CN103751184B - 孕烷x受体拮抗剂在制备调脂与保肝产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了孕烷X受体拮抗剂在制备调脂与保肝产品中的应用。本发明通过实验发现，戈米辛E具有拮抗人和啮齿动物孕烷X受体作用，通过抑制新生脂质生成、减少肝细胞对游离脂肪酸的摄取及上调脂肪酸β-氧化相关基因，明显降低高脂饮食诱导脂肪肝动物模型的肝脏甘油三酯含量，显著改善脂肪肝模型动物肝组织病理变化。戈米辛E还能防治化学性药物（对乙酰氨基酚、利福平与异烟肼）所造成的肝损伤。本发明提供了一种靶点明确的无细胞毒的防治脂肪肝、高胆固醇血症与化学性肝损伤的化学实体，可用于单独制备调脂与保肝药物，也可与其它成分混合使用制备保健食品。

Description

孕烷X受体拮抗剂在制备调脂与保肝产品中的应用

技术领域

本发明涉及一种天然单体化合物的医药用途，尤其涉及具孕烷X受体拮抗作用的天然化合物戈米辛E在制备防治脂肪肝、高胆固醇血症、药物性肝损伤产品中的用途，属于生物医药领域。

背景技术

脂肪肝(Hepaticsteatosis，Fattyliverdisease)是多因素导致的肝细胞内脂肪蓄积过多的慢性进展性病变，包括单纯性脂肪肝和由其演变发生的脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化及肝癌。随着社会发展和生活方式的变化，环境污染、药物滥用以及酗酒问题的广泛存在，脂肪肝现已成为世界上最普遍的疾病之一，我国人群中发生率至少达15％，西方国家达20％-30％，并且逐年升高，其机理尚未明晰。目前全世界未有批准用于治疗非酒精性脂肪肝的化学实体药物，也无治疗药物性肝损伤的特效药。

孕烷X受体(pregnaneXreceptor，PXR)是从美国华盛顿大学EST数据库中分离鉴定而得的一种核受体。PXR是配体依耐性转录因子，与亲脂性的信号分子结合，调控药物代谢酶CYP3A、CYP2B、UGT、SULT、GST和转运蛋白MRPs和OATPs的表达，在机体的防御机制中发挥着重要的生物调节作用和解毒功能。PXR在肝、肠有丰富的表达，在其它组织如肾、肺等弱表达。作为外源物感受器，其激活配体具有物种特异性：利福平能强激活人PXR(hPXR)，但对啮齿类动物PXR(rPXR)激活作用微弱，啮齿类动物PXR激活剂PCN反之。

近年研究发现PXR在脂代谢过程中扮演着重要角色。激活PXR会导致高胆固醇血症(JLipidRes.2009，50(10)：2004-13.)。过表达PXR的转基因小鼠会导致肝脏中甘油三酯的聚集，这种PXR介导的脂肪肝不依赖于脂质生成转录因子固醇调控元件结合蛋白(sterolregulatoryelementbindingprotein1c，SREBP-1c)的激活，而是与脂肪酸转位酶CD36、硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoylCoAdesaturase-1，SCD-1)及长链游离脂肪酸延长酶(longChainfreefattyacidelongase，FAE)的上调相关(JBiolChem.2006，281(21)：15013-20)。转基因和基因敲除小鼠实验表明，PXR对于CD36的活化是充分必要因素。进一步研究发现，小鼠CD36基因启动子上包含有PXR的反应元件DR-3，表明CD36是PXR的靶基因。Fox家族成员转录因子FoxA2，是调节空腹时肝脏脂肪酸分解代谢的关键开关，其调控基因包括参与β氧化的肉碱棕榈酰基转移酶1A(Carnitinepalmitoyltransferase，CPT1A)和参与生酮作用的线粒体3-羟-3-甲戊二酰辅酶A合成酶A2(mitochnodrail3-hydroxy-3-methylglutarate-CoAsynthase2，HMGCS2)。电泳迁移等实验证实，PXR能直接与FoxA2结合，抑制Cptla及Hmgcs2启动子的活化，减少机体的能量供给。这些结果均提示PXR的活化参与了脂肪肝的形成。另外在我们研究抗结核药物利福平与利福平合用所导致的肝损伤机制时，发现PXR的激活能导致化学药物所导致的肝损伤。

发明内容

本申请发明人在前期药物筛选工作中，发现五味子的高极性部位对PXR有明显的激活作用，而低极性部位对hPXR和mPXR具有明显的拮抗活性，进一步鉴定出低极性部位中对PXR起拮抗作用的化学成分是戈米辛E(IC₅₀约为86nM，结构式如I所示)。戈米辛E(GomisinE)可来源于木兰科五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Bail和华中五味子SchisandrasphenantheraRehd.etWils等多种植物中，也可人工全合成(JOrgChem.2005，70(22)：8932-41)。目前除了戈米辛E被报道有良好的拮抗血小板活化因子(Plateletactivatingfactor，PAF)作用(PlantaMedica2003，69：63-64，IC₅₀为4.73μM)外，未见其有抑制肝脏脂质堆积从而防治脂肪肝形成、抗高胆固醇血症和防治药物性肝损伤抗的作用报道。

