CN103804054A - 桑黄培养基质优化及短段木栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种菌类植物栽培，即桑黄培养基质优化及短段木栽培方法。桑黄母种培养基：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。桑黄短段木栽培方法，步骤如下：（1）采用子实体组织分离法分离桑黄菌母种。（2）桑黄原种培养。（3）桑黄栽培种培养。（4）短段木栽培材料的制备。选用柞木段做成菌棒，柞木段人工栽培桑黄生产资料的成本低廉，产量高，质量好，有效成分含量高，可获丰厚的经济回报。

Description

桑黄培养基质优化及短段木栽培方法

技术领域　

本发明涉及一种菌类植物栽培，即桑黄培养基质优化及短段木栽培方法。 

背景技术

在现有技术中，桑黄是一种珍稀的大型药用真菌，其药用价值早在唐朝的《药性论》就有记载。《本草纲目》记载，桑黄可治癖饮积聚、腹痛金疮；《中药大辞典》叙述其可治疗内科多种疾病。其子实体入药，味微苦，能利五脏、宣肠气、止血、排毒、和胃止泻。现代医学研究表明，桑黄除了具有传统中医理论上的药理作用以外，还具有抗癌、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、抗氧化、抗纤维化、骨髓造血功能损伤的保护、免疫调节、保肝和抗肝硬化等功效。桑黄为多年生木腐菌，由于受生理生态的特殊性和复杂性以及外部环境条件的制约，在自然界中形成的子实体稀少，再加上近年来，桑黄的用量日益加大，特别是国外对我国野生资源掠夺式的收购，野生资源越来越少。因此需要通过多种途径获得其活性物质，如进行人工木段栽培，液体和固体发酵等。人工木段栽培刚刚起步，尚未有关于人工木段栽培桑黄的具体报道，人工栽培的成品桑黄子实体国内还没有采收先例。 

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种改善培养基,实现人工栽培桑黄可行的桑黄培养基质优化及短段木栽培方法。 

本发明的技术解决方案是：一种桑黄母种培养基，由以下重量的原料制成：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。 

一种桑黄原种培养基，由以下重量的原料制成：柞木屑77%，麦麸10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1%。 

一种桑黄栽培种培养基，由以下重量的原料制成：柞木屑50%，棉籽壳39%，麦麸10%，石膏1%。 

一种桑黄短段木栽培方法，其特征在于步骤如下： 

（1）采用子实体组织分离法分离桑黄菌母种:对采自长白山区野生桑黄子实体进行表面消毒处理，钩取一小块桑黄子实体放于斜面母种培养基上；置于27℃-30℃恒温箱内培养,待子实体组织块周围长出乳黄色菌丝，在菌落边缘挑取先端菌丝体移植到新的试管移植母种培养基斜面上，27℃-30℃恒温培养，10d菌丝即可长满试管，如此反复移植2-3次，所得菌株作为母种；所述的母种培养基是：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。

（2）桑黄原种培养：原种培养基为柞木屑77%，麦麸10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1%；28℃恒温室中暗室培养。 

（3）桑黄栽培种培养：栽培种培养基为柞木屑50%，棉籽壳39%，麦麸10%，石膏1%；28℃恒温室中暗室培养。 

（4）短段木栽培材料的制备： 

选柞木做成菌棒，高压灭菌后备用。所述的菌棒选柞木树种作为段木栽培材料，稍头直径4-8cm,截成18-20 cm长的短木段，劈成两半，拼成约15 cm的段木梱，装入低压聚乙烯菌袋中，木段两头填充一层木屑麦麸皮营养料，木屑、麸皮比例为3:1，加水拌匀，扎好袋口，同时将段木袋扎两道，使段木与塑料袋贴合的较为紧密，高压灭菌后备用。

