CN103919717A - 一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂，其组成为0.01-7重量份酒石酸溴莫尼定，0.1-12重量份凝胶材料，注射用水加至100重量份。所述眼用凝胶制剂可以延长药物在眼内的滞留时间，减少用药次数，提高生物利用度并减小毒副作用。本发明同时公开了一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂的制备方法及其用途。

Description

一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种降低眼内压的药物，尤其涉及酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂及其制备方法和用途。

背景技术

青光眼是以眼压持续或间接增高、视野缺损、视***凹陷和萎缩及视力下降为主要特征的一种疾病。酒石酸溴莫尼定是一种α2-肾上腺素能激动剂，主要用于原发性开角型青光眼及高眼压的治疗。文献报道，酒石酸溴莫尼定除对α2-肾上腺素能受体具有高度选择性，且降眼压效果明显而持久，还有潜在的神经保护作用。其具有双重作用机制，即通过减少房水产生及增加巩膜葡萄膜外流而降低眼压，用药2h后降眼压效果达到高峰（参考文献：1.BurkeJ,Manlapaz C,Kharlamb A,Runde E,Padillo E,Spada C.In:Lanier,Limbird,editors.Therapeutic use of Alpha-2-adrenoceptoragonists in glaucoma.Inalpha-2-adrenergic receptors:structure,function and therapeutic implications.UK:Harwood AcademicPublishers;1996.p.179–87.；2.Torris CB,Camras CB,Yablonski ME.Acute versus chroniceffects of brimonidine on aqueous humordynamics in ocularhypertensive patients.Am J Ophthalmol.1999;128:8–14.）。

正因为酒石酸溴莫尼定在降眼压方面的效果显著，美国Allergan公司研制开发出0.2%酒石酸溴莫尼定滴眼液，商品名阿法根（Alphagan）,已在美国、英国、巴西及新西兰等国家获得批准并上市。其用药频率是3-4次/天，每次一滴。但由于大多数青光眼患者过量使用药物或者长期局部使用药物，所以产生了许多毒性反应。研究表明，其不良反应包括：口干、头痛、疲劳、嗜睡以及严重的心肺功能损伤。此外，对于婴幼儿还会产生更严重的毒副作用。因此，美国爱力根公司已研制0.1%和0.15%酒石酸溴莫尼定滴眼液，以降低其不良反应（参考文献：1.A Waldock,J Snape,C M Graham.Effects ofglaucoma medications on thecardiorespiratory and intraocular pressure statusofnewly diagnosed glaucoma patients.Br J Ophthalmol2000;84:710–713.;2.Ullrich Hoffmann,SaskiaKuno,GerdFranke.Adrenoceptor agonist poisoningafter accidental oral ingestion ofbrimonidine eye drops.PediatrCrit Care2004;5:282-285.）。

但滴眼液这种传统的眼部给药方式，本身就有滞留时间短、生物利用度低的缺点，在人体内药物与角膜的接触时间大约仅有1-2min，眼部生物利用度一般少于10%。给药频率在3-5次/天，但实际应用可多达10-20次/天，给药剂量也不易控制。因此，一部分药物会通过吸收进入全身循环而造成严重的毒副作用。

因此0.1%和0.15%酒石酸溴莫尼定滴眼液虽然可以在一定程度上降低酒石酸溴莫尼定的不良反应，但是由于仍然使用滴眼液的给药方式，所以效果有限。

发明内容

基于上述滴眼液存在的滞留时间短、生物利用度低的缺点，本发明提供了一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂。所述凝胶制剂包含下列组分：

在本发明的一个优选实施方案中，酒石酸溴莫尼定为0.05-3.0重量份，优选为0.05-0.2重量份，凝胶材料为0.2-2重量份，优选为0.2-0.5重量份。

在本发明的一个优选实施方案中，所述眼用凝胶制剂还包含等渗调节剂、增稠剂和防腐剂中的至少一种；其重量份分别为0.5-5、0.1-3、0.001-3。

在本发明的一个优选实施方案中，所述等渗调节剂、增稠剂和防腐剂的重量份分别为3-5、0.3-2、0.001-0.1。

在本发明的一个优选实施方案中，所述等渗调节剂为选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇和丙二醇中的至少一种；所述防腐剂为选自苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、洗必泰、苯扎氯铵、苯扎溴铵、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯中的至少一种；所述增稠剂为选自HPMC E4M、HPMC F4M和HPMC K4M中的至少一种。

