CN103940987A - 一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪,属于农产品安全检测技术领域。本发明所提供的快速检测仪由阵列式免疫传感器、模拟多路开关、检测电路、微控制器、显示屏、按键和电源构成。在本发明所提供的快速检测仪的阵列式免疫传感器的工作电极中,一半电极表面固定有各种农药抗体,一半电极表面固定有各种黄曲霉毒素抗体,使得检测仪可在一次取样中实现花生样品中的农药和黄曲霉毒素残留的同时检测。本发明的快速检测仪具有检测效率高,检测成本低,检测时间短等特点,一次至少可同时检测10种农药和黄曲霉毒素,检测限可达1μg/L,适用于花生的现场快速检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪,属于农产品安全检测技术领域。
技术背景
黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化合物,广泛存在于花生、花生油、大米、玉米、糕点等粮油食品和动物饲料中,严重影响人们的健康,甚至威胁着人们的生命安全。黄曲霉毒素与环境因素密切相关,是一种天然的毒素,普通的食物处理方法不会减少黄曲霉毒素的含量,因此,国际上对黄曲霉毒素尤其是B1 的限量要求日益严格,世界各国都对食品中的黄曲霉毒素的含量制定出了严格的限量标准。花生是我国北方重要的经济作物,为了防治病虫侵害,提高花生的产量,人们大量使用农药,因而在花生中产生农药残留问题也较为严重。为此各国对农药在花生中的残留监控也越来越严格,很多国家先后制定了花生中多种农药残留的最高残留限量,使我国花生出口面临越来越多的技术壁垒。
传统的黄曲霉毒素和农药残留检测方法主要有:气相色谱(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、色谱/质谱联用技术(GC/LC-MS)、毛细管电泳法(CE)、荧光分析、酶联免疫法(ELISA)。这些方法虽然选择性好、灵敏度高、准确度高、检出限低,可同时检测多种元素或化合物,但其需要昂贵的仪器设备,样品前处理过程繁琐、费时,并且对分析人员的技术水平要求很高,不适于现场快速检测。与传统的分析方法相比,免疫传感器具有如下特点:(1)较高的选择性,因此不需要对被测组分进行分离,即不用对样品进行预处理。(2)结构简单,体积小,使用方便,特别是便携式的免疫传感器,非常有利于农产品安全质量的快速测定。(3)可实现连续在线检测,使食品加工过程的质量控制变得简便。(4)响应速度快,样品用量少,与其他大型分析仪器相比,免疫传感器制作成本低,且可反复使用。特别适合花生中的黄曲霉毒素和农药残留的快速检测。但目前通常研究的生物传感器在一次样品取样中通常只能完成一种残留的检测,无法同时实现花生种黄曲霉毒素和农药残留是否超标的信息。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足,提供一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪,在一次样品的取样中同时实现花生中的农药和黄曲霉毒素残留是否超标等信息。可用于花生等农产品现场质量安全现场快速测定,并将测定的相关数据可随时上传至数据库,有利于花生等农产品质量溯源体系的建设。
本发明采取的技术方案如下:
一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪,其特征在于,由阵列式免疫传感器、模拟多路开关、检测电路、微控制器、显示屏、按键和电源构成;
所述阵列式免疫传感器,由一个圆形电极盘组成,中心位置有对电极和参比电极,***是均匀分布的工作电极,工作电极中一半固定有不同种类的农药抗体,另一半固定有不同种类的黄曲霉毒素抗体,对电极、参比电极与各工作电极的距离相等,圆形电极盘***和中间有直径相等的孔,可将工作电极、参比电极和对电极***电极孔中,各个工作电极接线端接入模拟多路开关;
