CN103622961B - 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用 - Google Patents

一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103622961B
CN103622961B CN201310405099.9A CN201310405099A CN103622961B CN 103622961 B CN103622961 B CN 103622961B CN 201310405099 A CN201310405099 A CN 201310405099A CN 103622961 B CN103622961 B CN 103622961B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bradykinin
receptor agonist
receptor
peptide class
prostaglandin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310405099.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103622961A (zh
Inventor
杨俊杰
李喆
李雪飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hundred foreign exchange international biotechnology (Wuhan) Limited by Share Ltd
Original Assignee
Wuhan Optical Valley Hundred Bridge International Bio Science And Technology Ltds
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Optical Valley Hundred Bridge International Bio Science And Technology Ltds filed Critical Wuhan Optical Valley Hundred Bridge International Bio Science And Technology Ltds
Priority to CN201310405099.9A priority Critical patent/CN103622961B/zh
Publication of CN103622961A publication Critical patent/CN103622961A/zh
Priority to US14/916,971 priority patent/US20160220464A1/en
Priority to PCT/US2014/053931 priority patent/WO2015034947A2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN103622961B publication Critical patent/CN103622961B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B20/00—ICT specially adapted for functional genomics or proteomics, e.g. genotype-phenotype associations
    • G16B20/30—Detection of binding sites or motifs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/494—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4946—Imidazoles or their condensed derivatives, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/34—Alcohols
    • A61K8/345—Alcohols containing more than one hydroxy group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4913—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having five membered rings, e.g. pyrrolidone carboxylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B15/00—ICT specially adapted for analysing two-dimensional or three-dimensional molecular structures, e.g. structural or functional relations or structure alignment
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B15/00—ICT specially adapted for analysing two-dimensional or three-dimensional molecular structures, e.g. structural or functional relations or structure alignment
    • G16B15/30—Drug targeting using structural data; Docking or binding prediction