在本发明的一个优选实施方案中，所述凝胶材料为选自丙烯酸聚合物、羟丙基纤维素、结冷胶、海藻酸钠、壳聚糖中的至少一种。

在本发明的一个优选实施方案中，所述凝胶材料为974P NF、980NF、981NF、940NF、941NF和934P NF中的至少一种。

本发明还提供了一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备凝胶基质：将包含0.1-12重量份凝胶材料的溶质A加入到具有足以使凝胶材料形成凝胶的重量份的缓冲液中，得到凝胶基质；

（2）制备药物溶液：将包含0.01-7重量份酒石酸溴莫尼定的溶质B溶解到具有足以使其溶解的重量份的注射用水中，得到药物溶液；

（3）混合：将（2）步制得的药物溶液加入步骤（1）制得的凝胶基质中，混合均匀后通过微孔滤膜过滤，再从过滤膜上加注射用水至100重量份。

在本发明的一个优选实施方案中，所述溶质A除包含0.1-12重量份凝胶材料外，还包含0.1-3重量份增稠剂；所述溶质B除包含0.01-5重量份酒石酸溴莫尼定外，还包含0.5-7重量份等渗调节剂和/或0.001-3重量份防腐剂。

本发明还提供了一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂在制备用于降低眼内压的药物中的应用，优选为在制备用于治疗青光眼药物中的应用。

本发明由于凝胶材料的引入，使得酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂克服了传统滴眼液的缺点，具有如下效果：

（1）因为凝胶组分可以增加药物的粘度，所以酒石酸溴莫尼定在角膜的滞留时间延长，起到缓释的作用，有效的解决了滴眼液代谢过快的问题，增加了生物利用度；同时也可以可以减少用药次数，从而降低由于全身吸收而导致的毒副作用；

（2）通过实验我们发现凝胶组分增加了酒石酸溴莫尼定的角膜渗透能力，因而增加了有效药物浓度；提高了降眼压效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1（A-L）为眼用凝胶制剂离体角膜透过曲线；

其中，图1（A）表示实施例1的离体角膜透过曲线；图1（B）表示实施例2的离体角膜透过曲线；图1（C）表示实施例3的离体角膜透过曲线；图1（D）表示实施例5的离体角膜透过曲线；图1（E）表示实施例7的离体角膜透过曲线；图1（F）表示实施例10的离体角膜透过曲线；图1（G）表示滴眼液（0.01%）的离体角膜透过曲线；图1（H）表示滴眼液（0.05%）的离体角膜透过曲线；图1（I）表示滴眼液（0.1%）的离体角膜透过曲线；图1（J）表示滴眼液（0.2%）的离体角膜透过曲线；图1（K）表示滴眼液（2%）的离体角膜透过曲线；图1（L）表示滴眼液（5%）的离体角膜透过曲线；

图2（A-F）为滴眼液和眼用凝胶制剂的角膜组织HE染色图片（放大倍数：20×）；

其中，图2（A）为对照眼角膜组织HE染色图片；图2（B）为实施例1角膜组织HE染色图片；图2（C）为实施例3角膜组织HE染色图片；图2（D）为实施例5角膜组织HE染色图片；图2（E）为实施例7角膜组织HE染色图片；图2（F）为实施例10角膜组织HE染色图片；

图3（A-F）为滴眼液和眼用凝胶制剂的结膜组织HE染色图片（放大倍数：20×）；

其中，图3（A）为对照眼结膜组织HE染色图片；图3（B）为实施例1结膜组织HE染色图片；图3（C）为实施例3结膜组织HE染色图片；图3（D）为实施例5结膜组织HE染色图片；图3（E）为实施例7结膜组织HE染色图片；图3（F）为实施例10结膜组织HE染色图片；

图4（A-F）为滴眼液和眼用凝胶制剂的虹膜组织HE染色图片（放大倍数：20×）；

其中，图4（A）为对照眼虹膜组织HE染色图片；图4（B）为实施例1虹膜组织HE染色图片；图4（C）为实施例3虹膜组织HE染色图片；图4（D）为实施例5虹膜组织HE染色图片；图4（E）为实施例7虹膜组织HE染色图片；图4（F）为实施例10虹膜组织HE染色图片；

