CN103555620A - 一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 - Google Patents
一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103555620A CN103555620A CN201310505522.2A CN201310505522A CN103555620A CN 103555620 A CN103555620 A CN 103555620A CN 201310505522 A CN201310505522 A CN 201310505522A CN 103555620 A CN103555620 A CN 103555620A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- catalase
- alkaline
- fermenting
- fermentation
- hydrogen peroxidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺,属于生物工程技术领域。本发明公开了碱性过氧化氢酶高产菌,经鉴定其属于节杆菌Arthrobactersp.,保藏编号为CGMCCNO.8181。本发明还公开了所述的碱性过氧化氢酶高产菌生产碱性过氧化氢酶的方法,本发明提出了一种碱性过氧化氢酶的高产菌,用该菌株经摇瓶液体深层发酵可制备碱性过氧化氢酶,酶活达到49706U/mL,可用于棉纺织品的染整处理过程,能改善产品品质,有效地改进现有棉纺织品染整处理工艺,使得生产过程更加绿色环保。
Description
技术领域
一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶,特别是一株高产碱性过氧化氢酶的菌株,属于生物工程技术领域。
背景技术
在众多行业中,纺织业是我国的传统产业和支柱产业。在纺织行业上,近些年来对于过氧化氢酶能够在纺织的过程中发挥作用的研究报道也是屡见不鲜,并且将过氧化氢酶作为一种在纱线过程中经济的除去剩余过氧化氢的物质,同样也在织物的漂白这一工序中发挥作用,与之相比,传统的水清洗方式是有较大的弊端的:例如过氧化氢作为漂白剂使用之后清除不是很容易而且残余的还原剂对于纤维也将有一些不良的影响,而改用过氧化氢酶清洗之后,不仅节约用水还能提高工作效率。过氧化氢酶生物净洗工艺的优势具体表现为:
1)显著降低水耗,能耗和废水量;
2)高效催化,减少生产时间,提高生产能力,增加产值;
3)酶剂用量少,降低生产成本;
4)织物的质量更好,强度更高,柔软度更好;
5)提升染色的准确性和安全性;
6)操作更加安全和简便;
7)产物是氧气和水,有利于环保。
在织物漂白工艺中运用过氧化氢酶实现漂白虽具有良好的经济和环保效益,但是就目前来看,实现这一工艺的主要问题是高温和强碱性条件下过氧化氢酶的稳定性问题,包括过氧化氢酶保存稳定性问题和反应稳定性问题,但是大多产品仍没有达到纺织工业强碱性(pH>10)的要求,同时在国内外的文献中节杆菌产过氧化氢酶酶活很低,远没有达到工业化的要求。过氧化氢酶来源丰富,几乎存在于所有好养生物中,随着细菌细胞壁破碎技术的成熟,过氧化氢酶应用将更为广泛。
发明内容
本发明的目的是提供一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶,所制备的碱性过氧化氢酶用于棉纺织品的染整处理过程。
本发明的技术方案:从造纸厂土壤中分离得到一株菌LHM7719,经鉴定其属于节杆菌Arthrobacter sp.,并于2013年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为CGMCC NO.8181。
碱性过氧化氢酶高产菌生产碱性过氧化氢酶的方法,按照下述步骤进行:
采用CGMCC NO:8181为出发菌株,经种子培养和液体深层发酵制得碱性过氧化氢酶,
种子培养基是LB培养基:以g/L计,葡萄糖20,蛋白胨10,牛肉浸膏5,氯化钠5,pH 7.2;培养条件:培养时间为12~16小时,温度为29~32℃,摇床转速为160 转/分钟。
发酵培养基是LB培养基:以g/L计,木薯淀粉15~20,豆粕粉50~70,磷酸二氢钾 0.5,初始pH为7.0;发酵条件:发酵时间为35~45小时,接种量为1%~8%(v/v),装液量为40ml/250 ml,培养温度为30~40℃,摇床转速为200~250 转/分钟。
取15ml发酵液,12000 转/分钟离心20分钟,然后加入15ml磷酸缓冲液混匀后,超声波破碎取,12000 转/分钟离心15分钟,取上清液得到碱性过氧化氢酶。
中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏编号CGMCC NO:8181发酵所得过氧化氢酶的应用:所制备的碱性过氧化氢酶酶活达到49706U /mL,可用于棉纺织品的染整处理过程。
本发明的有益效果:提出了一种碱性过氧化氢酶的高产菌,用该菌株经摇瓶液体深层发酵可制备碱性过氧化氢酶,酶活达到49706U /mL,可用于棉纺织品的染整处理过程,能改善产品品质,有效地改进传统棉纺织品染整处理工艺,使得生产过程绿色环保。
具体实施方式
一个标准酶活单位(lu)定义为:在37℃下,1 min内分解1 umol H2O2 (消光系数为39.4L/mol/cm)所需的酶量。H2O2的分解速率用紫外可见光分光光度计S53在240 nm, 30℃条件下进行测定。反应总体积为3 mL,含0.1ml酶液和2.9ml含有120 mmol/L H2O2和50 mmol/L的磷酸二氢钾、磷酸氢二钾缓冲液(pH 7.0)。
本发明所采用菌株,已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO:8181。
