CN103766219B - 一种组织培养长穗火炬花的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种组织培养长穗火炬花的方法，摘取长穗火炬花小芽洗净后利用芽诱导培养基进行培养，培养得到的带芽愈伤组织放入增殖培养基中分化增殖，再进行不定芽培养及生根培养，最后通过炼苗与移栽技术获得长穗火炬花植株。与现有技术相比，本发明通过组织培养技术，能够提高结实率，利用选择的芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基在不同的培养阶段提供不同的营养成分，从而最大程度上保持原有的母本性状，并且在炼苗与移栽步骤时的移栽成活率可以达到90％。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培技术，尤其是涉及一种组织培养长穗火炬花的方法。
背景技术
长穗火炬花是百合科火炬花属多年生草本植物。株高80～120厘米，茎直立。总状花序着生数百朵筒状小花，呈火炬形，花冠橘红色，花期6～7月。喜温暖，宜生长于疏松肥沃的沙壤土中。挺发的花茎高高擎起火炬花般的花序，壮丽可观，适合布置多年生混合花境和在建筑物前配置，丛植于草坪之中或植于假山石旁，用作配景，也可作切花。长穗火炬花比一般火炬花花序更长，但结实率很低，分株慢，因此需要开发组培技术，提高苗木繁殖速度和苗的整齐度并保持原有的母本性状，实现育苗工厂化，目前，长穗火炬花的组培报道尚未见。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种移栽成活率可以达到90％的组织培养长穗火炬花的方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种组织培养长穗火炬花的方法，采用以下步骤：
(1)芽诱导培养
摘取长穗火炬花小芽，洗净后2h用75v/v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/ms，进行芽诱导培养；
(2)芽分化增殖
嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大并出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织继续培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养中，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/ms进行增殖培养，不定芽生长迅速并无玻璃化的不良现象；
(3)不定芽壮苗培养
诱导出的丛生芽每丛有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/ms进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/ms进行诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至3-4cm；
(5)炼苗与移栽
生根培养20-30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，移栽室外即可。
所述的芽诱导培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L，芽诱导培养基的pH值为5.5-6。
所述的芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
所述的增殖培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培养基的pH值为5.5-6。
所述的增殖培养基的营养成分优选MS+6BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
所述的壮苗培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L，壮苗培养基的pH值为5.5-6。
所述的壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
所述的生根培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBA1.0-5.0mg/L，生根培养基的pH值为5.5-6。
所述的生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
与现有技术相比，本发明通过组织培养技术，能够提高结实率，利用选择的芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基在不同的培养阶段提供不同的营养成分，从而最大程度上保持原有的母本性状，并且在炼苗与移栽步骤时的移栽成活率可以达到90％。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
一种组织培养长穗火炬花的方法，采用以下步骤：
(1)芽诱导培养：摘取长穗火炬花小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，该培养基的基础成分为蔗糖20g/L，琼脂3g/L，营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，pH值为5.5，控制培养温度为24℃，光照为100μmol/ms，进行芽诱导培养；
(2)芽分化增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养中，该培养基的基础成分为蔗糖20g/L，琼脂3g/L，营养成分为MS+6-BA1mg/L-+NAA0.1mg/L，pH值为5.5，控制培养温度为24℃，光照为100μmol/ms，进行增殖培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养：诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖20g/L，琼脂3g/L，营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，pH值为5.5，控制培养温度为24℃，光照为100μmol/ms，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养：取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖20g/L，琼脂3g/L，营养成分为MS+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L，控制培养温度为24℃，光照为100μmol/ms进行诱导生根。10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3-4cm；
(5)炼苗与移栽：生根培养20天左右，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％。
实施例2
一种组织培养长穗火炬花的方法，采用以下步骤：
(1)芽诱导培养：摘取长穗火炬花小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，该培养基的基础成分为蔗糖25g/L，琼脂4g/L，营养成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH值为5.7，控制培养温度为25℃，光照为90μmol/ms，进行芽诱导培养：
(2)芽分化增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养中，该培养基的基础成分为蔗糖25g/L，琼脂4g/L，营养成分为MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L，pH值为5.7，控制培养温度为25℃，光照为90μmol/ms，进行增殖培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养：诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖25g/L，琼脂4g/L，营养成分为MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，pH值为5.7，控制培养温度为25℃(，光照为90μmol/ms，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养：取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖25g/L，琼脂4g/L，营养成分为MS+NAA0.2mg/L+IBA2.0mg/L，控制培养温度为24℃，光照为100μmol/ms进行诱导生根。10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3-4cm；