（5）菌棒接种与发菌期培养： 

按无菌操作，选用菌丝生长旺盛的桑黄栽培菌种，采用两头接种法，接种量在20%，以菌种封盖料面为度。

发菌培养期间培养温度为28℃，遮光培养，每天通风1次，培养时间35-40d。 

（6）子实体生长发育期培养： 

当菌棒内菌丝颜色有浅黄变为深黄时，在菌棒两侧侧切开口，开口性状月牙形，长2cm，月牙形宽度小于1cm，每个菌袋可以在菌袋两侧分别开两个口。

菌木埋土栽培：先在大棚地面作栽培床，棚上覆盖塑料薄膜，遮阳网或草帘遮荫，划口立木埋土栽培，先按深6 cm，株行距10 cm ×10 cm挖坑，再将菌袋一端距袋底6 cm处环切，脱掉袋底，立木放于坑中，培上沙土，然后再用刀片将菌袋环划两刀，割透塑料膜为度，只划出两道出菇口或缝。栽培床按6m宽的大棚可作三个菌床，中间菌床宽2m，两边菌床各1.2m，床间留60 cm作用道，棚两边各留20 cm排水沟。 

子实体发育期管理：当菌棒内菌丝颜色由浅黄色进入原基分化期，此时采用昼夜温差的方法，即白天培养温度28℃，夜间温度降为20℃，连续处理3d；空气相对湿度控制在85%-95%之间；给予散射光照射。 

子实体发育阶段，生长温度25℃，空气相对湿度保持在85%-95%之间，每天通风2次，每次30min；散射光照射。 

子实体采收：桑黄子实体应2-3年采收一次，采大留小。 

本发明的优点是：1、本发明从桑黄母种培养基选择、原种培养基选择、栽培种培养基的选择三方面着手，确定了桑黄培养基合理参数，以期获得优良桑黄菌种，为成功培养桑黄菌子实体提供前提保障。2、选用柞木段做成菌棒，采用埋土栽培，确定合理栽培条件，如发菌培养期间培养温度为28℃，遮光培养，每天通风1次，培养时间35-40d；进入原基分化期时，此时采用昼夜温差的方法，即白天培养温度28℃，夜间温度降为20℃，连续处理3d；空气相对湿度控制在85%-95%之间；给予散射光照射；子实体发育阶段，生长温度25℃，空气相对湿度保持在85%-95%之间，每天通风2次，每次30min；散射光照射，保证了桑黄人工栽培方法可行，并工业化生产。3、柞木段人工栽培桑黄生产资料的成本低廉，产量高，质量好，有效成分含量高；可获丰厚的经济回报。4、本研究以挽救和开发桑黄菌这一珍贵药用真菌资源，弥补野生桑黄菌因自然资源有限和过度采摘所导致的物种资源濒临枯竭、科学实验和研究难以开发和市场开发利用受限的实际问题，具有重大的经济效益、社会效益和生态效益。 

下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。 

具体实施方式

实验例1 

桑黄菌丝培养条件的研究

1材料与方法

1.1桑黄菌株（火木层孔菌Phellinus igniarius）,采自长白山系的老龄山脉森林中的柞木（蒙古栎）上。

1.2供试培养基 

基础培养基：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。

1.3实验方法 

1.3.1菌种分离及纯化培养

    采用子实体组织分离法分离桑黄菌母种。在严格无菌操作条件下对采自长白山区野生桑黄子实体进行表面消毒处理，用75%酒精反复涂擦子实体表面后置于无菌平板培养皿中，再将培养皿放入超净工作台内备用。用火焰灼烧灭菌的解剖刀从桑黄子实体基部纵向切开，然后再用解剖刀从剖面中心在欲分离部位刻划数个‘井’字，用火焰灼烧灭菌的接种钩钩取一小块桑黄子实体（绿豆大小）放于斜面基础培养基上。置于28℃恒温箱内培养。2天后菌丝开始萌发，待子实体组织块周围长出乳黄色菌丝，在菌落边缘挑取先端菌丝体移植到新的试管基础培养基斜面上，28℃恒温培养，10d菌丝即可长满试管，如此反复移植2-3次，所得菌株作为母种，菌丝长满试管后置4℃冰箱内保藏备用。

