CN103884694A - 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒 - Google Patents

一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN103884694A
CN103884694A CN201210562574.9A CN201210562574A CN103884694A CN 103884694 A CN103884694 A CN 103884694A CN 201210562574 A CN201210562574 A CN 201210562574A CN 103884694 A CN103884694 A CN 103884694A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lkb1
quantum dot
monoclonal antibody
sample
ghs
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201210562574.9A
Other languages
English (en)
Inventor
万晓春
王伟
粟武
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Original Assignee
Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS filed Critical Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority to CN201210562574.9A priority Critical patent/CN103884694A/zh
Publication of CN103884694A publication Critical patent/CN103884694A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种LKB1蛋白检测方法，包括以下步骤：制备LKB1单克隆抗体；用量子点标记LKB1单克隆抗体，得到量子点LKB1单克隆抗体；用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应；将反应后的标本置于显微镜下观察。本发明还提供了含有量子点LKB1单克隆抗体的检测试剂盒。本发明的检测方法以量子点LKB1单克隆抗体作为探针，与LKB1蛋白结合的特异性增强，毒性减小使用更安全，着色标本可长期保存，进行重复观察；操作简单、灵敏度高。

Description

一种LKB1蛋白检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种LKB1蛋白检测方法及试剂盒。
背景技术
人LKB1（Liver Kinase B1）基因或称STK11（Serine-Threonine kinase 11）基因，定位于人染色体19p13.3位置，含10个外显子，编码的LKB1蛋白由433个氨基酸组成，分子量约为50kDa，包括激酶区域（44-309）、N端调节域和C端调节域。N端调节域含一个核定位序列，使LKB1蛋白定位于细胞核内。LKB1基因编码一种丝-苏氨酸蛋白激酶，参与多种生物学过程，包括细胞周期阻滞、p53介导的凋亡、细胞极性诱导等，介导TGF-β、G蛋白偶联等信号通路，在细胞生长、分化调控中发挥着重要作用，几乎在人体多种组织中均有表达，以上皮、睾丸生精小管、肝脏、小肠和骨骼肌最多。LKB1基因是肿瘤易患综合症，即PJ综合征（Peutz-Jeghers syndrome，PJS）的致病基因，在高达90%的PJS病人中可检测到LKB1基因的胚系突变。LKB1基因的功能异常还与全身多种散发性肿瘤的发生密切相关，如在30-40%的非小细胞肺癌、20%的***、19%鳞状细胞癌及13%乳腺侵润性导管癌中均有LKB1基因的失活。另外，LKB1基因在恶性肿瘤发生中起着重要作用，已有研究证实LKB1能够使细胞周期停滞在G1期，抑制细胞生长。LKB1基因是一个较为普遍的抑癌基因。LKB1基因表达情况对肿瘤发生和预后影响都是一个重要的中间指标，对揭示LKB1基因抑制细胞恶性增殖的分子背景有重要的意义，因此，LKB1基因表达情况的检测，即LKB1蛋白水平检测或LKB1mRNA的水平检测是亟待解决的问题。
目前，LKB1蛋白的检测方法主要为免疫组织化学法，一种现有技术利用兔源多克隆抗体作为一抗，然后用标记了化学显色试剂或者荧光基团的二抗对一抗进行标记，一抗与LKB1蛋白结合后再用化学显色试剂的颜色或者荧光基团的荧光信号来判断LKB1蛋白的丰度。这种间接的检测方法步骤繁琐耗时长，并且由于多克隆抗体的特异性不强导致非特异性信号的产生，对检测结果的准确性有很大影响。还有一种现有技术是利用DAB显色的原理，对LKB1鼠源单克隆抗体进行显色标记，然后LKB1抗原免疫组化染色，再用光学显微镜观察，出现棕黄色或棕褐色的为阳性，综合考虑阳性细胞着色深浅和阳性细胞占所观察同类细胞的比例两项指标，进行半定量判断结果。这种方法中使用的DAB染色剂有毒性，为疑似致癌物质，不安全，另外，显色剂显色反应受温度影响大，且显色时间受到限制，不能长期保存，实验人员无法将组织切片保存进行重复观察。
量子点具有宽的激发光谱和窄的发射光谱（光谱宽在20-40nm之间），通过改变量子点的尺寸或者改变量子点内核的组分可以在很大范围内调节量子点的发射光谱。量子点与有机荧光团相比有几个突出的光学特点：窄的发射光谱能减少光谱重叠，从而能同时区别多个荧光团；宽的激发光谱能在单一波长下激发多种颜色的光谱。此外量子点具有光稳定性和抗降解性，对细胞的毒性小。这些独特的光学性质使量子点能在体内跟踪多个细胞和制备体外多个分子生物传感器，而且由于量子点的可调谐的发光波长，使量子点能促进组织深层的细胞成像。
发明内容
本发明旨在解决上述现有技术中存在的问题，提出一种LKB1蛋白检测方法，包括以下步骤：
用量子点标记LKB1单克隆抗体，得到量子点LKB1单克隆抗体；
用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应；
将反应后的标本置于显微镜下观察，
其中，所述的标本为细胞标本或组织标本，所述的细胞标本为组织印片、细胞爬片或细胞涂片，所述的组织标本为石蜡切片或冰冻切片。
优选地，所述的用量子点标记LKB1单克隆抗体包括以下步骤：
将量子点表面用GHS进行修饰，得到GSH-量子点；
在GSH-量子点中加入SMCC，形成SMCC-GHS-量子点；
将SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应，得到量子点LKB1单克隆抗体。
优选地，所述的将量子点表面用GHS进行修饰为：
将量子点加入到GHS中进行反应，得到第一反应液；
将第一反应液离心，收集沉淀；
将所得沉淀用potassium t-butoxide溶液溶解，得到第二液体；
将第二液体透析，去除第二液体中的GSH与potassium t-butoxide，得到GSH-量子点。
优选地，所述的SMCC-GHS-量子点的制备方法为：
将GSH-量子点与sulfo-SMCC水溶液混合反应，得到第三反应液；
在第三反应液中加入巯基乙醇，得到第四反应液；
将第四反应液进行层析，得到第五反应液，再将层析后得到的第五反应液离心，离心所得沉淀重新溶解，得到SMCC-GHS-量子点。
优选地，所述的SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应为：
LKB1单克隆抗体中加入DTT溶液进行还原，得到还原的LKB1单克隆抗体；
将SMCC-GHS-量子点与还原的LKB1单克隆抗体混合反应，得到量子点LKB1单克隆抗体。
优选地，所述的用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应包括以下步骤：
将标本用固定液进行固定；
用洗涤液冲洗固定后的标本；
过氧化氢处理标本；
封闭液处理标本；
将量子点LKB1单克隆抗体与标本进行反应。
本发明还提供了LKB1蛋白检测试剂盒，包括量子点LKB1单克隆抗体。
优选地，还包括固定液和洗涤液。
优选地，还包括封闭液。
优选地，还包括过氧化氢。
优选地，还包括阳性对照品和阴性对照品，所述的阳性对照品为过表达LKB1蛋白的细胞，所述的阴性对照品为LKB1表达沉默的细胞。
优选地，所述的固定液选自戊二醛、多聚甲醛、乙醇、甲醇或丙酮。
优选地，所述的洗涤液为PBS溶液。
优选地，所述的封闭液为正常山羊血清。
本发明的LKB1蛋白检测方法利用抗原抗体特异性结合的原理，以量子点LKB1单克隆抗体作为探针与抗原（LKB1蛋白）结合，利用量子点发出的荧光对LKB1蛋白进行定位、定性及定量研究。细胞样品或组织样本被制成标本后，加入量子点LKB1单克隆抗体反应，将反应后的标本置于荧光显微镜下观察。LKB1蛋白与量子点LKB1单克隆抗体特异性的结合后，LKB1蛋白发出荧光，能够发出荧光的细胞为阳性细胞，不能发出荧光的为阴性细胞，还可通过综合考虑阳性细胞荧光强度和阳性细胞占所观察同类细胞的比例两项指标，进行半定量判断结果。
本发明的有益效果在于，本发明的检测方法以量子点LKB 1单克隆抗体作为探针，与LKB 1蛋白结合的特异性增强，毒性减小使用更安全，着色标本可长期保存，进行重复观察；本发明的检测方法的有益效果还在于操作简单、灵敏度高。
附图说明
图1是荧光显微镜下乳腺癌细胞BT474涂片图。
图2是荧光显微镜下胃癌细胞BGC823涂片图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本申请的技术方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。本发明的LKB1蛋白检测方法利用抗原抗体特异性结合的原理，以量子点LKB1单克隆抗体作为探针与抗原（LKB1蛋白）结合，利用量子点发出的荧光对LKB1蛋白进行定位、定性及定量研究。
本发明的LKB 1蛋白检测方法采用以下技术方案实现：
用量子点标记LKB1单克隆抗体，得到量子点LKB1单克隆抗体；
用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应；
将反应后的标本置于显微镜下观察，
其中，所述的标本为细胞标本或组织标本，所述的细胞标本为组织印片、细胞爬片或细胞涂片，所述的组织标本为石蜡切片或冰冻切片。
LKB1单克隆抗体可选用鼠源LKB1单克隆抗体，本实施例中选用的是abcam公司的鼠抗人LKB1单克隆抗体ab15095，也可选用其他LKB1单克隆抗体。
量子点可选用CdSe、CdTe、CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdTe/CdS/ZnS、CdSe/CdS/ZnS、CdSe/CdZnS、CdSe:Mn2+、CdTe：Mn2+、CdSe:Zn2+或CdTe:Zn2+，不限于以上。本实施例中使用的量子点是CdSe/CdZnS。
本实施例中，量子点LKB1单克隆抗体采用以下方法制备：
将量子点表面用GHS进行修饰，得到GSH-量子点；
在GSH-量子点中加入SMCC，形成SMCC-GHS-量子点；
将SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应，得到量子点LKB1单克隆抗体。
本实施例中采用SMCC（Succinimidyl 4-（N-maleimidomethyl）cyclohexane-1-carboxylate，琥珀酰亚胺-4-环已烷-1-碳酸酯）作为螯合剂，连接LKB1单克隆抗体与GHS-量子点，SMCC分子一端的NHS酯基团与LKB1单克隆抗体的伯氨反应形成稳定的酰胺键，SMCC的另一端（马来酰亚胺基团一端）可与GHS-量子点的巯基发生特异***联。
LKB1单克隆抗体与量子点的连接方法还可以通过EDC HCl和NHS共同作用等其他方式实现，并不限于以上。
另外，GHS-量子点的制备方法优选为：
将量子点加入到GHS中进行反应，得到第一反应液；
将第一反应液离心，收集沉淀；
将所得沉淀用potassium t-butoxide溶液溶解，得到第二液体；
将第二液体透析，去除第二液体中的GSH与potassium t-butoxide，得到GSH-量子点。
在SMCC-GHS-量子点制备中，为了提高SMCC-GHS-量子点的回收率，在进行SMCC-GHS-量子点纯化前在反应液中加入巯基乙醇，再对反应液进行层析，本实施例中采用的是柱层析的方法，再将层析后得到的反应液离心，离心所得沉淀重新溶解，得到SMCC-GHS-量子点。
在SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应制备量子点LKB1单克隆抗体的步骤中，为了提高SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体的作用，SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体混合反应之前，在LKB1单克隆抗体中加入DTT溶液进行还原，得到还原的LKB1单克隆抗体。
另外，所述的用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应包括以下步骤：
将标本用固定液进行固定；
用洗涤液冲洗固定后的标本；
过氧化氢处理标本；
封闭液处理标本；
将量子点LKB1单克隆抗体与标本进行反应。
为了使细胞内的物质尽量保持原有的形态、结构、位置，在标本上加入了固定液，本实施例中固定液优选为戊二醛、多聚甲醛、乙醇、甲醛或丙酮，更优选为多聚甲醛或丙酮，最优选为丙酮。洗涤液优选为PBS溶液。为了减少量子点LKB1单克隆抗体与除LKB1蛋白外的其他蛋白的非特异性结合，在量子点LKB1单克隆抗体处理标本之前加入封闭液，所述的封闭液优选为血清，更优选为正常山羊血清或牛血清蛋白（BSA），最优选为正常山羊血清。
本发明还提供了LKB1蛋白检测试剂盒，包括量子点LKB1单克隆抗体，还包括固定液、洗涤液、过氧化氢、封闭液、阳性对照品和阴性对照品。
所述的阳性对照品为过表达LKB1蛋白的细菌，所述的阴性对照品为LKB1表达沉默的细菌。所述的固定液选自戊二醛、多聚甲醛、乙醇、甲醇或丙酮。所述的洗涤液为PBS溶液。所述的封闭液为正常山羊血清。
以下为实施例。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
LKB1蛋白检测步骤：
（1）CdSe/CdZnS量子点表面GSH修饰
在1ml的CdSe/CdZnS量子点溶液中缓慢加入1ml浓度为200mg/ml的GSH溶液，加热至60℃进行反应。GSH包被CdSe/CdZnS量子点形成GSH-量子点，GSH-量子点沉淀，离心收集沉淀。用1ml浓度为100mg/ml的potassiumt-butoxide溶解沉淀，水浴超声5min。水浴超声后的水溶液用0.2μm滤膜过滤，然后在10mM PBS溶液中透析除去多余的GSH和potassium t-butoxide。
（2）SMCC螯合的量子点合成
在上述1ml GSH-量子点PBS溶液中加入100μl浓度为1mM的sulfo-SMCC水溶液，反应30min。然后加入1mM巯基乙醇。再将反应混合物过NapTM-5柱子，用PBS溶液洗脱。洗脱液15000g离心5min去除聚合的量子点。
（3）SMCC-GSH-量子点与LKB1单克隆抗体螯合
1mg LKB1单克隆抗体溶于1ml水中，加入20μl浓度为1M的DTT对LKB1单克隆抗体进行还原；在10mM PBS溶液中进行透析；还原后的LKB1单克隆抗体加入到上述制备的SMCC-GSH-量子点中孵育1h，让LKB1单克隆抗体与量子点结合；然后在10mMPBS溶液中进行透析；0.2μm滤膜过滤去除聚合的量子点。
（4）利用量子点-LKB1单克隆抗体进行冰冻切片的免疫组化检测
a.冰冻切片4～8μm，室温放置30min后，浸入4℃丙酮中固定10分钟；
b.PBS冲洗，5min×3次；
c.用3%过氧化氢孵育5～10分钟消除内源性过氧化物酶活性；
d.PBS冲洗，5min×3次；
e.5-10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的QDs-LKB1抗体，37℃孵育1~2小时或4℃过夜；
f.PBS冲洗，2分钟×3次；
g.复染，脱水透明、封片；
h.在荧光显微镜下观察。
其中，CdSe/CdZnS量子点合成过程如下：在25ml三颈烧瓶中混合1gTOPO，3g HDA，66mg cadmium,4-pentanedionate，250mg月桂酸（stearic acid），冲入氩气，加热至320℃，恒温搅拌30min，快速加入0.2ml 100mg/ml TBP溶液，冷却至300℃恒温，CdSe量子点开始合成，检测其荧光发射波谱，当发射波谱达到635nm时，继续冷却至250℃，恒温，于三颈烧瓶中逐滴加入0.25mlCd-Zn-Se储存溶液，伴随剧烈搅拌，同时检测发射波谱，当红移15nm后继续冷却至100℃，搅拌5h，冷却至50℃时，加入过量的甲醇使量子点产物沉淀，后离心收集沉淀，将所得沉淀用20ml四氢呋喃溶解备用。
应用例1
将乳腺癌细胞BT474制成细胞涂片，用实施例1中的LKB 1蛋白检测方法对乳腺癌细胞涂片进行观察。图1为荧光显微镜下的观察到的乳腺癌细胞BT474。
应用例2
将胃癌细胞BGC823制成细胞涂片，用实施例1中的LKB 1蛋白检测方法对胃癌细胞涂片进行观察。图2为荧光显微镜下的观察到的胃癌细胞BGC 823。
应用例3
将胃癌组织标本与正常胃粘膜标本按照实施例1中的方法在显微镜下观察，综合每张切片中阳性细胞荧光强度和阳性细胞所占观察同类细胞的百分比两个指标，进行半定量检测。
表1荧光强度评价
Figure BDA00002630122900091
表2阳性细胞比例评价
Figure BDA00002630122900101
标本评分=荧光强度值评分×阳性细胞比例评分
根据标本评分确定LKB1蛋白的水平：
0-1分为阴性；
2-3分为弱阳性；
4分以上为强阳性。
40例胃癌组织标本（胃癌组）与40例正常胃粘膜标本（正常组）LKB1蛋白的水平比较结果见表3，正常胃粘膜标本LKB1蛋白水平全部为强阳性，胃癌组织标本LKB1蛋白水平没有强阳性，37.5%为弱阳性，62.5%为阴性，根据SPSS 13.0统计软件的数据处理结果，胃癌组与正常组的LKB 1蛋白水平差异显著（P<0.05）。
表3各组LKB 1蛋白的水平比较
Figure BDA00002630122900102
实施例2
按照以下配方制作LKB1蛋白检测试剂盒：
量子点LKB1单克隆抗体：按照实施例1步骤（1）-（3）合成量子点LKB1单克隆抗体；
固定液：丙酮；
洗涤液：PBS溶液；
封闭液：5-10%正常山羊血清；
过氧化氢：浓度为3%-5%。
本实施例中制备的LKB 1蛋白检测试剂盒的使用方法：
将标本用固定液进行固定；
用洗涤液冲洗固定后的标本；
过氧化氢处理标本；
封闭液处理标本；
将量子点LKB1单克隆抗体与标本进行反应。
实施例3
按照以下配方制作LKB1蛋白检测试剂盒：
量子点LKB1单克隆抗体：按照实施例1步骤（1）-（3）合成量子点LKB1单克隆抗体；
固定液：丙酮；
洗涤液：PBS溶液；
封闭液：5-10%正常山羊血清；
过氧化氢：浓度为3%-5%；
阴性对照：构建靶向LKB 1基因的siRNA表达质粒，将所述质粒转染到HEK293T细胞；
阳性对照：构建LKB1基因表达质粒，将所述质粒转染到HEK293T细胞。
本实施例中制备的LKB1蛋白检测试剂盒的使用方法：
将标本用固定液进行固定；
用洗涤液冲洗固定后的标本；
过氧化氢处理标本；
封闭液处理标本；
将量子点LKB1单克隆抗体与标本进行反应。
阴性对照和阳性对照使用时将阴性对照细胞和阳性对照细胞制作成细胞涂片或细胞爬片，用上述方法进行处理，在荧光显微镜下观察，阴性对照和阳性对照作为判断荧光强度的基准。
虽然本发明参照当前的较佳实施方式进行了描述，但本领域的技术人员应能理解，上述较佳实施方式仅用来说明本发明，并非用来限定本发明的保护范围，任何在本发明的精神和原则范围之内，所做的任何修饰、等效替换、改进等，均应包含在本发明的权利保护范围之内。

Claims (12)

1.一种LKB1蛋白检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
用量子点标记LKB1单克隆抗体，得到量子点LKB1单克隆抗体；
用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应；
将反应后的标本置于显微镜下观察，
其中，所述的标本为细胞标本或组织标本，所述的细胞标本为组织印片、细胞爬片或细胞涂片，所述的组织标本为石蜡切片或冰冻切片。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的用量子点标记LKB1单克隆抗体包括以下步骤：
将量子点表面用GHS进行修饰，得到GSH-量子点；
在GSH-量子点中加入SMCC，形成SMCC-GHS-量子点；
将SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应，得到量子点LKB1单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的将量子点表面用GHS进行修饰为：
将量子点加入到GHS中进行反应，得到第一反应液；
将第一反应液离心，收集沉淀；
将所得沉淀用potassium t-butoxide溶液溶解，得到第二液体；
将第二液体透析，去除第二液体中的GSH与potassium t-butoxide，得到GSH-量子点。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的SMCC-GHS-量子点的制备方法为：
将GSH-量子点与sulfo-SMCC水溶液混合反应，得到第三反应液；
在第三反应液中加入巯基乙醇，得到第四反应液；
将第四反应液进行层析，得到第五反应液，再将层析后得到的第五反应液离心，离心所得沉淀重新溶解，得到SMCC-GHS-量子点。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的SMCC-GHS-量子点与LKB1单克隆抗体反应为：
LKB1单克隆抗体中加入DTT溶液进行还原，得到还原的LKB1单克隆抗体；
将SMCC-GHS-量子点与还原的LKB1单克隆抗体混合反应，得到量子点LKB1单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的用量子点LKB1单克隆抗体与标本反应包括以下步骤：
将标本用固定液进行固定；
用洗涤液冲洗固定后的标本；
过氧化氢处理标本；
封闭液处理标本；
将量子点LKB1单克隆抗体与标本进行反应。
7.一种LKB1蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括量子点LKB1单克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括固定液、洗涤液、封闭液和过氧化氢。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照品和阴性对照品，所述的阳性对照品为过表达LKB1蛋白的细胞，所述的阴性对照品为LKB1表达沉默的细胞。
10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述的固定液选自戊二醛、多聚甲醛、乙醇、甲醇或丙酮。
11.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为PBS溶液。
12.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述的封闭液为正常山羊血清。
CN201210562574.9A 2012-12-21 2012-12-21 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒 Pending CN103884694A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210562574.9A CN103884694A (zh) 2012-12-21 2012-12-21 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210562574.9A CN103884694A (zh) 2012-12-21 2012-12-21 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103884694A true CN103884694A (zh) 2014-06-25

Family

ID=50953710

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210562574.9A Pending CN103884694A (zh) 2012-12-21 2012-12-21 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103884694A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105158477A (zh) * 2015-06-15 2015-12-16 中国科学院上海微***与信息技术研究所 一种量子点荧光探针及其应用
CN105865879A (zh) * 2016-05-19 2016-08-17 四川金域医学检验中心有限公司 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102121938A (zh) * 2010-01-07 2011-07-13 美国Rq生物科技有限公司 一种免疫学检测试剂盒及其制备和使用方法
CN102565393A (zh) * 2012-01-15 2012-07-11 中国人民解放军第四军医大学 一种检测体液细胞中结核杆菌特异性分泌抗原的免疫细胞化学染色试剂盒
WO2012115885A1 (en) * 2011-02-22 2012-08-30 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102121938A (zh) * 2010-01-07 2011-07-13 美国Rq生物科技有限公司 一种免疫学检测试剂盒及其制备和使用方法
WO2012115885A1 (en) * 2011-02-22 2012-08-30 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers
CN102565393A (zh) * 2012-01-15 2012-07-11 中国人民解放军第四军医大学 一种检测体液细胞中结核杆菌特异性分泌抗原的免疫细胞化学染色试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DHERMENDRA K. TIWARI 等: "Synthesis and Characterization of Anti-HER2 Antibody Conjugated CdSe/CdZnS Quantum Dots for Fluorescence Imaging of Breast Cancer Cells", 《SENSORS》 *
ERIK R. KLINE 等: "LOCALIZATION-SPECIFIC LKB1 LOSS IN HEAD AND NECK SQUAMOUS CELL CARCINOMA METASTASIS", 《HEAD & NECK》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105158477A (zh) * 2015-06-15 2015-12-16 中国科学院上海微***与信息技术研究所 一种量子点荧光探针及其应用
CN105865879A (zh) * 2016-05-19 2016-08-17 四川金域医学检验中心有限公司 一种冰冻切片免疫组化染色操作方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Saarnio et al. Immunohistochemical study of colorectal tumors for expression of a novel transmembrane carbonic anhydrase, MN/CA IX, with potential value as a marker of cell proliferation
Chen et al. The biocompatibility of quantum dot probes used for the targeted imaging of hepatocellular carcinoma metastasis
ES2434491T3 (es) An�lisis inmunohistoqu�mico multiplex in situ
ES2583079T3 (es) Matrices a base de anticuerpos para detectar transductores de señales múltiples en células de rara circulación
US9618512B2 (en) Biomarker for breast cancer
CN103328979B (zh) 组合的组织学染色
US20190112356A1 (en) High-affinity immunopolymers
MX2014008928A (es) Metodo para detectar celulas tumorales circunlantes 5t4-positivas y metodos de diagnostico de cancer 5t4-positivo en un sujeto mamifero.
CN105572095B (zh) 一种人血清白蛋白的检测试剂及定量检测方法
CN107923911A (zh) 使用聚乙二醇化分析物特异性结合剂的基于颗粒的免疫测定法
CN104313139A (zh) 一种单分子细胞检测方法及其应用和单分子细胞检测试剂盒
Wang et al. OregonFluor enables quantitative intracellular paired agent imaging to assess drug target availability in live cells and tissues
US20220186296A1 (en) Multiplexed signal amplification methods using enzymatic based chemical deposition
CN106518800B (zh) 一种基于氢离子激活的双响应检测ClO-/H2S荧光分子探针的制备方法及应用
CN103884694A (zh) 一种lkb1蛋白检测方法及试剂盒
JPS59178362A (ja) 被検体の検知法
Yudhistira et al. Biotinylated fluorescent polymeric nanoparticles for enhanced immunostaining
CN102782497A (zh) 测定
WO2021226516A2 (en) Oligonucleotide-tyramide conjugate and use of the same in tyramide-signal amplification (tsa)-based detection methods
KR20210098874A (ko) 화합물, 이를 포함하는 시스테인 탐지용 조성물, 및 시스테인 검출 방법
CN103882099A (zh) 一种LKB1mRNA检测方法、试剂盒及基因芯片
CN108949154A (zh) 含萘酰亚胺的小分子作为荧光探针在rna检测和成像方面的应用
CN108918887A (zh) 一种铁蛋白免疫比浊法检测试剂盒
Le et al. Compact quantum dots for quantitative cytology
KR20140062677A (ko) 광분해성 링커에 결합된 형광 염료를 이용한 세포 분리 또는 세포 계수 방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20140625

RJ01 Rejection of invention patent application after publication