CN103575849A - 一种岩黄连总碱的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种岩黄连总碱的质量检测方法，该方法包括对该有效部位的薄层鉴别，水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查，采用紫外分光光度法测定总生物碱含量以及采用高效液相色谱法同时测定去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。该方法具有较强的专属性和良好的重现性，能有效控制岩黄连总碱的质量，确保产品的安全有效、质量可控。

Description

一种岩黄连总碱的质量检测方法

技术领域

本发明属于中药分析领域，涉及一种中药有效部位的质量检测方法，具体涉及一种岩黄连总生物碱的质量检测方法。

背景技术

岩黄连为罂粟科植物石生黄堇Corydalis saxicola Bunting的全草，是黔、桂高寒山区珍贵的中草药材。本品味苦、性凉，具清利湿热，散瘀消肿功效。用于疮疖肿毒，肝炎，肝硬化，肝癌。

迄今为止对岩黄连的化学成分的研究不多，报道的现已分离鉴定出的化合物主要是生物碱，尚未有其他类化合物的报道。1980年，柯珉珉最早对岩黄连的化学成分进行研究，应用pH梯度分离，在强碱性部位分得水溶性季铵碱类生物碱小檗碱（berberine）及脱氢卡维丁（岩黄连碱，dehydrocavidine）。K. H. Janbaz等于2003年报道，水溶性季铵碱类化合物，如小檗碱，具有肝损伤保护作用。

岩黄连中主要有效成分是以脱氢卡维丁为代表的生物碱类化合物，而这类化合物具有潜在的抗HBV活性和肝保护活性。

经检索，目前关于岩黄连的专利主要集中在岩黄连生物碱的制备工艺上，没有关于质量控制的相关专利。中药长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。以上岩黄连总碱由于缺少***的质量控制方法，难以控制其质量，以致正常的临床用药及疗效无法保证。

目前有关岩黄连制剂的质量标准研究中，上市品种岩黄连注射液的质量标准是采用薄层色谱定性鉴别脱氢卡维丁和盐酸小檗碱，采用高效液相色谱法测定脱氢卡维丁的含量。文献报道的岩黄连片和岩黄连直肠栓都是采用的与岩黄连注射液同样的方法建立的质量标准。本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对岩黄连总碱的质量进行控制，特别是采用高效液相色谱法同时测定该药物中多种成分的含量，解决了岩黄连总碱质量控制的难题，本发明提供了一种实用的质量控制方法。该方法提供了薄层鉴别，水分、炽灼残渣、重金属含量等检查，紫外分光光度法测定药物中岩黄连总碱和高效液相色谱法测定药物中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱成分的含量等质量控制方法，提高后的质量标准能更好地控制岩黄连总碱的质量，本发明的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现中药安全有效、质量可控。

发明内容

本发明的目的在于提供一种岩黄连的质量控制方法。为了达到这个目的，采用如下技术方案：

一种岩黄连总碱的质量检测方法，该方法包括以下步骤：

（1）以岩黄连为对照药材，以脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，对岩黄连总碱进行薄层鉴别；

（2）对岩黄连总碱的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行检查；

（3）采用紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量；

（4）采用高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。

上述岩黄连总碱的质量检测方法，岩黄连总碱的薄层鉴别方法步骤为：

a.供试品溶液的制备：取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

b.对照药材溶液的制备：取岩黄连对照药材0.1g，加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

c.对照品溶液的制备：取脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含脱氢卡维丁0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液，作为混合对照品溶液；

d.薄层条件及结果：照中国药典2010年版一部附录VI B记载的薄层色谱法进行试验，吸取上述三种溶液各5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为9∶2∶5∶3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液，及比例为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，置波长为365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

上述岩黄连总碱的质量检测方法，岩黄连总碱水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查方法步骤为：

a.照中国药典2010年版一部附录IX H第一法记载的水分测定法对岩黄连总碱的水分进行测定，岩黄连总碱中水分不得超过5.0%；

b.照中国药典2010年版一部附录IX J记载的炽灼残渣测定法对岩黄连总碱的炽灼残渣进行测定，岩黄连总碱中炽灼残渣不得过2.0%；

c.中国药典2010年版一部附录IX E第二法记载的重金属检查方法进行测定，砷盐的检查按中国药典2010年版一部附录IX F记载的第一法古蔡氏法进行测定，岩黄连总碱中重金属不得过百万分之十，砷盐不得过百万分之二。

上述岩黄连总碱的质量检测方法，紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量步骤为：

a.对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的脱氢卡维丁对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用；

b.标准曲线的制备精密量取对照品贮备液0.3ml，0.4m1，0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，分别置10ml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，照中国药典2010年版一部附录V A记载的紫外-可见分光光度法，在347nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；

c.供试品溶液的制备取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，作为样品贮备液，备用；精密吸取样品贮备液1.0ml置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得；

d.测定法：取供试品溶液，以1%盐酸甲醇溶液为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中脱氢卡维丁的量，计算，即得。本品含总生物碱以脱氢卡维丁C21H23O4N计，不得少于50.0%。

