约50%降低到约40%至约50%的一种。在其他实施方案中，有效量的ω-3 脂肪酸组合物为实现小于约236 P2Y12受体反应单元的一种，如通过在VerifyNow P2Y12测定中对二磷酸腺苷(ADP)的应答所测量的。在其他实施方案中，有效量的ω-3 lc-PUFA组合物为诱导小于约46%最大5 μM ADP-诱导的血小板聚集，优选约46%至约 40%最大5 μM ADP-诱导的血小板聚集的一种，如通过在富血小板血浆中的浊度分析法测量的。在其他实施方案中，有效量的ω-3 lc-PUFA组合物为在对ADP的应答中实现小于约468任意聚集单元/分钟，优选约188至约468任意聚集单元/分钟的一种，如通过Multiplate®阻抗集合度测定所测量的。在各种实施方案中，用于治疗或预防对抗血小板治疗的耐受性的有效量的ω-lc-PUFA组合物在两个或更多个P2Y12测定、ADP-诱导的血小板聚集测定和每分钟对ADP应答的任意聚集单元的测定中实现期望的终点。在特定的实施方案中，有效量的ω-3 lc-PUFA组合物在所有三个测定中都实现了期望的终点。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括滴定包含ω-3 lc-PUFA的组合物的剂量以实现期望的AA绝对血浆含量；在AA的血浆含量中的期望的百分比降低程度；在AA的血液或血清含量中期望的绝对值或百分比降低；期望的EPA/AA比率；和/或期望的ω-3指数。任选地，所述方法进一步包括在测量PUFA含量之后调节包含ω-3 lc-PUFA的组合物的剂量。
在典型的实施方案中，有效治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的包含ω-3 lc-PUFA的组合物的量为有效地将血浆花生四烯酸含量降低至少5%的量。在一些实施方案中，所述量有效地将血浆AA含量降低了至少10%、15%、甚至至少20%、25%或更多。在某些实施方案中，包含ω-3 lc-PUFA的组合物的量足以将血浆AA降低到并非对抗血小板治疗耐受的个体中的平均值。
在各种实施方案中，包含ω-3 lc-PUFA的组合物的量有效地将血浆花生四烯酸含量降低了至少25 µg/mL、至少50 µg/mL、至少75 µg/mL、甚至至少100 µg/mL。
在各种实施方案中，包含ω-3 lc-PUFA的组合物的量有效地产生至少约0.30、至少约0.40、至少约0.50、至少约0.60、至少约0.65、甚至至少约0.70的EPA/AA比率。
对象中体内的lc-PUFA含量可以通过本领域中已知的任何方法确定。监测生物样品中lc-PUFA含量的示例性方法包括但不限于色谱法例如气相色谱法(GC)、气液相色谱法(GLC)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、反相HPLC法、薄层色谱法(TLC)、GC-MS法和TLC-GLC法等，光谱学法，例如核磁共振光谱法(NMR)和傅里叶变换红外光谱法(FTIR)。
在本文中描述的方法中使用的ω-3 lc-PUFA组合物的合适的有效剂量范围，取决于所述组成、剂型、患者身体尺寸和待治疗的病况的严重度，为约1 g/天至约10 g/天；约2 g/天至约9 g/天；约3 g/天至约8 g/天；约4 g/天至约7 g/天；约5 g/天至约6 g/天。
在特定的一系列实施方案中，ω-3 lc-PUFA组合物的有效剂量为约1 g/天至约4 g/天。因此，本文中描述的ω-3 lc-PUFA组合物的合适的有效剂量为至少约1 g/天, 至少约2 g/天, 至少约3 g/天, 或至少约4 g/天。
5.2.5. 剂量安排
本文中描述的ω-3 lc-PUFA组合物的有效量是指每天施用的总量。可以以单次剂量或以分次剂量形式施用有效剂量。在一个实施方案中，约每24小时施用一次有效剂量。在另一个实施方案中，有效剂量被分割的，并在24小时的进程中以两次剂量的形式施用。在特定的实施方案中，每天在相同时间或接近相同时间，每天施用一次有效剂量。在另一个特定的实施方案中，在24小时中，以两次剂量的形式施用有效剂量，各剂量在每天相同的时间或接近相同的时间。
如果需要施用的量是足够小的，则可以使用单次单位剂型（例如以一个胶囊剂或片剂）施用所述剂量。在典型的实施方案中，每次施用要求多个单位剂型，例如2、3或4个胶囊。
在一些实施方案中，在抗血小板治疗之前首次施用ω-3 lc-PUFA组合物，持续足够的时间以充分降低血浆花生四烯酸含量至足以治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性。在某些实施方案中，在抗血小板治疗之前施用ω-3 lc-PUFA组合物持续至少1天，持续至少2天, 持续至少3天, 持续至少4天, 持续至少5天, 持续至少6天, 持续至少1 周, 持续至少2周, 持续至少3周, 或持续至少1个月或更长时间。在其他实施方案中，与抗血小板治疗同时开始首次施用ω-3 lc-PUFA组合物。
在各种实施方案中，在抗血小板治疗期间施用ω-3 lc-PUFA组合物。在一些实施方案中，在抗血小板治疗之前首次施用ω-3 lc-PUFA组合物，然后与抗血小板治疗同时施用。
在某些实施方案中，施用ω-3 lc-PUFA组合物持续2周、4周、6周、8周、12周、4个月、6个月、8个月、12个月、24个月或更长时间，取决于病况的性质和严重度。
在某些实施方案中，所述ω-3组合物与食物一起施用，通常与早餐和/或晚餐一起施用。在其他实施方案中，将所述组合物施用于禁食对象。
在某些实施方案中，脂肪酸组合物任选地与除了抗血小板药剂之外的一种或多种另外的治疗药剂同时施用，或以具有一种或多种除了抗血小板药剂之外的其它治疗药剂的单位剂量药物制剂同时提供，其中所述一种或多种另外的治疗药剂可用于降低心血管疾病发生率或预防心血管疾病发生或发展，或有效地治疗通常与心血管疾病相关的任何潜在风险因素。此类另外的治疗药剂包括但不限于强心苷（例如地高辛）、抗心律失常药剂（例如普鲁卡因胺、维拉帕米、心得安）、抗心绞痛药剂（例如***、地尔硫卓）、抗高血压药剂（例如氢***、卡托普利、哌唑嗪（prazocin））、抗凝药剂（例如香豆定、肝素）、溶栓药剂（例如阿替普酶、链激酶、尿激酶）、胆固醇降低药剂（例如他汀类、贝特类、烟酸）、和药学上可接受的其酯类、衍生物、偶联物、前体或盐、及其组合。
基于药剂，有效量的另外的治疗药剂将是本领域已知的。然而，确定所述另外的治疗药剂的最佳有效量范围完全是在技术人员的理解范围内的。
5.3. ω-3 lc-PUFA组合物
5.3.1. 一般组成方面
在某些实施方案中，在本文中描述的方法中使用的包含ω-3 lc-PUFA的组合物("ω-3组合物")以药学上可接受的酯形式包含脂肪酸，如C1-C5烷基酯，例如甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等。在特定实施方案中，所述组合物中的脂肪酸为乙酯形式。在其他特定实施方案中，所述组合物中的脂肪酸为游离酸形式。在某些实施方案中，所述组合物中的脂肪酸为游离酸盐。除非另外说明，否则特定类型的ω-3或ω-6脂肪酸，如“EPA”、“DHA”等意在包含其游离酸形式和其盐、药学上可接受的酯、酰胺、甘油三酯、甘油二脂、甘油单酯、磷脂、和衍生物，所述衍生物包括但不限于α-取代衍生物、偶联物包括但不限于具有活性成分（如水杨酸酯、贝特类、烟酸、环氧酶抑制剂或抗生素）的偶联物、或其盐、或任何上述物质的混合物。