图5为正常兔眼的眼用凝胶和滴眼液IOP差值-时间曲线图；

图6（A-G）为眼用凝胶和滴眼液对水负荷高眼压兔眼IOP-时间曲线图；

其中，其中，图6（A）为水负荷高眼压兔眼的正常组与滴眼液的IOP-时间曲线图；图6（B）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例1的IOP-时间曲线图；图6（C）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例2的IOP-时间曲线图；图6（D）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例3的IOP-时间曲线图；图6（E）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例5的IOP-时间曲线图；图6（F）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例7的IOP-时间曲线图；图6（G）为水负荷高眼压兔眼的正常组与实施例10的IOP-时间曲线图；且在图6（A-G）中，□表示正常组，◆分别代表滴眼液、实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10；

图7为水负荷高眼压兔眼的眼用凝胶和滴眼液IOP差值-时间曲线图；

图8（A-F）为眼用凝胶和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；

其中，图8（A）为实施例1和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；图8（B）为实施例2和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；图8（C）为实施例3和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；图8（D）为实施例5和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；图8（E）为实施例7和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；图8（F）为实施例10和滴眼液中药物在血浆中的药-时曲线图；在图8（A-F）中，◇表示滴眼液，■分别表示实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10。

具体实施方式

为了能够清楚的说明本发明的方案，先将本发明所需的各组分进行解释。

本发明应用的缓冲液为本领域常用的安全、无毒、无刺激性的缓冲溶液，包括但不限于硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液，其具体成分不够成对本发明的限定。

本发明技术方案所用的缓冲液用来溶解包含凝胶材料的溶质A以形成凝胶，其用量的范围只要能完全溶解溶质A以形成凝胶即可。本发明技术方案采用的用量可以为能完全溶解包含凝胶材料的溶质A以形成凝胶的最小量或者略大于该最小量，例如最小量的1.05倍，或最小量的1.1倍；其优选范围是15-35重量份。本领域技术人员可以容易的确定缓冲液的最小用量。例如，本领域技术人员可以通过将缓冲液在不断搅拌下慢慢加到溶质A中，当包含凝胶材料的溶质A刚好完全溶解于缓冲液并形成凝胶时，此时缓冲液的量即为最小量。可以理解的是，其它的用量范围也可以实现本发明技术方案，缓冲液的用量不能作为对本发明技术方案的限制。

本发明应用的丙烯酸聚合物可以理解为，以丙烯酸或丙烯酸的衍生物为单体聚合，或以它们为主而与其他不饱和化合物共聚合所制得的可以用作凝胶材料的安全、无毒、无刺激性的聚合物。

本发明应用的增稠剂为本领域常用的安全、无毒、无刺激性的增稠剂，包括但不限于羟丙基甲基纤维素HPMC E4M、HPMC F4M和HPMC K4M，其具体成分不够成对本发明的限定。

本发明应用的等渗调节剂为本领域常用的安全、无毒、无刺激性的等渗调节剂，包括但不限于氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇和丙二醇，其具体成分不够成对本发明的限定。

本发明应用的防腐剂为本领域常用的安全、无毒、无刺激性的防腐剂，包括但不限于苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、洗必泰、苯扎氯铵、苯扎溴铵、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯，其具体成分不够成对本发明的限定。

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

制备酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂，总质量为100g，其中，酒石酸溴莫尼定0.01g、974P NF0.1g，其余为注射用水。

其制备方法为：（1）制备凝胶基质，将0.1g974P NF在不断搅拌下加入15g磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，制得凝胶基质；

（2）制备药物溶液，将0.01g酒石酸溴莫尼定逐渐加入5g注射用水中，混合均匀，制得药物溶液；

（3）混合：将（2）步制得的药物溶液在不断搅拌下加入（1）步制得的凝胶基质中，搅拌均匀，溶液通过微孔滤膜过滤，再从过滤膜上加注射用水至100g。

实施例2-10

根据如实施例1所记载的方法，采用如表1所示组分及其重量份，分别制备实施例2到10中的眼用凝胶制剂；其中，在使用增稠剂时，其在制备凝胶基质的步骤中与凝胶材料一起加入到缓冲液中，在使用等渗调节剂和防腐剂时，其在制备药物溶液的步骤中与酒石酸溴莫尼定一起加入到注射用水中。

表1眼用凝胶制剂各组分及其重量份

注：本实施例所使用的增稠剂HPMC E4M、HPMC F4M、HPMCK4M为陶氏化学生产的产品，商品名分别为美多秀^TM E4M，美多秀^TMF4M，美多秀^TMK4M。

