CN103656711A - 除臭液、其制备方法及其制备试剂盒 - Google Patents

除臭液、其制备方法及其制备试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种对人体安全、不使金属等劣化、廉价且持续性高的除臭剂。本发明提供一种枯草杆菌的菌体浓度高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的除臭液。该除臭液使用容易增殖的枯草杆菌，因此，能够廉价地大量生产。另外，枯草杆菌具有形成芽胞的性质，耐热性优异，因此，该除臭液及其稀释用的原液容易保管。而且，该发明的除臭液，通过以高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的菌体浓度含有枯草杆菌，能够进行枯草杆菌的迅速增殖，因此，能够驱逐成为除臭的原因的菌类，能够高效地除去恶臭。

Description

除臭液、其制备方法及其制备试剂盒
技术领域
本发明涉及一种用于腐烂臭等的除臭的除臭液、其制备方法及其制备试剂盒。
背景技术
目前，作为除去垃圾或屎尿等臭味的方法，已知的有通过利用臭氧引起的氧化等的化学反应将臭味分子变成无臭的成分的方法、或使用活性炭使臭味分子吸附的方法。另外，还已知有通过使成为恶臭的根源的臭味分子与环糊精等分子复合化来除臭的方法。
发明内容
发明所要解决的课题
使用如臭氧那样的氧化剂等时，如果对金属制品使用，有可能招致生锈引起的金属制品的劣化。另外，将腐败臭等有机性的恶臭进行分解的成分大多对人体是有害的。活性炭高价，但是存在必须频繁地进行交换的问题。通过环糊精等摄入臭味分子的方法也具有容易成本高、而且效果难以持续的难点。
从这样的观点考虑时，需要对人体安全、不使金属等劣化、廉价且持续性高的除臭剂。
用于解决课题的方法
用于解决上述课题的该发明涉及一种除臭液，其含有枯草杆菌大于7.6个/ml、优选7.6×10个/ml以上，以上限浓度低于3.8×105个/ml、优选1.9×105个/ml以下的菌体浓度含有。
在上述除臭液中，上述枯草杆菌为选自酸热芽胞杆菌（Bacillusacidocaldarius）、蜂房芽胞杆菌（Bacillus alvei）、解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、短芽胞杆菌（Bacillus brevis）、丝状菌落芽胞杆菌（Bacillus filicolonicus）、巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium）、短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）、球形芽胞杆菌（Bacillus sphaericus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillussubtilis subsp subtilis）中的至少1种枯草杆菌。
另外，在上述除臭液中，上述枯草杆菌处于活性状态。
而且，该发明还涉及上述除臭液的制备方法。
在上述方法中，上述除臭液通过如下工序制备，包括：稀释工序，以上述除臭液为4.0×105个/m1以上、优选4.0×106个/m1以上、更优选4.0×107个/ml以上、进一步优选4.0×108个/ml以上、且为2.0×109个/m1以下、优选1.0×109个/ml以下的菌体浓度含有非活性状态的上述枯草杆菌的原液进行稀释，稀释为高于7.6个/ml、优选7.6×10个/ml以上、且上限浓度低于3.8×105个/ml、优选1.9×105个/m1以下的菌体浓度；和活化工序，通过将稀释得到的上述原液在40℃～60℃下进行加热，使上述枯草杆菌活化。
而且，该发明涉及除臭液制备试剂盒，其中，与上述原液同时含有将上述制备方法告知上述除臭液的使用者的单元。
发明的效果
由于该发明的除臭液使用容易增殖的枯草杆菌，因此，能够廉价地大量生产。另外，枯草杆菌具有形成芽胞的性质，耐热性优异，因此，该除臭液及其稀释用的原液容易保管。而且，该发明的除臭液，通过以高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的菌体浓度含有枯草杆菌，能够进行枯草杆菌的迅速增殖，因此，能够抑制成为除臭的原因的菌类的作用，能够高效地除去恶臭。