本文中描述的组合物的脂肪酸含量可以通过本领域中已知的任何方法确定。确定组合物的脂肪酸特征的示例性方法包括但不限于色谱法如气相色谱法(GC)、气液相色谱法(GLC)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、反相HPLC法、薄层色谱法(TLC)、GC-MS法和TLC-GLC法等，光谱学法如核磁共振光谱法(NMR)和傅里叶变换红外光谱法(FTIR)。
在某些实施方案中，所述组合物包含ω-3 lc-PUFA类，EPA。在各种实施方案中，所述组合物包含EPA和DHA。在多种实施方案中，所述组合物包含ω-3 lc-PUFA类，二十二碳五烯酸(n-3) ("DPA")。在一些实施方案中，所述组合物包含EPA、DHA和DPA。
在各种实施方案中，所述组合物以该组合物中所有脂肪酸的GC色谱图中面积百分比的形式("% (a/a)")以至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%或至少约98%、至少约99%或甚至约100%的量包含EPA。在某些实施方案中，所述组合物以任何上述值之间的范围的量包含EPA。
在某些实施方案中，所述组合物以所述组合物中所有脂肪酸的GC色谱图中面积百分比的形式，以至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%或至少约95%的量包含DHA。在某些实施方案中，所述组合物以任何上述值之间的范围的量包含DHA。
在某些实施方案中，所述组合物以该组合物中所有脂肪酸的GC色谱图中面积百分比形式以所述组合物中全部脂肪酸的不多于约10%、不多于约9%、不多于约8%、不多于约7%、不多于约6%、不多于约5%、不多于约4%、不多于约3%、不多于约2%、不多于约1%、或不多于约0.5%的量包含DHA。在特定实施方案中，所述组合物不包含能检测到的DHA。
在某些实施方案中，所述组合物以该组合物中所有脂肪酸的GC色谱图中面积百分比形式以所述组合物中全部脂肪酸重量的至少约 20%、至少约 25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%或至少约95%的量包含EPA，并且还以一定量进一步包含DHA，从而使所述组合物中的总EPA+DHA以所述组合物中全部脂肪酸的GC色谱图中面积百分比形式为所述组合物中全部脂肪酸重量的至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%、至少约99%或甚至约100%。
在某些实施方案中，所述组合物以所述组合物中所有脂肪酸的GC色谱图中面积百分比形式，以至少约96%的量包含乙酯形式的EPA（二十碳五烯酸乙酯），其中检测不到DHA。在特定实施方案中，所述组合物以所述组合物中所有脂肪酸重量百分比形式以至少约96%的量包含乙酯形式的EPA（二十碳五烯酸乙酯），其中检测不到DHA。在特定实施方案中，所述组合物是Vascepa (Amarin Corporation)。
在某些实施方案中，所述组合物以如下比率（GC色谱图的面积百分比的比率或重量比率）包含EPA和DHA：约1:1、约1.25:1、约1.5:1、约1.75:1、约2:1、约2.25:1、约2.5:1、约2.75:1、约3:1、约3.25:1、约3.5:1、约3.75:1、约4:1、约4.25:1、约4.5:1、约4.75:1或约5:1。在特定实施方案中，所述组合物以约2:1、约3:1、约1.24:1、约4:1或约4.1:1的比率包含EPA和DHA。在特定实施方案中，所述组合物以约1.24:1至约1.43的重量比率以乙酯形式包含EPA和DHA。
在某些实施方案中，所述组合物以约2:1至约4:1的重量比率以游离酸形式包含EPA和DHA。
在一些实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸重量计以约40重量%至约50重量%的量以乙酯形式包含EPA，并以约30重量%至约45重量%的量以乙酯形式包含DHA。在其他实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸重量计以约43重量%至约49.5重量%的量以乙酯形式包含EPA，并以约34.7重量%至约40.3重量%的量以乙酯形式包含DHA。在其他实施方案中，所述组合物以约70重量%至约80重量%的量包含EPA乙酯，并以约10重量%至约20重量%的量包含DHA。在仍其他实施方案中，所述药物组合物以至少约96重量%的量以乙酯形式包含EPA，并且检测不到DHA。在特别优选的实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸重量计以约50重量%至约60重量%的量包含游离酸形式的EPA，并以约15重量%至约25重量%的量包含游离酸形式的DHA。
在各种实施方案中，所述组合物还以所述组合物中脂肪酸总重量的不多于约30%、不多于约25%、不多于约20%、不多于约15%、不多于约10%、不多于约9%、不多于约8%、不多于约7%、不多于约6%、不多于约5%、不多于约4%、不多于约3%、不多于约2%、或不多于约1%的量包含ω-3或ω-6脂肪酸中除了EPA或DHA之外的至少一种。
在某些实施方案中，所述组合物以所述组合物中脂肪酸总重量的约12重量%至约20重量%的量包含除了EPA和DHA之外的脂肪酸类。这样的类型的示例性实例包括饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、ω-6 PUFA类例如花生四烯酸(AA, C20:4)、亚油酸(LA, C18:2)、γ-亚麻酸(GLA, C20:3)、和α-亚麻酸(ALA, C18:3)、和ω-3脂肪酸，例如十八碳四烯酸(STA, C18:4)、二十碳三烯酸(ETA, C20:3)、二十碳四烯酸(ETE, C20:4)、二十二碳五烯酸(DPA, C22:5)、二十一碳五烯酸(HPA, C21:5)、二十四碳五烯酸(C24:5)和二十四碳六烯酸(C24:6)。
在某些实施方案中，除了EPA和DHA之外的脂肪酸类为乙酯形式。在特定实施方案中，所述组合物以所述组合物中脂肪酸总重量的约12重量%至约20重量%的混合总量包含乙酯形式的DPA、STA、HPA、ETE和ALA。
在某些实施方案中，除了EPA和DHA之外所述组合物不包含可检测到的ω-3脂肪酸。在各种实施方案中，所述组合物以该组合物中的总脂肪酸的不多于约1重量%、不多于约2重量%、不多于约3重量%、不多于约4重量%、不多于约5重量%、不多于约6重量%、不多于约7重量%、不多于约8重量%、不多于约9重量%、不多于约10重量%、不多于约11重量%、不多于约12重量%、不多于约13重量%、不多于约14重量%或不多于约15重量%、不多于约16重量%、不多于约17重量%、不多于约18重量%、不多于约19重量%或不多于约20重量%的量包含除了DHA 和EPA之外的ω-3脂肪酸。在某些实施方案中，所述组合物以总脂肪酸的任何上述值之间范围的量，例如1重量%-15重量%、4重量%-12重量%、10重量%-15重量%、5重量%-10重量%、1重量%-4重量%等包含除了EPA和DHA之外的ω-3脂肪酸。