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B20/00—ICT specially adapted for functional genomics or proteomics, e.g. genotype-phenotype associations
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B20/00—ICT specially adapted for functional genomics or proteomics, e.g. genotype-phenotype associations
    • G16B20/50—Mutagenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及非肽类缓激肽B2受体激动剂在局部应用促进毛发生长方面的新用途。本发明创造性的发现非肽类缓激肽B2受体激动剂具有良好的促进毛发生长的作用，并通过研究表明其促进毛发生长的作用机理为：非肽类缓激肽B2受体激动剂能刺激缓激肽B2受体引起内源性的***素F-2a或***素E的释放，通过***素的受体途径改善局部微环境促进毛发生长，从而达到促进毛发生长的效果。本发明为治疗各种毛发脱落的新靶点药物的研发提供了新的方向。

Description

一种非肽类缓激肽B2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种非肽类缓激肽B2受体激动剂的新用途。
背景技术
缓激肽（BK）受体属于G-蛋白偶联受体（GPCRs），分两个不同的亚型：B1和B2受体。B2受体在各种细胞中都有表达，而B1受体的在细胞中的表达量很低，只有在组织损伤、炎症和细胞因子作用的情况下表达量才会增加。B2受体的作用是促进***素的释放，而B1受体则介导对***素反应的延迟。当B2受体与受体激动剂结合后，能激活磷脂酶使磷脂转换成花生四烯酸，进一步合成***素。
***素（prostaglandin，PG）是存在于动物和人体中的一类不饱和脂肪酸组成的具有多种生理作用的活性物质。最早发现存在于人的***中，当时以为这一物质是由***释放的，因而定名为***素。现已证明***中的***素主要来自精囊，并且全身许多组织细胞都能产生***素。***素（PG）在体内由花生四烯酸所合成，结构为一个五环和两条侧链构成的20碳不饱和脂肪酸。按其结构，***素分为A、B、C、D、E、F、G、H、I等类型。不同类型的***素具有不同的功能，如***素E能舒张支气管平滑肌，降低通气阻力；而***素F的作用则相反。***素的半衰期极短（1～2分钟），除***素I2外，其他的***素经肺和肝迅速降解，故***素不像典型的激素那样，通过循环影响远距离靶组织的活动，而是在局部产生和释放，对产生***素的细胞本身或对邻近细胞的生理活动发挥调节作用。
美国宾夕法尼亚大学皮肤病学教授科察雷利斯最近发现，秃发者的头皮上仍有毛囊存在。因此他和同事们推断，要么是毛囊中缺乏令头发生长的催化剂，要么是毛囊活性受到抑制。从受“雄激素性脱发”困扰的男性头皮上取样，测量其中约2.5万种不同基因的水平。他们发现，秃发部位的头皮中，一种名为***素D2（PGD2）的水平是有头发生长头皮中的三倍。研究人员随即用老鼠和在实验室中培育的毛囊进行验证，并证明PGD2蛋白质的确会减少毛发生长。这是一个全新发现，先前“没有人意识到PGD2与毛发生长有关”。
人们已知，一些***素能促使毛发生长。PGD2则与其他***素的作用相反，会让毛发越来越短。近年发现，***素F2a类似物（抗青光眼的一线药物）如苏为坦（Travotan）有促进眼睫毛生长和瞳孔变黑的功能。从而提示***素亚类有或可能有促进毛发生长的功能。
继肥胖、乙肝等传统病症之后，脱发问题也开始成为社会性的话题，中国脱发人群每年都呈现出大量增长的趋势。脱发虽然不是病，但严重影响了人的外形，并会给人带来巨大的心理压力。2011年11月，据中国健康促进与教育协会公布的“中国脱发人群调查”数据表明，我国脱发人群约达2亿，其中男性脱发人数约1.3亿。所有脱发人群中，31岁至40岁之间脱发的人群占48.33%，20至30岁脱发的人群占23.14%，而20岁之前开始脱发的人占了6.31%。相比于四年前的调查数据显示：近年来脱发人群出现低龄化，并且30岁至40岁的脱发人数相较于四年前以14%的速度递增。
脱发基本分为脂溢性脱发、神经性脱发、疤痕性脱发、疾病性脱发、雄激素性脱发（AndrogeneticAlopecia，AGA）也称男性型脱发，这五大类。但其中脂溢性脱发占90%以上，是最常见的脱发方式。
关于脱发治疗，因为受到对发病机理认识的局限，目前只有两种药物被广泛证实安全有效。目前国内外抗脱发西药治疗的药物有：一种是口服药1mg非那雄胺；另一种是外用的1～5%米诺地尔制剂，男女均可用。两者共用效果可能更好，但每月费用相应就会升高；两者都有明显的副作用如性功能障碍和女性怀孕后胎儿的泌尿外生殖器***发育异常等。
发明内容
本发明提供了一种非肽类缓激肽B2受体激动剂在促进毛发生长方面的新用途。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种非肽类缓激肽B2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用。
上述方案中，所述非肽类缓激肽B2受体激动剂是一种通式M的化合物及其药学可接受的盐类，溶剂合物和它们的任何的立体化学异构体，和这样的盐的溶剂合物
其中R选自以下基团：
和
上述方案中，所述非肽类缓激肽B2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用为非肽类缓激肽B2受体激动剂在治疗毛发脱落方面的应用；其中所述毛发脱落为脂溢性脱发、雄性激素脱发、眼睫毛稀少症、或眉毛脱落。
