CN103788154A - 一种制备黄芩苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种天然产物的提纯方法，具体来说，本发明涉及一种制备高***芩苷的方法及其工艺。采用反相硅胶或反相聚合物树脂作为DAC制备柱填料，甲醇和水的混合溶剂为流动相的方法分离纯化了黄芩苷，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化制备型液相色谱分离纯化黄芩苷提供了基础。

Description

一种制备黄芩苷的方法

技术领域

本发明涉及的是动态轴向压缩柱分离纯化黄芩苷的方法，具体是采用加热回流提取、动态轴向压缩制备柱进行分离纯化的方法。

背景技术

黄芩苷(Baicalin)是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗***及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能，在临床医学已占有重要地位。黄芩苷还能吸收紫外线，清楚氧自由基，又能抑制黑色素的生成，因此即可用于医药，也可用于化妆品，是一种很好的功能性美容化妆品原料。目前，国内对黄芩苷提取工艺的研究有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法等，但这些提取工艺操作周期长，条件不易控制，得到的黄芩苷的含量低。

随着制药、生物化工等行业的迅速发展，制备型液相色谱分离技术得到越来越广泛的开发和应用，已成为分离和纯化复杂混合物的重要方法，尤其适用于天然产物的返利。动态轴向压缩(DAC)法具有多方面的优越性，因而得到了更为深入的研究和发展。动态轴向压缩柱的核心技术是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，简化了大直径色谱柱的填卸过程，填装的色谱柱性能稳定、效率高。DAC柱柱效高，重复性好，填装所用的时间短，可以采用粒径更小的填料，减小柱长，增加柱径，从而减小管壁效应，得到几乎接近分析柱的柱效。

本发明采用乙醇加热回流提取，反相动态轴向压缩柱制备色谱法分离纯化了黄芩苷，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化制备型液相色谱分离纯化黄芩苷提供了基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种从冬凌草中提取并用动态轴向压缩柱分离纯化黄芩苷的生产方法，属于天然产物的提取分离纯化领域，包括醇提取、动态轴向压缩柱分离、重结晶以及成品的纯度检测。

本发明为实现上述发明目的采用如下步骤：

a、提取：将粉末过60目筛后置于提取器中，95%乙醇为溶剂，70℃水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；

 b、样品的溶解：a步骤的浓缩物用甲醇与水的混合溶剂溶解，过滤，备用；   

 c、流动相的配制：流动相采用步骤b的甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为50-70%之间；

    d、DAC柱分离：用进样泵向填装好填料的动态轴向压缩柱中泵入上述溶解的样品溶液，再用步骤c配制好的流动相洗脱，收集目标主峰，取样HPLC检测；

    e、浓缩：将d步骤中收集到的目标组分进行浓缩处理，得到黄芩苷纯品；

 f、成品的纯度检测：泵：NewstyleNP7000型泵；色谱柱(ODS填料4.6*250mm，5μm)；检测器：汉邦紫外检测器NewstyleNU3000，检测波长：274nm，检测温度：室温；流动相：甲醇:2%乙酸水=57:43，流速：1.2mL/min。

 

具体实施方式

实施方案一

1、提取：将粉末过60目筛后称取100g置于提取器中，用600mL70%乙醇提取，70℃水浴回流2h，提取2次，合并提取液，减压浓缩成膏；

2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=55:45溶解，浓度为10g/mL，过滤，备用；   

3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=55:45； 

4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为65mL/min，用流动相洗脱，流速为100mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；

5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到黄芩苷纯品，经HPLC检测纯度为98.6%。

 

实施方案二

1、提取：将粉末过60目筛后称取150g置于提取器中，用1200mL70-%乙醇提取，70℃水浴回流2h，提取3次，合并提取液，减压浓缩成膏；

2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=57:43溶解，浓度为15g/mL，过滤，备用；   

3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=57:43； 

4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为20um填料的动态轴向压缩柱(50*700mm)中泵入样品溶液，进样流速为80mL/min，用流动相洗脱，流速为120mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；

5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到黄芩苷纯品，经HPLC检测纯度为99.03%。

 

实施方案三

1、提取：将粉末过60目筛后称取200g置于提取器中，用1600mL70%乙醇提取，70℃水浴回流2h，提取3次，合并提取液，减压浓缩成膏；

2、样品的溶解：浓缩物用甲醇:水=60:40溶解，浓度为20g/mL，过滤，备用；   

3、流动相的配制：流动相为甲醇：水=60:40； 

4、DAC柱分离：用进样泵向填装好粒径为30um填料的动态轴向压缩柱(100*500mm)中泵入样品溶液，进样流速为150mL/min，用流动相洗脱，流速为200mL/min，收集目标成分，取样HPLC检测；

5、浓缩：将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到黄芩苷纯品，经HPLC检测纯度为99.24%。

 

上述实施实例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权力要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种制备黄芩苷的方法，包括：

a、黄芩苷粗品的制备：将黄芩粉末过筛后置于提取器中，70%乙醇为溶剂，70℃水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；

b、样品的溶解：将黄芩苷粗品用甲醇与水的混合溶剂溶解，过滤，备用；

c、流动相的配制：流动相采用步骤a的甲醇与水的混合溶剂，甲醇的浓度为50-70%之间；

d、上柱洗脱：用进样泵向装好填料的动态轴向压缩制备柱中泵入步骤b溶解好的样品，再用步骤c配制好的流动相洗脱，收集黄芩苷，取样用HPLC检测纯度；

e、浓缩：对收集到的目标组分进行浓缩处理，得黄芩苷纯品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是a步骤中每次回流所用95%乙醇的用量为冬凌草干草粉末的6~10倍量。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于b步骤样品的浓度在10-30g/mL之间。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于d步骤中采用单针上柱吸附、解析并进行分段收集；或采用多针分批连续方式上柱、解析的连续进样方式，且对每批解析液进行分段收集。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用的动态轴向压缩柱为50-1000mm各系列不同直径的制备柱，所述填料为C18和C8，填料粒径为20-40um。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于d步骤样品溶液的上样流速为0.02BV/min~0.10BV/min，洗脱流速为0.10 BV/min~0.20BV/min。

7.根据权利要求1~6任一项所述的方法，其特征在于重复进行d步骤，直到所得黄芩苷HPLC检测含量达到98%以上。