在某些实施方案中，所述组合物以该组合物中的总脂肪酸的不多于约20重量%、不多于约19重量%、不多于约18重量%、不多于约17重量%、不多于约16重量%、不多于约15重量%、不多于约14重量%、不多于约13重量%、不多于约12重量%、不多于约11重量%、不多于约10重量%、不多于约9重量%、不多于约8重量%、不多于约7重量%、不多于约6重量%、不多于约5重量%、不多于约4重量%、不多于约3重量%、不多于约2重量%、不多于约1重量%、或不多于约0.5重量%的混合量包含总ω-6 PUFA。在一些实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸重量的不多于约10重量%的混合量包含ω-6脂肪酸。在一些实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸的不多于约10色谱图面积%的混合量包含ω-6脂肪酸。
在一些实施方案中，所述组合物基于该组合物中总脂肪酸重量计以不多于约10重量%、不多于约9重量%、不多于约8重量%、不多于约7重量%、不多于约6重量%、不多于约5.5重量%、不多于约5重量%、不多于约4.5重量%、不多于约4重量%、不多于约3.5重量%、不多于约3重量%、不多于约2.5重量%、不多于约2重量%、不多于约1.5重量%、不多于约1重量%或不多于约0.5%的量包含AA。在某些实施方案中，所述组合物以该组合物中总脂肪酸的不多于约4.5重量%的量包含AA。在一些实施方案中，所述组合物以该组合物中总脂肪酸的不多于约4.5色谱图面积%的量包含AA。
在各种实施方案中，所述组合物以该组合物总脂肪酸的不多于约5重量%、不多于约4重量%、不多于约3重量%、不多于约2重量%或不多于约1重量%的量包含其他脂肪酸，例如饱和脂肪酸, 和/或以所述组合物总脂肪酸的不多于约7重量%、不多于约6重量%、不多于约5重量%、不多于约4重量%、不多于约3重量%、不多于约2重量%或不多于约1 重量%的量包含单不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，所述组合物以所述组合物中总脂肪酸的不多于约7重量%、不多于约6重量%、不多于约5重量%、不多于约4重量%、不多于约3重量%、不多于约2重量%、或不多于约1%的量包含除了聚不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸之外的不饱和脂肪酸。在特定实施方案中，所述组合物以该组合物中总脂肪酸计以不多于约3重量%的量包含饱和脂肪酸，以不多于5重量%的量包含单不饱和脂肪酸，和以不多于5重量%的量包含除了ω-3和ω-6聚不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸之外的不饱和脂肪酸。在另一的特定实施方案中，所述组合物基于该组合物中总脂肪酸的色谱图面积计，以不多于约3%的量包含饱和脂肪酸，以不多于5%的量包含单不饱和脂肪酸，和以不多于5%的量包含除了ω-3和ω-6聚不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸之外的不饱和脂肪酸。
在一些实施方案中，所述组合物是Lovaza (GSK)。在某些实施方案中，所述组合物是Vascepa (Amarin Corporation)。在某些实施方案中，所述组合物是Omax3 (Cenestra Health)。
本文中描述的药物组合物中所使用的脂肪酸源包括但不限于鱼油、海洋微藻油、植物油或其组合。在一些实施方案中，所述脂肪酸衍生自藻类。在特定实施方案中，在本文中描述的药物组合物中使用的脂肪酸源为鱼油。由于脂肪酸衍生自天然来源，因此在某些实施方案中，所述组合物包含痕量衍生自所述来源油的其他物质，如脂溶性维生素（例如维生素A和/或维生素D）、和/或胆固醇。
本文中描述的组合物中使用的脂肪酸可以通过本领域中已知的任何方法分离和纯化。在某些实施方案中，在脂肪酸酯的组合物为所期望的情况下，通过(i) 将粗海洋油甘油三酯精制并除臭；(ii) 酯化所述脂肪酸；(iii) 例如通过分馏来分级和浓缩所述酯；(iv) 除去饱和脂肪酸和其他污染物；和(v) 例如通过蒸馏浓缩所述脂肪酸酯以从海洋油中提取和纯化所述脂肪酸从而获得最终产品。在某些实施方案中，当游离脂肪酸的组合物为所期望的情况下，可以水解在步骤(iv)之后获得的脂肪酸酯，例如通过碱性水解，并然后通过分馏进一步纯化。在其他实施方案中，可以在精制步骤之前通过例如蒸馏或用氢氧化钠洗涤将海洋油去酸化以除去游离脂肪酸。例如在Norsk Hydro AS的美国专利No. 5,656,667和No. 6,630,188、Ocean Nutrition Canada, Ltd.的美国专利No. 7,807,848和Laxdale Ltd.的美国专利No. 7,119,118中找到获得脂肪酸组合物的示例性方法。
5.3.2. n-3 FFA组合物
如下列实施例3中进一步描述的，本发明人已经进一步发现，包含游离酸形式的lc-ω-3 PUFA的组合物("n-3 FFA组合物")在降低AA血浆含量中提供了前所未有的功效。因此，在特定的一系列实施方案中，在本文中所述的方法中使用的脂肪酸组合物包含游离酸形式的lc-PUFA。
在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少约50% (a/a) 的量EPA。在某些实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含至少约15% (a/a) 的量DHA。
在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含EPA和DHA，以所述组合物中所有脂肪酸的百分比(a/a)形式表示，其各自在平均值±3标准差的范围，如下表1中所述。在一些实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含EPA和DHA，其各自为平均值±2标准差的范围，如下表1中所述。在一些实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含EPA和DHA，其各自为平均值±1标准差的，如下表1中所述。在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含EPA和DHA，其各自的量为约等于下表1中所述的相应平均值。
在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含DPA。在一些实施方案中，DPA以至少约2.5% (a/a)的量存在。在各种实施方案中，DPA在平均值±3标准差的范围存在，以所述组合物中所有脂肪酸的百分比(a/a)形式表示，如下表1中所述。在各种实施方案中，DPA以平均值±2标准差存在，以所述组合物中所有脂肪酸的百分比(a/a)形式表示，如下表1中所述。在一些实施方案中，以平均值±1标准差存在，以所述组合物中所有脂肪酸的百分比(a/a)形式表示，如下表1中所述。在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物以约等于下表1中所述的平均值的量包含DPA。
在各种实施方案中，所述n-3 FFA组合物进一步包含AA。在某些实施方案中，AA以平均值±3范围标准差的量存在，如上表1中所示。在一些实施方案中，AA以平均值±2标准差范围的量存在，如表1中所示。在某些实施方案中，AA以表1中平均值±1标准差范围的量存在。在一些实施方案中，AA以大约表1中所示的平均值的量存在。在某些实施方案中，AA以不多于约5% (a/a)或5% (w/w)的量存在。在各种实施方案中，AA以不多于约4.5% (a/a)或4.5% (w/w)的量存在。
在某些实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含EPA、DHA、DPA、AA和一种或多种表1中所示的另外的lc-PUFA类。在具体实施方案中，所述n-3 FFA组合物包含表1中所示全部的lc-PUFA类。在特定实施方案中，所述n-3 FFA组合物具有下表2中所示的组成。
在各种实施方案中，所述组合物包含总量为约70.0-80.0% (m/m)的EPA+DHA，以所述组合物中全部脂肪酸的质量百分比计。在某些实施方案中，所述组合物包含约75.0% (m/m) EPA加DHA。在典型的实施方案中，总ω-3脂肪酸占药物组合物中所有脂肪酸的约80.0 – 约95% (m/m)。
在典型的实施方案中，所述组合物包含不多于约3.0% (a/a)的饱和脂肪酸、不多于约5.0% (a/a)的单不饱和脂肪酸、和不多于约0.1 ppm氨基甲酸乙酯。在各种实施方案中，所述组合物包含少于0.1 ppm氨基甲酸乙酯。
在本文中描述的和在表1和2中示出的n-3 FFA组合物的制备方法在2012年1月6日提交的美国临时申请No. 61/583,796中记载，其公开内容全部引入本文中作为参考。
5.3.3. 药物产品和剂型
在某些实施方案中，在本文中描述的方法中使用的包含ω-3 lc-PUFA的药物组合物（包括n-3 FFA组合物）含有一种或多种本领域中通常使用的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂（本文中称为“赋形剂”），即填料、稳定剂、增量剂、粘合剂、增湿剂、表面活性剂、润滑剂、防腐剂、抗氧化剂、调味剂、着色剂和其他混杂的添加剂。可以用于配制口服剂型的药学上可接受的载体和赋形剂的具体实例记载于Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association (1986)中和Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)中。在所使用的剂量和浓度，此类添加剂对于接受者必须是无毒的。赋形剂可以是惰性的或其可具有药学益处。
在某些实施方案中，本文中描述的ω-3组合物包含抗氧化剂。合适的抗氧化剂包括但不限于生育酚，例如α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚，和生育三烯酚，如α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚。在某些实施方案中，抗氧化剂可以所述组合物中总脂肪酸的约0.1重量%至约0.5重量%, 约0.15重量%至约0.25重量%, 约0.2重量%至约0.4重量%, 或约0.25重量%至约0.35重量%的量存在于所述组合物中。在一个实施方案中，抗氧化剂为以所述组合物的约0.4重量%至约0.44重量%的量存在的α-生育酚。在另一个实施方案中，所述α-生育酚以所述组合物的约0.27重量%至约0.33重量%的量存在该组合物中。
根据期望的施用形式并与常规药物施用协调来选择赋形剂。优选地，所述组合物例如以片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂、混悬剂等口服施用。
在特定实施方案中，所述药物剂型为胶囊剂。在某些实施方案中，所述剂型为明胶胶囊。在某些实施方案中，所述明胶胶囊为硬质明胶胶囊。在其他实施方案中，所述剂型为软质明胶胶囊。用于包囊本文中所述药物组合物的明胶胶囊可以从由例如猪皮制备的A型明胶（猪A型明胶）（即通过包括胶原源的酸前处理的方法所提取的明胶）制备，或从B型明胶（通过包括胶原源的碱性预处理的方法所提取的明胶）如牛B型明胶制备。制备明胶的胶原源包括但不限于猪、牛和鱼。胶囊也可以从非动物副产品的物质制备，例如琼脂、角叉菜胶、果胶、魔芋、瓜尔豆胶、食物淀粉、改性的玉米淀粉、马铃薯淀粉和树薯粉。可以用于制备胶囊的材料的非动物源在美国专利公开No. 2011/0117180（受让给Ocean Nutrition Canada Ltd.）中描述。
在特定实施方案中，本文中所述的药物组合物的剂型为从A型猪明胶制备的软质明胶胶囊。在具体实施方案中，所述剂型为从A型猪明胶制备的软质明胶胶囊，其中活性填料为上文第5.3.2节中描述的n-3 FFA组合物。
除了明胶或非动物胶凝剂之外，在特定实施方案中，使用含有增塑剂和水的软质明胶胶囊外壳。在软质明胶胶囊中使用的增塑剂包括但不限于小分子多羟基化合物例如甘油、山梨醇、丙二醇、蔗糖、麦芽糖醇和其混合物。在某些实施方案中，所述明胶胶囊包含一种或多种选自防腐剂的物质，例如羟苯甲酸甲酯或丙基甲基羟苯甲酸甲酯（propylmethyl paraben）、着色剂、乳浊剂如二氧化钛、增味剂、糖、螯合剂和药剂。在某些实施方案中，所述明胶胶囊以所述组合物的至少约1重量%、至少约2重量%、至少约3重量%、至少约4重量%、至少约5重量%、至少约6重量%、至少约7重量%、至少约8重量%、至少约9重量%或至少约10重量%量包含水。在某些实施方案中，所述明胶胶囊以任何上述值之间范围的量，例如1重量%-5重量%、2重量%-8重量%、6重量%-10重量%、5重量%-10重量%等包含水。在特定实施方案中，所述明胶胶囊以所述组合物的约6重量%至约10重量%的量包含水。在一些实施方案中，所述明胶胶囊以所述组合物重量的不多于约0.1%、不多于约0.2%、不多于约0.3%、不多于约0.4%、不多于约0.5%、不多于约0.6%、不多于约0.7%、不多于约0.8%、不多于约0.9%或不多于约1%的量包含增塑剂。
在某些实施方案中，所述明胶胶囊是未包衣的。在其他实施方案中，所述明胶胶囊是包衣的。
在各种包衣的实施方案中，所述胶囊具有肠溶包衣以在通过胃之后缓释脂肪酸组合物。在其他实施方案中，将所述胶囊包衣从而在摄取之后缓释脂肪酸组合物至少30分钟。在各种实施方案中，在摄取之后脂肪酸组合物的释放推迟了约30分钟至约60分钟。用于实现脂肪酸组合物缓释的合适的包衣是本领域技术人员已知的，并包括对以时间而非pH依赖性方式溶解耐受的包衣。在特定实施方案中，用聚(丙烯酸乙酯-丙烯酸甲酯)聚合物包衣明胶胶囊。在一个实施方案中，所述剂型为用中性聚丙烯酸酯例如聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯) 如Eudragit NE 30-D (Rohm Pharma GmbH)包衣的软质明胶胶囊，其平均分子量为约800,000。在特定实施方案中，所述剂型为例如在Tillotts Pharma AG的美国专利No. 7,960,370中描述的包衣的A型猪软质明胶胶囊。