测试与评价

角膜滞留时间试验

发明人选用荧光素钠作为显色材料，分别以实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10为例，对所述的眼用凝胶制剂在体角膜滞留时间进行了研究。试验分为七组，每组6只家兔，其中六组家兔右眼结膜囊内分别滴入含有0.05%荧光素钠溶液的实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10的凝胶制剂50μL，第七组家兔右眼结膜囊内滴入0.2%含有荧光素钠溶液的酒石酸溴莫尼定滴眼液(自制)50μL，所有家兔左眼滴入同等体积的pH7.4的磷酸盐缓冲液作为对照。给药后使家兔眼睛被动闭合30秒。用裂隙灯观察并记录给药后角膜和结膜囊荧光素钠的荧光消褪时间。实验结果见表2。

表2兔眼滞留时间（n=6）

配方	在结膜囊滞留时间(min±SD)	在眼角膜滞留时间(min±SD)
			滴眼液(0.2%)	25±2	21±1
实施例1	170**±12	151**±8
			实施例2	165**±14	146**±9
实施例3	184**±10	169**±7
			实施例5	190**±17	157**±16
实施例7	188**±13	170**±11
			实施例10	177**±11	166**±9

Note:**:与滴眼液比p＜0.01

由表2可知，酒石酸溴莫尼定滴眼液在兔眼角膜和结膜囊中的滞留时间约为21min和25min，酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂与其相比，在结膜囊内的滞留时间和角膜上的留时间均显著增加。其中，以实施例5的滞留时间最长，其在结膜囊内的滞留时间约为190min，在角膜上的滞留时间约为157min。

由此可见，凝胶制剂角膜粘附性良好，延长了药物在眼部的滞留时间，起到了明显的缓释作用，解决了滴眼液代谢过快的问题。

体外角膜渗透试验

将家兔（n=3）处死，分离完整的角膜。将角膜固定于扩散池上，角膜内侧（房水侧）面向接受池，接受液为谷胱甘肽-碳酸氢钠林格液(GBR)溶液。角膜外侧面向供给池，取施例1、施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10的眼用凝胶剂2g置于供给池，于37℃下进行角膜渗透试验。用与施例1、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10相同浓度的酒石酸溴莫尼定滴眼液（自制）作为对照溶液同时进行试验。分别于不同时间将接受液从接受池中全部取出，并补充相同体积的接受液。用HPLC（High Performance LiquidChromatography，高效液相色谱法）法测定接受液中酒石酸溴莫尼定的浓度。

单位面积累积透过率Q可由下式求算：

$Q_n=V_0(C_n+\frac{V}{V_0}\underset{i=3}{\overset{n=1}{\mathrm{\Σ}}}{C}_i)=V_0{C}_0+V\underset{i-3}{\overset{n-1}{\mathrm{\Σ}}}{C}_i$

其中，Cn为t时间药物的测定浓度，Ci为t时间前的测定浓度，V0为接受池中溶液体积，V为取样体积。

表观渗透系数（Papp，cm·s-1）定义为：

$P_{\mathrm{app}}=\frac{\mathrm{\ΔQ}}{\mathrm{\Δt}\·C_0\·A\·60}$

其中，C0为供给池初始药物浓度；A为有效透过面积；ΔQ/Δt可由累积透过量-时间曲线稳态部分的斜率求得。酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂离体角膜透过实验结果分别见图1（A-L）、表3。

表3酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂离体角膜透过参数（n=3）

配方	Papp×106(cm/s)±SD
		实施例1	1.15**±0.23
实施例2	1.43**±0.26
		实施例3	1.26**±0.11
实施例5	1.79**±0.58
		实施例7	1.45**±0.33
实施例10	1.98**±0.35
		滴眼液（0.01%）	3.78±0.27
滴眼液（0.05%）	4.09±0.21
		滴眼液（0.1%）	3.98±0.09
滴眼液（0.2%）	3.41±0.33
		滴眼液（2%）	4.13±0.19
滴眼液（5%）	3.19±0.20

Note:**:与滴眼液比p＜0.01

图1（A-L）是各药物对离体角膜渗透结果进行释放曲线拟合，结果显示累积透过量与时间呈良好的线性关系，说明各药物通过角膜的扩散行为符合零级动力学特征。由表3可知，眼用凝胶制剂的表观渗透系数与相同浓度的滴眼液对照组相比，呈现极其显著性差异（p＜0.01），这表明凝胶制剂的角膜渗透速度和程度均慢于滴眼液组，由于角膜保存在GBR中的活性只有4～6h，超过一定时间后角膜活性会受到影响，因此本试验只进行了4个小时。