1.3.2接种培养及观测方法 

将灭菌的试管基础培养基倒入直径9cm的无菌平板培养皿中，每个培养皿加入基础培养基15ml；待培养基凝固后，在培养皿中接一直径5mm的菌块，每一处理接种3个培养皿（即三次重复）。每隔3天测量一次菌落直径，计算菌丝生长速度，并观察菌落变化及长势。

1.3.3 数据统计方法 

原始数据的处理、相关性分析及图表，用Excel软件处理，方差分析用SPSS12.0软件处理，应用Duncan单因素方差分析比较各处理之间的差异显著性（p＜0.05）。

1.3.4 不同碳源对桑黄菌丝生长的影响 

分别用麦芽糖、蔗糖、乳糖、甘露醇代替基础培养基中的葡萄糖，28℃，黑暗条件下培养，观测不同碳源对桑黄菌丝生长的影响。

1.3.5 不同氮源对桑黄菌丝生长的影响 

    分别用牛肉膏、酵母膏、硫酸铵、氯化铵代替基础培养基中的大豆蛋白胨，28℃，黑暗条件下培养，观测不同氮源对桑黄菌丝生长的影响。

1.3.6 不同温度对桑黄菌丝生长的影响 

使用基础培养基，分别在18℃、21℃、24℃、27℃、30℃、33℃，黑暗条件下培养，观测不同温度对桑黄菌丝生长的影响。

1.3.7 不同 pH对桑黄菌丝生长的影响 

使用基础培养基，调pH值分别在5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5，28℃，黑暗条件下培养，观测不同pH值对桑黄菌丝生长的影响。

2 结果与分析 

2.1 不同碳源对桑黄菌丝生长的影响（结果见表1-1）

       表1-1 不同碳源对桑黄菌丝生长的影响（ 

±S.D n﹦3）

从表1-1中可以看出：桑黄在供试的5种碳源中均能生长，但不同碳源对菌丝生长的影响差异显著（p＜0.05）。当以葡萄糖为碳源时，菌丝生长速度最快，4.2 mm/d；其后依次是甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖；从生长长势来看，葡萄糖为碳源时，菌落菌丝浓密、生长势旺盛，以甘露醇和蔗糖为碳源时，菌落菌丝细长、较浓密、生长势较旺盛，以乳糖和麦芽糖为碳源时，菌落菌丝稀疏、生长势较弱（见表1-1）。由此可见，该菌菌丝生长的最佳碳源是葡萄糖。

2.2 不同氮源对桑黄菌丝生长的影响（结果见表1-2） 

表 1-2 不同氮源对桑黄菌丝生长的影响（

±S.D n﹦3）

从表1-2中可以看出：桑黄在供试品的5种氮源中均能生长，但不同氮源对菌丝生长的影响差异显著（p＜0.05）。当以蛋白胨为氮源时，菌丝生长速度最快；其后依次是酵母膏、氯化铵、硝酸钾、牛肉膏；从生长势来看，蛋白胨为氮源时，菌落菌丝浓密、生长势旺盛，以酵母膏和牛肉膏为氮源时，菌落菌丝较浓密、生长势较旺盛，但，以牛肉膏为氮源时，菌丝生长速度缓慢，以氯化铵和硝酸钾为氮源时菌落菌丝稀疏，生长势较弱（见表1-2）。由此可见，该菌对两种无机氮源中的硝态氮（硝酸钾、氯化铵）的利用无显著差别，较无机氮源而言，该菌能更好地利用有机氮，且菌丝生长的最适氮源是大豆蛋白胨。

2.3 不同温度对桑黄菌丝生长的影响（结果见表1-3） 

表1-3 不同温度对桑黄菌丝生长的影响（菌落直径mm）

从表1-3中可以看出：不同温度对桑黄菌丝生长的影响差异显著（p＜0.05）。培养温度为18℃时，菌丝生长速度缓慢，仅为1.2mm/d；随着温度的升高，菌丝生长速度逐步加快；当温度为27℃时，菌丝的生长速度最快，为3.8mm/d；当温度上升至33℃时，菌丝虽然能够生长，但生长速度明显减慢。差异显著性测验结果表明，温度27℃和30℃对菌丝生长速度影响差异不显著，但两者和其他温度处理间有着显著的差异。因此，菌丝适宜的生长温度为27℃-30℃。