在一些实施方案中，所述剂型包含250 mg的包含ω-3 PUFA的组合物。在各种实施方案中，所述剂型选自250-mg剂型、300-mg剂型、350-mg剂型、400-mg剂型、450-mg剂型、500-mg剂型、600-mg剂型、700-mg剂型、800-mg剂型、900-mg剂型、1-g剂型、1.2-g剂型和1.5-g剂型。在一些实施方案中，所述剂型为1.5-g剂型。在特定实施方案中，所述剂型为1-g剂型。在某些实施方案中，所述1-g剂型为如上所述的包衣的软质猪A型明胶胶囊。在某些实施方案中，所述1-g剂型以每1-g剂型至少约800 mg, 至少约825 mg, 至少约850 mg, 至少约875 mg, 至少约900 mg, 至少约925 mg, 至少约950 mg, 至少约960 mg, 或至少约975 mg的量包含总ω-3脂肪酸。
在某些实施方案中，所述1-g剂型以任何上述值之间范围例如800 mg-950 mg、875 mg-900 mg、900 mg-975 mg等的量包含总ω-3脂肪酸。在一个特定实施方案中，所述剂型为1-g包含至少约900 mg总ω-3脂肪酸的乙酯的软质明胶胶囊。在另一特定实施方案中，所述剂型为1-g包含约800 mg至约950 mg游离酸形式的总ω-3脂肪酸的软质明胶胶囊。在仍另一个实施方案中，所述剂型为500-mg包含约400 mg至约495 mg、约425 mg至约480 mg、或约450 mg至约490 mg EPA的乙酯形式的胶囊。在仍其他实施方案中，所述剂型为1.5-g包含至少约1,300 mg、至少约1,350 mg、至少约1,400 mg、或至少约1,450 mg EPA和DHA乙酯的胶囊。
在一特定系列实施方案中，所述剂型为如第5.3.2节中所述的填充了 n-3 FFA组合物并用配制的Eudragit NE-30D包衣从而当在USP装置2中在37ºC下在pH 5.5下体外测试时延迟胶囊破裂至少30分钟的猪A型软质明胶胶囊。
5.3.4. 包含ω-3 lc-PUFA组合物和至少一种抗血小板药剂的剂型
另一方面，提供了包含(a) 包含ω-3 lc-PUFA的组合物和(b) 一种或多种用于抗血小板治疗的组合物（“抗血小板药剂”）的剂型。
适合于包含在这样的双组分中的抗血小板药剂包括二磷酸腺苷(ADP)受体抑制剂，如氯吡格雷(Plavix®)、噻氯吡啶(Ticlid®)、普拉格雷(Effient®)、和替卡格雷(Brilinta®); 磷酸二酯酶抑制剂如西洛他唑(Pletal®); 糖蛋白IIb/IIIa抑制剂，如阿昔单抗(ReoPro®)、依替巴肽(Integrilin®)和替罗非班(Aggrastat®)。在各种实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为腺苷再摄取抑制剂，如双嘧达莫(Persantine®); 凝血噁烷抑制剂，例如凝血噁烷合酶抑制剂或凝血噁烷受体拮抗剂如terutroban，和其组合。
在某些实施方案中，所述抗血小板治疗药剂为非甾族抗炎性药物，选自阿司匹林、阿洛普令、贝诺酯、二氟尼柳、乙水杨胺、水杨酸镁、水杨酸甲酯、双水杨酯、水杨苷、水杨酰胺、水杨酸钠、芳基烷酸类、醋氯芬酸、乙酰氯酚酸、阿西美辛、阿氯芬酸、溴酚酸、依托度酸、吲哚美辛、吲哚美辛法尼酯（indometacin farnesil）、纳布美通（mabumetone）、奥沙美辛、丙谷美辛、舒林酸、托美丁、布洛芬、阿明洛芬、苯噁洛芬、卡洛芬、右部洛芬、右酮洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟诺洛芬、 氟比洛芬、异丁普生、吲哚洛芬、酮洛芬、酮咯酸、氯索洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡洛芬、舒洛芬、tarenflurbil、噻洛芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、甲氧芬那酸、托芬那酸、保泰松、氨基安替比林、阿扎丙宗、氯非宗、凯布宗、安乃近、莫非布宗、羟布宗、安替比林、磺吡酮、吡罗昔康、屈噁昔康、氯诺昔康、美洛昔康、替诺昔康、安吡昔康、塞来考昔、地拉昔布、艾托考昔、非罗考昔、芦米考昔、帕瑞考昔、罗非考昔、伐地考昔、尼美舒利、耐普西诺（naproxcinod）、氟丙喹宗、和其组合。
在特定实施方案中，所述抗血小板药剂为氯吡格雷。在一些实施方案中，所述抗血小板药剂为阿司匹林。在某些实施方案，所述抗血小板药剂为氯吡格雷和阿司匹林的组合。
在一些实施方案中，所述ω-3 lc-PUFA和抗血小板治疗以重量计为约1:1000至约1000:1, 优选约200:1至约200:1以重量计存在。在一些实施方案中，所述ω-3 lc-PUFA可以约1 mg至约3000 mg，更优选约500 mg至约2000 mg的量存在。在一些实施方案中，所述抗血小板治疗可以约1 mg至约1000 mg，更优选约5 mg至约500 mg, 并甚至更优选约5 mg至约100 mg的量存在。在一些优选的实施方案中，所述抗血小板治疗为氯吡格雷。
在某些实施方案中，如上所述包囊ω-3 lc-PUFA组合物，并且在胶囊上包衣一种或多种抗血小板药剂。例如美国专利申请公开No. 2007/0212411（其整体引入本文中作为参考）描述了用于在胶囊上包衣活性药物组合物的技术。
可以通过任何常用技术包括但不限于锅包衣（pan coating）、流化床包衣或喷雾包衣在胶囊上施加一种或多种包衣。可以例如以溶液、混悬液、喷雾、散剂或粉末形式施加包衣。在一些实施方案中，包衣层的平均厚度为5-400微米，优选10-200微米，更优选20-100微米，最优选40-80微米。
在某些实施方案中，所述包衣层包含聚合物。合适的聚合物包括本领域中技术人员已知的任何药学上可接受的聚合物。优选的聚合物包括但不限于纤维素衍生物，如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、乙基纤维素含水分散体和其组合，优选羟丙基纤维素、乙基纤维素和其混合物。
6. 实施例
6.1. 实施例1： 游离酸形式的PUFA的药学组合物("n-3 FFA组合物")
制备了包含游离酸形式的PUFA的药物组合物("n-3 FFA组合物")的十个示例性产品批次。对ω-3 ("n-3")和ω-6 ("n-6")系列的各种lc-PUFA类计算平均值、标准差(STDEV，或SD)和Δ（+1 SD与-1 SD之间的绝对值差值("1SΔ")；+2SD与-2 SD之间的绝对值差值 ("2SΔ")；和+3SD与-3 SD之间的绝对值差值 ("3SΔ")）。结果示于表1中，如下重现的。
6.2. 实施例2：升高的基线AA含量与在FADS1和FADS2基因中的某些SNP下的基因型一致，并可以用n-3 FFA组合物的临床相关剂量来降低
制备了研究药物(Epanova®) – A型猪软质明胶胶囊，其各自含有一克(1g)ω-3 FFA组合物("API")。用Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG)包衣胶囊。所述API具有下表2中给出的组成(Omefas Lot #36395)。
研究设计 – 本研究(OM-007)使用公开标记的（open-label）双向交叉设计，主要意欲评价辛伐他汀和Epanova®之间的PK相互作用。在用Eudragit NE-30D (Epanova®)包衣的猪A型软质明胶胶囊中包囊由1g n-3 FFA组合物（参见表2）构成的各Epanova®剂量。