因而，本发明的一个目的是提供孕烷X受体拮抗剂或其药学上可接受的盐在制备调脂和／或保肝产品中的应用。

本发明的另一个目的是提供一种可用于制备调脂和／或保肝产品的天然化合物戈米辛E，以解决现有技术中所存在的不足。

本发明所采取的技术方案是：

孕烷X受体拮抗剂或其药学上可接受的盐在制备调脂和／或保肝产品中的应用。

所述孕烷X受体拮抗剂为戈米辛E或其药学上可接受的盐。

所述戈米辛E药学上可接受的盐是指其钠盐或钾盐。

所述调脂是指针对脂肪性肝病和／或高胆固醇血症，降低肝脏的甘油三酯和血液中的高胆固醇；所述脂肪性肝病是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝、糖代谢综合征引起的脂肪肝或药物性脂肪肝。

所述产品包括药物、保健品。

一种用于调脂和／或保肝的药物，其主要成分为孕烷X受体拮抗剂或其药学上可接受的盐。

所述孕烷X受体拮抗剂为戈米辛E或其药学上可接受的盐。

所述戈米辛E药学上可接受的盐是指其钠盐或钾盐。

所述药物中还含有药学上可以接受的载体和／或辅料。

所述药物为口服制剂、外用剂型或注射液。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种防治脂肪肝、高胆固醇血症和药物性肝损伤性的新药物。动物体内试验表明戈米辛E对高脂饮食所致实验性脂肪肝具有显著改善作用，显著降低了肝细胞内甘油三酯含量和肝脏脂质堆积。对实验性高胆固醇血症有明显调脂作用，能显著降低血液中胆固醇的含量，改善脂质代谢，并且没有观察到明显副作用。对于高脂饮食性高脂血症的降血液中胆固醇的药效，戈米辛部分指标优于贝特类。在利福平与异烟肼合用所致的药物性肝损伤动物模型中，戈米辛E能恢复谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)至正常水平，显著改善实验动物病理学改变。而且戈米辛E的服用量少，推算到成人约为20mg／天。单独使用或与其它药物复合使用有着良好的应用前景。

附图说明

图1为高脂饮食C57／BL6J小鼠肝脏切片HE染色图(A为正常小鼠鼠对照组，B为模型组，C为吉非罗齐组，D为戈米辛E低剂量组，E为戈米辛E中剂量组，F为戈米辛E高剂量组)；

图2为高脂饮食SD大鼠肝脏切片HE染色图(A为正常大鼠对照组，B为模型组，C为吉非罗齐组，D为戈米辛E低剂量组，E为戈米辛E中剂量组，F为戈米辛E高剂量组)；

图3为人源化PXR转基因小鼠肝脏切片HE染色图(A为正常hPXR鼠组；B-C为利福平与异烟肼联合给药致肝损伤模型组，D为戈米辛E对利福平与异烟肼联合给药所致肝损伤模型干预组)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

以下实施例中所用到的戈米辛E(GonisinE)根据参考文献(YukinobuIkeya，HeihachiroTaguchi，ItiroYosioka，HiroshiKobayashi.TheConstituentsofSchizandrachinensisBAILL.V.TheStructuresofFourNewLignans，GomisinN，GomisinO，EpigomisinOandGomisinE，andTransformationofGomisinNtoDeangeloylgomisinB，chem.Pharm.Bull.，1979，27(11)：2695-270)的方法制备得到，光谱学数据与文献所述报道一致，HPLC纯度检测大于98％。

实施例1戈米辛E对高脂饮食所致C57／BL6J小鼠血脂异常的作用

6周龄C57／BL6J小鼠(雄性，SPF级，体重18±22g)适应性饲养一周后，将小鼠按体重随机分为正常对照组、模型组、戈米辛E低剂量组(0.5mg／kg)、戈米辛E中剂量(3mg／kg)组和戈米辛E高剂量组(15mg/kg)、吉非罗齐组(50mg/kg)其中正常对照组10只喂基础饲料，其余50只喂养高脂饲料(S3282)，10周后喂养高脂饲料的小鼠分别灌胃低、中、高剂量的戈米辛E和对照药吉非罗齐，持续2周后进行眼眶后静脉丛取血测定血脂各项指标，见表1。处死小鼠后，取肝脏，制成切片，HE染色后进行病理学检查，见图1。结果表明戈米辛E对高脂喂养导致的实验性小鼠的血脂代谢异常均有显著的调节作用，对血液中的胆固醇有降低作用，对高脂饮食所致的脂肪肝具有明显的改善作用。