在该发明的除臭液的一方式中，枯草杆菌为选自酸热芽胞杆菌（Bacillus acidocaldarius）、蜂房芽胞杆菌（Bacillus alvei）、解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、短芽胞杆菌（Bacillus brevis）、丝状菌落芽胞杆菌（Bacillus filicolonicus）、巨大芽胞杆菌（Bacillusmegaterium）、短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）、球形芽胞杆菌（Bacillussphaericus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillus subtilis subsp subtilis）中的至少1种枯草杆菌，因此，对人体无害，在环境方面不会带来卫生上的恶劣影响。
另外，由于该发明的除臭液中所含的枯草杆菌为活性状态，因此，进行散布时，立刻增殖，迅速地显现除臭效果。
在该发明的除臭液的制备方法中，从以4.0×105个/ml以上、优选4.0×106个/m1以上、更优选1.0×107个/ml以上、进一步优选4.0×108个/ml以上、且2.0×l09个/m1以下、优选1.0×109个/ml以下的菌体浓度含有非活性状态的枯草杆菌的原液制备除臭液。该原液除了以高浓度含有菌体之外，菌体为非活性状态，由此，与除臭液相比，保存稳定性更高，因此，在取代除臭液进行保存、输送方面是有利的。
在该发明的除臭液制备用的试剂盒中，含有将除臭液的制备方法告知使用者的单元和除臭液的原液，因此，使用者能够容易地制备除臭液。
附图说明
图1表示各稀释浓度中的枯草杆菌的增殖实验的结果。
图2表示各稀释浓度中的枯草杆菌的增殖实验的结果。
具体实施方式
该发明所述的除臭液含有高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的菌体浓度的枯草杆菌。一般而言，菌类在增殖时，增殖前的菌体数越大，增殖后的菌体数也越大，但枯草杆菌具有在增殖开始时处于密集状态时则不增殖的性质，因此，在该发明中，确定最适于枯草杆菌的增殖的浓度。本说明书中，表示枯草杆菌的菌体数的数字全部用有效数字2位记录。这里，枯草杆菌优选选自酸热芽胞杆菌（Bacillusacidocaldarius）、蜂房芽胞杆菌（Bacillus alvei）、解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、短芽胞杆菌（Bacillus brevis）、丝状菌落芽胞杆菌（Bacillus filicolonicus）、巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium）、短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）、球形芽胞杆菌（Bacillus sphaericus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillussubtilis subsp subtilis）。枯草杆菌可以含有上述的1种，也可以含有2种以上。优选枯草杆菌含有上述的1～5种，最优选含有5种。
在优选的除臭液的使用形态中，枯草杆菌处于活性状态。在本说明书中，枯草杆菌的“活性状态”是指从芽胞发芽的状态，“非活性状态”是指形成有芽胞的休眠状态。
在该发明所述的除臭液的制备方法中，将以4.0×105个/ml以上、优选4.0×106个/ml以上、更优选4.0×107个/m1以上、进一步优选4.0×l08个/ml以上、且2.0×109个/m1以下、优选1.0×109个/m1以下的菌体浓度含有非活性状态的枯草杆菌的原液稀释至高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的菌体浓度，进行加热并使其活化，由此得到除臭液。该原液在保管时是稳定的。该原液能够利用醋酸缓冲液或水等进行稀释。一般而言，用自来水的稀释是简便的。在使非活性状态的枯草杆菌活化时，也能够使用氨基酸或糖等发芽诱导物质。