(5)炼苗与移栽：生根培养25天左右，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％。
实施例3
一种组织培养长穗火炬花的方法，采用以下步骤：
(1)芽诱导培养：摘取长穗火炬花小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，该培养基的基础成分为蔗糖30g/L，琼脂6g/L，营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L，pH值为5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol/ms，进行芽诱导培养；
(2)芽分化增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养中，该培养基的基础成分为蔗糖30g/L，琼脂6g/L，营养成分为MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L，pH值为5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol/ms，进行增殖培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养：诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖30g/L，琼脂6g/L，营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，pH值为5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol/ms，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养：取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖30g/L，琼脂6g/L，营养成分为MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L，控制培养温度为25℃，光照为80μmol/ms进行诱导生根。10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3-4cm，并且根系粗壮，须根众多，生根率为100％；
(5)炼苗与移栽：生根培养25天左右，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％。
实施例4
一种组织培养长穗火炬花的方法，采用以下步骤：
(1)芽诱导培养：摘取长穗火炬花小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，该培养基的基础成分为蔗糖40g/L，琼脂8g/L，营养成分为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，pH值为6，控制培养温度为28℃，光照为70μmol/ms，进行芽诱导培养；
(2)芽分化增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养中，该培养基的基础成分为蔗糖40g/L，琼脂8g/L，营养成分为MS+6-BA3mg/L-+NAA0.3mg/L，pH值为6，控制培养温度为28℃，光照为70μmol/ms，进行增殖培养，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)不定芽壮苗培养：诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的基础成分为蔗糖40g/L，琼脂8g/L，营养成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH值为5.5，控制培养温度为28℃，光照为70μmol/ms，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；
(4)生根培养：取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的基础成分为40g/L，琼脂8g/L，营养成分为MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L，控制培养温度为28℃，光照为70μmol/ms进行诱导生根。10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3-4cm；
(5)炼苗与移栽：生根培养30天左右，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％。
Claims (5)
1.一种组织培养长穗火炬花的方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：
(1)芽诱导培养
摘取长穗火炬花小芽，洗净后2h用75v/v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/m2·s，进行芽诱导培养；
(2)芽分化增殖
嫩芽接种于芽诱导培养基上5周后芽基部开始膨大并出现黄绿色突起,3周后见明显的愈伤组织继续培养1个月，切下带芽愈伤组织放入增殖培养基中，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/m2·s进行增殖培养，不定芽生长迅速并无玻璃化的不良现象；
(3)不定芽壮苗培养
诱导出的丛生芽每丛有2-3株能够伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后,放入壮苗培养基，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/m2·s进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，20天后长到2-3cm；
(4)生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，控制培养温度为24-28℃，光照为70-100μmol/m2·s进行诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至3-4cm；
(5)炼苗与移栽
生根培养20-30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂,在温室中驯化40天后，移栽室外；
所述的芽诱导培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L，芽诱导培养基的pH值为5.5-6；
所述的增殖培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培养基的pH值为5.5-6；
所述的壮苗培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L，壮苗培养基的pH值为5.5-6；
所述的生根培养基的基础成分为蔗糖20-40g/L，琼脂3-8g/L，营养成分为MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBA1.0-5.0mg/L，生根培养基的pH值为5.5-6。
2.根据权利要求1所述的一种组织培养长穗火炬花的方法，其特征在于，所述的芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种组织培养长穗火炬花的方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分为MS+6BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种组织培养长穗火炬花的方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种组织培养长穗火炬花的方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分为MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
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