治疗条件"A"包括40 mg辛伐他汀(1片)、81 mg阿司匹林(1片)和4 g(4个胶囊)Epanova®的口服剂量共同施用、每天（每24小时）一次，在第1至14天早上用240 mL水在禁食条件下进行，总共持续14次剂量。治疗条件"B"包括40 mg辛伐他汀(1片)和81 mg阿司匹林(1片)的口服剂量施用、每天（每24小时）一次，在第1至14天早上用240 mL水在禁食条件下进行，总共持续14次剂量。在治疗间隔存在14天的清除。
总共招募了52个对象并且治疗顺序随机化。在用Epanova® (治疗"A")治疗分支之后，在登入（第1天）和登出（第15天）时抽血用于确定血浆脂肪酸含量(EPA、DHA、AA)。在各种先前鉴定的SNP下进行基因型分型，所述先前鉴定的SNP包括在Fads1基因（包括与DGLA到AA的转化相关的SNP(SNP rs174537)）、Fads2基因和Scd-1基因中的SNP。
图2 – 24描绘了在(A)基线(以µg/mL计)和(B)“治疗A”的第15天（从基线的百分比变化）根据各个鉴定的SNP下的基因型分组的花生四烯酸(AA)血浆含量。对于各基因组，方块表示四分位差范围，四分位差方块的内部的水平线表示中值和菱形表示平均值。开环表示异常值。横条延伸至非异常值的最小值和最大值。分数1表示在主要（最普遍）等位基因为纯合的对象 ；分数3表示在次要等位基因为纯合体的对象；并且分数2表示杂合体。下表3示出了与各测试SNP相关的基因和其中的结果绘制成曲线的各个图。
如图2A中所示，在Fads1 SNP rs174537 (基因型: GG)的次要等位基因为纯合的对象具有更高的中值和平均值基线AA含量，并因此具有对抗血小板治疗耐受的更大的潜力。如图2B中所示，相比于其他基因型，用4g Epanova®/天治疗14天之后，这些个体具有更大的AA含量的百分比降低。针对Fads1 SNPs rs174554 (图3A和3B)、rs174546 (图4A和4B)、和rs102275 (图5A和5B)观察到了类似结果。
如图6A中所示，在Fads2 SNP rs174568 (基因型: CC)对次要等位基因为纯合体的对象具有更高的中值和平均值基线AA含量，并因此具有对抗血小板治疗耐受的更大的潜力。如图6B中所示，相比于其他基因型，用4g Epanova®/天治疗14天之后，这些个体具有更大的AA含量的百分比降低。针对Fads2 SNP rs1535 (图7A和7B)和rs174583 (Fads2内合子) 观察到类似的结果。
对于rs17156535—与FADS3基因相关的SNP，图9示出类似结果。
图10 (rs174589，FADS基因簇)和图11 (rs174579，FADS基因簇)表明对于某些SNP，主要等位基因而不是次要等位基因为纯合的对象具有更高的平均值和中值基线AA含量。在这些个体中，与杂合体或在次要等位基因为纯合的那些的血浆含量相比，在主要等位基因纯合体中的AA的血浆含量对用4g Epanova®/天14天的治疗应答性更强。对于其他SNP，如图12 – 24所示，观察不到对基线和治疗后AA含量的清晰的基因型贡献。
6.3. 实施例3： n-3 FFA组合物在降低血浆AA含量和升高EPA/AA比率中具有前所未有的功效
6.3.1. 药剂
制备了研究药物(Epanova®) – A型猪软质明胶胶囊，其各自含有一克(1g)包含游离酸形式的ω-3 PUFA的PUFA组合物("API")。用Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG)包衣胶囊。所述API具有下表2中给出的组成(参见上文实施例2)。
安慰剂– 制备含有橄榄油的胶囊用作对照。
6.3.2. 研究设计
在美国、丹麦、匈牙利、印度、荷兰、俄罗斯和乌克兰进行12-周双盲、橄榄油对照的研究。基于高甘油三酯含量在500–2,000 mg/dL范围内选择对象。随机选择对象以接受2, 3, 或4 g Epanova®或4 g橄榄油作为安慰剂。在图27中示例了一般试验设计，其中图28提供了更详细的治疗流程图，其还确定了研究访问的时间。主要研究终点为血浆甘油三酯含量从基线到治疗终点("EOT")的百分比变化。次要终点为血浆非HDL氯吡格雷("非HDL-c")从基线到EOT的百分比变化。
6.3.3. 结果
图29示出所有对象的处理过程，其中"AE"是“不良事件”的缩写，"SAE"是“严重不良事件”的缩写。
最初筛选了总共1,356名对象，其中选择399名参与研究。在这399名对象中，99名接受橄榄油安慰剂，100名接受 2 gEpanova®/天；101名接受 3 g Epanova® /天，和99名接受4 gEpanova®/天。表4显示对随机安排（治疗之前）的对象测量平均甘油三酯(TG)和胆固醇，与专家小组对成人高血胆固醇的检测、评估和治疗的第三次报告（成人治疗小组III）所述的期望水平（由国家新增肺和血液研究所公布）相比。
在接受橄榄油的患者中，出于以下原因从研究中离开总共五名： 同意放弃(1)、没有跟进(1)、和其他原因(3)。在接受2 gEpanova®/天的患者中，总共七名由于以下原因离开：副作用(5)、同意放弃(1)、和其他原因(1)。在接受3 g Epanova®/天的患者中，总共14名由于以下原因离开：副作用(7)、不服从(2)、同意放弃(1)、没有跟进(3)和其他原因(1)。在接受4 g Epanova®/天的患者中，9名由于以下原因离开：副作用(5)、不服从(1)、同意放弃(2)和其他原因(1)。
Epanova®实现了在所有剂量下甘油三酯降低的主要终点和非HDL胆固醇的次要终点（总胆固醇含量减去HDL-胆固醇含量）("非HDL-C")降低，并在导致动脉粥样硬化的多个已建立的标记：Apo B、Apo CIII、RLP、和LpPLA2 (数据未显示)中产生统计学上显著的降低。在伴随抑制素治疗的患者中，Epanova®提供了对关键脂质参数：TG；非HDL-C；HLD-c；总胆固醇(TC)；和TC/HDL-C (数据未显示)的附加功效。
如ω-6 lc-PUFA，花生四烯酸(AA)的血浆含量，在基线和在治疗终点(EOT)测量EPA、DHA、和DPA血浆含量 – 在Epanova®中含量最大的三种ω-3 lc-PUFA。下表5对于EPA、DHA、DPA、和AA将平均值和中值基线和治疗终点(EOT)血浆含量(以µg/mL计)分别制成表格。
EPA、DHA、DPA、和AA的基线血浆含量表明治疗分支中对象的有效随机化。在基线处的EPA:AA比率为约0.10（参见下表8）。
图30A - 30E绘制了对于EVOLVE试验中的各治疗分支而言，对于EPA (图30A)、DHA (图30B)、DPA (图30C)和AA (图30D)的平均基线和治疗终点("EOT")血浆含量(以µg/mL计)的图。图30E将对于各治疗分支和对照（橄榄油）分支的平均基线和EOT EPA含量与在不相关的JELIS试验("JELIS")中早期报道的值进行对比。发现在JELIS试验中的日本对象具有更高的基线EPA含量。图31A - 31D绘制了对于EPA (图31A)、DHA (图31B)、DPA (图31C)和AA (图31D)的中值基线和治疗终点("EOT")血浆含量(以µg/mL计)的图。
下表6将对于EPA、DHA、DPA、和AA的绝对值血浆含量(以µg/mL计)从基线到EOT的绝对值血浆含量(以µg/mL计)的平均值变化和中值变化制成表格。