一种促进毛发生长的药物制剂，是以非肽类缓激肽B2受体激动剂为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成。
上述方案中，所述非肽类缓激肽B2受体激动剂是一种通式M的化合物及其药学可接受的盐类，溶剂合物和它们的任何的立体化学异构体，和这样的盐的溶剂合物
其中R选自以下基团：
和
上述方案中，所述药物制剂为外用制剂。
本发明中，用于促进毛发生长的外用制剂的制备及使用方法：
取非肽类缓激肽B2受体激动剂50～2000mg溶解在100ml溶剂中，适合的溶剂为水、生理盐水、磷酸缓冲液（PBS）、乙醇、二甲亚砜、乙二醇单***、二乙二醇单丁醚、及二甲基甲酰胺中的一种或几种，优选的溶剂为乙醇；同时还可添加一定浓度（0.001～0.1%）的香精。常规外用制剂的配比见下表1，2；对酒精过敏的脱发患者可使用如下表3所示制剂。外用制剂的使用方法为：每天两次，每次以覆盖脱发部位为宜。
表1常规外用制剂
成分 用量
非肽类缓激肽B2受体激动剂 50～2000mg
95%酒精 100ml
表2常规外用制剂
成分 用量
非肽类缓激肽B2受体激动剂 50～2000mg
95%酒精 50ml
磷酸缓冲液 50ml
表3可用于酒精过敏的脱发患者的外用制剂
成分 用量
非肽类缓激肽B2受体激动剂 50～2000mg
二甲亚砜（溶解药物） 10ml
磷酸缓冲液 90ml
本发明创造性的发现一种非肽类缓激肽B2受体激动剂具有良好的促进毛发生长的作用，并通过研究表明其促进毛发生长的作用机理为：用缓激肽B2受体激动剂可以刺激缓激肽B2受体引起内源性的***素F-2a和***素E的释放，通过***素的受体途径改善局部微环境，从而达到促进毛发生长的效果。本发明的非肽类缓激肽B2受体激动剂制剂是一种新结构、新靶点、新机制的毛发生长创新药物。
本发明的有益效果：
（1）非肽类缓激肽B2受体激动剂可以刺激缓激肽B2受体引起内源性的***素F-2a和***素E的释放，通过改变局部微环境中***素含量及其亚类的比例，实现促进毛发生长的效果，为治疗脱发的药物生产提供了新的方向。
（2）本发明为治疗脱发新药物的研发提供了可靠的理论依据，采用药物外用制剂，可直接局部外用，在局部发挥作用，减少全身用药的负作用。
附图说明
图1为脱发患者的治疗效果图，其中A为使用前，B为使用药剂（YLB-01）一个月后；C为使用前，D为使用95%的酒精一个月后的对照图；
图2为促进毛发增长的效果图，其中A为使用95%的酒精2周后的对照，D为使用药剂（YLB-01）2周后的效果图；B为使用95%的酒精3周后的对照，E为使用药剂（YLB-01）3周后的效果图；C为使用95%的酒精4周后的对照，F为使用药剂（YLB-01）4周后的效果图；
图3为三种非肽类缓激肽B2受体激动剂的药效功能团结构，其中A为YLB-01，B为YLB-02，C为YLB-03；
图4为三种非肽类缓激肽B2受体激动剂与主要的残基的相互作用,其中A为YLB-01，B为YLB-02，C为YLB-03；
图5为三种非肽类缓激肽B2受体激动剂在配体结合位点的部分条带结构图，其中A为YLB-01，B为YLB-02，C为YLB-03；
图6为非肽类缓激肽B2受体激动剂YLB-01的PFSC结合位点；
图7为非肽类缓激肽B2受体激动剂YLB-02的PFSC结合位点；
图8为非肽类缓激肽B2受体激动剂YLB-03的PFSC结合位点。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的实质，下面结合附图、附表和实施例来进一步说明本发明所述非肽类缓激肽B2受体激动剂对促进毛发生长的作用机理和效果，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
以下实施例中，所述非肽类缓激肽B2受体激动剂为表4所示的三种化合物，其中YLB-01是通式M中R基团为M-1的化合物，其英文名是：4-(3-2-((2,4-dichloro-3-((2-methoxy-1-(pyridine-2ylmethyl)-1H-benzo[d]imidazol-4-yloxy)methyl)phenyl)(methyl)amino-2-oxoethylamino)-3-oxopropyl)-N-methylbenzamid；YLB-02是通式M中R基团为M-2的化合物，其英文名称为：3-(6-acetamidopyridin-3-yl)-N-(2-((2,4-dichloro-3-((2-methoxy-1-(pyridine-2-ylmethyl)-1H-benzo[d]imidazol-4yloxy)methyl)phenyl)(methyl)amino-2-oxoethyl)propanamide；YLB-03是通式M中R基团为M-3的化合物，其英文名称为：4-{2-[({[2,4-Dichloro-3-(2-methoxy-1-pyridin-2-ylmethyl-1H-benzoimidazol-4-yloxymethyl)-phenyl]-methyl-carbamoyl}-methyl)-carbamoyl]-ethyl}-piperazine-1-carboxylicacidmethylamide。
表4非肽类缓激肽B2受体激动剂
实施例1
一、缓激肽B2受体激动剂激发缓激肽B2受体分泌***素（Prostanglandin，PG）的实验
选用表4所示三种非肽类缓激肽B2受体激动剂进行实验，以缓激肽（BK）作为对照组，具体操作步骤为：首先接种细胞株到T-75培养瓶中生长，细胞长满后，严格按照PG试剂盒的说明操作：第1天，将细胞接种至24孔板中生长过夜，其培养基为基础培养基；第2天，用无血清培养基饥饿细胞；第3天，将无血清培养基切换到基础培养基，向27组基础培养基中加入上述三种非肽类缓激肽B2受体激动剂，每组基础培养基中添加一种非肽类缓激肽B2受体激动剂，每种非肽类缓激肽B2受体激动剂的添加剂量分别为0.1nM,1nM,10nM,30nM,100nM,300nM,1μM,3μM和10μM，于此同时在另一组基础培养基中添加1μM缓激肽作为对照组，将细胞于37℃培养1小时，培养结束后，收集细胞上清液，备用；