上述岩黄连总碱的质量检测方法，高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量步骤为：

a.色谱条件与***适用性试验采用Hanbon ODS-2C18，规格为250mm×4.6mm，5μm的色谱柱，以比例为18.5∶81.5的乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，柱温30℃，检测波长347nm，流速1.0ml/min，进样量10μl，采样时间50min；

b.对照品溶液的制备精密称取去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液，分别精密取各储备液适量，配制成混合标准品储备液，以上6个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292，0.0174mg/mL；

c.供试品溶液的制备供试品溶液制备取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm直径微孔滤膜，取续滤液，即得；

d.测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品含去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维汀、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱总量不得少于32.0%。

有益效果：

本发明对岩黄连总碱提出了质量控制方法，该方法提供了鉴别、检查、紫外分光光度法和高效液相色谱法同时测定药物中岩黄连总碱及去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量，提高后的质量标准能更好地控制岩黄连的质量，本发明的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现中药安全有效、质量可控。

附图说明

图1为本发明供试样品在乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液（9∶2∶5∶3）展开条件下的薄层色谱图，其中条带从左至右依次为：混合对照品、岩黄连对照药材、样品1（批号：20071014）、样品1（批号：20071018）、样品1（批号：20071022）；

图2为本发明供试样品在正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）展开条件下的薄层色谱图，其中条带从左至右依次为：混合对照品、岩黄连对照药材、样品1（批号：20071014）、样品1（批号：20071018）、样品1（批号：20071022）；

图3为本发明去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱混合对照品液相色谱图（图中1为去氢碎叶紫堇碱，2为脱氢甲卡维汀，3为药根碱，4为脱氢卡维丁，5为盐酸巴马汀，6为盐酸小檗碱）；

图4为本发明岩黄连总碱供试品（批号：20071014）液相色谱图（标号同图3）。

具体实施方式

本发明所述的倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法是经过大量筛选试验得到的最优方案，结合具体实施方式，对本发明进一步说明如下：

1.岩黄连总碱薄层鉴别：

1.1仪器、试药与试剂

FA1104型万分之一电子分析天平（上海天平仪器厂）；紫外分析仪WD-9403C型（北京市六一仪器厂）；水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂）；硅胶G、H薄层板（青岛海洋化工厂）；岩黄连总碱（批号：20071014、20071018、20071022）；脱氢卡维丁对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111667-200601）；盐酸巴马汀对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110732-200506）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110713-200508）。正丁醇为分析纯（上海实意化学试剂有限公司，批号：20080227）；乙酸乙酯为分析纯（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20090406）；氨水为分析纯（南京化学试剂有限公司，批号：080920759）；冰醋酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20090305）；浓硫酸为分析纯（上海久亿化学试剂有限公司，批号：091022）；乙醇为分析纯（南京化学试剂有限公司，批号：09081310871）；***为分析纯（上海中试化工总公司，批号：20100415）；正己烷为分析纯（上海试四赫维化工有限公司，批号：0904102）；二氯甲烷为分析纯（上海凌峰化学试剂有限公司，批号：042101）；水为双重蒸馏水。

1.2鉴别实验方法

岩黄连总生物碱薄层色谱鉴别条件为：取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取岩黄连对照药材0.1g，加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取脱氢卡维丁对照品、盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含脱氢卡维丁0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液（9∶2∶5∶3）及正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1、2。

2检查：

参照《中国药典》及相关技术要求，对本品的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行了检查和测定。

2.1水分照水分测定法（2010年版《中国药典》一部附录IX H第一法）测定，结果见表1。

                       表1岩黄连总生物碱水分测定值

结果表明，三批中试样品水分均未过5.0%，故规定岩黄连总碱中水分不得过5.0%。

2.2炽灼残渣炽灼残渣检查按2010年版《中国药典》一部附录IX J测定，结果见表2。

                     表2岩黄连总生物碱炽灼残渣测定值

结果表明，三批中试样品炽灼残渣均未过2.0%，故规定岩黄连总碱中炽灼残渣不得过2.0%。

2.3重金属及砷盐重金属的检查按《中国药典》2010年版一部附录IX E第二法进行测定，砷盐的检查按《中国药典》2010年版一部附录IX F第一法（古蔡氏法）进行测定，三批样品的检查结果见表表3、表4。

