CN103782912B - 红桂木组织培养培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红桂木组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。首次采用组织培养的方式进行种苗无性繁殖，该技术比通过种子繁殖更快，可达到规模化生产的要求，而且能有效保持种苗的优良遗传性状，保证了种苗的品质和质量。

Description

红桂木组织培养培养基
技术领域
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种红桂木组织培养培养基。
背景技术
红桂木（Artocarpus nitidus ssp.Lingnanensis(Merr.)Jarr.）又名狗果树、大叶胭脂、胭脂木等，属桑科桂木属常绿乔木，喜高温多湿气候，较耐旱，主要分布于广东中部至西南部、广西、海南、福建南部。其种子富含红桂木凝集素，可用于疾病检测治疗，临床应用潜力很大；果酸甜可口，可生津止渴，开胃化痰，消食敛气，药用价值颇高。木材坚硬，纹理通直，可供建筑、家具及器具等用。红桂木树形优美，枝叶繁茂，树干通直，抗污染及抗火性较强，适应性亦强，绿化效果好，苗木供不应求，特别是中大径级苗木更为匮乏，是一种应用前景广阔的优良乡土树种。
红桂木常用种子播种育苗，繁殖较慢，满足不了市场的需求，通过组织培养育苗则能提高繁殖速度，保证苗木质量，达到规模化生产的要求。有关红桂木树的组培育苗技术方面的研究目前还未见有报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种红桂木组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.3-1.0mg/L、萘乙酸0.1-0.2mg/L；
余量为蒸馏水。
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾42.5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：ABT6号0.4-0.6mg/L、吲哚乙酸0.1-0.3mg/L；
余量为蒸馏水。
本发明红桂木组织培养基中的继代、生根培养基的配制方法为：
1母液的配制与保存
1.1为便于取样，宜先配制各种母液，分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液，需要时直接称样；
1.2大量元素母液浓度成100倍溶液，有机物、微量元素母液配成200倍溶液，植物生长调节试剂母液的浓度配成1mg/ml；
1.3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制，大量生产时用煮沸过的水；
1.4配制大量元素母液时，每个组分应单独溶解，后按氮、钙、镁、磷的顺序逐个混合，否则容易引起沉淀；
1.5微量元素、有机物、植物生长调节剂母液应用棕色瓶装好并置于冰箱中保存；
1.6母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过1个月；
1.7发现母液有沉淀，或有微生物生长，或有藻类生长，应废弃不用。
2培养基的配制
2.1依照培养基配方，按比例量取各种母液；
2.2在定量容器内放入准备配制培养基总量的约1/2以上的纯净水，并加入适量的糖，然后边搅拌边逐一加入所需量的母液；
2.3琼脂可加热熔化后加入，如有搅拌设备时也可直接加入琼脂粉，然后用纯净水补足所需配制培养基的总量，搅拌均匀即可；
2.4培养基中的糖，在大量组培苗生产中，一般可用市售白糖，但最好是用蔗糖而不要用甜菜糖；
2.5用1.0摩尔/升的盐酸或1.0摩尔/升的氢氧化钠调节培养基的pH值至5.8；
2.6配制好的培养基要尽快分装到培养容器中，以免培养基凝固或变稠而难以分装；
2.7分装培养基时应注意避免培养基粘在瓶口上，如果粘有培养基，在盖瓶盖或瓶塞前必须用干净纱布擦净瓶口。
3培养基消毒灭菌
3.1将分装好的培养基装于高压灭菌锅内消毒；
3.2加热初期，当消毒锅消毒室的气压达0.05Mpa时，打开冷凝阀，排尽消毒室内冷空气；
3.3当消毒室内气压达到0.11Mpa、温度达121℃时，开始计时，保持温度与压力消毒15-20分钟；
3.4关闭加热电源开关，按慢排气方式排放热气，待消毒室内的气压降至大气压时打开消毒锅盖或门，取出培养基；
3.5培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却，否则在降温进气过程中导致霉菌孢子进入培养器皿，产生霉菌污染。
4培养基储藏
4.1培养基应尽量现配现用；
4.2可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基，但储藏超过1个月的培养基应废弃不用。
本发明红桂木组织培养的方法为：
1.无菌芽的获取
胭脂树果实为肉质果，7-8月份成熟，当果实由青色转为黄色带红，果肉***时采摘，将果实揉搓，用清水洗净后得种子，并将其及时置于阴凉处晾干，剥去外壳。在超净台上用75%酒精浸泡消毒10s，无菌水漂洗2-3次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，无菌水漂洗5次。将经消毒处理的种子接种在诱导培养基上进行初始培养，诱导种子发芽以获取无菌材料。外植体初次培养时，需全暗培养10天左右，再放到弱光下进行培养，大约经过20天左右的种子开始萌芽，然后再移至见光的地方培养。
2.芽的增殖培养
将诱导获得的无菌芽接种至继代培养基上进行芽的继代增殖，一般40天继代一次，继代材料均放在培养室内培养，培养室温度为（25±2）℃,光照12h.d-1,光照度2000lx。
3.生根的诱导
芽条长至约2-3cm时，将较健壮的芽苗由丛生芽上单个切下转至生根培养基上诱导生根，其余芽苗转至继代培养基上继续进行增殖培养。生根培养需要在弱光下培养15天左右，此时小苗的基部形成白色突起，并逐渐伸长，20天后可形成明显根系，逐渐长成完整的小植株，此时期宜逐步增加光照使小苗变得粗壮。
4.生根苗的移栽
待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，茎轴伸长，苗高约3-4cm时即可进行大棚移栽。移栽时先取出小苗，洗净基部的培养基后，移栽于经0.1%高锰酸钾消毒过用营养袋装好的育苗基质上，移栽后浇透定根水，保持一定的温度和湿度，并要定期进行喷药进行防病处理。
本发明的优点是：
1、首次采用组织培养的方法对红桂木进行苗木繁殖，该技术比通过种子繁殖更快，可达到规模化生产的要求，而且能有效保持母本的优良遗传性状，保证了种苗的品质和质量；
2、以继代培养基进行红桂木增殖培养，培养温度保持在25-28℃左右，继代苗年繁殖系数为3.512，继代苗分化芽多，芽健壮，生长整齐，叶色浓绿；
3、用生根培养基进行生根苗培养生根率达92.0%，温度为25-28℃时，培养20天左右可出根，根系发达，平均出根量有3-5条，40天可移栽，移栽成活率达91.0%。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
红桂木组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.2mg/L；
余量为蒸馏水。
（1）大量元素：硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：ABT6号0.5mg/L、吲哚乙酸0.3mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例2：
红桂木组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.15mg/L；
余量为蒸馏水。
（1）大量元素：硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：ABT6号0.4mg/L、吲哚乙酸0.2mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例3：
红桂木组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.3mg/L、萘乙酸0.1mg/L；
余量为蒸馏水。
（1）大量元素：硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：ABT6号0.6mg/L、吲哚乙酸0.1mg/L；
余量为蒸馏水。
通过以上实施例对红桂木进行组培繁殖，用继代培养基进行增殖培养，培养温度保持在25-28℃左右，继代苗年繁殖系数为3.512，继代苗分化芽多，芽健壮，生长整齐，叶色浓绿；用生根培养基进行生根苗培养生根率达92.0%，温度为25-28℃时，培养20天左右可出根，根系发达，平均出根量有3-5条，40天可移栽，移栽成活率达91.0%。采用本发明的技术比通过种子繁殖更快，可达到规模化生产的要求，而且能有效保持母本的优良遗传性状，保证了种苗的品质和质量。

Claims (1)

1.一种红桂木组织培养的培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
(2)微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
(3)有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.3-1.0mg/L、萘乙酸0.1-0.2mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
(2)微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
(3)有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/；
(4)植物生长调节剂：ABT6号0.4-0.6mg/L、吲哚乙酸0.1-0.3mg/L；
余量为蒸馏水。
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