第四天，洗涤培养板和显色（45～90min），然后测量OD值进行定量分析，得到B2受体激动剂的OD（420nm）读数从而计算出EC50，EMAX。计算结果见表5。
上述实验中所用细胞株为人主动脉平滑肌细胞（Humanaoticsmoothmusclecells，HASMC)。
表5缓激肽B2受体激动剂的EC50和Emax
表5的结果说明，缓激肽（BK）的EC50浓度最低，YLB-02的EC50浓度最高，且Emax仅为缓激肽（BK）的70%。YLB-01和YLB-03的Emax分别为缓激肽（BK）的87%和103%，但是EC50的浓度是BK的三倍多。
二、内源性***素的测定
采用基于细胞竞争的酶联免疫（EIA，Enzymeimmunoassay）法，测定上述
细胞上清液中的PG及其亚类的量，整个EIA测定反应需要18小时，结果见下表6。
表6PG分泌量百分比（%）
以1μM缓激肽刺激释放获得的PG分泌量为基准（100%）
表6的结果说明：以1μM缓激肽（BK）刺激释放获得的PG分泌量为基准（100%），对添加不同浓度的药物YLB-01，YLB-2和YLB-03刺激释放的PG的量进行了比较。结果表明YLB-01和YLB-03的效果较好，3μM的YLB-01刺激分泌的PG的量相当于1μM缓激肽（BK）刺激释放的PG的量的87.79%，10μM的YLB-03刺激分泌的PG的量相当于1μM缓激肽（BK）刺激释放的PG的量的103.48%，而YLB-02的效果略差，3μM的YLB-02刺激分泌的PG的量相当于1μM缓激肽（BK）刺激释放的PG的量的70.44%。
三、缓激肽B2受体抑制剂HOE-140阻断***素分泌的实验
具体的实验步骤：首先接种两种细胞系到T-75培养瓶中生长，细胞长满后，严格按照PG试剂盒的说明操作：第1天，将细胞接种至24孔板中生长过夜，其培养基为基础培养基；第2天，用无血清培养基饥饿细胞；第3天，将无血清细胞培养基切换到基础培养基，向27组基础培养基中加入上述三种非肽类缓激肽B2受体激动剂，每组基础培养基中添加一种非肽类缓激肽B2受体激动剂，每种非肽类缓激肽B2受体激动剂的添加剂量分别为0.1nM,1nM,10nM,30nM,100nM,300nM,1μM,3μM和10μM，同时加入1μMHOE-140，其中在另一组基础培养基中只添加1μM缓激肽作为对照组，将细胞于37℃培养1小时，培养结束后，收集细胞上清液，备用；最后在第四天，洗涤培养板和显色（45-90min），然后进行定量分析，得到B2受体激动剂的OD（420nm）读数从而计算出EC50，EMAX。
上述细胞上清液中PG的测定方法同上，定量实验结果见表7。表7的结果表明1μMHOE-140可阻断本发明所述的缓激肽B2受体激动剂的促***素释放功能。因HOE-140是B2受体的阻断剂，因此可以说明此缓激肽B2受体激动剂是通过B2受体发挥***素释放功能的。
表7PG分泌量（%）
以1μM缓激肽刺激释放获得的PG分泌量为基准（100%）
实施例2
一、非肽类缓激肽B2受体激动剂激发B2受体释放的***素亚类分析
利用上述三种非肽类缓激肽B2受体激动剂诱导人原代动脉内皮细胞和人主动脉平滑肌细胞释放***素，具体操作步骤同实施例1。采用EIA测定法测定PG亚类含量，测定方法同实施例1，结果见表8。结果表明，缓激肽B2受体激动剂YLB-01能促进细胞株HASMC和HPVEC释放***素F-2a和***素E，其中***素E的含量是***素F-2a的5～6倍，而***素D未检出；缓激肽B2受体激动剂YLB-02和YLB-03能促进细胞株HASMC释放***素F-2a和***素E，而***素D未检出；但是缓激肽B2受体激动剂YLB-02和YLB-03只能促进细胞株HPVEC释放***素E，而***素F-2a和***素D均未检出，没检出的原因可能是和它的含量太低有关，也可能和试剂盒的敏感度有关。HOE-140B2受体阻滞剂能阻止缓激肽B2受体激动剂对B2受体的***素释放的功能。因缓激肽（BK）不能穿透皮肤，且有明显的毒负作用，还不能成为一个药物在临床上应用，而上述结果表明，此缓激肽B2受体激动剂可替代缓激肽(BK)，实现诱导B2受体释放内源性***素E2和***素F-2a的功能。
表8***素亚类分泌量百分比(%)
以1μM缓激肽（BK）刺激释放获得的PG亚类分泌量为基准(100%)
HPVEC：人原代静脉内皮细胞；HASMC：人主动脉平滑肌细胞
实施例3
按照非肽类缓激肽B2受体激动剂体外细胞实验的浓度，取非肽类缓激肽B2受体激动剂(YLB-01)100mg，溶解到100ml的95%的酒精中，配置成药物制剂质量体积浓度为0.1%的外用制剂，对中青年的早期脂溢性脱发和雄性激素性脱发进行喷涂，每天两次，每次以覆盖脱发部位为宜，同时以95%酒精为对照组，进行同样的喷涂。每天观察头发的生长状况及有无明显的副作用，如红肿、瘙痒、疼痛等，每周照相记录头发的生长状况，结果见图1，从结果可看出治疗后，肉眼可见细小的毛发从以前未长头发的地方长出（红色标记处），约有12个新的毛发长出，而对照组无新的毛发长出。为比较YLB-01促进毛发的生长速度，剃去左右腿的毛发，用同上的方式喷涂，然后每周测量毛发的长度，从第二周开始在随机挑选20根毛发的长度比较中，YLB-01组的毛发长度与对照相比明显延长，如图2、表9所示。
表9.非肽类缓激肽B2受体激动剂（YLB-01）对毛发增长的影响（mm）
0周 2周 3周 4周
对照组 0 4.6±0.57 6.22±0.65 8.92±0.94
YLB-01 0 4.89±0.38 6.82±0.4 9.61±0.55
注：与对照相比毛发增长明显，两周(p<0.05)，三周(p<0.001)和四周(p<0.01)
实施例4