2.4不同pH对桑黄菌丝生长的影响（结果见表1-4） 

表1-4不同pH对桑黄菌丝生长的影响

从表1-4中可以看出：桑黄菌丝在pH5.5-7.5范围内的基础培养基上均可生长，但不同pH对桑黄菌丝生长的影响差异显著（p＜0.05）。基础培养基pH 5.0时，菌丝生长速度为3.2 mm/d；基础培养基pH 5.5 时菌丝生长速度较快，为3.6 mm/d，菌落菌丝较浓密、生长势较旺盛；基础培养基pH 6.0时，菌丝生长速度最快，为3.8 mm/d，菌落菌丝生长浓密，生长势旺盛；基础培养基pH大于 6.0时，菌丝生长速度随pH增高而减慢，生长势也较弱；基础培养基pH 7.5 时，菌丝生长速度降至2.6mm/d。由此可见桑黄适于在偏酸性环境中生长。同时差异显著性测验结果表明，pH 6.0对桑黄菌丝生长速度的影响与处理间有着显著差异。因此，在本实验中，pH 6.0为桑黄菌丝生长的最适pH值。

实验例2 

桑黄原种、栽培种培养基质的研究

桑黄菌菌种的生产，是整个桑黄栽培过程中非常重要的一环。只有优良的菌种，再配以良好的栽培条件，才可能成功获得桑黄子实体。优良菌种获得的关键除了菌种种类外，最关键的就是培养基或培养基质的选择，只有合适的培养基质才能获得健壮、有活力的优良菌种。本实验从母种培养基选择、原种培养基选择、栽培种培养料的选择三方面着手，以期获得优良桑黄菌种，为成功培养桑黄菌子实体提供前提保障。

1 桑黄菌原种培养基的筛选 

1.1 材料与方法

1.1.1 供试菌株

桑黄菌株(火木层孔菌phellius ingiarius),2004年采自长白山系的老岭山脉森林中的柞木（蒙古栎）上。

1.1.2 实验方法 

选用五种不同原种培养基：

1）玉米培养基：将干玉米用水泡4小时后，放入沸水中煮开后捞出，控水，加入1%石膏，搅拌混匀。

2)桑木屑培养基：桑木屑77%、麦麸10%、玉米面10%、葡萄糖2%、石膏1%，搅拌混匀。 

3)柞木屑培养基：柞木屑77%、麦麸10%、玉米面10%、葡萄糖2%、石膏1%，搅拌混匀。 

4)杨木屑培养基：杨木屑77%、麦麸10%、玉米面10%、葡萄糖2%、石膏1%，搅拌混匀。 

5)桦木屑培养基：桦木屑77%、麦麸10%、玉米面10%、葡萄糖2%、石膏1%，搅拌混匀。 

将培养基分别制备好，装高10 cm、直径8 cm罐头瓶培养桑黄菌，每个配方（处理）装30瓶，每10瓶为1组，3次重复，采用高压蒸汽灭菌，压力0.11兆帕（温度121℃）持续2.5h。于无菌条件下接种，接种后在25℃-28℃条件下密闭遮光培养，观察记录各培养基上桑黄菌丝萌发状况、菌丝生长速度，筛选出桑黄菌种的最适原种培养基。 

1.1.3 数据统计方法 

原始数据的处理、相关性分析及图表，用Excel软件处理，方差分析用SPSS12.0软件处理，应用 Duncan单因素方差分析比较各处理之间的差异显著性（p＜0.05）。