                        表3三批样品重金属检查结果

                          表4三批样品砷盐检查结果

通过对三批样品重金属及砷盐的检测，结果均符合药品安全性技术规范的要求，故规定岩黄连总碱中重金属不得过百万分之十，砷盐不得过百万分之二。

3含量测定

3.1仪器与试剂

Agillent1100高效液相色谱仪，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、真空脱气机，紫外检测器；色谱柱为Agilent XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；Shimadzu UV2550紫外-可见分光光度计，752型紫外-可见分光光度计。乙腈为色谱纯(TEDIA)，水为重蒸水，KH₂PO₄、磷酸、盐酸、甲醇，皆为分析纯。岩黄连总碱提取物（批号：20071014、20071018、20071022）。脱氢卡维丁对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111667-200601）、盐酸巴马汀对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110732-200506）、盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110713-200508）。去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱对照品自制，经¹H-NMR，¹³C-NMR，UV，MS等方法确定其结构，HPLC归一法确定其纯度均大于98%。

3.2岩黄连总碱测定

照紫外-分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA）测定并建立岩黄连总碱的紫外分光光度法含量测定方法。

3.2.1测定波长的选择

对照品溶液的制备：精密称取脱氢卡维丁对照品约10.06mg，置100ml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用。

将脱氢卡维丁对照品和本品用1%盐酸甲醇溶液分别配制成20μg/ml的溶液，1%盐酸甲醇溶液为空白，在200～800nm波长范围内扫描，对照品及样品在347nm处均有平坦吸收，这与药材的紫外可见光谱图一致，故选择347nm作为含量测定的波长。

3.2.2线性范围的考察

精密量取对照品贮备液0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，分别置10ml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，在347nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=0.0704X-0.0088，r=0.9997。结果表明岩黄连总生物碱在3.018μg/ml～10.06μg/ml范围内呈良好的线性关系，见表5。

                             表5线性试验结果

3.2.3精密度试验

取浓度为10.06μg/ml的对照品溶液，重复测定6次，结果见表6。

                            表6精密度试验结果

6次测定的岩黄连总碱紫外吸光度的RSD为0.27%，精密度符合含量测定方法学考察的要求。

3.2.4重复性试验

取同一批岩黄连总碱粉末（批号：20071014）6份，精密称定，分别置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液溶解并定容，精密量取续滤液1.0mI置50m1量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，依次于不同时间测定紫外吸光度，标准曲线法计算含量，结果见表7。

                            表7重复性试验结果

结论：样品的重复性符合总碱含量测定方法学考察的要求。

3.2.5稳定性试验

取本品重复性试验中的1号供试品溶液，依次于不同时间测定紫外吸光度，结果见表8。

                            表8稳定性试验结果

结果表明样品在2小时内稳定（RSD为0.51%），结论：样品在室温下短期放置2小时内稳定，提示对样品的测定应该在2小时内完成。

3.2.6准确度试验

精密称取脱氢卡维丁对照品适量，配成浓度为7.062mg/ml的对照品贮备溶液。分别精密称取已知含量（56.47%）的岩黄连总碱粉末（批号：071014）12.5mg，共9份，置50ml量瓶中，分别加入上述对照品贮备溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml，用1%盐酸甲醇溶液溶解定容，精密吸取溶液1.0ml置50ml量瓶中，用1%盐酸甲醇溶液定容至刻度。测定含量。结果见表9。

                            表9准确度试验结果

结果表明平均回收率为98.06%，RSD为1.26%。结论：样品的加样回收率试验结果符合含量测定方法学考察的要求。

3.2.7岩黄连总碱测定方法条件的确立

经过对线性范围、精密度、供试品溶液稳定性、重复性、回收率等方法学考察，证明本方法操作简便、准确、可行。参照紫外分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA）测定，现确定总生物碱含量测定的方法如下：

对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的脱氢卡维丁对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用。

标准曲线的制备精密量取对照品贮备液0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，分别置10ml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，在347nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备精密称取本品25mg于50ml容量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液溶解并定容，作为样品贮备液，备用；精密吸取样品贮备液1.0ml置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。

测定法取供试品溶液，以1%盐酸甲醇溶液为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中岩黄连总生物碱的含量，计算，即得。

3.2.8三批样品总生物碱含量测定

按上述岩黄连总生物碱含量测定方法测定三批样品含量。结果见表10。

                 表10 3批样品岩黄连总生物碱含量测定结果

本品含岩黄连总生物碱分别为56.82%、56.74%、56.24%。根据以上结果，暂定本品含岩黄连总生物碱含量不得低于50%。

3.3去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量测定

3.3.1色谱条件与***适应性试验

Hanbon ODS-2C18(250mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液（18.5∶81.5)为流动相，柱温30℃，检测波长347nm，流速1.0ml/min，进样量10μl，采样时间50min。

3.3.2对照品溶液的制备

精密称取去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液。分别精密取各储备液适量，配制成混合标准品储备液，以上6个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292，0.0174mg/mL。