利用同源建模技术建立非肽类缓激肽B2受体激动剂体与B2受体结合模型。AT1R和B2R都属于7TM或G蛋白偶联受体（GPCRs），他们序列有30%相似性，并且都易于在跨膜部位的相似结合处结合小分子配体。因此，我们希望研究缓激肽B2受体激动剂体与B2R之间的相互作用。然而利用计算机在分子水平研究配体-GPCR复合物结构，目前只有两种GPCRX射晶体结构可以应用：基态视紫红质结构和β2-肾上腺素能受体（β2-ADR）。缓激肽受体B1和B2属于视紫红质类GPCR（G蛋白偶联受体）的A类家族。
同源建模：在缺少B2R结构的情况下，通过使用同源建模的技术，将牛的视紫红质（PDBID：1HZX）的高分辨率捷径结构用来做模板。我们从Swiss-Prot数据库获得B2受体序列（进入P30411）数据。应用DiscoveryStadio3.5软件包的MACROMOLECULES，建立一个初始的3D同源模型。我们再使用CHARMm力场进行MD模拟。通过TheRamachandranPlot和VerifyProtein（Profiles-3D）协议对模型结构进一步评估。
配体制备：通过Chemdraw3.0并应用CHARMm力场获得获得非肽类缓激肽B2受体激动剂的结构。
非肽类缓激肽B2受体激动剂-B2R偶联配体模型建立：该受体结构具有A类GPCR家族同源性。受体的InputSiteSphere输入分别位于-0.164482,6.6825,22.61,22.4，我们应用一款强大的基于CHARMm对接方法的CDOCKER软件生成高准确度的靶点对接区，把一个随机构造血管紧张素受体拮抗剂嵌入B2受体的结合位点。Inputsitesphere的受体口袋分别位于-0.1644826.6825，22.61，22.4。我们推出的CDOCKER是一个功能强大的CHARMm基于对接的方法可生成高度精确的对接的姿势。将非肽类缓激肽B2受体激动剂的随机构型对接到BK受体结合位点，
非肽类缓激肽B2受体激动剂的药效功能团结构见图3，药效功能包括疏水性、芳烃、氢键受体、氢键给体的负离子化。由于氢键是有方向性的，每个HBA（在形成氢时，接受氢原子的这方面是HBA，通常是带有部分负电荷的O或者N原子）特性具有两个特点：一个是相关联的重原子的位置，而另一个是投射点，即与目标结合形成氢键的方向，每个球体定义一个特定的位点的位置容忍度。
非肽类缓激肽B2受体激动剂主要的残基的相互作用见图4。
进一步研究B2受体激动剂在配体结合位点的部分条带结构，结构见图5，由图可以推断B2受体激动剂可以于N-断口袋,H4-H5口袋,H6-H7口袋及TM7与配体结合。
同时，我们使用PFSC的代码来描述的三维蛋白结合位点，结果示于图6。图6为非肽类缓激肽B2受体激动剂（YLB-01，YLB-02，YLB-03）的PFSC结合位点，数目代表链上的结合点。氨基酸参与形成H-键和PI相互作用显示于框内。几何：氨基酸的属性说明，tiny=T，small=S，large=L，hardiness=H；Phy-Chem:Chemical-PhysicalProperties，hydrophobicity=P，acidic=A，basic=B，theGlycine=H，OH=O，carbonylandamidegroupO=CNH2=N，SH=S。PFSC代码：PFSC结构分配方法，“A”表示α-螺旋和“B”β-链。
下表10和表11为B2受体激动剂的药效特性的数目和参与相互作用的残基。
表10B2受体激动剂的药效特性的数目
药物 负离子基团 芳香基团 氢键接受体 氢键供体 疏水基团
YLB-01 0 3 2 0 1
YLB-02 0 3 2 1 1
YLB-03 0 3 0 0 1
表11参与相互作用的残基
氢键接受体 氢键供体 PI相互作用
YLB-01 G205,I219,Y322 E204,T314,Y322 W5,R297
YLB-02 ARG338,TYR332 GLU93 ARG167
YLB-03 VAL91,GLN352,ARG338 0 TYR347
综上所述，此模型显示了B2受体激动剂和受体之间的结合位点数目，表明YLB-01的结合力较强，而YLB-02，YLB-03相对较弱，但是从诱导PG及其亚类的释放的效果来看，释放的强弱与结合力强弱没有明显的相关性。换句话来讲，即在一定的结合力的基础上，诱导PG释放的功能大致相当。此方法为新药研发或老药新用的开发提供了方便快速的筛选的方法，我们正是通过此项技术的应用发现了几个老药新的用途。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种非肽类缓激肽B2受体激动剂在制备治疗促进毛发生长药物中的应用，其中，所述非肽类缓激肽B2受体激动剂选自如下化合物：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进毛发生长为治疗毛发脱落。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述毛发脱落为脂溢性脱发、雄性激素脱发、眼睫毛稀少症、或眉毛脱落。
CN201310405099.9A 2013-09-06 2013-09-06 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用 Active CN103622961B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310405099.9A CN103622961B (zh) 2013-09-06 2013-09-06 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用
US14/916,971 US20160220464A1 (en) 2013-09-06 2014-09-03 Nonpeptide bk b2 receptor agonists for hair growth
PCT/US2014/053931 WO2015034947A2 (en) 2013-09-06 2014-09-03 Nonpeptide bk b2 receptor agonists for hair growth