表1.戈米辛E不同剂量对小鼠血清和肝脏中TC、TG含量的影响

*P＜0.05vs高脂模型组，**P＜0.01vs高脂模型组；^△P＜0.05vs空白对照组，^△△P＜0.01vs空白对照组。

实施例2戈米辛E对高脂饮食所致SD大鼠血脂异常的作用

雄性SD(SpragueDawley)大鼠，SPF级，体重180±20g，适应性饲养一周后，将大鼠按体重随机分为正常对照组和造模组，其中正常对照组10只，喂基础饲料；造模组50只，高脂饲料(含基础饲料87.5％，胆固醇2％，胆酸盐0.5％和猪油10％)饲养42天后进行眼眶后静脉丛取血，与喂饲高脂饲料前比较，测定模型组受试动物血中TC、TG，选取显著升高的作为高脂血症造模成功的大鼠。将血清TG升高值大于50％者纳入实验，将高血脂大鼠分为高血脂模型组、阳性药吉非罗齐组、戈米辛E不同剂量组，每组10只。正常对照组及高血脂模型组给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠，阳性对照药吉非罗齐组按30mg/kg体重给药，戈米辛E组分别按体重0.4，2，10mg／kg剂量，均配成给药体积为10ml／kg体重的羧甲基纤维素钠适宜浓度灌胃给药，每天1次，连续28天，于末次给药2h后，眼静脉丛取血测定血脂，见表2。麻醉处死大鼠，剖腹摘取肝脏，制成切片。进行病理学镜检，见图2。结果表明，本发明的戈米辛E对高脂喂养导致的实验性大鼠的血脂代谢异常均有显著的调节作用，对模型动物的肝脏脂肪堆积也有显著的改善作用。

表2.戈米辛E对大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C和肝中TG含量的影响

*P＜0.05vs高脂模型组，**P＜0.01vs高脂模型组；^△P＜0.05vs空白对照组，^△△P＜0.01vs空白对照组

实施例3戈米辛E对抗结核药物利福平与异烟肼联合应用所致的肝损伤的保护作用

人源化PXR转基因小鼠12只(2-4月大，雄性，体重18-25g)，分为三组：空白对照组、模型组和给药组，空白对照组给予普通饲料和饮用水，模型组给予含利福平100mg/Kg的饲料和400mg／L的水，给药组在模型组的基础上按体重3mg／kg的剂量灌胃戈米辛E。4周后，进行眼眶后静脉丛采血测定肝损伤指标ALT和ALP，并检测血脂各项指标，见表3。处死小鼠后，收集各小鼠肝样组织，HE染色后进行病理学检查，见图3。结果表明，给予戈米辛E的小鼠其肝损伤程度显著减轻，无胆汁淤积和脂肪性肝病变，ALT和ALP与空白对照组水平相当。

表3.戈米辛E对抗结核药物所致的hPXR肝损伤小鼠血清ALT、AST、ALP及TC和TG含量的影响

**P＜0.01vs对照组；^△△P＜0.01vs利福平与异烟肼联合给药组

以上实施例表明，戈米辛E对于脂肪肝、高胆固醇血症和药物性肝损伤具有明显的治疗效果，可将其用于制备降脂保肝的保健品或药物。

实施例4含戈米辛E的调脂或保肝药物的制备工艺

1、戈米辛E颗粒剂的制备

称取戈米辛E干燥粉末200mg、白糖粉17.5kg、糊精2.5kg，混匀，加80％体积酒精适量，制粒，干燥、上机包装成1万小包，即得2.0g／包，每包含戈米辛E干粉20mg。

2、戈米辛E丸剂的制备

称取戈米辛E干粉0.6kg，加淀粉3kg，混匀，加蜂蜜3kg泛丸成水泛丸，干燥得7.5kg干燥丸，包装成3万包，即得0.25g／包，每包含戈米辛E20mg。

3、戈米辛E滴丸剂的制备

称取戈米辛E干粉0.2kg，加聚乙二醇40001kg，聚乙二醇20001kg混匀，90℃熔螎后在滴丸机上滴制成丸，干燥得3kg干燥滴丸，包装成1万包，即得0.30g/包，每包含戈米辛E20mg。

上述实施例只是药物与辅料配比和剂型有所不同，可按常规制剂方法制成各种剂型，包括片剂、胶囊、散剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆、酏剂、茶、油，均具有本发明所述效果。使用时采用口服的方法，戈米辛E成人用量约为20mg/天。

以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。

Claims (3)

1.戈米辛E或其药学上可接受的盐在制备调脂产品中的应用；所述调脂是指针对脂肪性肝病和/或高胆固醇血症，降低肝脏的甘油三酯和血液中的高胆固醇；所述脂肪性肝病是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝、糖代谢综合征引起的脂肪肝或药物性脂肪肝。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述戈米辛E药学上可接受的盐是指其钠盐或钾盐。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物、保健品。