处于非活性状态的枯草杆菌的活化条件为在40℃～60℃下20分钟～60分钟的加热，优选为45℃～50℃下的加热。
通过在上述条件下将非活性状态的枯草杆菌进行加热，枯草杆菌成为从芽胞发芽、在营养条件下能够增殖的活性状态。这里，营养条件下是指大豆酪蛋白消化培养基等培养基、生活垃圾或屎尿等的、枯草杆菌处于可以吸收营养的物质的存在下的状态。
在该发明的试剂盒中，用于制备除臭液的原液与将制备方法告知使用者的单元同时提供。
作为告知使用者的单元，例如，可以列举利用文字或插图记载有容易理解的制备方法的使用说明书、原液的收容容器、用于在稀释原液时使用的容器、用于贴附于这些容器的标签等。上述单元可以为记录有对使用方法进行说明的声音或图像或其两者的存储介质。
【实施例1】
（枯草杆菌液A中所含的枯草杆菌的菌体浓度测定）
测定枯草杆菌液A中的枯草杆菌的菌体浓度。该枯草杆菌液A为来自天然的枯草杆菌，至少含有枯草芽孢杆菌，不含有枯草杆菌以外的细菌及真菌。
（测定方法）
如下测定枯草杆菌液A中所含的枯草杆菌的菌体浓度。
（1）在无菌条件下，将枯草杆菌液A用灭菌水稀释为4,000倍，进一步重复3次进行过高压蒸气灭菌的0.1%Tween80溶液的10倍稀释，制备枯草杆菌液A的4×104倍、4×105倍和4×106倍的阶梯稀释系列。
（2）将各阶梯稀释液0.5m1移至3个已灭菌的培养皿，将进行了高压蒸气灭菌并在50℃中保温的大豆酪蛋白消化琼脂培养基（和光纯药）20ml分注于培养皿中，轻轻地搅拌后，使培养基固化。
（3）在30～35℃中培养24小时，计数菌落数。
（结果）
菌数测定结果为，就4×106倍的稀释液而言，每1个培养皿为94个、84个和104个。即，进行平均时，每1个培养皿为94个。
因此，稀释为4,000倍的枯草杆菌液A中所含的枯草杆菌的菌体浓度为1.9×105个/m1，原液的枯草杆菌液A的菌体浓度为7.6×108个/ml。
【实施例2】
（枯草杆菌液A的各稀释倍率中的增殖实验）
（方法）
（1）对实施例1中使用的枯草杆菌液A，在无菌条件下重复进行用高压蒸气灭菌过的大豆酪蛋白消化培养基（和光纯药）的10倍稀释，制备10～107倍的阶梯稀释系列（实验1）。同样地操作，制备10倍、102倍、103倍、2×103倍、4×103倍、6×103倍、8×103倍和104倍的阶梯稀释系列（实验2）。
（2）将各稀释系列在40℃中加热1小时后，在35℃中培养36小时。培养后，通过目视观察判定细菌的增殖引起的培养基的浑浊。
（结果）
图1中表示实验1的结果。在图1中，将细菌增殖的项目记载为“＋”的情况，表示看到增殖引起的浑浊，记载为“－”的情况，表示没有看到增殖引起的浑浊。从图1可知，在稀释了104倍以上的样品中全部看到培养基的浑浊。
另外，图2中表示实验2的结果。在图2中，将细菌增殖的项目记载为“＋”的情况，表示看到增殖引起的浑浊，记载为“-”的情况，表示没有看到增殖引起的浑浊。从图2可知，在2×103倍的稀释中，没有看到培养基的浑浊，在4×103倍以上的稀释中，看到培养基的浑浊，由此，显示在超过2×103倍的稀释中看到浑浊。
因此，可知通过将枯草杆菌液A超过2×103倍而进行稀释，优选稀释为4×103倍以上，形成适于枯草杆菌的增殖的浓度。另外，在进行实验的范围内，即使在稀释至107倍时，也充分确认浑浊，因此，可知只要是低于108倍的稀释，则产生浑浊。即，适于枯草杆菌的增殖的浓度为低于3.8×105个/ml、优选1.9×105个/ml以下的菌体浓度。除臭液中的枯草杆菌的下限浓度为高于7.6个/ml、优选7.6×10个/ml以上的菌体浓度。
【实施例3】
（除臭液的除臭效果的感官试验）
（方法）
（厌氧性细菌的培养）
（1）在已灭菌的培养皿中，在固化的标准琼脂培养基（日水制药）上，涂沫来自天然的冻结干燥的偏性厌氧性细菌生孢梭菌（Clostridiumsporogenes），在30℃的恒温器中培养48～72小时后，确认菌落的形成。
（2）在250ml的已灭菌的小玻璃瓶中放入大豆酪蛋白消化培养基（和光纯药），在其中接种按顺序（1）确认了形成的菌落1个，用橡胶栓盖严。在30℃的恒温器中培养3天。
（3）培养后，确认培养基的pH，结果为pH5.95。将其使用已灭菌的索伦森（Sorensen）磷酸盐缓冲液（pH7）调整为pH6.10。将其分注于500ml的已灭菌的振荡培养用三角烧瓶2个（A、B）各100m1，盖上硅塞（注册商标）。
（枯草杆菌液A的添加）
（5）将在45℃加热了30分钟的用灭菌水稀释了4.0×l03倍的枯草杆菌液A10m1作为除臭液的样品，添加于三角烧瓶A中。作为对照样品，在三角烧瓶B中添加灭菌水10m1。
（6）将三角烧瓶A、B用振荡培养机（B.BRAUN制CERTOMAT（注册商标）U）在30℃中进行振荡培养。
（7）三角烧瓶A、B的振荡培养开始24小时后，取下硅塞（注册商标），进一步分别在三角烧瓶A、B中添加样品及对照样品各自10ml。再用硅塞（注册商标）盖严，进一步进行振荡培养。
（8）三角烧瓶A、B的振荡培养开始48小时后，取下硅塞（注册商标），进一步分别在三角烧瓶A、B中添加样品及对照样品各自10ml。这里，由臭味鉴定师进行烧瓶中的臭味的判定。再用硅塞（注册商标）盖严，进一步进行振荡培养。
（9）在三角烧瓶A、B的振荡培养开始72小时后，取下硅塞（注册商标），进一步分别在三角烧瓶A、B中添加样品及对照样品各自10ml。再用硅塞（注册商标）盖严，进一步进行振荡培养。
（10）在三角烧瓶A、B的振荡培养开始96小时后，取下硅塞（注册商标），进一步分别在三角烧瓶A、B中添加样品及对照样品各自10ml。这里，由1位臭味鉴定师进行烧瓶中的臭味的判定。
（结果）
以10级评价表示臭味的判定。将最弱的臭味设定为1，将最强的臭味设定为10。
结果如以下的表1所述。
烧瓶A（样品) 烧瓶B(对照样品）
  48小时后   5   10
  96小时后   3   9
48小时后，从加入有对照样品的烧瓶B发出的主要的臭味为粪臭素，96小时后，从加入有对照样品的烧瓶B发出的主要的臭味为氨气。
由以上可知，枯草杆菌液A的4.0×103倍稀释液（以1.9×105个/ml的菌体浓度含有枯草杆菌）具有除臭效果。

Claims (9)

1.一种除臭液，其特征在于：
含有枯草杆菌，
所述枯草杆菌的菌体浓度高于7.6个/m1、低于3.8×105个/ml。
2.如权利要求1所述的除臭液，其特征在于：
所述枯草杆菌的菌体浓度为7.6×10个/ml以上、1.9×105个/ml以下。
3.如权利要求1或2所述的除臭液，其特征在于：
所述枯草杆菌为选自酸热芽胞杆菌、蜂房芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、短芽胞杆菌、丝状菌落芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、球形芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌枯草亚种中的至少1种枯草杆菌。
4.如权利要求1或2所述的除臭液，其特征在于：
所述枯草杆菌处于活性状态。
5.一种制备除臭液的方法，其特征在于：
使用以4.0×105个/ml以上、2.0×109个/ml以下的菌体浓度含有处于非活性状态的枯草杆菌的原液，制备菌体浓度高于7.6个/ml、低于3.8×105个/ml的除臭液。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下工序：
稀释工序，将所述原液进行稀释，稀释为高于7.6个/ml、低于3.8×105个/m1的菌体浓度；和
活化工序，通过将稀释得到的所述原液在40℃～60℃下进行加热，使所述枯草杆菌活化。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：
所述枯草杆菌为选自酸热芽胞杆菌、蜂房芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、短芽胞杆菌、丝状菌落芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、球形芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌枯草亚种中的至少1种枯草杆菌。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于：
所述除臭液中所含的枯草杆菌处于活性状态。
9.一种除臭液制备用试剂盒，其特征在于：
包括将权利要求5所述的方法告知使用者的单元和权利要求5所述的原液。
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