图32A和32B将上表中的数据绘制成图，显示出对于EVOLVE试验的各治疗分支而言，AA、DHA、EPA和DPA的绝对值血浆含量(以µg/mL计)从基线到EOT的变化，其中图32A将平均值变化绘制成图，图32B显示出从基线的中值变化。
下表7将EPA、DHA、DPA、和AA的平均值和中值血浆含量从基线到EOT的百分比变化分开制成表格。表7还显示EPA, DHA, 和AA的LS平均值变化(%)。
图33A将对于在EVOLVE试验的各治疗分支中的AA、DHA、EPA和DPA而言，从基线到EOT的平均值变化（作为基线值的百分比）制成图，图33B将从基线到EOT的中值百分比变化制成图。
下图8显示对于EVOLVE试验的各治疗分支而言在开始和治疗终点的EPA/AA比率。
如从表5 -7和图30 – 33中可以看出，采用Epanova®的12周治疗导致EPA、DHA、和DPA血浆含量的显著提高。例如，以2g剂量，EPA血浆含量从基线到EOT的平均百分比变化为411%；以4g剂量为778%。EPA血浆含量的中值百分比变化分别为254%和405%。以2g剂量，DHA血浆含量从基线到EOT的平均百分比变化为69%；以4g剂量，平均百分比变化为106%。DHA血浆含量的中值百分比变化出现不那么显著的变化，其中在2g Epanova®为61.2%的变化，和在4g为65.5%的变化。
血浆AA含量的显著降低伴随EPA、DHA、和DPA的血浆含量的增加，其中4g剂量方案获得95.8 µg/mL的平均值降低和89.2 µg/mL的中值降低，其对应于18%的平均值百分比降低、25.9%的中值百分比变化、和23.2%的LS平均值变化。应该注意到，尽管施用花生四烯酸，其在该试验中使用的Epanova®批次中以2.446% (a/a)存在，但还是观察到血浆花生四烯酸含量的降低。
在4g剂量的情况下，EPA血浆含量的增加和伴随的AA血浆含量的降低导致EPA/AA比率的显著提高，如图8所示，从在基线的约0.10到EOT的约0.67（平均值）和0.62（中值）。
在Epanova®中ω-3 PUFA的极高的生物利用率表明在ω-3类和花生四烯酸中pK应答的差异。图34将在2g至4g剂量的EPANOVA之间的情况下，EPA、DHA、DPA、和AA的血浆含量（绝对值）从基线的中值百分比变化的变化速率绘制成图。下表9将结果制成表格：
在将Epanova®每日剂量从2g加倍到4g时，DHA和DPA的血浆含量没有或很少有提高，从基线的中值百分比变化的变化速率（斜率）几乎为零，从而预测将剂量进一步提高之后会看到DHA和DPA血浆含量中很小的进一步升高。在甘油三酯含量、HDL-c含量和非HDL-c含量中看到（数据未示出）应答的类似平稳水平。
相比之下，EPA的变化速率保持很高，其中斜率为0.59；预计通过提高Epanova®剂量至4g/天之上将获得EPA血浆含量的进一步提高。显著地，在将Epanova®每日剂量从2g加倍到4g时，AA含量的变化速率甚至比EPA的更高；预计随着Epanova®剂量提高至4g/天之上，AA血浆含量将进一步降低。因此，Epanova®在降低AA含量的能力方面显示出前所未有的效果。
程度上正如各单独的公开、专利、专利申请或其他文件被出于各种目的独自引入作为参考一样，本申请中引用的所有公开、专利、专利申请和所引用的其他文件出于各种目的都被整体引入本文中作为参考。
尽管已经示例和描述了各种特定实施方案，但将理解可以在不脱离本发明精神和范围的情况下作出各种变化。

Claims (73)

1.在对象中治疗、逆转、抑制或预防对抗血小板治疗的耐受性的方法，所述对象是有效转化者并且对其而言抗血小板治疗是临床指示的，所述方法包括：
向所述对象施用有效量的包含ω-3 lc-PUFA的组合物（“ω-3组合物”）。
2.权利要求1所述的方法，其进一步包括确定所述对象是否为有效转化者的在先步骤。
3.权利要求2所述的方法，其中确定所述对象是否为有效转化者包括在与选自FADS1、FADS2和FADS3的一种或多种基因有关的一种或多种多态性方面确定所述对象的基因型。
4.权利要求2所述的方法，其中确定所述对象是否为有效转化者包括测量来自所述对象的样品中的花生四烯酸的含量。
5.权利要求1所述的方法，其中ω-3组合物的量有效地将血浆中花生四烯酸(AA)浓度降低至少约5%。
6.权利要求5所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约10%。
7.权利要求6所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约20%。
8.权利要求1所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆花生四烯酸的浓度降低至少约50 µg/mL。
9.权利要求8所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约75 µg/mL。
10.权利要求1所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25。
11.权利要求10所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.50。
12.权利要求11所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.65。
13.权利要求1所述的方法，其中所述ω-3组合物为n-3 FFA组合物。
14.权利要求12所述的方法，其中所述ω-3组合物为n-3 FFA组合物。
15.权利要求13所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。
16.权利要求15所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。
17.权利要求16所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
18.权利要求1所述的方法，其中所述ω-3组合物的量不多于4g/天。
19.权利要求18所述的方法，其中所述ω-3组合物的量不多于2 g/天。
20.权利要求19所述的方法，其中所述ω-3组合物是n-3 FFA组合物。
21.对有需要的对象提供抗血小板治疗的方法，其包括：
(a) 确定所述对象是否为有效转化者；和
(b) 在被确定为有效转化者的那些对象中，附加地施用(i)有效量的ω-3组合物，和(ii)有效量的抗血小板药剂。
22.对有需要的对象提供抗血小板治疗的方法，改进包括：
(a) 确定所述对象是否为有效转化者；和
(b) 在被确定为mc-PUFA至lc-PUFA的有效转化者的那些对象中，附加地施用有效量的ω-3组合物。
23.权利要求21所述的方法，其中确定所述对象是否为有效转化者包括在与选自FADS1、FADS2和FADS3的一种或多种的基因有关的一种或多种多态性方面确定所述对象的基因型。
24.权利要求21所述的方法，其中确定所述对象是否为有效转化者包括测量来自所述对象的样品中的花生四烯酸的含量。
25.权利要求21所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆中花生四烯酸(AA)浓度降低至少约5%。