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310405099.9A CN103622961B (zh) 2013-09-06 2013-09-06 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103622961A CN103622961A (zh) 2014-03-12
CN103622961B true CN103622961B (zh) 2016-03-02

Family

ID=50204649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310405099.9A Active CN103622961B (zh) 2013-09-06 2013-09-06 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20160220464A1 (zh)
CN (1) CN103622961B (zh)
WO (1) WO2015034947A2 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112133391B (zh) * 2020-09-17 2024-01-26 吾征智能技术(北京)有限公司 一种基于人体异常眉毛的疾病认知***

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012024419A2 (en) * 2010-08-18 2012-02-23 Alcon Research, Ltd. Bradykinin receptor agonists and uses thereof to treat ocular hypertension and glaucoma

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5564345A (en) * 1993-05-11 1996-10-15 Park Ohio Industries Inc. Stackable table, table assembly, and tray and table combination
FR2756566B1 (fr) * 1996-12-04 1999-01-08 Fournier Ind & Sante Peptides agonistes du recepteur b2 de la bradykinine, procede de preparation et utilisation en therapeutique
AU2985399A (en) * 1998-04-03 1999-10-25 Alcon Laboratories, Inc. Non-peptide bradykinin receptor antagonists for use in controlling intraocular pressure and treating glaucoma
JP5216002B2 (ja) * 2006-06-16 2013-06-19 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 硝子体内投与に適したｖｅｇｆアンタゴニスト製剤
US7807629B1 (en) * 2007-06-05 2010-10-05 Alcon Research, Ltd. Use of bradykinin and related B2R agonists to treat ocular hypertension and glaucoma
WO2012135695A2 (en) * 2011-03-30 2012-10-04 The Uab Research Foundation Modulation of cellular migration
CN103479627A (zh) * 2013-05-16 2014-01-01 武汉光谷百桥国际生物科技有限公司 一种血管紧张素ii的i型受体拮抗剂在促进毛发生长方面的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012024419A2 (en) * 2010-08-18 2012-02-23 Alcon Research, Ltd. Bradykinin receptor agonists and uses thereof to treat ocular hypertension and glaucoma

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015034947A2 (en) 2015-03-12
US20160220464A1 (en) 2016-08-04
WO2015034947A3 (en) 2015-11-12
CN103622961A (zh) 2014-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kanasaki et al. Gonadotropin-releasing hormone pulse frequency-dependent activation of extracellular signal-regulated kinase pathways in perifused LβT2 cells
Xie et al. IL-6-induced epithelial-mesenchymal transition promotes the generation of breast cancer stem-like cells analogous to mammosphere cultures
TWI835179B (zh) 胰腺炎治療