所述模拟多路开关,分别逐次将阵列免疫传感器产生的阻抗信号进行采集并送至检测电路;
所述检测电路由供电电路、检测芯片、拨码开关和标定电阻构成,供电电路与微控制器和检测芯片相连,采用先经变压器降压再经滤波器稳压的方法获得稳恒电压供电;检测芯片通过拨码开关与标定电阻相连,检测芯片在微控制器的控制下产生激励电压施加到阵列免疫传感器上并收集响应信号,经过离散型傅里叶变换后得到实部与虚部,并输出到微控制器;
所述微控制器上运行检测程序,将接收到的阻抗实部与虚部通过阻抗的模值与相角计算公式计算出阻抗的模值与相角,在经过校准后得到实际阻抗值,与设定的反应前阻抗值进行比较,得到变化率并与标准曲线对比得出结论,送至显示屏显示;
所述显示屏与微控制器相连,用于显示数据和作为用户交互操作的窗口;
所述按键与微控制器和检测电路相连,设有启动、开始、复位、停止按键和四个检测范围档位,用于输入指令和检测参数;
所述电源与供电电路相连;
所述快速检测仪的工作电极与参比电极之间的工作电压为300mV;
所述显示屏的型号是LED12864;
所述检测仪的微处理器中置入了阻抗变化率与黄曲霉毒素和农药残留浓度关系的数据库。
所述快速检测仪的检测花生中黄曲霉毒素和农药残留的方法的步骤如下:
1) 打开检测仪,将阵列式传感器放入测试底液中测量初始阻抗值A1,并保存;
2) 取出阵列式传感器,用超纯水冲洗后,放入预处理样品液中孵化10min;
3) 取出阵列式传感器,用超纯水冲洗后,放入测试底液中测量阻抗值A2;
4) 根据阻抗值变化公式计算阻抗值变化率,并根据预置入数据库中的阻抗变化率与农药或黄曲霉毒素残留浓度关系标准曲线计算农药或黄曲霉毒素的浓度。
步骤2)中所述预处理样品液的处理方法为:
准确称取经过磨细的花生样品5.0g于50mL离心管中,准确加入15.0mL 80%甲醇水溶液,涡旋3min,取上清0.1mL至1.5mL离心管中,加入0.7mL去离子水,混匀后备检测使用。
步骤4)所述阻抗值变化公式为:变化率=|A1-A2|/A1。
本发明所提供的可同时检测花生中黄曲霉毒素和农药残留的快速检测仪的基本原理是:当固定不同农药和黄曲霉毒素抗体的阵列式免疫传感器置入样品液中,如果样品液中有对应的农药和黄曲霉毒素,则由于抗体与抗原之间的免疫反应形成免疫复合物阻碍测试底液与免疫传感器之间电子转移,进而产生阻抗信号的变化,通过模拟多路开关分别逐次地将阵列免疫传感器产生的阻抗信号采集送入检测仪中,进而测定样品液中是否有某种农药与黄曲霉毒素,并确定是否超标等信息。
本发明的有益效果:本发明的检测仪可实现一次样品的进样中同时完成黄曲霉毒素和农药的检测。这样节约了检测时间,同时也减少了试剂的消耗量,降低了检测成本。弥补了当前黄曲霉毒素和农药检测仪器中,分别制备样品,分别检测黄曲霉毒素和农药,不能同时检测黄曲霉毒素和农药的缺陷。
附图说明
图1为本发明的一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪的结构框图。
图2为圆盘式阵列免疫传感器电极分布图。
图3为本发明中供电电路原理图。
图4为本发明中检测电路原理图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的技术方案作详细说明,但本发明不受实施例的限制。
图1为本发明的一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪的结构框图。检测仪由检测电路、阵列式免疫传感器、模拟多路开关、电源、按键、微控制器及显示屏构成。其中检测电路由供电电路、检测芯片、拨码开关、标定电阻构成。检测电路用来产生激励电压并施加到阵列免疫传感器上,随后采样激励后的响应信号并进行数字处理,将结果送入微控制器;微控制器及其上面运行的检测程序对输入信号进行再次处理,并对整个***的运行进行控制和响应;按键用来输入指令和检测参数;显示屏用来量化输出呈现最终的检测结果,是用户与***的交互界面;电源为整个***供电。
图2为阵列式免疫传感器电极分布图。所述的阵列式免疫传感器由一个圆形的电极盘组成,中心位置有对电极和参比电极,***是均匀分布的工作电极,以确保对电极、参比电极与各工作电极的距离相等,使各个工作电极与对电极之间的有相等的阻抗值。圆形的电极盘***和中间有直径相等的孔,可将工作电极、参比电极和对电极***电极孔中。三电极的工作面***测试底液,各个工作电极接线端接入模拟多路开关,通过模拟多路开关分别逐次地将阵列免疫传感器产生的阻抗信号采集送入检测仪检测电路中。参比电极和对电极直接接到检测电路中。在用纳米材料修饰好的工作电极表面分别固定农药抗体和黄曲霉毒素抗体。在工作电极与参比电极之间加300毫伏的工作电压,测试液中测定的是工作电极与对电极之间的阻抗值。如果样品液中有固定抗体相对应的农药与黄曲霉毒素,则导致阵列免疫传感器中相应传感器发出信号,从而确定样品中含有何种农药和黄曲霉毒素有残留及是否超标。
所述的阵列式免疫传感器,阵列式工作电极上分别固定了甲胺磷、敌百虫、乐果、对硫磷、马拉硫磷、毒死蜱、西维因、异丙威、克百威和仲丁威10种农药抗体和黄曲霉毒素抗体。在固定抗体前工作电极表面用纳米材料进行修饰,然后滴涂2μL(浓度为5μg/mL)的抗体溶液到电极表面,待自然晾干后阵列式免疫传感器制备完成。
所述检测仪的微控制器选用STC89C52,其上加载检测程序。检测电路中的供电电路构成和原理如图3所示,由变压器T1,桥式整流电路BR1,电解电容C1、C3,普通电容C2、C4,三端稳压器U1构成,其作用是为整个***提供+5V的电源供电。本设计中电解电容C1、C2的作用是滤波,简单的讲就是电容两端电压升高时,电容充电,电压降低时,电容放电,让电压降低时的坡度变得平缓,从而起到滤波的作用。普通电容C2、C4的作用是防止自激,其可以将高频激信号吸收保持稳定,使电路没有激励信号,从而防止自激。三端稳压器U1的作用是将输出电压稳定在+5V上,U1的输出端和接地端分别接+5V和接地。
所述的检测电路中核心部分检测电路的构成如图4所示:由检测芯片U3,拨码开关SW3,标定电阻R1、R2、R3、R4、R5,普通电容C7、C8构成,其作用是产生激励电压并施加到免疫传感器上,随后采样激励后的响应信号并进行数字处理,将结果送入微控制器。其中标定电阻R1、R2、R3的作用是作为外接反馈电阻。拨码开关SW3是四位拨码开关,其作用是选择合适的标定的电阻连入检测电路来防止响应信号超过检测芯片的量程并且保证***的线性特性。标定电阻R4、R5的作用是作为上拉电阻连接在检测芯片的15、16引脚与电源之间。电容C7、C8的作用是用来滤波和起保护作用的,防止电磁干扰。检测芯片U3是一款高精度的阻抗测量芯片,内部集成了带有12位,采样率高达1MSPS的AD转换器的频率发生器。其作用是产生特定频率的激励电压来激励待测元件,得到的响应信号被ADC采样,并通过片上的DSP进行离散的傅立叶变换,傅立叶变换后返回在这个输出频率下得到的实部值和虚部值,并将结果送入微控制器。其15、16引脚通过上拉电阻R4、R5与+5V电源相连,其12、13、14引脚并联接地,其9、10、11引脚并联与+5V电源相连,其4、5引脚之间通过拨码开关与标定电阻相连,其5、6用来接待测元件。
本发明所提供的快速检测仪,具体使用过程如下:在使用前将阵列式传感器工作电极表面使用纳米材料进行化学修饰,提高传感器检测的灵敏度,之后在阵列式免疫传感器工作电极表面分别固定不同种类的农药和黄曲霉毒素抗体。然后将阵列式免疫传感器放入冰箱中,4°C下保存备用。使用时打开检测仪的电源开关,将阵列式传感器放入测试底液中测量初始阻抗值A1,并保存。将免疫传感器放入事先处理好的样品液中孵化10分钟,再将传感器连接至检测仪进行阻抗测量,获取第二次测量的阻抗值A2,微控制器将其送至显示屏显示。计算出变化率,变化率计算公式如下:
变化率=|A1-A2|/A1
如果样品液中含有农药或黄曲霉毒素,则含相应工作电极发生特异性免疫反应,导致反应后的相应传感器阻抗值明显增大。A1与A2的差值越大,表明检测溶液中的含有某种农药或黄曲霉毒素残留的浓度越高。对比标准曲线得到样品中农药或黄曲霉毒素残留的浓度,在显示屏显示。存储器中置入了阻抗变化率与农药和黄曲霉毒素残留浓度关系标准曲线,根据各传感器阻抗变化率的大小,在仪器的显示屏可显示检测的样品中含有何种农药、黄曲霉毒素及农药和黄曲霉毒素残留的浓度信息。
本发明所提供的快速检测仪操作方法简单,检测时间较短,可在一次取样中实现花生中的农药和黄曲霉毒素残留的定性定量测量,具有检测时间短,灵敏度高,稳定性好、重现性好等优点,符合我国对花生中农药黄曲霉毒素残留快速检测技术发展和国际化要求。
Claims (7)
1.一种同时检测花生中黄曲霉毒素和农药的快速检测仪,其特征在于,由阵列式免疫传感器、模拟多路开关、检测电路、微控制器、显示屏、按键和电源构成;
所述阵列式免疫传感器,由一个圆形电极盘组成,中心位置有对电极和参比电极,***是均匀分布的工作电极,工作电极中一半固定有不同种类的农药抗体,另一半固定有不同种类的黄曲霉毒素抗体,对电极、参比电极与各工作电极的距离相等,圆形电极盘***和中间有直径相等的孔,可将工作电极、参比电极和对电极***电极孔中,各个工作电极接线端接入模拟多路开关;
所述模拟多路开关,分别逐次将阵列免疫传感器产生的阻抗信号进行采集并送至检测电路;
所述检测电路由供电电路、检测芯片、拨码开关和标定电阻构成,供电电路与微控制器和检测芯片相连,采用先经变压器降压再经滤波器稳压的方法获得稳恒电压供电;检测芯片通过拨码开关与标定电阻相连,检测芯片在微控制器的控制下产生激励电压施加到阵列免疫传感器上并收集响应信号,经过离散型傅里叶变换后得到实部与虚部,并输出到微控制器;
所述微控制器上运行检测程序,将接收到的阻抗实部与虚部通过阻抗的模值与相角计算公式计算出阻抗的模值与相角,在经过校准后得到实际阻抗值,与设定的反应前阻抗值进行比较,得到变化率并与标准曲线对比得出结论,送至显示屏显示;
所述显示屏与微控制器相连,用于显示数据和作为用户交互操作的窗口;
所述按键与微控制器和检测电路相连,设有启动、开始、复位、停止按键和四个检测范围档位,用于输入指令和检测参数;
所述电源与供电电路相连。
2.权利要求1所述快速检测仪,其特征在于,工作电极与参比电极之间的工作电压为300mV。
3.权利要求1所述快速检测仪,其特征在于,所述显示屏的型号是LED12864。
4.权利要求1所述快速检测仪,其特征在于,所述检测仪内置的检测芯片上的微处理器置入了阻抗变化率与农药和黄曲霉毒素残留浓度关系的数据库。
5.一种权利要求1所述快速检测仪的检测花生中农药和黄曲霉毒素残留的方法,其特征在于,步骤如下:
打开检测仪,将阵列式传感器放入测试底液中测量初始阻抗值A1,并保存;
取出阵列式传感器,用超纯水冲洗后,放入预处理样品液中孵化10min;
取出阵列式传感器,用超纯水冲洗后,放入测试底液中测量阻抗值A2;
根据阻抗值变化公式计算阻抗值变化率,并根据预置入数据库中的阻抗变化率与农药或黄曲霉毒素残留浓度关系标准曲线计算农药或黄曲霉毒素的浓度。
6.权利要求5所述方法,其特征在于,步骤2)中所述预处理样品液的处理方法是:准确称取经过磨细的花生样品5.0g于50mL离心管中,准确加入15.0mL 80%甲醇水溶液,涡旋3min,取上清0.1mL至1.5mL离心管中,加入0.7mL去离子水,混匀后备检测使用。
7.权利要求5所述方法,其特征在于,步骤4)所述阻抗值变化公式为:变化率=|A1-A2|/A1。
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