1.2 结果与分析 

表2-1 桑黄在5种原种培养基质上的生长情况

从表2-1中可以看出：桑黄菌丝在5种原种培养基质上均可生长，但不同培养基质对桑黄菌丝生长的影响差异显著（p＜0.05）。玉米培养基中，桑黄菌长势最好，生长速度快，30d就可以长满菌种瓶，菌丝颜色为棕黄色，表面菌丝扭结，有很厚的菌苔；柞木屑培养基长势很好，菌丝均有一致，37d基本长满菌种瓶，颜色棕黄；杨木屑和桦木屑培养基桑黄菌丝生长密集，长势较好，新生菌丝体颜色鲜黄，菌丝生长速度相对较慢；桑木屑培养基菌丝长势好，表面菌丝密集，新生菌丝颜色嫩黄，但菌丝生长速度缓慢，50d方可长满菌种瓶。综上所述：比较这5种原种培养基上桑黄菌丝生长长势和速度，玉米培养基最优，但成本最高，四种木屑培养基中柞木屑研究更适合制作桑黄菌原种。

2 桑黄菌栽培种基质的筛选 

2.1 材料与方法

2.1.1 供试菌株

桑黄菌株((火木层孔菌phellius ingiarius),)2004年采自长白山系的老岭山脉森林中的柞木(蒙古栎)上.

2.1.2 实验方法

桑黄人工栽培基质的选择,根据原种培养基筛选结果,进一步降低扩繁成本,按照就地取材的原则,设计以下5种栽培种培养基:

1)  木屑麦、麸培养基:柞木屑80%、麦麸18%、蔗糖1%、石膏1%;

2)  木屑稻糠培养基:柞木屑77%、细稻糠22%、石膏1%;

3)  棉籽壳木屑培养基:柞木屑50%、棉籽壳39%、麦麸10%、石膏1%;

4)  木屑玉米芯培养基:柞木屑65%、玉米芯 34%、石膏1%;

5)  玉米芯麦麸培养基: 玉米芯80%、麦麸19%、石膏1%。

分别配制栽培料基质，将配好的培养料装入高10cm、直径8 cm罐头瓶，用聚丙烯封瓶口，采用高压蒸汽灭菌，压力0.11兆帕（温度121℃）持续2.5h。于无菌条件下接种，接种后在25℃-28℃条件下密闭遮光培养，观测桑黄菌丝发菌状况。通过考察记录菌丝的发菌状况、菌丝特征、满瓶天数，筛选出桑黄菌适宜的栽培种配方。 

2.2 结果与分析 

表2-2 桑黄在5种培养基质上的生长情况

不同培养基配方对栽培种菌丝生长的影响，从表2-2结果显示：在5种栽培基上菌丝生长速度存在显著差异，桑黄菌丝在棉籽壳木屑麦麸培养基上生长速度最快，其长满袋时间为36d，生长势强、菌丝较密、淡黄色；在木屑麦麸培养基上生长速度次之，其长满袋时间为39d，在玉米芯麦麸培养基上生长速度最慢，51d长满菌袋，且长势弱，菌丝较稀疏。因此，根据综合指标，棉籽壳木屑麦麸培养基为栽培种最佳培养基。

三 短段木栽培技术的研究 

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株及其来源

桑黄菌株((火木层孔菌phellius ingiarius),)2004年采自长白山系的老岭山脉森林中的柞木(蒙古栎)上。

1.1.2 供试原种（二级种）培养基的制备 

试验证明原种选择柞木屑做培养基为好，配制时谷粒中加入1%石膏粉混匀，装瓶高压灭菌后备用。

1.1.3 供试栽培种（三级种）培养基的制备 

通过试验筛选出栽培种的培养基配方装瓶高压灭菌后备用。

1.1.4 栽培段木树种的筛选 

1.1.4.1 供试段木栽培材料的准备与制备

根据野生桑黄在自然条件下生长的树种，选择长白山区常见的桑树、柞树(蒙古栎)、杨树（山白杨）及桦树（白桦）为栽培材料。树龄在6-10年。

1.1.4.2段木栽培材料（即菌棒）的制备 

选择以上4种不同的树种作为段木栽培材料，对比其对桑黄菌丝及其子实体的生长以及产量的影响。稍头直径4-8cm,截成18-20 cm长的短木段，劈成两半（细的不劈），拼成约15 cm的段木梱，装入低压聚乙烯菌袋中，每个树种50袋。木段两头填充一层木屑麦麸皮营养料（木屑、麸皮比例为3:1，加适量水拌匀），扎好袋口，同时将段木袋扎两道，使段木与塑料袋贴合的较为紧密，高压灭菌后备用。

1.2 试验方法 

1.2.1 原种（二级种）培养

严格遵守无菌操作要求将桑黄斜面菌种接入原种培养基（一支斜面试管母种接500g罐头瓶6瓶），28℃恒温室中暗室培养，30d菌丝可以长满菌种瓶。

1.2.2 栽培种（三级种）的培养 

在无菌条件下接入桑黄谷粒二级菌种，1瓶二级菌种可接750ml罐头瓶20瓶，28℃恒温室中暗室 培养，40d菌种可长满瓶。

1.2.3 菌棒接种与发菌期培养 

严格遵守无菌操作，选用菌丝生长旺盛的桑黄栽培菌种，采用两头接种法，接种量在20%，以菌种封盖料面为度。

发菌培养期间培养温度为28℃，遮光培养，待菌丝长满菌棒并逐渐转变为黄色即可进入生理分化期。 

1.2.4 子实体生长发育期培养 

当菌棒内菌丝颜色有浅黄变为深黄时，在菌棒两侧侧切开口，开口性状月牙形，长2cm，月牙形宽度小于1cm，每个菌袋可以在菌袋两侧分别开两个口。

2 结果与分析 

2.1 发菌期管理

发菌阶段培养温度28℃，不需要光照，暗室培养，每天通风1次，培养时间35-40d。

2.2 菌木埋土栽培 

先在地面作栽培床，6m宽的大棚可作三个菌床，中间菌床宽2m，两边菌床各1.2m，床间留60 cm作用道，棚两边各留20 cm排水沟，棚上覆盖塑料薄膜（12丝）和两层遮阳网（或草帘）遮荫。床面整好后，采用不脱袋，划口立木埋土栽培，先按深6 cm，株行距10 cm ×10 cm挖坑，再将菌袋一端距袋底6 cm处环切，脱掉袋底，立木放于坑中，培上沙土，然后再用刀片将菌袋环划两刀（割透塑料膜为度），只划出两道出菇口（缝），不脱袋，利于保湿。

2.3 子实体发育期管理 

当菌棒内菌丝颜色由浅黄色进入原基分化期，此时采用昼夜温差的方法，即白天培养温度28℃，夜间温度降为20℃，连续处理3d，能加速桑黄子实体发生。

通过试验发现，空气相对湿度对桑黄子实体生长速度及其质量影响较大，为此，考察了不同梯度空气相对湿度对桑黄子实体生长速度及质量的影响。结果表明，将空气相对湿度控制在85%-95%之间有利于桑黄子实体生长，所得到的桑黄质量也达到最佳。温度是影响桑黄子实体生长速度计质量的另一个重要环境因子。温度过高，桑黄子实体虽然长得快，但子实体重量较轻，且温度过高再加上高湿，很容易感染杂菌，从而降低产量。有鉴于此，我们也考察了 不同温度对桑黄子实体生长和质量的影响。在考虑到温度和空气相对湿度之间相互影响的前提下，最终发现，将温度控制在25℃能兼顾桑黄子实体生长速度和质量。在空气相对湿度达到85%-95%之间，桑黄子实体感染杂菌现象较少。 

此外，通过试验发现：当有充足的氧气时，有利于桑黄子实体生长；为此，培养室早、晚各通风一次，每次30min，这样能加快桑黄子实体生长，同时还能保证桑黄质量。 

2.4 子实体采收 

桑黄为多年生药用真菌，子实体生长较慢，应2-3年采收一次，采大留小。

人工段木栽培的桑黄子实体马蹄形或肾形，木质坚硬，单片或二、三层叠生，基部较厚，边缘渐薄钝圆，菌盖呈深黄至浅咖啡色。木栽培的桑黄无论在子实体形态特征，还是桑黄产量和质量都优于塑料栽培的桑黄，而且木段栽培的桑黄子实体近似于野生桑黄。 

当桑黄菌盖不再生长，并见有少量孢子散发时，便进入子实体成熟期。采收要用刀从桑黄子实体基部割下，原则是采大留小，边成熟、边采收。 

2.5 不同段木树种栽培桑黄产量比较 

表3-1 桑黄在5种不同树种上的生长情况

树种	接菌数量（袋）	长满菌棒时间（d）	生长势	成活数量（袋）	子实体形成时间（d）	平均单棒产量（g）	总产量（第二年收）
								桑	50	60	弱	23	45	58	1334
柞	50	48	强	46	25	110	5060
								杨	50	45	强	48	30	80	3840
桦	50	52	较弱	45	32	78	3510

不同树种的椴木对桑黄菌丝及子实体生长以及产量的影响，从表3-1的结果可以看出：在4个不同树种的木段上菌丝、子实体生长速度及其产量存在明显的差异，桑黄在柞木上生长较快，48d基本长满菌木，埋土栽培后35d便陆续在割口处或袋口产生子实体，二年秋后采收第一潮子实体，采大留小的，木段平均单产桑黄子实体（干品）110g，产量 ，子实体质地坚硬，形态与野者相近。在杨木段上虽然菌丝生长速度快（45d长满菌木），子实体形成较早（埋土栽培后30d陆续产生），但其产量不及柞木段（平均产量为80g/段）,且桑黄子实体质地较疏松，产品质量次之。桑木栽培由于树皮较薄，菌丝长势弱，长速慢，一般需60d长满菌木，且栽培后有部分木段不产生桑黄子实体，成活率不足50%，平均单产58g/段；尽管如此，桑木上生长的桑黄产品称为极品，深受消费者青睐。因此，我们仍继续探讨和深入研究采用桑木段栽培桑黄，希望能尽快提高桑木段栽培桑黄的产量。

3讨论 

通过栽培试验发现：桑黄菌是中温偏高型真菌，子实体分化温度在25℃-35℃之间，持续35℃以上及18℃以下均不能分化。同时，桑黄菌也属于变温结实型真菌，温差刺激有利于桑黄子实体的行成。

开口形状和大小影响桑黄菌子实体的形状和形成。经试验发现，采用环段木划口（只划一条缝不脱袋，能通气，不失水），有利出菇，为最佳出菇方式。方形开口或圆形开口容易使桑黄耳牙形成时间延迟，其可能原因是由于暴露在空气中的菌丝面积大，菌丝之间竞争性强，而不利于桑黄子实体的形成，此时形成的桑黄子实体外形不好。 

空气相对湿度也是影响桑黄菌子实体形成的重要因素之一，空气相对湿度过低会加速桑黄菌子实体表面水分蒸发，使基质内水分大量流失，甚至使桑黄子实体原基干枯而死。空气相对湿度过大，又容易使呼吸作用受阻，抑制桑黄子实体生长发育。由于高温高湿的培养条件导致桑黄菌木遭受红色链孢霉的侵染，所以要注意随时观察菌袋内菌丝颜色变化，发现杂菌污染应立即隔离，以防传染其它菌袋。桑黄在出菇阶段空气相对湿度应控制在85%-95%之间，温度控制在25℃，这种条件有利桑黄生长，出菇良好。 

通气对桑黄子实体的形成也不容忽视，基质内缺氧会抑制桑黄菌丝的呼吸作用，使菌丝生长缓慢，菌丝衰弱，严重时桑黄菌丝停止生长，甚至死亡。桑黄出菇阶段每天至少通风2次，每次30min。如果桑黄子实体阶段氧气不足，容易造成桑黄子实体发生大量畸形，影响桑黄等级。 