Matsunaga et al. 24-hour rhythm of aquaporin-3 function in the epidermis is regulated by molecular clocks
Chasiotis et al. Cortisol reduces paracellular permeability and increases occludin abundance in cultured trout gill epithelia
Fitzpatrick Inhibition of IL-17 as a pharmacological approach for IBD
NZ592918A (en) Antibody formulation comprising an IL-1beta antibody and a buffer
WO2010036918A3 (en) Intracellular dna receptor
Deng et al. ER-α variant ER-α36 mediates antiestrogen resistance in ER-positive breast cancer stem/progenitor cells
TWI308492B (zh)
Oliveira-Fusaro et al. Antihyperalgesic effect of CB1 receptor activation involves the modulation of P2X3 receptor in the primary afferent neuron
JP2015523553A (ja) 治療用皮脂抑制活性を有するＡｈＲ受容体のリガンドを同定する方法、および前記リガンド
Liu et al. Estrogen inhibits LPS-induced IL-6 production in macrophages partially via the nongenomic pathway
CN103622961B (zh) 一种非肽类缓激肽b2受体激动剂在促进毛发生长方面的应用
Kong et al. Hepatocyte-specific deletion of Brg1 alleviates methionine-and-choline-deficient diet (MCD) induced non-alcoholic steatohepatitis in mice
Chao et al. MCPIP1 regulates fibroblast migration in 3-D collagen matrices downstream of MAP kinases and NF-κB
Vita et al. Physical activity and post-transcriptional regulation of Aging Decay: modulation of pathways in postmenopausal osteoporosis
CN103479627A (zh) 一种血管紧张素ii的i型受体拮抗剂在促进毛发生长方面的应用
Calabrese et al. Leishmania (Leishmania) infantum/chagasi: Histopathological aspects of the skin in naturally infected dogs in two endemic areas
Pulat et al. Topical delivery of atraric acid derived from Stereocaulon japonicum with enhanced skin permeation and hair regrowth activity for androgenic alopecia
Lee et al. Targeting PAR2 with pepducins
US9351950B2 (en) Method for preventing or treating allergic disease using capsiate or salt thereof
EP3903793A1 (en) Pharmaceutical composition comprising clonal stem cell for prevention or treatment of atopic dermatitis
KR20120058864A (ko) 비피더스균 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물
KR101540051B1 (ko) 피부 노화 방지 또는 피부 상태 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C56 Change in the name or address of the patentee
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 430075 building No. 858, hi tech Avenue, East Lake hi tech Development Zone, Hubei, Wuhan,

Patentee after: Hundred foreign exchange international biotechnology (Wuhan) Limited by Share Ltd

Address before: 430075 building No. 858, hi tech Avenue, East Lake hi tech Development Zone, Hubei, Wuhan,

Patentee before: Wuhan optical valley hundred bridge international bio Science and Technology Ltd.s