26.权利要求25所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约10%。
27.权利要求26所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约20%。
28.权利要求21所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约50 µg/mL。
29.权利要求28所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约75 µg/mL。
30.权利要求21所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25。
31.权利要求10所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.50。
32.权利要求31所述的方法，其中所述ω-3组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.65。
33.权利要求21所述的方法，其中所述ω-3组合物为n-3 FFA组合物。
34.权利要求22所述的方法，其中所述ω-3组合物为n-3 FFA组合物。
35.权利要求33所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。
36.权利要求35所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。
37.权利要求36所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
38.权利要求21所述的方法，其中所述ω-3组合物的量不多于4g/天。
39.权利要求38所述的方法，其中所述ω-3组合物的量不多于2 g/天。
40.权利要求21所述的方法，其中所述抗血小板药剂选自氯吡格雷硫酸氢盐和阿司匹林。
41.权利要求40所述的方法，其中所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
42.采用抗血小板药剂治疗患者的方法，其包括：
(a) 施用治疗有效量的血小板聚集抑制剂；和
(b) 附加地施用有效量的n-3 FFA组合物。
43.用抗血小板药剂治疗患者的方法，其改进包括：
附加地施用有效量的n-3 FFA组合物。
44.权利要求42所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆中花生四烯酸(AA)浓度降低至少约5%。
45.权利要求44所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约10%。
46.权利要求45所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆AA浓度降低至少约20%。
47.权利要求42所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约25 µg/mL。
48.权利要求47所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约50 µg/mL。
49.权利要求48所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆花生四烯酸浓度降低至少约75 µg/mL。
50.权利要求42所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.25。
51.权利要求50所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.50。
52.权利要求51所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量有效地将血浆EPA/AA比率提高到至少约0.65。
53.权利要求42所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。
54.权利要求53所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。
55.权利要求36所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
56.权利要求42或权利要求43所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物包含约55% EPA (a/a)、约20% DHA (a/a)、和约5% DPA (a/a)。
57.权利要求42所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量不多于4g/天。
58.权利要求57所述的方法，其中所述n-3 FFA组合物的量不多于2 g/天。
59.权利要求42所述的方法，其中所述抗血小板药剂选自氯吡格雷硫酸氢盐和阿司匹林。
60.权利要求59所述的方法，其中所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
61.单位剂型，其包含：
ω-3组合物；和
抗血小板药剂，
其中所述ω-3组合物包含在胶囊中，并将所述抗血小板药剂包衣在所述胶囊的外部。
62.权利要求61所述的单位剂型，其中所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐或阿司匹林。
63.权利要求62所述的单位剂型，其中所述抗血小板药剂为氯吡格雷硫酸氢盐。
64.权利要求61所述的单位剂型，其中包囊至少0.5 g的ω-3组合物。
65.权利要求64所述的单位剂型，其中包囊至少1 g的ω-3组合物。
66.权利要求61所述的单位剂型，其中所述ω-3组合物为n-3 FFA组合物。
67.权利要求66所述的单位剂型，其中所述n-3 FFA组合物包含至少50% (a/a) EPA。
68.权利要求67所述的单位剂型，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少15% (a/a) DHA。
69.权利要求68所述的单位剂型，其中所述n-3 FFA组合物进一步包含至少2.5% (a/a) DPA。
70.权利要求66所述的单位剂型，其中所述胶囊为猪A型软质明胶胶囊。
71.权利要求70所述的单位剂型，其中所述胶囊进一步包含置于所述明胶和含有所述抗血小板药剂的所述包衣之间的包衣。
72.权利要求71所述的单位剂型，其中所述置于所述明胶和含有所述抗血小板药剂的所述包衣之间的包衣在37ºC体外含水介质中能够迟释所述n-3 FFA组合物至少30分钟。
73.权利要求71所述的单位剂型，其中所述置于所述明胶和含有所述抗血小板药剂的所述包衣之间的包衣是中性聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯)聚合物。
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