3.3.3供试品溶液制备

取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

3.3.4线性范围考察

精密吸取上述混合对照品溶液4μl，6μl，8μl，10μl，14μl，16μl进样分析，每个体积进样2次，测定其峰面积，取平均值。以对照品的进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制各对照品的标准曲线，计算各成分的线性回归方程。结果表明各化合物在相应范围内线性关系良好，见表11。

                             表11线性试验结果

3.3.5精密度试验

精密吸取同一混合对照品溶液，连续进样6次，记录各化合物峰面积。结果表明，各化合物峰面积的RSD%分别为2.55，1.60，2.76，0.85，0.81，0.96，表明仪器精密度良好。结果见表12。

                                表12精密度试验结果

3.3.6稳定性试验

分别于配制后的0，1，2，4，8，10，12，24h，精密吸取同一供试品溶液10ul进样测定峰面积，各化合物稳定性的RSD值分别为3.45%，1.65%，2.94%，0.96%，0.82%，0.99%，表明样品在室温下24h内稳定。结果见表13。

                                表13稳定性试验结果

3.3.7重复性试验

取同一批岩黄连总碱25mg，共6份，精密称定，按3.4项下方法制备样品，测定化合物1-7的平均含量分别为2.93%，9.85%，1.68%，11.00%，10.84%，2.30%，RSD分别1.57%，2.63%，3.42%，2.05%，1.98%，2.41%，表明该方法重复性良好。

3.3.8准确性试验

取同一批已知含量的样品粉末约12.5mg，精密称定，共9份，置50ml量瓶中，分别精密加入等同于样品中各对照品的含量80%、100%、120%的对照品，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定并计算各成分的加样回收率及RSD。结果见表14。

                     表14加样回收率试验结果（n=3）

3.3.9三批样品含量测定

按上述含量测定方法测定三批样品含量。结果见表15。

                      表15外标法含量测定结果（n=3）

本品去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱总含量分别为34.07%、38.04%、37.76%。根据以上结果，暂定本品岩黄连总生物碱中的指标性成分含量总和不得低于30.0%。

Claims (5)

1.一种岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

（1）以岩黄连为对照药材，以脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，对岩黄连总碱进行薄层鉴别；

（2）对岩黄连总碱的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行检查；

（3）采用紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量；

（4）采用高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。

2.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于岩黄连总碱的薄层鉴别方法步骤为：

a.供试品溶液的制备：取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；

b.对照药材溶液的制备：取岩黄连对照药材0.1g，加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；

c.对照品溶液的制备：取脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含脱氢卡维丁0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液，作为混合对照品溶液；

d.薄层条件及结果：照中国药典2010年版一部附录VI B记载的薄层色谱法进行试验，吸取上述三种溶液各5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为9∶2∶5∶3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液，及比例为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，置波长为365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于岩黄连总碱水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查方法步骤为：

a.照中国药典2010年版一部附录IX H第一法记载的水分测定法对岩黄连总碱的水分进行测定，岩黄连总碱中水分不得超过5.0%；

b.照中国药典2010年版一部附录IX J记载的炽灼残渣测定法对岩黄连总碱的炽灼残渣进行测定，岩黄连总碱中炽灼残渣不得过2.0%；

c.中国药典2010年版一部附录IX E第二法记载的重金属检查方法进行测定，砷盐的检查按中国药典2010年版一部附录IX F记载的第一法古蔡氏法进行测定，岩黄连总碱中重金属不得过百万分之十，砷盐不得过百万分之二。

4.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量步骤为：

a.对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的脱氢卡维丁对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用；

b.标准曲线的制备精密量取对照品贮备液0.3ml，0.4m1，0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，分别置10ml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，照中国药典2010年版一部附录V A记载的紫外-可见分光光度法，在347nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；

c.供试品溶液的制备取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，作为样品贮备液，备用；精密吸取样品贮备液1.0ml置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得；

d.测定法：取供试品溶液，以1%盐酸甲醇溶液为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中脱氢卡维丁的量，计算，即得。本品含总生物碱以脱氢卡维丁C21H23O4N计，不得少于50.0%。

5.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量步骤为：

a.色谱条件与***适用性试验采用Hanbon ODS-2C18，规格为250mm×4.6mm，5μm的色谱柱，以比例为18.5∶81.5的乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，柱温30℃，检测波长347nm，流速1.0ml/min，进样量10μl，采样时间50min；

b.对照品溶液的制备精密称取去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液，分别精密取各储备液适量，配制成混合标准品储备液，以上6个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292，0.0174mg/mL；

c.供试品溶液的制备供试品溶液制备取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm直径微孔滤膜，取续滤液，即得；

d.测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品含去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维汀、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱总量不得少于32.0%。

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