中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏编号CGMCC NO:8181的筛选方法是从造纸厂土壤中筛选并经平板培养,滴加产气泡情况再筛选,并比较过氧化氢酶活性大小而得到。造纸厂土壤经过两次LB培养基增值培养,涂平板,培养后滴加0.2ml3%过氧化氢于大小均匀的菌落上,选择产气泡迅速且持续时间久的菌落进行试管发酵培养,通过比较碱性过氧化氢酶分解H2O2能力的大小,最终确定菌株为LHM7719。经鉴定其属于节杆菌Arthrobacter sp.,并于2013年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为CGMCC NO.8181。
LHM7719菌株部分生理生化特性鉴定如表1 所示,细胞为杆状,革兰氏染色为阳性,并做该菌株16S rDNA鉴定。16SrDNA序列在核糖体数据库中通过比对与Arthrobacter sp. TM4_3(DQ279376)最为接近,所以确定该菌株为节杆菌属( Arthrobacter)微生物。最终判定菌株LHM7719应属于节杆菌属的一种( Arthrobacter sp.),命名为Arthrobacter sp. LHM7719。
实施例1
从斜面上刮取两环菌种,置于装有30ml种子培养基的250ml三角瓶中进行种子培养。条件为:pH 7.2,培养时间为16小时,温度为30℃,摇床转速为160 转/分钟。再以2%的接种量接入装有40ml发酵培养基的250ml三角瓶中进行发酵培养。条件为:pH为7.0,发酵时间为45小时,温度为30℃,摇床转速为250 转/分钟,即可得到酶活49706U /mL的发酵液。
实施例2
从斜面上刮取两环菌种,置于装有30ml种子培养基的250ml三角瓶中进行种子培养。条件为:pH 7.2,培养时间为16小时,温度为30℃,摇床转速为160 转/分钟。再以2%的接种量接入装有40ml发酵培养基的250ml三角瓶中进行发酵培养。条件为:pH为7.0,发酵时间为36小时,温度为32℃,摇床转速为250 转/分钟,即可得到酶活41000U /mL的发酵液。
表1 菌株LHM7719部分生理生化特性
其中 “+” 阳性, “-” 阴性。
Claims (2)
1.碱性过氧化氢酶高产菌,经鉴定其属于节杆菌Arthrobacter sp.,保藏编号为CGMCC NO.8181。
2.权利要求1所述的碱性过氧化氢酶高产菌生产碱性过氧化氢酶的方法,按照下述步骤进行:
采用CGMCC NO:8181为出发菌株,经种子培养和液体深层发酵制得碱性过氧化氢酶,
种子培养基是LB培养基:以g/L计,葡萄糖20,蛋白胨10,牛肉浸膏5,氯化钠5,pH 7.2;培养条件:培养时间为12~16小时,温度为29~32℃,摇床转速为160 转/分钟;
发酵培养基是LB培养基:以g/L计,木薯淀粉15~20,豆粕粉50~70,磷酸二氢钾 0.5,初始pH为7.0;发酵条件:发酵时间为35~45小时,接种量为1%~8%(v/v),装液量为40ml/250 ml,培养温度为30~40℃,摇床转速为200~250 转/分钟;
取15ml发酵液,12000 转/分钟离心20分钟,然后加入15ml磷酸缓冲液混匀后,超声波破碎取,12000 转/分钟离心15分钟,取上清液得到碱性过氧化氢酶。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310505522.2A CN103555620B (zh) | 2013-10-24 | 2013-10-24 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310505522.2A CN103555620B (zh) | 2013-10-24 | 2013-10-24 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103555620A true CN103555620A (zh) | 2014-02-05 |
CN103555620B CN103555620B (zh) | 2015-08-05 |
Family
ID=50009986
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310505522.2A Expired - Fee Related CN103555620B (zh) | 2013-10-24 | 2013-10-24 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103555620B (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105567653A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-05-11 | 仇颖超 | 一种过氧化氢酶的制备方法 |
CN105624140A (zh) * | 2016-03-29 | 2016-06-01 | 常州大学 | 一种提高过氧化氢酶存储稳定性的方法 |
CN106520596A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-03-22 | 常州大学 | 一种添加过氧化氢胁迫节杆菌发酵产过氧化氢酶的方法 |
CN108384777A (zh) * | 2018-05-18 | 2018-08-10 | 江苏世邦生物工程科技有限公司 | 土壤修复用多孔微生物制剂的制备方法 |
CN108624582A (zh) * | 2018-05-18 | 2018-10-09 | 江苏世邦生物工程科技有限公司 | 用于土壤修复的微生物制剂 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1081714A (zh) * | 1992-07-30 | 1994-02-09 | 浙江大学 | 利用微生物生产d-酒石酸的方法 |
CN1966671A (zh) * | 2006-07-31 | 2007-05-23 | 江南大学 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶 |
-
2013
- 2013-10-24 CN CN201310505522.2A patent/CN103555620B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1081714A (zh) * | 1992-07-30 | 1994-02-09 | 浙江大学 | 利用微生物生产d-酒石酸的方法 |
CN1966671A (zh) * | 2006-07-31 | 2007-05-23 | 江南大学 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
赵志军 等: ""碱性过氧化氢酶高产菌的筛选、鉴定及发酵条件优化"", 《微生物学通报》, vol. 34, no. 4, 30 April 2007 (2007-04-30), pages 667 - 671 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105567653A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-05-11 | 仇颖超 | 一种过氧化氢酶的制备方法 |
CN105624140A (zh) * | 2016-03-29 | 2016-06-01 | 常州大学 | 一种提高过氧化氢酶存储稳定性的方法 |
CN106520596A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-03-22 | 常州大学 | 一种添加过氧化氢胁迫节杆菌发酵产过氧化氢酶的方法 |
CN108384777A (zh) * | 2018-05-18 | 2018-08-10 | 江苏世邦生物工程科技有限公司 | 土壤修复用多孔微生物制剂的制备方法 |
CN108624582A (zh) * | 2018-05-18 | 2018-10-09 | 江苏世邦生物工程科技有限公司 | 用于土壤修复的微生物制剂 |
CN108384777B (zh) * | 2018-05-18 | 2020-07-17 | 江苏世邦生物工程科技有限公司 | 土壤修复用多孔微生物制剂的制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103555620B (zh) | 2015-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103555620B (zh) | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及该菌株发酵法生产工艺 | |
CN104830910B (zh) | 利用纤维化纤维微细菌制备微生物絮凝剂的方法 | |
CN107603908A (zh) | 一种利用城市污泥制备的超高温好氧发酵菌剂及其制备方法 | |
CN110577917A (zh) | 一种秸秆生物降解复合菌剂及其应用 | |
CN102925388A (zh) | 碱性蛋白酶高产菌株及其所产的碱性蛋白酶 | |
Sangkharak et al. | Strain improvement and optimization for enhanced production of cellulase in Cellulomonas sp. TSU-03 | |
CN108546660A (zh) | 甲壳素脱乙酰基酶高产菌株及其应用 | |
CN100422313C (zh) | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶 | |
CN103695319A (zh) | 一种生产柠檬酸的菌株及其发酵制备柠檬酸的方法 | |
CN105713851B (zh) | 一株拜氏梭菌及其应用 | |
CN108823116A (zh) | 一株产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌突变株及其应用 | |
CN101423983A (zh) | 苎麻韧皮纤维的混菌脱胶方法 | |
CN103146776B (zh) | 一种用枯草芽孢杆菌生产靛蓝色素的方法 | |
CN108660178A (zh) | 一种高絮凝率微生物絮凝剂的制备方法 | |
CN103896408A (zh) | 一种利用细菌高效降解染料废水中的偶氮染料的方法 | |
CN106967644A (zh) | 一种处理谷氨酸发酵污水的生物制剂 | |
CN1177003A (zh) | 新的嗜碱芽孢杆菌菌株及其在苎麻脱胶中的应用 | |
CN103409379A (zh) | 一种阿魏菇与胶红酵母共发酵生产漆酶的方法 | |
CN102994400B (zh) | 降解脐橙囊衣微生物、含有其的酶制剂及应用 | |
CN103421692B (zh) | 强化活性污泥的复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用 | |
CN101096650B (zh) | 一株克劳氏芽孢杆菌突变株及其发酵生产碱性果胶酶 | |
CN100513553C (zh) | 一株聚乙烯醇降解酶产生菌及用该菌株发酵法制备的聚乙烯醇降解酶 | |
CN109694836B (zh) | 一种麻类生物脱胶用固态菌剂的制备方法 | |
CN110903994B (zh) | 产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及其应用 | |
CN110835610B (zh) | 一种适用于降解秸秆的复合菌剂及制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150805 Termination date: 20201024 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |