CN103804309B - 一种氯肟类化合物及其制备方法和在制药中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种氯肟类化合物及其制备方法和在制药中的应用。所述氯肟类化合物具有如下通式I的结构：此类化合物具有很强的协同调节热休克蛋白活性的作用，能够用来治疗大鼠因注射Aβ1‑42引起的神经退行性疾病，目的是为了治疗人类的神经退行性疾病。此类化合物也具有显著的抵抗应激的作用，可用于制备治疗由于蛋白质错误折叠和/或聚集、氧化应激所引起疾病的新药。
Description
技术领域
本发明涉及一种氯肟类化合物，及其制备方法和在制备用于治疗和预防由于蛋白质折叠错误或聚集引起的神经退行性疾病，代谢***疾病，心、脑血管***疾病以及炎症的药物中的应用。
背景技术
蛋白质对人类和动物的生命都非常重要，是人体的三大营养物质之一，是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。在细胞内，大多数天然蛋白质能自发形成比较稳定的天然结构，或被配体和代谢因子稳定。但发现大约有10%～20%新合成的多肽链需与分子伴侣结合，借助分子伴侣才能正确折叠。还有大约20%新合成的多肽链不能形成正确的三维结构而被蛋白酶所降解。翻译后的质量控制主要通过分子伴侣和蛋白酶这两套***来保证蛋白质的正常功能。分子伴侣的作用是帮助不能自发折叠的蛋白质的折叠和组装，使其恢复正常的结构，蛋白酶***的作用是清除错误折叠的蛋白质。
而当细胞处于应激状态如感染、热休克以及氧化损伤时，可导致蛋白质稳定性降低，某些蛋白质不能按正确的方式折叠。如氧化应激情况下，线粒体DNA突变或者活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的净增量增多都会大大提高帕金森病，老年痴呆等神经退行性疾病的发病率。在动物和体外模型中，抗氧化治疗一定程度上能保护神经元(Simpson,Lancet Neurol.4:266,2005;Neymotin et al.,Free Radic Biol Med.51:88-96,2011)。
蛋白质折叠错误时常常将含碳丰富的氨基酸一端裸露在表面，而不是把它包裹在里面，而含碳丰富的此类基团会紧密结合其它蛋白质中的类似基团，构成聚合物大分子。这些聚合物对细胞（神经元）而言是致死性的。事实上，几乎所有的神经退行性疾病都牵涉到神经元蛋白的异常进程。异常进程可以导致一种蛋白质的错误折叠，导致翻译后新合成的蛋白质不能正常被修饰，蛋白裂解异常，异常的基因拼接，表达不当，或清除异常蛋白的能力降低。错误折叠的蛋白质往往被积累。许多神经退行性疾病，最突出的特征是脑细胞内、外的细胞出现淀粉样蛋白的纤维状结构的蛋白质聚集体(Muchowski,Neuron.35:9-12,2002)。细胞对这些蛋白质处理不当导致不同的神经元组发生故障，在临床上就表现为各种不同的神经退行性疾病(Prusiner,N Engl J Med.344:1516-1526,2001)。
在老年痴呆病(AD)中有两种蛋白质聚集沉淀。在脑实质和脑血管壁周围的细胞外有淀粉样蛋白斑块沉积，其主要成分是40-42个氨基酸残基的组成的多肽称为β-淀粉样蛋
在帕金森病(PD)患者在大脑黑质神经元的胞浆中，能观察到路易小体聚集，这些聚集体的主要成分为α-synuclein的蛋白质片段(Spillantini et al.,Nature.388:839-840,1997)。
20%典型家族遗传性脊髓侧索硬化症(ALS)的铜-锌超氧歧化酶(copper-zincsuperoxide dismutase,SOD1)基因编码有突变，SOD1的突变体明显错误折叠了，导致高度聚集化。而在散发性ALS中始终伴随着泛素-染色包涵体的聚集物，如图1A所示(Kiernan etal.,Lancet.377:942-955,2011)。因此蛋白质错误折叠和聚集在ALS的发病机制中起着重要作用(Cudkowicz et al.,Muscle Nerve.38:837-844,2008)。
在亨廷顿(HD)患者的细胞核内沉积着大量的亨廷顿蛋白（Huntingtin protein，Htt）的多聚谷氨酰胺(polyglutamine,polyQ)聚集物，这是此病患者的一个典型脑特征(DiFiglia et al.,Science.277:1990-1993,1997)。这种突变蛋白在细胞内积累，形成有毒低聚物和聚合物。免疫组织化学和电子显微镜方法，无论是在HD患者或实验模型中，都表明了细胞的自噬途径发生了改变。最早的证据来源于很多HD模型和患者的自噬泡大量增多的观察结果(Davies et al.,Cell.90:537-548,1997;Sapp et al.,Ann Neurol.42:604-612,1997;Kim et al.,J Neurosci.19:964-973,1999;Kegel et al.,J Neurosci.20:7268-7278,2000;Nagata et al.,Neuroreport.15:1325-1328,2004;Heng et al.,HumMolGenet.19:3702-3720,2010)。
当细胞处于应激状态（如氧化应激ROS增多）时，引起蛋白质折叠错误或聚集，最终导致神经退行性疾病的产生，因此修复这种蛋白质错误折叠或降解聚集物可能就是阻止病情进一步发展的有效途径。
治疗蛋白质错误折叠疾病的一个重要方面就是增加分子伴侣的数量、提高热休克蛋白的活性，辅助蛋白的正确折叠，促进错误折叠蛋白的降解。热休克蛋白(heat shockprotein,HSP)又被称为应激蛋白(stress proteins,SP)作为分子伴侣中的一员，与众多蛋白的活性作用发挥有关，能够辅助调节错误折叠的蛋白恢复正常结构(Hartl et al.,Nature.475:324-332,2011)。当细胞发生应激反应(热休克反应)时，热休克蛋白能大量表达，然后识别错误折叠或去折叠的蛋白质及其聚集物，并标记它们以供蛋白酶体降解。例如，热休克蛋白HSP27和HSP90很早就已经被证实可以提高泛素-蛋白酶体***(ubiquitin-proteasome system,UPS)的活性。还有一种热激蛋白HSP70能够与来自折叠错误的蛋白质表面疏水区结合，然后引导E3泛素的一种连接酶（如CHIP,carboxy terminus of HSC70-interacting protein）在折叠错误的蛋白质及其聚集物上面标记上泛素，此后蛋白酶体就能够结合并且降解它们。但是高强度的氧化损伤会加强蛋白质片断之间相互连 接的程度，蛋白酶体很难降解这样高稳定性的蛋白聚合物。此时可能需要更多的热休克蛋白表达来提高泛素-蛋白酶体***的降解能力。
热休克蛋白活性还与很多疾病相关，几乎与所有应激导致的疾病密切联系。比如热休克蛋白作为分子伴侣可以预防治疗免疫***疾病，防止炎症，比如Hsp60,Hsp70,Hsp90,和gp96可以结合细菌外毒素LPS(Tsan et al.,J Leukoc Biol.85:905-910,2009)，与免疫缺陷病艾滋病息息相关(Di Cesare et al.,Immunology.76:341-343,1992)，也与心脑血管疾病紧密相连(Pockley,Circulation.105:1012-1017,2002)。
氯肟衍生物首先是匈牙利Biorex公司发现的一类能选择性放大HSPs的表达化合物，临床试验用于抗糖尿综合病(Biro et al.,Brain Res Bull.44:259-263,1997;Nanasiet al.,Cardiovasc Drug Rev.19:133-151,2001)。2004年Biorex公司被美国CytRx公司收购，并开发出新的氯肟衍生物作为药物前体，进一步用于治疗各种与热休克蛋白（分子伴侣）活性相关的疾病神经退行性疾病。大量研究证实氯肟类化合物具有很好的分子伴侣活性调节作用，能提高热休克蛋白的活性，可用于神经退行性疾病的治疗。正常细胞中，氯肟衍生物不激活HSF1或诱导HSPs的表达。氯肟化合物仅放大应激状态或病态细胞中的伴侣蛋白活性(Soti et al.,Br J Pharmacol.146:769-780,2005)。如此特别的分子作用机制，特定靶向作用于应激细胞，比那些不加选择地作用于所有细胞的分子伴侣调节剂更具潜力、更安全(Soti et al.,Br J Pharmacol.146:769-780,2005)。
氯肟衍生物活性已经得到肯定。化合物Bimoclomol和arimoclomol(图1B)是两个具有代表性的氯肟衍生物，都已经进入临床II/III期研究。Bimoclomol多年以前就应用于糖尿病及糖尿病肾病的治疗，1997年雅培公司投入资金与bimoclomol发现者Biorex公司合作进行bimoclomol糖尿病综合征的二期临床研究(Kalman.1997)。Bimoclomol能选择性放大多种热休克蛋白和热休克因子的活性,例如Hsp60，Hsp70，Hsp90，Grp94（glucoseregulated protein94kDa，葡萄调节蛋白94）等(Nat Med.3:1150-1154,1997)，而这类分子伴侣作用机制涉及到多种疾病，它不但被证实能治疗STZ造模的糖尿病大鼠及多种并发症(Biro et al.,Brain Res Bull.44:259-263,1997;Biro et al.,Neuroreport.9:2029-2033,1998)，而且能治疗心功能障碍，脑血管异常各类疾病(Erdo et al.,Brain ResBull.45:163-166,1998;Lubbers et al.,Eur J Pharmacol.435:79-83,2002;Polakowskiet al.,Eur JPharmacol.435:73-77,2002)。
Arimoclomol在治疗多种神经退行性疾病上表现出突出的活性，临床试验(NCT00706147)结果显示它至少能延缓ALS患病30%的进程。前期研究报道也证实了arimoclomol为HSPs诱导物（放大器），能明显提高应激状态细胞中HSF1，HSP70，HSP90等的表达量，而对正常状态细胞中HSPs的表达影响不明显(Polakowski et al.,EurJPharmacol.435:73-77,2002;Hargitai et al.,Biochem Biophys Res Commun.307:689-695,2003;Kieran et al.,Nat Med.10:402-405,2004)。
Arimoclomol也像bimoclomol一样最初被开发用于治疗糖尿病，后来被发现在动物模型中治疗ALS效果显著。Arimoclomol被认为是功能健全的分子伴侣调节剂，通常能诱导人体的所有细胞中的热休克蛋白活性，以提高细胞的自然修复能力，治疗许多疾病，包括ALS之受损蛋白质异常。另一个应用于临床试验的氯肟衍生物Iroxanadine，应用于心脑血管疾病的治疗。(http://www.cytrx.com/molecular_chaperone_regulation.html,2010)。
川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)为中药川芎中提取得到的主要活性成分，具有广泛的药理作用，用于多种心脑血管疾病的治疗。川芎嗪在血管组织还表现出的钙拮抗剂作用(Pang et al.,Planta Med.62:431-435,1996)，此机制可能应用于神经退行性疾病。作为ROS抑制剂，它能清除超氧阴离子（O2 -），氢氧根负离子（OH-），脂质过氧负离子（lipid peroxyl，LOO-）等自由基(Zhang et al.,Zhongguo Yao Li Xue Bao.15:229-231,1994;Zhang et al.,Life Sci.72:2465-2472,2003)。在中枢神经***，TMP可显著抑制铁介导的神经细胞氧化损伤并减轻谷氨酸毒性引起的神经细胞死亡(Shih et al.,Neuroreport.13:515-519,2002;Zhang et al.,Eur J Pharmacol.467:41-47,2003;Liaoet al.,Neurosci Lett.372:40-45,2004)。川芎嗪全身用药保护对老鼠和兔子的缺血或脑外伤或脊髓损伤的神经细胞，能促进其功能恢复(Fan et al.,BMC Neurosci.7:48,2006;Kao et al.,Neurochem Int.48:166-176,2006)。有趣的是，全身给药川芎嗪能减轻D-半乳糖或缺血性脑损伤引起的啮齿类动物学习和记忆能力损害(Ni et al.,Jpn JPharmacol.67:137-141,1995;Zhang et al.,Chin Med Sci J.19:180-184,2004)。显著改善痴呆症模型小鼠的认知功能以及脑淀粉样蛋白的量(Tan,J Ocul Biol Dis Infor.2:57-64,2009)。
但是，川芎嗪的抗氧化作用微弱，生物利用度低，临床上需要多次给药才能达到有效浓度。目前神经退行性疾病的治疗还没有特效药，已经上市的为数不多的药物都因为疗效不佳或毒副作用大很难满足要求。诱导热休克蛋白表达修复错误折叠的蛋白质或清除其聚集物保护神经细胞的作用一直是国内外研究的重点。
发明内容
本发明旨在提供一种氯肟类化合物及其药学上可接受的盐，该类化合物可诱导热休克蛋白的表达，抗氧化应激损伤，具有很强的细胞保护能力；并且提供所述氯肟类化合物的制备方法；还提供所述氯肟类化合物及其药学上可接受的盐在治疗由于蛋白质错误折叠或异常折叠形成聚集物或由于氧化应激所导致的疾病的方法，以及所述氯肟类化合物及其药学上可接受的盐在制备相应药物中的应用。
在一方面，本发明提供了一种氯肟类化合物及其药学上可接受的盐，所述氯肟类化合物具有如下通式I的结构：
一种氯肟类化合物及其药学上可接受的盐，所述氯肟类化合物具有如下通式I的结构：
其中：
R1,R2,R3,R4相同或不同，各自独立的为H,OH,NH2,COOH,直链或支链烷基，取代或未取代的单环或多环烷基，芳基，芳杂基(O,S)，含氮芳杂基及其N→O基团，酰基，酯基，或胺基；R2与R3亦可与N原子形成取代或未取代的4-8元环；
当R4为H时，R1不为H，取代或未取代的苯基，萘基，吡啶基，或噻吩基；
n为0，1，2或3。
根据通式I，优选的氯肟类化合物具有如下通式II的结构：
其中：R2,R3,R4相同或不同，各自独立的为H,OH,NH2,COOH,直链或支链烷基，取代或未取代的单环或多环烷基，芳基，芳杂基(O,S)，含氮芳杂基及其N→O基团，酰基，酯基，或胺基；R2与R3亦可与N原子形成取代或未取代的4-8元环；
R5,R6,R7相同或不同，各自独立的为H,F,Cl,Br,I,OH,NH2,COOH,直链或支链烷基，芳基，芳杂基(O,N,S)，酰基，酯基，或胺基；
X与Y至少有一个是N原子，且当X与Y仅一个为N原子时，R4不为H；N原子上连有氧或者不连氧；
n为0，1，2或3。
根据通式II，优选的氯肟类化合物具有通式III的结构：
根据通式III，优选的氯肟类化合物其特征在于R2选自甲基，乙基，正丙基，异丙基，R3选自3-甲基金刚烷基，3，5-二甲基金刚烷基，异丙基，或R2，R3与N原子连接成六元环；进一步优选的氯肟类化合物其特征在于R5,R6,R7为甲基，R2,R3与N原子连接成六元环，所述氯肟类化合物具有如下通式IV的结构：
R4为H,OH,NH2,COOH,直链或支链烷基，取代或未取代的单环或多环烷基，芳基，芳杂基(O,S)，含氮芳杂基及其N→O基团，酰基，酯基，胺基。R8选自H，C1-C4的直链或支链烷基；
吡嗪环N原子上面连有氧或者不连氧；
n为0，1，2或3。
根据通式IV，优选的氯肟类化合物具有通式V的结构：
R4为H,OH,NH2,COOH,直链或支链烷基，取代或未取代的单环或多环烷基，芳基，芳杂基(O,S)，含氮芳杂基及其N→O基团，酰基，酯基，或胺基；
吡嗪环N原子上面连有氧或者不连氧；
n为0，1，2或3。
根据通式V，优选的氯肟类化合物具有通式VI的结构：
其中：吡嗪环N原子上连有氧或者不连氧；n为0，1，2或3。
根据通式VI，优选的氯肟类化合物具有如下TCO-1和TCO-2的结构，但不仅限于此两个化合物。
在另一方面，本发明还提供了所述氯肟类化合物的制备方法。所述方法包括：将起始原料的腈基衍生物与盐酸羟胺反应后再与取代的2-羟基-4-氮杂-4-鎓盐反应制得氨基取代的氨基肟类化合物，最后氨基肟与盐酸反应制得氯肟类化合物。
本发明还提供了包含药学上有效剂量的上述任一化合物或其药学上可接受盐的药物组合物。所述有效剂量为1mg-10g。
本发明进一步提供了药学上有效剂量的上述任一化合物或其药学上可接受盐，以及包含药学上有效剂量的上述任一化合物或其药学上可接受盐的药物组合物在治疗由于蛋白质错误折叠或异常折叠形成聚集物或由于氧化应激所导致的疾病的方法和在制备相应药物中的应用。
本发明与现有技术相比，具有如下创新性：
1)首次采用中药活性分子TMP环及其衍生物或吡嗪环替换临床试验药物bimoclomol和arimoclomol氯肟衍生物的吡啶环合成了系列新的氯肟衍生物。
2)首次在TMP环替换临床试验药物bimoclomol和arimoclomol氯肟衍生物的吡啶环的基础上采用烷烃或支链烷烃、金刚烷及其衍生物替换右侧的哌啶合成系列新的氯肟衍生物；新合成的化合物TCO-1、TCO-2的活性显著高于bimoclomol和arimoclomol。
3)首次在TMP环替换临床试验药物bimoclomol和arimoclomol氯肟衍生物的吡啶环的基础上采用活性小分子丹参素，肉桂酸，硫辛酸，生物素，TMP及其衍生物替换中间羟基氢合成系列新的氯肟衍生物。
4)发现了一套切实可行的化学合成路线（方法）来合成氯肟-川芎嗪衍生物。
附图说明
图1A.为文献报道图示，其中描述在散发性ALS中始终伴随着泛素-染色包涵体的聚集物（参见Cellular and molecular processes mediating neurodegeneration inALS,Kiernan et al.,Lancet.377:942-955,2011）；
图1B.显示有关氯肟类化合物的化学结构；
图1C.显示TMP、TCO-1和TCO-2的化学结构；
图2.显示化合物TCO-1的一种合成路线；
图3.显示化合物TCO-1的另一种合成路线；
图4.显示化合物TCO-2的一种合成路线；
图5.显示化合物TCO-2的另一种合成路线；
图6.描述化合物TCO-1,TCO-2,PCO-1以及BCO-1对MG-132诱导损伤的细胞的保护作用；
图7.描述化合物TCO-1,TCO-2,PCO-1以及BCO-1对ROS的抑制作用；
图8.描述化合物TCO-1,TCO-2以及PCO-1对MPP+诱导损伤的细胞的保护作用；
图9.为显示化合物TCO-1/TCO-2清除泛素化蛋白的聚集的图片；
图10.为显示TCO-1减少AD模型大鼠到达平台时间的数据图；
图11.为显示TCO-1增加AD模型大鼠穿过平台次数的数据图。
具体实施方式
定义：
以下定义用以阐明和界定该发明中所用到的各种术语的含义以及范围。
本文所用的术语“烷基”是指未被取代的或被取代的直链、支链或环形的多至15个碳原子的烷基碳链。直链烷基包括如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。支链烷基包括如异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、新戊基。单环烷基包括如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。烷基可被一个或多个取代基取代。上述取代基的非限定性例子包括OH，F，Cl，Br，I，NH2，NO2，ONO2。术语“多环烷基”也指未取代或取代的二元环，三元环，取代基的非限定例子包括OH，F，Cl，Br，I，NH2，NO2，ONO2。
本文所用的术语“芳基”是指未被取代的或取代的芳香化合物、碳环基团和杂芳基。芳基或者是单环或者是多环稠合化合物。例如，苯基是单环芳基。萘基是具有多环稠合的芳基的例子。芳基可以被一个或多个取代基取代，取代基的非限制性的例子包括OH，F，Cl，Br，I，NH2，NO2，ONO2。术语“杂芳基”涉及到取代的或非取代的单环或多环的基团，环内至少包括一个杂原子，譬如氮、氧以及硫。举例来说，典型的杂环基团包括一个或多个氮原子譬如四唑基、吡咯基、吡啶基(如4-吡啶基，3-吡啶基，2-吡啶基等)、哒嗪基、吲哚基、喹啉基(如2-喹啉基，3-喹啉基等)、咪唑基、异喹啉基，吡唑基、吡嗪基、嘧啶基、吡啶酮基或哒嗪基；典型的含一个氧原子的杂环基团包括2-呋喃基，3-呋喃基或苯并呋喃基；典型的硫杂原子基团包括噻吩基、苯并噻吩基；典型的混合杂原子基团包括呋吖基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基和吩噻噁基。杂环基团能被一个或多个取代基取代。这些取代基包括NH2、NO2、O-烷基、NH-烷基、N(烷基)2、NHC(O)-烷基、ONO2、F、Cl、Br、I、OH、OCF3、OSO2CH3、CO2H、CO2-烷基、CN以及低级烷基、芳基和多芳基。这些情况同时包括环内杂原子被氧化，譬如形成N-氧化物、酮或砜。
含氮杂芳基N→O化合物涉及到含有1个或2个N原子芳香杂环的N→O化合物。
本文使用的术语“药学上可接受的”指的是在化合物如盐中不具有不能接受的毒性。药学上可接受的盐包括无机阴离子，例如氯离子、硫酸根、亚硫酸根、硝酸根、亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根等。有机阴离子包括乙酸根、丙酸根、肉桂酸根、苯甲磺酸根、柠檬酸根、乳酸根、葡萄糖酸根等。
在本发明的具体实施方式中所提供的具有通式(I)结构的新化合物包括如下的优选化合物：(TCO-1),(TCO-2),(PCO-1),(PCO-2),(ACO-1a),(ACO-1b),(ACO-2a),(ACO--2b),(GCO-1c-7c),(GCO-1d-7d),(FCO-1a-6a),(FCO-1b-6b),(LCO-1),(LCO-2)。
具有通式(I)结构的化合物(TCO-1),(TCO-2),(PCO-1),(PCO-2),(ACO-1a),(ACO-1b),(ACO-2a),(ACO--2b),(GCO-1c-7c),(GCO-1d-7d),(FCO-1a-6a),(FCO-1b-6b),(LCO-1),(LCO-2)所涉及的氯肟和肟TMP或其N→O化衍生物都是具有诱导热休克蛋白表达的能力，一方面它们可以诱导应激状态下的热休克蛋白表达，另一方面能够修复应激导致折叠错误的蛋白质或清除其聚集物，因此，它们可用于预防和治疗蛋白质折叠错误或异常聚集形成引起的疾病。这些疾病包括但不限于神经***疾病，如缺血缺氧性脑损伤、中风、脑外伤、老年痴呆症、癫痫、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩侧索硬化症，艾滋病痴呆症、多发性硬化症、慢性疼痛、***异常***、囊性纤维化、精神***症、抑郁症、经前期综合征、焦虑、成瘾和偏头痛等；还包括心血管疾病，如心脏侧流、缺血-再灌注损伤、缺血-再灌注、中毒性休克症候群、成人呼吸窘迫症候群、恶病质、心肌炎、动脉粥样硬化、冠心病心脏疾病和心脏病发作等；还包括炎症感染性疾病，如发炎性肠道疾病、糖尿病、类风湿关节炎、哮喘、肝硬化、异体排斥反应、脑脊髓炎、脑膜炎、胰腺炎、腹膜炎、血管炎、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎、肾小球肾炎、***性红斑狼疮、胃肠运动功能紊乱、肥胖、饮食过量、肝炎和肾功能衰 竭；还包括眼科疾病，如糖尿病视网膜病变、葡萄膜炎、青光眼、眼睑炎、霰粒肿、过敏性眼病、角膜溃疡、角膜炎、白内障、老年黄斑变性和视神经炎。
本发明涉及的氯肟类化合物可以一种药学可接受的盐或药物组合物的形式对患者给药。某个复合物需与适当载体或赋形剂混合形成药物组合物从而保证达到有效治疗剂量。“有效治疗剂量”是指氯肟类化合物达到治疗效果（修复蛋白质折叠错误，清除异常聚集的蛋白质，降低因为神经退行性疾病、代谢性疾病或心脑血管疾病造成的细胞损伤等）所必须的剂量。
氯肟类化合物及其含有该类化合物的组合物可以制成多种剂型，包括固体剂型，半固体剂型，液体制剂和气雾剂（Remington’s Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Company(1995),Philadelphia,PA,19th ed）。这几类剂型中的具体剂型包括片剂、丸剂、糖锭剂、颗粒剂、凝胶剂、膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂以及喷雾剂。这些剂型既能用于局部或全身给药又能用于速释或缓续给药，此类药物的给药方式有很多种，除了上述方式，还有口腔给药、面颊给药、直肠给药、腹膜给药、腹膜内给药、皮表给药、皮下给药和气管内给药等。
当氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物注射给药时，可以用水溶性或脂溶性的溶剂将此类化合物配制成溶液剂，悬浊剂和乳剂。脂溶性溶剂具体包括植物油及类似油类，合成脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸酯以及乙二醇酯（proylene glycol）。这类化合物更易溶于乙醇溶液，微量DMSO溶液。
当氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物口服给药时，可以采用常用技术将其与药学可接受的赋形剂制成复合物。这些赋形剂可以将这些化合物制成多种可以被病人剂型，如片剂、丸剂、混悬剂、凝胶剂等。口服制剂的配制有多种方法，如先把化合物和固体赋形剂混匀，充分研磨混合物，添加适当的辅料，加工处理成颗粒。可以用于制成口服剂型的辅料包括：糖类如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素类如玉米淀粉、小麦淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄薯胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素（hydroxyproylmethyl-cellulose）、羧甲基纤维素纳、聚乙烯吡咯酮等。
本发明涉及的氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物也可以制成喷雾剂，此种剂型是通过一个加压器和一个喷雾器或者一个干粉吸入装置而实现的。可以用作喷射器里合适的喷射剂如二氯二氟甲烷、氟三氯甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳和二甲醚等。气雾剂给药的剂量可以通过喷射器的阀门来调节。
本发明涉及的各种剂型都关系到氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物的有效治疗剂量。该类化合物的有效治疗剂量取决于接受治疗的患者。在决定适宜的剂量时，患者的体重、病情、服药方式以及处方医师的主观判断因素都要纳入考虑。氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物的治疗有效量应该由有能力和丰富经验的处方医师决定。
尽管氯肟类化合物及其含有这些化合物的组合物的有效治疗剂量会根据患者情况发生变化，但是通常适当的给药剂量范围是10mg-10g。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：本发明提供了一种全新结构的化合物，同时具有双重作用机理(修复蛋白质折叠错误&清除其异常聚集物或/和细胞保护),可以通过血脑屏障而且安全有效的化合物。这些化合物是值得开发的治疗和预防由于蛋白质折叠错误或异常聚集或由于氧化应激引起的神经退行性疾病，代谢***疾病，心、脑血管***疾病，感染性疾病以及老化疾病等的药物。
下面的实施例用来针对本发明的实施进行说明，但是不应该被解释为本发明会受到这些实施例的限制。
实施例一、化合物TCO-1的合成（图2）
称取四甲基吡嗪10g(73.5mmol)溶于20ml乙酸中，加入30%过氧化氢8ml。70°C条件下油浴反应5小时后补加8.3ml30%(73.5mmol)过氧化氢，继续反应5小时，TLC监测反应程度，停止反应。冷至室温，氢氧化钠饱和溶液调节pH至10。二氯甲烷萃取(50ml*5次)，取有机层用旋转蒸发仪减压蒸馏干得白色固体(1a-1)。向其中加入20ml乙酸酐(212mmol)125°C油浴反应2.5小时，TLC检测反应完全。减压蒸馏除去乙酸酐，得乙酰化粗产物(1a-2)。然后，氢氧化钠饱和溶液调至pH至12，室温搅拌，水解反应过夜。乙酸乙酯萃取反应液(50ml*5次)，减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE(1:1)，TLC检测馏分，收集TMP-OH馏分。合并所需相同馏分，减压蒸馏干，得乳白色固体粉末7.5g(1a-3，TMP-OH,49.3mmol)，[M+Na]+=175，产率67%。
将所得7.5g TMP-OH(49.3mmol)溶于50ml无水乙醇加入活性二氧化锰(6.4g,73.6mmol)氧化，84°C油浴反应2h，TLC检测反应完全后，趁热采用五层滤纸小心抽滤反应液，除去二氧化锰粉末。滤后得到澄清滤液，旋转蒸发仪减压蒸馏干。湿法上样柱层析：流动相EA:PE(1:5)分离纯化，TLC监测馏分。收集化合物1a-4馏分，合并相同馏分蒸馏干得晶体状白色固体5.5g(36.7mmol)，[M+H]+=151即1a-4(TMP-CHO)，产率75%。
将5.5g(36.7mmol)化合物1a-4样品用30ml甲酸溶解，称取3.2g(45.9mmol)盐酸羟胺加入，随后加入3.13g(45.9mmol)甲酸钠，混溶，120°C油浴反应回流过夜。饱和氢氧化钠溶液调节反应液pH至10，二氯甲烷萃取（30ml*5次），取有机层减压蒸馏干。100-200目硅胶拌样，干法上样柱层析：流动相EA:PE（1:5），TLC监测流出馏分成分，收集化合物1a-5馏分。合并相同馏分蒸馏干，得白色固体即化合物1a-5，产率65%。
取化合物1a-5(3.5g,23.9mmol)溶于30ml无水乙醇中，加入盐酸羟胺2.1g(29.9mmol)，取碳酸氢钠2.6g（30.9mmol）于20ml蒸馏水加热溶解，混溶，105°C油浴反 应3小时。TLC监测反应程度，停止反应。减压蒸馏干，干法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(60:40:0.5)，收集馏分，TLC监测馏分成分。合并相同馏分减压蒸馏干，得白色固体即化合物1a-6，产率95%。
取化合物1a-6(4.1g,22.7mmol)溶于30ml乙醇，取氢氧化钠(1.4g,35mmol)溶于30ml蒸馏水中，后加入季铵盐1a-75.1g(28.8mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（30ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(70:30:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物1a-8(4.4g,13.7mmol)，产率60%。
称取亚硝酸钠(1.2g,17.4mmol)溶于4ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物1a-8(4.4g,13.7mmol)溶于20ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（15ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(17:83:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即TCO-1(2.2g,6.8mol)，产率50%。1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.37-1.60(m,6H,3CH2),2.30-2.40(m,6H,3NCH2),2.52(s,6H,2CH3),2.60(s,3H,CH3),4.04(m,1H,CH),4.28(m,2H,NOCH2).13C-NMR(CDCl3,75.47MHz)(ppm)δ:21.57(CH3);21.97(CH3);22.40(CH3);24.29,26.16(3C,piperidine,3CH2);55.78,55.41(2C,piperidine,2NCH2);61.09(CHOH);65.34(CH2N);78.31(NOCH2);135.89(2-pyrazine);141.98(C(Cl)=N);148.96(5-pyrazine);149.24(3-pyrazine);152.20(6-pyrazine).MS(ESI)[M+H]+m/z341;Analysis calculatedfor(C16H25ClN4O2):C,56.38;H,7.39;N,16.44.Found:C,56.14;H,7.58;N,16.19.
实施例二、化合物TCO-1的另一种合成方法（图3）
取已制备的1a-6(2.1g,11.6mmol)溶于20mlNaOH溶液中，取环氧氯丙烷（2.05ml,21.5mmol）溶于少量DMSO中，混溶，冰浴搅拌过夜，TLC监测反应程度，停止反应。二氯甲烷萃取反应液（50ml*5次），柱层析纯化得到化合物1a-9(1.64g,6.96mmol)，产率60%。将所得1a-9溶于10ml DMF中，加入哌啶(1.04ml,10.3mmol)80°C,反应3h，TLC监测反应程度，停止反应。乙酸乙酯萃取（30ml*5次），柱层析纯化得到化合物1a-8（2.12g,6.6mmol），产率95%。称取亚硝酸钠(0.57g,8.3mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5 °C备用。取化合物1a-8(2.12g,6.6mmol)溶于13ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(17:83:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即TCO-1(1.1g,3.4mol)，产率51.5%。检测数据与上一方法相同。
实施例三、化合物TCO-2的合成（图4）
取已制备的中间体1a-5(3g,20.4mmol)，加入30ml二氯甲烷溶解，然后加入间氯过氧苯甲酸（MCPBA,3.5g,20.4mmol）室温（20-24°C）搅拌24h，TLC监测反应程度，停止反应。减压蒸馏除去二氯甲烷，干法上样柱层析。流动相EA:PE(1:2)，收集馏分，TLC监测馏分成分，合并相同馏分。减压蒸馏干，得白色固体1b-1(2.8g,17.2mmol)。产率84%。
将所得的1b-1(2.8g,17.2mmol)溶于30ml无水乙醇中，加入盐酸羟胺1.5g(21.7mmol)，取碳酸氢钠1.9g(22.6mmol)于20ml蒸馏水溶解，混溶，室温搅拌反应24小时。TLC监测反应程度，停止反应。减压蒸馏干，干法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)，收集馏分，TLC监测馏分成分。合并相同馏分减压蒸馏干，得白色固体即化合物1b-2，产率95%。
取化合物1b-2(3.2g,16.3mmol)溶于30ml乙醇，取氢氧化钠(0.8g,20mmol)溶于20ml蒸馏水中，后加入季铵盐1a-7(3.5g,19.7mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（30ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(85:15:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物1b-2馏分减压蒸馏干得透明油状物（3.3g,9.8mmol），产率60%。
称取亚硝酸钠（1.06g,12.25mmol）溶于3.5ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物1b-3(3.3g,9.8mmol)溶于20ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（15ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物反复冻融后能得白色固体即TCO-2(1.8g,4.9mmol)，产率50%。1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.23-1.60(m,6H,3CH2),2.04-2.41(m,6H,3NCH2),2.51(s,3H,CH3),2.56(s,3H,CH3),2.59(s,3H,CH3),4.01-4.35(m,3H,CH and NOCH2).13C-NMR(CDCl3,75.47MHz)(ppm)δ:13.81(CH3);14.23(CH3);22.57(CH3);24.33,26.22(3C,piperidine,3CH2);54.78,54.81,60.97(3C,3NCH2);65.29(CHOH);78.58(NOCH2);134.22(C(Cl)=N);141.48(2-pyrazine);143.11(6-pyrazine); 144.96(3-pyrazine);152.27(5-pyrazine).ESI-MS[M+H]+m/z357;Analysis calculated for (C16H25ClN4O3):C,53.85;H,7.06;N,15.70.Found:C,53.91;H,6.91;N,16.04.
实施例四、化合物TCO-2的另一种合成方法（图5）
取已制备的1b-2(1.6g,8.2mmol)溶于10ml NaOH溶液中，取环氧氯丙烷（1.2ml,12.6mmol）溶于少量DMSO中，混溶，冰浴搅拌过夜，TLC监测反应程度，停止反应。二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），柱层析纯化得到化合物1b-4(1.23g,4.9mmol)，产率60%。将所得1b-4溶于10ml DMF中，加入哌啶(0.74ml,7.3mmol)80°C,反应3h，TLC监测反应程度，停止反应。乙酸乙酯萃取（10ml*5次），柱层析纯化得到化合物1b-3（1.57g,4.65mmol），产率95%。称取亚硝酸钠(0.4g,5.8mmol)溶于4ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物1b-3（1.57g,4.66mmol）溶于10ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即TCO-2(0.86g,2.3mol)，产率51.7%。检测数据与上一方法相同。
实施例五、化合物BCO-1的一种合成方法
取已合成的中间体化合物1a-3(TMP-OH,4g,26.3mmol)，向其中加入79ml氨水(30%)溶解，然后加入碘单质0.67g(2.63mmol)、叔丁基过氧化氢(TBHP)8.3ml(57.86mmol)混溶在60°C条件下油浴反应，15h后TLC监测反应程度，停止反应。乙酸乙酯萃取(30ml*5次)，收集有机层减压蒸馏干。100-200目硅胶拌样，干法上样柱层析。流动相：Acetone:PE:Et3N(20:80:0.5)洗脱，TLC监测流出馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，得淡黄色固体粉末2a-1(0.45g,3.06mmol)，产率11.6%。
取已合成的2a-1(0.45g,3.06mmol)溶于10ml无水乙醇中，然后加入盐酸羟胺(0.27g,3.88mmol)，另外称取碳酸氢钠(0.33g,3.93mmol)溶于5ml蒸馏水中混溶，105°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度，停止反应。减压蒸馏干，硅胶拌样干法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，TLC监测流出馏分成分，合并相同成分，减压蒸馏干得白色固体2a-2(0.53g,2.93mmol)，产率95.7%。
取化合物2a-2(0.53g,2.93mmol)溶于15ml乙醇，取氢氧化钠(0.18g,4.5mmol)溶于5ml蒸馏水中，后加入季铵盐1a-70.65g(3.66mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液(10ml*5次)，收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物2a-3馏分减压蒸馏干得透明油状物2a-3(0.28g,0.87mmol)，产率30%。
称取亚硝酸钠(0.075g,1.09mmol)溶于0.5ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物2a-3(0.28g,0.87mmol)溶于1.3ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液，反应1h。然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液(7M)调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液(2ml*5次)，收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(15:85:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即2a,BCO-1(0.063g,0.0017mol)，产率20%。 1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.42-1.62(m,6H,3CH2),2.24-2.66(m,12H,3NCH2,2CH3),4.02-4.37(m,3H,CH,NOCH2).13C-NMR(CDCl3,75.47MHz)(ppm)δ:21.75(CH3);22.52(CH3);24.32,26.20(3C,piperidine,3CH2);54.79,54.86(2C,piperidine,2NCH2);60.96(CHOH);65.26(CH2N);78.60(NOCH2);135.17(2-pyrazine,CCl);142.85(5-pyrazine);147.81(C(Cl)=N);149.61(3-pyrazine);150.45(6-pyrazine).ESI-MS[M+H]+m/z361;Analysis calculated for(C15H22Cl2N4O2):C,49.87;H,6.14;N,15.51.Found:C,50.27;H,6.18;N,15.40.
实施例六、化合物PCO-1的一种合成方法
取化合物2-腈基吡嗪(3g,28.6mmol)溶于35ml无水乙醇中，加入盐酸羟胺2.5g(36.2mmol)，取碳酸氢钠3.1g(36.9mmol)于25ml蒸馏水加热溶解，混溶，105°C油浴反应3小时。TLC监测反应程度，停止反应。减压蒸馏干，干法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(70:30:0.5)，收集馏分，TLC监测馏分成分。合并相同馏分减压蒸馏干，得白色固体即化合物3a-1(3.75g,27.2mmol,产率95%)。
取化合物3a-1(3.75g,27.2mmol)溶于30ml乙醇，取氢氧化钠(1.4g,35mmol)溶于30ml蒸馏水中，后加入季铵盐1a-75.1g(28.8mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液(30ml*5次)，收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(85:15:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物3a-2馏分减压蒸馏干得透明油状物(4.5g,16.1mmol)，产率59%。
称取亚硝酸钠(1.4g,20.3mmol)溶于4ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物3a-2(4.5g,16.1mmol13.7mmol)溶于25ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液(7M)调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液(15ml*5次)，收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即3a,PCO-1(2.2g,6.8mol)，产率50%。 1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.35-1.51(m,6H,3CH2),2.25-2.38(m,6H,3NCH2),3.96-4.40(m,3H,CH,NH2).13C-NMR(CDCl3,75.47MHz)(ppm)δ:23.99,25.67(3C,piperidine,3CH2);58.40(2C,piperidine,2NCH2);61.71(CH2N),66.09(CHOH);79.36(NOCH2);135.09(5-pyrazine);143.75(3-pyrazine);144.30(6-pyrazine);145.11(2-pyrazine);145.76(C(Cl)=N).ESI-MS[M+H]+m/z299;Analysis calculated for (C13H19ClN4O2):C,52.26;H,6.41;N,18.75.Found:C,52.19;H,6.53;N,18.62.
实施例七、化合物FCO-1a的一种合成方法
取2,6-二甲基哌啶（10ml,约8.23g）溶于25ml甲醇中，加入环氧氯丙烷（9ml,约10g）,80°C油浴反应10小时，减压蒸馏出甲醇，加入25ml水，用二氯甲烷洗涤（15ml*3次）除去剩余原料，收集水相减压蒸干得到淡红色固体5a-1（8.6g,41.9nmol），产率60%。
取化合物1a-6(1.0g,5.6mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.6g,15mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐5a-12.28g(11.1mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物5a-2(1.1g,3.2mmol)，产率59%。
称取亚硝酸钠(0.43g,6.3mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物5a-2(1.1g,3.2mmol)溶于10ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-1(0.57g,1.5mmol)，产率50%。ESI-MS[M+H]+m/z369,ESI-MS[M+Na]+m/z391。
实施例八、化合物FCO-1b的一种合成方法
取化合物1b-2(1.0g,5.1mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.43g,10.7mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐5a-1(2.00g,9.75mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物5b-1(1.12g,3.07mmol)，产率60%。
称取亚硝酸钠(0.42g,6.1mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物5b-1(1.12g,3.07mmol)溶于9.2ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-2(0.58g,1.5mmol)，产率50%,ESI-MS[M+H]+m/z385,ESI-MS[M+Na]+m/z407。
实施例九、化合物FCO-2a的一种合成方法
取3,5-二甲基哌啶（10ml,约8.23g）溶于25ml甲醇中，加入环氧氯丙烷（9ml,约10g）,80°C油浴反应10小时，减压蒸馏出甲醇，加入30ml水，用二氯甲烷洗涤（15ml*3次）除去剩余原料，收集水相减压蒸干得到白色固体6a-1（9.7g,47.3nmol），产率65%。
取化合物1a-6(1.0g,5.6mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.6g,15mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐6a-12.3g(11.2mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物6a-2(1.04g,2.97mmol)，产率54%。
称取亚硝酸钠(0.41g,6.0mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物6a-2(1.04g,2.97mmol)溶于8.9ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-2a(0.58g,1.5mmol)，产率51%,ESI-MS[M+H]+m/z369,ESI-MS[M+Na]+m/z391。
实施例十、化合物FCO-2b的一种合成方法
取化合物1b-2(1.0g,5.1mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.49g,12.3mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐6a-1(2.1g,10.0mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物6b-1(0.93g,2.5mmol)，产率50%。
称取亚硝酸钠(0.35g,5.1mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物6b-1(0.93g,2.5mmol)溶于7.6ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-2b(0.58g,1.5mmol)，产率50%,ESI-MS[M+H]+m/z385,ESI-MS[M+Na]+m/z407。
实施例十一、化合物FCO-3a的一种合成方法
取二异丙胺（10ml,约7g）溶于25ml甲醇中，加入环氧氯丙烷（10ml,约11.7g）, 80°C油浴反应10小时，减压蒸馏出甲醇，加入30ml水，用二氯甲烷洗涤（20ml*3次）除去剩余原料，收集水相减压蒸干得到白色固体7a-1（7.4g,38.3nmol），产率56%。
取化合物1a-6(1.0g,5.6mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.6g,15mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐5a-12.14g(11.1mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物7a-2(1.04g,3.08mmol)，产率60%。
称取亚硝酸钠(0.43g,6.3mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物7a-2(1.04g,3.08mmol)溶于9.2ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-3a(0.42g,1.2mmol)，产率38%。ESI-MS[M+H]+m/z357,ESI-MS[M+Na]+m/z379。
实施例十二、化合物FCO-3b的一种合成方法
取化合物1b-2(1.0g,5.1mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.43g,10.7mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐7a-1(1.97g,10.2mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物7b-1(0.83g,2.35mmol)，产率46%。
称取亚硝酸钠(0.32g,4.7mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物7b-1(0.83g,2.35mmol)溶于7.1ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即FCO-6(0.304g,0.8mmol)，产率34.7%,ESI-MS[M+H]+m/z373,ESI-MS[M+Na]+m/z395。
实施例十三、化合物ACO-1a的一种合成方法
取金刚烷10g(73.5mmol),滴加溴素23.5g(147.0mmol),1小时缓慢升温到70°C，反应6小时，静置过夜，滴加饱和亚硫酸氢纳，直至溶液变为无色，乙酸乙酯萃取（30ml*3），取有机相减压浓缩，减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相为石油醚，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状液体即8a-1（11.0g,51.4mmol），产率70%。
取化合物8a-1（11.0g,51.4mmol），加入N-甲基甲酰胺（10g，169.4mmol）,170°C回流2小时，冷却至100°C,加入10%盐酸30ml,100°C搅拌2小时，冷却，甲苯洗涤（20ml*3），水相中加入活性炭1g，70°C搅拌30分钟，冷却，过滤，饱和氢氧化钠调节pH至12，无水***萃取（30ml*3），减压蒸馏蒸干得到白色固体8a-2（6.6g,40mmol），产率78%。
取8a-2（6.6g,40mmol）溶于50ml甲醇中，加入环氧氯丙烷（4.6g,80mmol）,80°C油浴反应10小时，减压蒸馏出甲醇，加入50ml水，用二氯甲烷洗涤（25ml*3次）除去剩余原料，收集水相减压蒸干得到白色固体8a-3（4.4g,17.2mmol），产率43%。
取化合物1a-6(1.0g,5.6mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.6g,15mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐8a-3(2.85g,11.1mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(67:33:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物8a-4(1.1g,2.7mmol)，产率50%。
称取亚硝酸钠(0.37g,5.4mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物8a-4(1.1g,2.7mmol)溶于8.5ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即ACO-1a(0.44g,1.1mmol)，产率38%,ESI-MS[M+H]+m/z421,ESI-MS[M+Na]+m/z443。1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.49-1.68(m,12H,CH2),1.98(s,3H,CH),2.27(s,3H,NCH3),2.47(s,6H,2CH3),2.56(s,3H,CH3),2.14-2.18,2.63-2.73(m,2H,OCH2),3.84-3.92(m,1H,OCH),4.21-4.26(m,2H,OCH2).1C-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:21.47(CH3),21.87(CH3),22.30(CH3),29.69 (3CH),34.25(3CH2),36.68(3NCH2),38.96(NCH3),51.46(OCH2),56.44(NCH2),65.44(HOCH),78.26(NOCH2),135.67(2-pyrazine);141.91(C(Cl)=N);148.86(5-pyrazine);149.11(3-pyrazine);152.35(6-pyrazine).
实施例十四、化合物ACO-1b的一种合成方法
取化合物1b-2(1.0g,5.1mmol)溶于20ml乙醇，取氢氧化钠(0.43g,10.7mmol)溶于10ml蒸馏水中，后加入季铵盐8a-3(2.6g,10.2mmol)混溶，80°C油浴反应3小时，TLC检测反应程度。乙酸乙酯萃取反应液（20ml*5次），收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(80:20:0.5)洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分。合并化合物馏分减压蒸馏干得透明油状物8b-1(0.95g,2.29mmol)，产率45%。
称取亚硝酸钠(0.31g,4.58mmol)溶于2ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5°C，制成亚酸钠溶液备用。将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5°C备用。取化合物8b-1(0.95g,2.29mmol)溶于7.0ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的NaOH溶液（7M）调节pH至10。最后，采用二氯甲烷萃取反应液（10ml*5次），收取有机层。减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相EA:PE:Et3N(20:80:0.5)，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即ACO-1b(0.8g,1.8mmol)，产率36%,ESI-MS[M+H]+m/z437,ESI-MS[M+Na]+m/z459。1H-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:1.61-1.76(m,12H,6CH2),2.09(s,3H,3CH),2.23(s,3H,CH3),2.26-2.34,2.73-2.81(m,2H,CH2),2.52(s,3H,CH3),2.57(s,3H,CH3),2.70(s,3H,CH3),3.09-3.98(m,1H,CHOH),4.33-4.34(d,2H,OCH2).1C-NMR(CDCl3,300MHz)(ppm)δ:13.64(CH3),14.04(CH3),22.39(CH3),29.48(3CH),33.57(3CH2),36.66(3NCH2),38.95(NCH3),50.93(OCH2),54.10(NCH2),65.40(HOCH),82.17(NOCH2),133.83(2-pyrazine);141.66(C(Cl)=N);142.91(5-pyrazine);144.79(3-pyrazine);152.08(6-pyrazine).
实施例十五、化合物TCO-1,TCO-2,PCO-1,BCO-1对MG-132诱导损伤的细胞的保护作用（图6）
每孔10000个SY5Y细胞，先用化合物保护1h，然后加入终浓度为15μΜ的MG-132 孵育24h。采用bimoclomol,arimoclomol，以及TMP作为阳性对照，DMSO作为溶媒对照，MTT法检测细胞活性。
结果显示我们合成的化合物TCO-1，TCO-2能剂量依赖地保护神经细胞应激损伤，TCO-1的生物活性与CytRx公司的bimoclomol及arimoclomol的活性相当；而TCO-2的活性明显强于bimoclomol与arimoclomol。#P<0.01versus control group.*P<0.05versus MG-132group.**P<0.01versus MG-132group.Ctrl:control,Ari:arimoclomol,Bim:bimoclomol.
实施例十六、化合物TCO-1,TCO-2,PCO-1,BCO-1对ROS的抑制作用（图7）
氧化刺激会导致细胞处于应激状态，蛋白质表达异常，可能产生错误的折叠或聚集，导致神经退行性疾病的产生。首先我们通过叔丁基过氧化氢诱导氧化损伤，然后用不同浓度梯度的化合物保护检测各化合物抗氧化能力。每孔10000个SY5Y细胞，先用化合物保护1h，然后加入终浓度为150μΜ的TBHP孵育4h。采用bimoclomol,arimoclomol，以及TMP作为阳性对照，DMSO作为溶媒对照，MTT法检测细胞活性。实验结果显示：阳性对照品bimoclomol，arimoclomol，TMP均无抗氧化作用，而新合成的化合物TCO-1，TCO-2有明显抗氧化作用。#P<0.01versus control group.*P<0.05versus t-BHP group.
实施例十七、化合物TCO-1,TCO-2,PCO-1对MPP+诱导损伤的细胞的保护作用（图8）
每孔10000个SY5Y细胞，先用化合物保护1h，然后加入终浓度2mΜ的MPP+孵育24h。采用bimoclomol,arimoclomol，以及临床抗帕金森病药selegiline(MAO-B)抑制剂作为阳性对照，DMSO作为溶媒对照，MTT法检测细胞活性。初步实验结果显示：阳性对照品bimoclomol，arimoclomol，selegiline除了10μM的arimoclomol之外均无无抗MPP+诱导的细胞凋亡作用，而新合成的化合物TCO-1，TCO-2在1μM,10μM均有明显的抗凋亡作用。#P<0.01versus control group.*P<0.05versus MPP+group.Sel:Selegiline.
实施例十八、化合物TCO-1,TCO-2抑制泛素化蛋白的聚集（图9）
TCO-1，TCO-2能调节热休克状态下HSPs蛋白表达；而在MG-132应激细胞模型中，100μM的TCO-1和TCO-2能明显清除泛素化蛋白的聚集。
实施例十九、化合物TCO-1对Aβ1-42诱导的AD模型大鼠的保护作用
注射Aβ1-42制造大鼠老年痴呆模型，然后用合成的氯肟衍生物TCO-1治疗，考察化合物对大鼠的保护作用。采用临床抗老年痴呆药物多奈哌齐(donepezil,DPH)作为阳性对照，生理盐水组为正常对照组。Morris水迷宫***检测行为学指标，观察新合成化合物 的保护作用大小。首先，大鼠侧脑室注射Aβ1-42(10μg/只)后，观察各组大鼠游泳速度没有明显统计学差异，说明大鼠的状态相同。
大鼠侧脑室注射Aβ1-42(10μg/只)后，第一次到达平台的时间（潜伏期）显著延长，*P<0.01versus Aβ组。阳性对照药多奈哌齐(3mg/kg)可对抗Aβ1-42的作用，明显缩短第一次到达平台的时间，*P<0.01versus Aβ组。所测试的TCO-1能显著缩短大鼠第一次到达平台的时间（潜伏期），*P<0.01versus Aβ组（图10）。
大鼠侧脑室注射Aβ1-42（10μg/只）后，穿越平台的次数明显减少，*P<0.01versusAβ组。DPH(3mg/kg)可对抗Aβ1-42的作用，明显增加穿越平台的次数，*P<0.01versus Aβ组。新合成的氯肟衍生物TCO-1能显著增加穿越平台的次数，*P<0.01versus Aβ组（图11）。
上述对本发明的具体描述清晰说明了此新化合物对蛋白质折叠错误或异常聚集形成的疾病如神经退行性疾病，心、脑血管疾病，代谢疾病和炎症的治疗或预防提供了独特的方法。上述关于具体实施例的详细描述，仅作为对本发明技术方案的实例说明，而不限制本发明权利要求的范围。特别指出，发明者经过审慎考虑，本发明不同的取代、改变和修饰都不偏离本发明权利要求所定义的内涵和外延。
Claims (8)
1.一种氯肟类化合物及其药学上可接受的盐，所述氯肟类化合物具有如下通式VI的结构：
其中：吡嗪环N原子上连有氧；n为0，1，2或3。
2.根据权利要求1所述氯肟类化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于通式VI中n为0，吡嗪环N原子上连有氧，所述氯肟类化合物具有如下式TCO-2的结构：
3.一种氯肟类化合物的制备方法，其中所述氯肟类化合物为TCO-2：
所述方法包括：
称取四甲基吡嗪10g溶于20ml乙酸中，加入30％过氧化氢8ml；70℃条件下油浴反应5小时后补加8.3ml30％过氧化氢，继续反应5小时，TLC监测反应程度，停止反应；冷至室温，氢氧化钠饱和溶液调节pH至10；二氯甲烷萃取50ml*5次，取有机层用旋转蒸发仪减压蒸馏干得白色固体1a-1；向其中加入20ml乙酸酐，125℃油浴反应2.5小时，TLC检测反应完全；减压蒸馏除去乙酸酐，得乙酰化粗产物1a-2；然后，氢氧化钠饱和溶液调至pH至12，室温搅拌，水解反应过夜；乙酸乙酯萃取反应液50ml*5次，减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相为1:1的EA:PE，TLC检测馏分，收集TMP-OH馏分；合并所需相同馏分，减压蒸馏干，得乳白色固体粉末7.5g1a-3，即TMP-OH，[M+Na]+＝175，产率67％；
将所得7.5g的1a-3即TMP-OH溶于50ml无水乙醇加入活性二氧化锰6.4g氧化，84℃油浴反应2h，TLC检测反应完全后，趁热采用五层滤纸小心抽滤反应液，除去二氧化锰粉末；滤后得到澄清滤液，旋转蒸发仪减压蒸馏干；湿法上样柱层析：流动相为1:5的EA:PE分离纯化，TLC监测馏分；收集化合物1a-4馏分，合并相同馏分蒸馏干得晶体状白色固体5.5g，1a-4，即TMP-CHO，[M+H]+＝151，产率75％；
将5.5g化合物1a-4样品用30ml甲酸溶解，称取3.2g盐酸羟胺加入，随后加入3.13g甲酸钠，混溶，120℃油浴反应回流过夜；饱和氢氧化钠溶液调节反应液pH至10，二氯甲烷萃取30ml*5次，取有机层减压蒸馏干；100-200目硅胶拌样，干法上样柱层析：流动相为1:5的EA:PE，TLC监测流出馏分成分，收集化合物1a-5馏分；合并相同馏分蒸馏干，得白色固体即化合物1a-5，产率65％；
取已制备的中间体1a-5 3g，加入30ml二氯甲烷溶解，然后加入间氯过氧苯甲酸即MCPBA 3.5g室温搅拌24h，TLC监测反应程度，停止反应；减压蒸馏除去二氯甲烷，干法上样柱层析；流动相为1:2的EA:PE，收集馏分，TLC监测馏分成分，合并相同馏分；减压蒸馏干，得白色固体1b-1 2.8g，产率84％；
将所得的1b-1 2.8g溶于30ml无水乙醇中，加入盐酸羟胺1.5g，取碳酸氢钠1.9g于20ml蒸馏水溶解，混溶，室温搅拌反应24小时；TLC监测反应程度，停止反应；减压蒸馏干，干法上样柱层析，流动相为80:20:0.5的EA:PE:Et3N，收集馏分，TLC监测馏分成分；合并相同馏分减压蒸馏干，得白色固体即化合物1b-2，产率95％；
然后，所述方法还进一步包括步骤(C)或(D)：
步骤(C)：取化合物1b-2 3.2g溶于30ml乙醇，取氢氧化钠0.8g溶于20ml蒸馏水中，后加入季铵盐1a-7 3.5g混溶，80℃油浴反应3小时，TLC检测反应程度；乙酸乙酯萃取反应液30ml*5次，收齐有机层减压蒸馏干，湿法上样柱层析，流动相为85:15:0.5的EA:PE:Et3N洗脱，收集馏分，TLC检测馏分成分；合并化合物1b-3馏分减压蒸馏干得透明油状物3.3g，产率60％；
称取亚硝酸钠1.06g溶于3.5ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5℃，制成亚酸钠溶液备用；将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5℃备用；取化合物1b-3 3.3g溶于20ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的7M NaOH溶液调节pH至10；最后，采用二氯甲烷萃取反应液15ml*5次，收取有机层；减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相为20:80:0.5的EA:PE:Et3N，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物反复冻融后能得白色固体即TCO-2 1.8g，产率50％；
步骤(D)：取已制备的1b-2 1.6g溶于10ml NaOH溶液中，取环氧氯丙烷1.2ml溶于少量DMSO中，混溶，冰浴搅拌过夜，TLC监测反应程度，停止反应；二氯甲烷萃取反应液10ml*5次，柱层析纯化得到化合物1b-4 1.23g，产率60％；将所得1b-4溶于10ml DMF中，加入哌啶0.74ml，80℃,反应3h，TLC监测反应程度，停止反应；乙酸乙酯萃取10ml*5次，柱层析纯化得到化合物1b-3 1.57g，产率95％；称取亚硝酸钠0.4g溶于4ml蒸馏水中，盐冰浴降至-5℃，制成亚酸钠溶液备用；将浓盐酸稀释为1M的溶液，冷至-5℃备用；取化合物1b-3 1.57g溶于10ml冷盐酸溶液中，盐冰浴搅拌，然后向其中缓慢滴加亚硝酸钠溶液反应1h，然后在冰浴条件下用冷却了的7M NaOH溶液调节pH至10；最后，采用二氯甲烷萃取反应液10ml*5次，收取有机层；减压蒸馏萃取所得的样品液，湿法上样柱层析，流动相为20:80:0.5的EA:PE:Et3N，TLC监测馏分成分，合并相同馏分减压蒸馏干，油泵减压抽除残留溶剂，得无色透明油状物即TCO-2 0.86g，产率51.7％；
其中，化合物1a-1、1a-2、1a-3、1a-4、1a-5、1a-7、1b-1、1b-2、1b-3、1b-4分别为：
4.根据权利要求1所述的氯肟类化合物及含有所述化合物的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用来预防或治疗的疾病是脑神经或脑血管疾病、心血管疾病、炎症感染性疾病或眼科疾病。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述脑神经或脑血管疾病是阿尔兹海默氏病、帕金森症、亨廷顿氏病、朊蛋白病、脑软化病、致死的家族性失眠症、人类的纹状体脊髓变性病、羊瘙痒病，疯牛病、肌萎缩性脊髓侧索硬化、痴呆、多发性硬化症、慢性痛类脑病、脑创伤、癫痫、中风或缺氧缺血脑损伤。
6.根据权利要求4所述的用途，其中所述心血管疾病是心肺侧流、心脏缺血或再灌注、心肌炎、动脉粥样硬化、冠心病和突发性心脏病类心脏或血管性疾病。
7.根据权利要求4所述的用途，其中所述炎症感染性疾病是炎性肠病、类风湿性关节炎、哮喘、脑脊髓炎、脑脊膜炎、胰腺炎、腹膜炎、血管炎病、脉络丛脑膜炎、肾小球肾炎、全身性红斑狼疮或肝炎。
8.根据权利要求4所述的用途，其中所述眼科疾病是糖尿病性视网膜病、眼色素层炎、青光眼、睑炎、睑板腺囊肿、过敏性眼病、角膜溃疡、角膜炎、白内障、老年性黄斑退行性改变或视神经炎。
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