CN103940646B - 一种红掌细胞核悬液制备方法 - Google Patents
一种红掌细胞核悬液制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103940646B CN103940646B CN201410115783.8A CN201410115783A CN103940646B CN 103940646 B CN103940646 B CN 103940646B CN 201410115783 A CN201410115783 A CN 201410115783A CN 103940646 B CN103940646 B CN 103940646B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extracting solution
- red palm
- nucleus suspension
- final concentration
- tender leaf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种红掌细胞核悬液制备方法。步骤如下：1）取红掌嫩叶50 mg，置于塑料培养皿中加入1 ml提取液，所述提取液主要由终浓度如下的组分组成：21g/L一水柠檬酸，10g/L聚乙烯吡咯烷酮K‑40）使用刀片在提取液中切碎红掌嫩叶，然后收集提取液经350目尼龙网过滤，获得红掌细胞核悬液。本发明的有益效果：1）最大限度地减少了有害试剂的使用，如巯基乙醇，减轻了提取液对人体的危害；2）提取液成分简单，只有三种，均为常规实验室试剂，成本低廉，配置容易，可大大降低成本；3）步骤简单，无需离心，节省了时间提高了效率，可以在短时间内获得高质量的细胞核悬液用于流式细胞仪检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种适用于流式细胞仪分析的红掌细胞核悬液制备方法。
背景技术
红掌（Anthurium andraeanum），其花朵独特，有佛焰花序，色泽鲜艳华丽，色彩丰富，叶形苞片，常见的苞片颜色有红色、粉红、白色等，有极大的观赏价值，是世界著名花卉。普遍认为目前红掌栽培品种的遗传背景狭窄，新品种培育也因此受到限制。随着研究深入，使用流式细胞仪进行花药培养植株倍性鉴定、基因组大小测定以及细胞周期等应用和基础研究对拓宽红掌育种基础具有重要意义。而其中获得适用于流式细胞仪分析的红掌细胞核悬液成为其中关键技术。
红掌叶片含有较多次生代谢物质，采用已报道的方法难以获得适用于流式细胞仪分析的红掌细胞核悬液，或相关方法繁琐、含有对人体有害的试剂，这些都阻碍了相关研究的进行。
发明内容
本发明目的是提供一种红掌细胞核悬液制备方法，该方法高效、快捷、经济。
本发明采用的技术方案是：
一种红掌细胞核悬液制备方法，步骤如下：
1）取红掌嫩叶50 mg，置于塑料培养皿中加入1 ml提取液，所述提取液主要由终浓度如下的组分组成：21g/L一水柠檬酸，10g/L聚乙烯吡咯烷酮K-40；
2）使用刀片在提取液中切碎红掌嫩叶，然后收集提取液经350 目尼龙网过滤，获得红掌细胞核悬液。
在步骤2）所述的红掌细胞核悬液中加入DNA荧光染料碘化丙锭( propidiumiodide , 终浓度为50μg/ ml)， 及Rnase (终浓度为50μg/ ml)，染色后的提取液用于流式细胞仪的检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在于：
1）最大限度地减少了有害试剂的使用，如巯基乙醇，减轻了提取液对人体的危害；
2）提取液成分简单，只有两种，均为常规实验室试剂，成本低廉，配置容易，可大大降低成本；
3）步骤简单，无需离心，节省了时间提高了效率，可以在短时间内获得细胞核悬液用于流式细胞仪检测；
4）可获得较高质量细胞核悬液用于流式细胞仪检测。
附图说明
图1 采用本发明制备的红掌细胞核悬液流式细胞仪分析直方图；
图2 采用LB01法制备的红掌细胞核悬液流式细胞仪分析直方图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步描述，但本发明的保护范围不仅限于此：
实施例1
一、试剂的配置
1）细胞核提取液配置：称取2.1g一水柠檬酸、1g聚乙烯吡咯烷酮K-40于一干净的250ml烧杯中，加超纯水定容到100ml。用0.22微米滤膜过滤后4度保存备用。
2）荧光染料配置：称取25mg碘化丙锭、25mg核糖核酸酶于一干净的250ml烧杯中加超纯水定容到50ml。用0.22微米滤膜过滤后4度保存备用。
二、红掌细胞核悬液提取方法
（1）取红掌嫩叶（约50 mg），置于塑料培养皿中加入1 ml提取液。（2）使用锋利剃须刀片在提取液中切碎叶片；（3）收集提取液经350 目尼龙网过滤，获得红掌细胞核悬液；（4）过滤后的提取液中加入DNA荧光染料碘化丙锭（终浓度为50μg/ ml）及Rnase （终浓度为50μg/ ml）。染色后的提取液上流式细胞仪检测。
红掌细胞核悬液的流式细胞仪检测
采用Quanta SC流式细胞仪（美国贝克曼库尔特公司），在488 nm 激光的激发下发出桔红色荧光，由FL2 通道检测出荧光强度。从随机软件CellLab Quanta SC 获取数据,并通过ModFit LT软件显示直方图（横坐标以DNA相对含量反映荧光曲线的面积纵坐标为细胞核次数），结果见图1。本发明制备的红掌细胞核悬液不仅适用Quanta SC流式细胞仪，也适用于FACSCalibur（美国Becton-Dickinson 公司） 等目前市场是所有具有488nm激光器的流式细胞仪。
对比例1：采用已报道的LB01法（Dolezel J, Binarova P, Lucretti S.Analysis of nuclear DNA content in plant cells by flow cytometry. BiologiaPlantarum 1989, 31: 113 - 120）提取红掌细胞核悬液经流式细胞仪检测的直方图，结果见图2。无明显荧光峰，碎片较多，无法用于相关研究。
Claims (1)
1.一种红掌细胞核悬液制备方法，其特征在于，步骤如下：
1）取红掌嫩叶50 mg，置于培养皿中加入1 ml提取液，所述提取液主要由终浓度如下的组分组成：21g/L一水柠檬酸，100g/L聚乙烯吡咯烷酮K-40；
2）使用刀片在提取液中切碎红掌嫩叶，然后收集提取液经350 目尼龙网过滤，获得红掌细胞核悬液；