桑黄在菌丝生长阶段不需要光线，暗室恒温培养即可。当桑黄原基形成后，应给与适当的散射光刺激，能加速桑黄子实体原基分化。桑黄菌丝在黑暗环境中也能形成子实体原基，但是桑黄子实体颜色较浅，为淡黄色；给与散射光刺激的桑黄子实体成色较好，为深黄色。 

上面描述，只是本发明的具体实施方式，各种举例说明不对本发明的实质内容构成限制。 

Claims (7)

1. 一种桑黄母种培养基，其特征在于由以下重量的原料制成：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。

2.一种桑黄原种培养基，其特征在于由以下重量的原料制成：柞木屑77%，麦麸10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1%。

3.一种桑黄栽培种培养基，其特征在于由以下重量的原料制成：柞木屑50%，棉籽壳39%，麦麸10%，石膏1%。

4.一种桑黄短段木栽培方法，其特征在于步骤如下：

（1）采用子实体组织分离法分离桑黄菌母种:对采自长白山区野生桑黄子实体进行表面消毒处理，钩取一小块桑黄子实体放于斜面母种培养基上；置于27℃-30℃恒温箱内培养,待子实体组织块周围长出乳黄色菌丝，在菌落边缘挑取先端菌丝体移植到新的试管移植母种培养基斜面上，27℃-30℃恒温培养，10d菌丝即可长满试管，如此反复移植2-3次，所得菌株作为母种；所述的母种培养基是：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，琼脂18g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml；

（2）桑黄原种培养：原种培养基为柞木屑77%，麦麸10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1%；28℃恒温室中暗室培养；

（3）桑黄栽培种培养：栽培种培养基为柞木屑50%，棉籽壳39%，麦麸10%，石膏1%；28℃恒温室中暗室培养；

（4）短段木栽培材料的制备：

选柞木做成菌棒，高压灭菌后备用；

（5）菌棒接种与发菌期培养：

按无菌操作，选用菌丝生长旺盛的桑黄栽培菌种，采用两头接种法，接种量在20%，以菌种封盖料面为度；

发菌培养期间培养温度为28℃，遮光培养，每天通风1次，培养时间35-40d；

（6）子实体生长发育期培养：

当菌棒内菌丝颜色有浅黄变为深黄时，在菌棒两侧侧切开口，每个菌袋可以在菌袋两侧分别开两个口；

菌木埋土栽培：先在大棚地面作栽培床，棚上覆盖塑料薄膜，遮阳网或草帘遮荫，划口立木埋土栽培；

子实体发育期管理：当菌棒内菌丝颜色由浅黄色进入原基分化期，此时采用昼夜温差的方法，即白天培养温度28℃，夜间温度降为20℃，连续处理3d；空气相对湿度控制在85%-95%之间；给予散射光照射；

子实体发育阶段，生长温度25℃，空气相对湿度保持在85%-95%之间，每天通风2次，每次30min；散射光照射；

子实体采收：桑黄子实体应2-3年采收一次，采大留小。

5.按照权利要求4所述的桑黄短段木栽培方法，其特征在于所述的菌棒选柞木树种作为段木栽培材料，稍头直径4-8cm,截成18-20 cm长的短木段，劈成两半，拼成约15 cm的段木梱，装入低压聚乙烯菌袋中，木段两头填充一层木屑麦麸皮营养料，木屑、麸皮比例为3:1，加水拌匀，扎好袋口，同时将段木袋扎两道，使段木与塑料袋贴合的较为紧密，高压灭菌后备用。

6.按照权利要求4所述的桑黄短段木栽培方法，其特征在于栽培床按6m宽的大棚可作三个菌床，中间菌床宽2m，两边菌床各1.2m，床间留60 cm作用道，棚两边各留20 cm排水沟。

7.按照权利要求4所述的桑黄短段木栽培方法，其特征在于划口立木埋土栽培是指先按深6 cm，株行距10 cm ×10 cm挖坑，再将菌袋一端距袋底6 cm处环切，脱掉袋底，立木放于坑中，培上沙土，然后再用刀片将菌袋环划两刀，割透塑料膜为度，只划出两道出菇口或缝。