结合滞留时间试验的结果，我们可以推测凝胶制剂比同等浓度的滴眼液在角膜上持续释放的时间有所延长并且有更高的渗透性。此外，不同药物浓度的滴眼液之间的渗透率没有显著性差异，说明药物浓度对离体角膜的渗透无影响。

动物多次给药刺激性试验

为了考察本凝胶制剂是否对眼睛安全无刺激性，发明人进行了多次给药刺激性试验，观察角膜、结膜和虹膜的刺激反应情况，方法和结果如下：以六只家兔为实验动物，给药前先用裂隙灯观察每只家兔角膜、结膜和虹膜情况，如有病变或炎症者剔除不用。试验时，将100μL实施例1、实施例3、实施例5、实施例7和实施例10的凝胶制剂滴入家兔右眼结膜囊内，左眼滴入同等体积的pH7.4的磷酸盐缓冲液作为对照。给药后使家兔眼睛被动闭合30秒。每天给药4次，连续给药七天，用裂隙灯观察每次给药前眼部情况及最后一次给药后4h、12h、24h、48h、72h时角膜、虹膜、结膜的反应情况，按Draize评分标准对角膜、虹膜及结膜分别进行评分，算出平均分值，并与家兔左眼(对照眼)进行比较。末次观察后处死家兔，剪取双眼，肉眼观察有无红肿、水肿，并用4%多聚甲醛溶液固定后，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察角膜、虹膜及结膜有无炎性细胞浸润、出血、坏死等情况。角膜、结膜以及虹膜的病理组织学切片结果分别见图2(A-F)，图3(A-F)，图4(A-F)。

由图2(A-F)、图4(A-F)、图4(A-F)可知，凝胶制剂多次滴眼后，肉眼观察家兔角膜无混浊，结膜无充血及坏死。对家兔眼角膜、结膜和虹膜刺激性综合评分也皆为0分，表明酒石酸溴莫尼定眼用凝胶多次给药对家兔眼睛无刺激性。与对照眼相比，兔眼组织上皮细胞排列整齐，上皮基底膜完整，无明显的急性或慢性炎症表现。

正常兔眼药效学试验

药效学试验主要考察不同浓度的凝胶制剂对正常兔眼的降眼压效果，并与滴眼液比较。将家兔随机分为8组，每组6只，分别为正常组、实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7和实施例10以及和实施例5相同浓度的酒石酸溴莫尼定滴眼液组。为了减轻兔眼不适，测量前在家兔眼部滴入一滴0.1%(w/v)盐酸利多卡因进行局部麻醉。给药前每40min，交替测定左右眼的眼压值(IOP,the intraocular pressure)，持续2h，取平均值作为基础眼压。

实验采取自身对照法。实验时，每只家兔左眼准确滴入样品50μL，作为实验组；右眼给予生理盐水50μL，作为空白对照组。滴加后轻轻闭合双睑40s。然后在每一既定的时间点均采用同一方法对IOP进行测定。给药后每个IOP值均测定至少4次，并取平均值。每只家兔的眼压变化值（ΔIOP）用公式表示为：ΔIOP=IOP_controleye–IOP_treatmenteye，每个时间点的降压值为6只家兔ΔIOP的平均值。以ΔIOP对相应测定时间(t)作图。以ΔIOP峰值I_max，达到ΔIOP_max所需的时间T_max及ΔIOP-t曲线下面积AUC_0-10h、AUC_0-∞以及AUC_Rel(相对药时曲线下面积)为指标评价不同处方的作用效力。

AUC_Rel可由下式求算：

${\mathrm{AUC}}_{\mathrm{Rel}}=\frac{{\mathrm{AUC}}_{\left(\mathrm{\ΔIOP}\right)}\mathrm{Test}\left(\mathrm{designedformulations}\right)}{{\mathrm{AUC}}_{\left(\mathrm{\ΔIOP}\right)\mathrm{Reference}\left(\mathrm{marketedeyedrops}\right)}}$

不同制剂对正常家兔眼压的影响ΔIOP对时间的变化如图5，相关参数见表4。从图中可以看出，正常组眼压基本不变，在1.5h之前，滴眼液组的降眼压效果优于凝胶组，并于1.5h时达到最大降压值。1.5h之后凝胶组的降眼压效果优于滴眼液组，达到最大降压值的时间也随着药物浓度的升高而延长，且降眼压效果持续时间明显长于滴眼液组。

表4眼用凝胶和滴眼液相关动力学参数（n=6）

Note:*:与滴眼液比p＜0.05;**:与滴眼液比p＜0.01

表4中列出了相关的动力学参数。由表中可知，滴眼液达到峰值效应时IOP较对侧降低了7.47mmHg，实施例1和实施例2眼用凝胶制剂达到峰值效应时IOP较对侧分别降低了11.82mmHg和8.82mmHg，与滴眼液相比具有显著性差异（p＜0.05），且达峰时间显著延长。实施例2眼用凝胶制剂的AUC_0-10h分别为42.05mmHg*h，与滴眼液相比，提高了1.68倍，具有极其显著性差异（p＜0.01）。

实施例3和实施例5眼用凝胶达到峰值效应时IOP较对侧分别降低了10.24mmHg、11.82mmHg，与滴眼液相比具有及其显著性差异（p＜0.01）。达峰时间也较滴眼液显著延长，AUC_0→10h分别为49.79mmHg*h、54.07mmHg*h，与滴眼液相比分别提高了1.99和2.16倍，具有极其显著性差异（p＜0.01）。

实施例7和实施例10眼用凝胶达到峰值效应时IOP较对侧分别降低了12.94mmHg、11.82mmHg，与滴眼液相比具有及其显著性差异（p＜0.01）。达峰时间也较滴眼液显著延长，AUC_0→10h分别为59.69mmHg*h、74.27mmHg*h，与滴眼液相比分别提高了2.39和2.97倍，具有极其显著性差异（p＜0.01）。

水负荷高眼压兔眼药效学试验

本试验考察不同浓度的凝胶制剂对水负荷高眼压兔眼的降眼压效果，并与滴眼液比较。将家兔随机分为8组，每组6只，分别为正常组、实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7和实施例10以及和实施例5相同浓度的酒石酸溴莫尼定滴眼液组。给药方法同前。在滴药1h时插胃管用生理盐水灌胃，100ml/kg，于既定的时间点测定IOP，观察药物对水负荷引起IOP升高的抑制效应。实验结果见图6（A-G）、图7，相关参数见表5。

表5眼用凝胶和滴眼液相关动力学参数（n=6）

Note:*:与滴眼液比p＜0.05;**:与滴眼液比p＜0.01

从图6可知，各组对照组IOP值在水负荷后大幅度升高,灌水后40～50min内达峰值，4h后降至实验前；此时各浓度滴药眼的IOP值则都受到不同程度的抑制，眼压升幅程度和峰值明显降低，达峰时间也有不同程度的延长，其中0.2%的眼用凝胶制剂效果最好，达峰时间延迟至2h左右。

由图7和表5可知，滴眼液达到峰值效应时IOP较对侧降低了8.46mmHg，AUC_0→4h为15.99mmHg*h，AUC_0→∞为16.61mmHg*h。实施例2眼用凝胶达到峰值效应时IOP较对侧降低了11.99mmHg，与滴眼液相比具有显著性差异（p＜0.05）。

实施例3和实施例5眼用凝胶制剂达到峰值效应时IOP较对侧分别降低了15.80mmHg和17.84mmHg，与滴眼液相比具有及其显著性差异（p＜0.01）。AUC值也随着药物浓度的升高而增大，其中，实施例5眼用凝胶的AUC_0→4h为40.86mmHg*h，AUC_0→∞为40.44mmHg*h，分别较滴眼液相比提高了2.55倍和2.44倍，具有极其显著性差异（p＜0.01）。

实施例7和实施例10眼用凝胶制剂达到峰值效应时IOP较对侧分别降低了18.18mmHg和21.11mmHg，与滴眼液相比具有及其显著性差异（p＜0.01）。AUC值也随着药物浓度的升高而增大。

动物药代动力学试验

本试验通过考察滴眼液以及不同浓度的眼用凝胶制剂在血浆中的药物浓度，从而研究不同制剂对于全身吸收的影响。实验中，将家兔随机分为7组，每组6只，分别为实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例7、实施例10以及和实施例5相同浓度的酒石酸溴莫尼定滴眼液组。分别于兔眼结膜囊内滴入100μL不同浓度的眼用凝胶制剂和滴眼液。在给药后0.5h，1h，1.5h，2h，4h，4h，6h，8h，10h，12h和24h经兔耳缘静脉取全血抗凝，4000rpm离心10min，用HPLC-MS/MS检测血浆中的药物浓度。血浆中的药代动力学参数见表6，药物在血浆中的药-时曲线见图8（A-F）。

表6血浆中的药代动力学参数

Note:*:与滴眼液比p＜0.05;**:与滴眼液比p＜0.01

药代动力学参数表明，滴眼液的T_max为1h，C_max为14.45ng·ml^-1,AUC_0→24h为47.45ng·ml^-1·h,AUC_0→∞为68.81ng·ml^-1·h。与滴眼液组相比，实施例2眼用凝胶的T_max为2h，有显著性差异（p＜0.01），C_max为6.18ng·ml^-1，低于滴眼液,有显著性差异（p＜0.05），,AUC_0→24h为40.55ng·ml^-1·h，AUC_0→∞为47.77ng·ml^-1·h，明显低于滴眼液,具有及其显著性差异（p＜0.01）。实施例3和实施例5眼用凝胶的T_max分别为2.84h、2.67h，与滴眼液组相比具有及其显著性差异（p＜0.01），C_max为8.51ng·ml^-1和5.82ng·ml^-1，同样具有显著性差异（p＜0.05），AUC_0→24h为42.08ng·ml^-1和44.45ng·ml_-1·h，AUC_0→∞为57.82、78.54ng·ml^-1·h，与滴眼液无显著性差异。

由实验结果可知，0.2%眼用凝胶制剂的全身吸收与同等药物浓度的滴眼液相当，0.1%眼用凝胶的全身吸收低于滴眼液，而0.05%眼用凝胶的全身吸收明显低于滴眼液。

本发明中较低药物浓度的眼用凝胶制剂与市售滴眼液的药效相当，但全身吸收较滴眼液显著降低，可以减小毒副作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂，其包含下列组分：

2.如权利要求1所述的眼用凝胶制剂，其中，酒石酸溴莫尼定为0.05-3.0重量份，优选为0.05-0.2重量份，凝胶材料为0.2-2重量份，优选为0.2-0.5重量份。

3.如权利要求1所述的眼用凝胶制剂，其中，所述眼用凝胶制剂还包含等渗调节剂、增稠剂和防腐剂中的至少一种；其重量份分别为0.5-5、0.1-3、0.001-3。

4.如权利要求3所述的眼用凝胶制剂，其中，所述等渗调节剂、增稠剂和防腐剂的重量份分别为3-5、0.3-2、0.001-0.1。

5.如权利要求3所述的眼用凝胶制剂，其中，所述等渗调节剂为选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇和丙二醇中的至少一种；所述防腐剂为选自苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、洗必泰、苯扎氯铵、苯扎溴铵、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯中的至少一种；所述增稠剂为选自HPMC E4M、HPMC F4M和HPMC K4M中的至少一种。

6.如权利要求1至5中任意一权利要求所述的眼用凝胶制剂，其中，所述凝胶材料为选自丙烯酸聚合物、羟丙基纤维素、结冷胶、海藻酸钠、壳聚糖中的至少一种。

7.如权利要求1-5中任意一权利要求所述的眼用凝胶制剂，其中，所述凝胶材料为974P NF、980NF、981NF、940NF、941NF和934P NF中的至少一种。

8.一种酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备凝胶基质：将包含0.1-12重量份凝胶材料的溶质A加入到具有足以使凝胶材料形成凝胶的重量份的缓冲液中，得到凝胶基质；

（2）制备药物溶液：将包含0.01-7重量份酒石酸溴莫尼定的溶质B溶解到具有足以使其溶解的重量份的注射用水中，得到药物溶液；

（3）混合：将（2）步制得的药物溶液加入步骤（1）制得的凝胶基质中，混合均匀后通过微孔滤膜过滤，再从过滤膜上加注射用水至100重量份。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述溶质A除包含0.1-12重量份凝胶材料外，还包含0.1-3重量份增稠剂；所述溶质B除包含0.01-7重量份酒石酸溴莫尼定外，还包含0.5-5重量份等渗调节剂和/或0.001-3重量份防腐剂。

10.一种如权利要求1～7中任意一项所述的酒石酸溴莫尼定眼用凝胶制剂在制备用于降低眼内压的药物中的应用，优选为在制备用于治疗青光眼药物中的应用。