在步骤2）所述的红掌细胞核悬液中加入DNA荧光染料碘化丙锭propidium iodide ,终浓度为50μg/ ml，及Rnase，终浓度为50μg/ ml，染色后的提取液用于流式细胞仪的检测。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410115783.8A CN103940646B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种红掌细胞核悬液制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410115783.8A CN103940646B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种红掌细胞核悬液制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103940646A CN103940646A (zh) | 2014-07-23 |
| CN103940646B true CN103940646B (zh) | 2016-08-24 |
Family
ID=51188409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410115783.8A Active CN103940646B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种红掌细胞核悬液制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103940646B (zh) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2263067A1 (en) * | 1999-02-26 | 2000-08-26 | The Australian National University | Method of modifying plant morphology, biochemistry and physiology |
| CN102243150B (zh) * | 2010-05-14 | 2012-12-26 | 河北省农林科学院昌黎果树研究所 | 一种适于流式细胞分析的果树成熟叶片细胞核提取方法 |
-
2014
- 2014-03-26 CN CN201410115783.8A patent/CN103940646B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103940646A (zh) | 2014-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Suebkhampet et al. | Effect of using aqueous crude extract from butterfly pea flowers (Clitoria ternatea L.) as a dye on animal blood smear staining | |
| Bohanec | Ploidy determination using flow cytometry | |
| CN102517384A (zh) | 一种用流式细胞术快速鉴定非洲菊倍性的方法 | |
| Ghotbi Ravandi et al. | The effects of chromosome-doubling on selected morphological and phytochemical characteristics of Cichorium intybus L. | |
| Boon et al. | Variation in DNA-content in the genus Lilium | |
| CN102703597A (zh) | 血液白细胞分离液及其制作方法、真空采血管与应用 | |
| Li et al. | Determination of genome size and chromosome ploidy of selected taxa from Prunus armeniaca by flow cytometry | |
| CN103940646B (zh) | 一种红掌细胞核悬液制备方法 | |
| CN109937876A (zh) | 一种提高不结球白菜小孢子胚胎诱导率的方法 | |
| CN103940656B (zh) | 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 | |
| CN106957888A (zh) | 一种基于倍性分析仪快速鉴定仔鱼倍性的方法 | |
| CN103776678B (zh) | 一种草莓细胞核悬液制备方法 | |
| CN104152439A (zh) | 一种适用于烟草种子的rna提取方法 | |
| Li et al. | An improved protocol for flow cytometry analysis of dragon fruit (Hylocereus spp.)—Species with a high polysaccharide content | |
| CN104359738A (zh) | 一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法 | |
| CN101162224A (zh) | 一种以褶皱臂尾轮虫纯系进行环境监测的方法 | |
| CN109874671A (zh) | 一种南瓜单倍体植株的诱导方法及用于该诱导方法的培养基 | |
| CN204422311U (zh) | 一种海洋浮游细菌和病毒样品快速分离装置 | |
| CN109724976B (zh) | 基于纸层析的树木雌雄鉴别方法 | |
| Pasqual et al. | Flow cytometry applied in tissue culture | |
| CN108489884B (zh) | 一种小麦单倍体育种所得纯合系后代的流式鉴定方法 | |
| CN110146431A (zh) | 一种适用于虾脊兰属植物的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液 | |
| CN110055298A (zh) | 一种大田甜樱桃矮化砧木染色体倍性的检测方法 | |
| CN108165645A (zh) | 一种检测山茶属植物细胞核dna含量的方法 | |
| CN110127095A (zh) | 一种过滤白酒灌装线产生杂酒的制酒装置及其步骤工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |