CN103550206B

CN103550206B - 一种白藜芦醇靛玉红组合药物、缓释微囊剂及其应用

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Publication number: CN103550206B
Application number: CN201310502822.5A
Authority: CN
Inventors: 杨大坚; 陈新滋; 徐宏喜; 陈士林; 卞兆祥; 吕爱平; 陈国庆; 张毅
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine; Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC; China Academy of Chinese Medical Sciences CACMS; Hong Kong Baptist University HKBU
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine; Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC; China Academy of Chinese Medical Sciences CACMS; Hong Kong Baptist University HKBU
Priority date: 2013-10-23
Filing date: 2013-10-23
Publication date: 2015-11-25
Anticipated expiration: 2033-10-23
Also published as: CN103550206A

Abstract

本发明提供了一种白藜芦醇靛玉红组合药物，所述为白藜芦醇和靛玉红两种药物单体混合组成；所述是以海藻酸钠作为载体材料，以白藜芦醇和靛玉红为活性成分制成的缓释微囊剂；一种白藜芦醇和靛玉红组合药物及其微囊制剂，靛玉红与白藜芦醇的组合药物在活性上由于任一单体在同等剂量下的活性，同时微囊剂型可以有效的起到缓释的作用。

Description

一种白藜芦醇靛玉红组合药物、缓释微囊剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种植物药，更具体的说涉及一种白藜芦醇靛玉红组合药物、缓释微囊剂及其应用。

技术背景

癌症是严重危害人类健康及生命的常见慢性疾病。近年，受环境恶化、工作生活压力等因素影响，癌症死亡己位居国各类死亡的第一位。据国家***通报，上世纪70年以来，我国癌症死亡一直呈持续增长趋势。20世纪70年代我国每年死于癌症的人数为70万，90年代为117万，21世纪则上升为150万。如此众多的肿瘤患者，形成了一个庞大的抗肿瘤药物市场。据有关部门对上海、北京、广州、沈阳等14个城市300多家医院抗肿瘤用药金额的统计，1999年、2000年、2001年上述城市各医院抗肿瘤用药的金额在持续上升，年平均增幅在20％以上。有关研究表明，中国1999年抗肿瘤药物市场规模为60.3亿元人民币，2000年为70.2亿元，2001年为82.13亿元，市场规模增长明显。目前国际上公认的抗肿瘤疗效较好的药物有50‐60种，其中抗肿瘤植物药是抗肿瘤用药的主体，占41％的市场份额，这与该类药物在增强机体自身对癌细胞的免疫力以及促进癌细胞凋亡两方面独特的疗效和较低的毒副作用有关。中药虎杖中的白藜芦醇和中药大青叶中的靛玉红对于癌症均具有良好的活性。

但是白藜芦醇和靛玉红均具有溶解度低、稳定性差、生物利用度低、半衰期较短等问题，影响其在临床上的应用。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种有靛玉红和白藜芦醇组合的组合药物及其微囊制剂，具体发明内容为：所述为白藜芦醇和靛玉红两种药物单体混合组成。

所述中白藜芦醇和靛玉红的重量比为1-10:1-10。

所述中白藜芦醇和靛玉红的重量比为2:3。

所述白藜芦醇靛玉红组合药物的缓释微囊剂，所述是以海藻酸钠作为载体材料，以白藜芦醇和靛玉红为活性成分制成的缓释微囊剂。

所述的白藜芦醇靛玉红组合药物的缓释微囊剂的制备方法，其特征在于：根据比例称取白藜芦醇和靛玉红，加入粘度为125mPa.s的海藻酸钠水溶液，混匀，用注射器吸取混悬液滴加至慢速搅拌的CaCl₂溶液中，固化，过滤，水洗3次，50℃干燥，得微囊。为了保证试验的重复性，规定固化时间为10min,氯化钙的体积为海藻酸钠体积的6倍，滴距为8cm；海藻酸钠粘度为380mPa.s、海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比0.5、海藻酸钠质量分数为2.0％、氯化钙质量分数为3.0％。

上述所述的白藜芦醇靛玉红组合药物在制备治疗癌症药物中的应用。

本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种白藜芦醇和靛玉红组合药物及其微囊制剂，靛玉红与白藜芦醇的组合药物在活性上由于任一单体在同等剂量下的活性，同时微囊剂型可以有效的起到缓释的作用。

具体实施方式

实施例1采用海藻酸钠为载体材料制备微囊的工艺考察

1、空白海藻酸钠微囊制备工艺的研究

经预实验可知，主要影响海藻酸钠微囊的因素包括：海藻酸钠粘度；钙化时间和滴制工艺参数，如滴制针头的大小、滴速、滴距(液滴出口到液面问的距离)等。以下对这些影响因素分别进行微囊成型性的单因素考察。

海藻酸钠粘度的考察

分别考察3种粘度浓度为1.5％海藻酸钠样品，对微囊成型的影响。将浓度为1.5％的海藻酸钠用7号针头的注射器，以约30滴/min的速度滴加至慢速搅拌的1.1％氯化钙溶液中，固化10min，过滤，即得，结果见表1。

表1海藻酸钠粘度

实验结果表明，海藻酸钠粘度为30mPa.s时得不到完整的球形。可能是因为粘度太小，可能部分在氯化钙溶液中溶解，不能形成单独的球体。同时发现海藻酸钠的粘度越高，微囊硬度越大；但增加至380mPa.s时，其硬度过大。因此，最适宜的海藻酸钠粘度为125mPa.s。

滴速的考察

各取5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)溶液用(0.5×20RWLB)，分别以快速(52滴/min)、中速(30滴/min)、慢速(17滴/min)的滴速滴入30mL1.1％氯化钙溶液中，固化10min，过滤，即得，结果见表2。

表2滴速

实验结果表明，滴速太快会导致微囊的粒径增大，且圆整度差。因此在制备时滴速最好小于或等于30滴/min。

针头大小

分别用号5、7和9号针头将5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)以约30滴/min的速度滴加至慢速搅拌的30mL1.1％氯化钙中，固化10min，过滤，即得，结果见表3。

表3针头大小

实验结果表明，由于微囊是依靠挤压力通过针头滴制而成，因此针头口径的大小是决定粒径大小的关键，说明针头越小，微囊粒径越小。但是当针头过小时，由于海藻酸钠存在一定的粘度，滴制将变得非常困难。

滴距的考察

用5号针头将5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)以约30滴/min的速度，滴距分别为0、5、10、20cm，滴加至慢速搅拌的30mL1.1％氯化钙中，固化10min，过滤，即得，结果见表4。

表4滴距

实验结果表明，滴距为5～10cm比较适宜，滴距小于5cm海藻酸钠液滴不能成球，滴距大于10cm微球漂浮于氯化钙溶液面上，影响微球进一步的固化反应，导致圆整度差。

搅拌速度的考察

用5号针头将5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)以约30滴/min的速度，滴距为10cm，滴加至的30mL1.1％氯化钙溶液中，其中氯化钙溶液的搅拌速度分别为无搅拌、慢速、中速、快速，固化10min，过滤，即得，结果见表5。

表5搅拌速度

实验结果表明，搅拌速度不应过快，因为过快时会导致微囊尚未成型时被搅拌，造成微囊的大小不均，圆整度不好。

固化时间的考察

用5号针头将5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)以约30滴/min的速度，滴距为10cm，滴加至慢速搅拌的30mL1.1％氯化钙中，固化时间分别为5、10、30、60min，过滤，即得，结果见表6。

表6固化时间

从结果来看，不同固化时间得到的微囊无明显差异，且大小均匀、圆整度好，说明固化时间对微囊的成型性无显著影响。可以证明海藻酸钠溶液在滴入氯化钙溶液时是瞬间反应形成海藻酸酸钙微囊。

氯化钙的体积的考察

用5号针头将5mL1.5％海藻酸钠(粘度125mPa.s)以约30滴/min的速度，滴距为10cm，滴加至慢速搅拌的5、10、20、30、40mL1.1％氯化钙中，固化10min，过滤，即得，结果见表7。

表7氯化钙的体积

不同体积的氯化钙得到的微囊无明显差异，且大小均匀、圆整度好，可见氯化钙的体积对微囊的成型性无显著影响。但当氯化钙的体积过小时，形成的微囊一旦增多，微囊会黏附在一起，无法搅拌。因此氯化钙的体积应等于或大于2倍的海藻酸钠溶液体积。

2、白藜芦醇微囊的制备

根据空白海藻酸钠微囊制备工艺的单因素研究结果，进行白藜芦醇缓释微囊的制备工艺研究。称取适量白藜芦醇，加入海藻酸钠(粘度为125mPa.s)水溶液，混匀，用注射器(9号针头)吸取混悬液滴加至慢速搅拌的CaCl₂溶液中，固化，过滤，水洗3次，50℃干燥，得微囊。为了保证试验的重复性，规定固化时间为10min,氯化钙的体积为海藻酸钠体积的6倍，滴距为8cm。

微囊包封产率和载药量的测定

称取干燥的微囊适量，研磨，用无水乙醇提取药物数次，过滤后定容至50ml，根据标准曲线方程计算药物质量浓度，并按下式计算载药量和包封产率。

载药量＝微囊中药物量/微囊总重量×100％

包封产率＝微囊中药物量/投药量×100％

微囊影响因素试验

海藻酸钠的粘度

按重量比1:1称取靛玉红与白藜芦醇，得到白藜芦醇与靛玉红的组合；在1.5％海藻酸钠、3.0％氯化钙、海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比为1.0条件下，海藻酸钠粘度分别为30mPa.s、125mPa.s、380mPa.s，制备一系列微囊，观察其形态，测定其载药量和包封率，结果见表8。试验表明，海藻酸钠的粘度对微囊的载药量和包封率无显著影响。而对圆整度和硬度有显著影响。海藻酸钠的粘度越大，圆整度越好，硬度越强。由此可见海藻酸钠的最佳粘度是380mPa.s。

表8海藻酸钠粘度的影响(n＝3)

海藻酸钠与组合药物质量比

在1.5％海藻酸钠(380mPa.s)、3.0％氯化钙条件下，海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比分别为0.5、1.0、2.0制备一系列微囊，观察其形态，测定其载药量和包封率，结果见表9。试验表明，海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比对圆整度、硬度和包封率均无显著影响，而对微囊的载药量有显著影响。海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合的质量比越大，载药量则越小。并且当海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比小于0.5时，白藜芦醇与靛玉红的组合与海藻酸钠溶液混匀后，溶液过于粘稠，导致滴制时易堵塞针头。由此可见海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合的最佳质量比为0.5。

表9不同海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比的影响(n＝3)

海藻酸钠质量分数

在3.0％氯化钙、海藻酸钠(380mPa.s)与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比为0.5条件下，海藻酸钠质量分数分别为1.0％、1.5％、2.0％，制备一系列微囊，观察其形态，测定其载药量和包封率，结果见表10。试验表明，随着海藻酸钠质量分数的增大，微囊的圆整度逐渐变好，硬度增强，包封率无显著变化，但载药量却逐渐减小。当海藻酸钠质量分数小于2.0％时，微囊的载药量虽然较高，但其圆整度和硬度却不理想；当海藻酸钠的质量分数大于2.5％则滴制困难，需特殊的加压装置。因此海藻酸钠的最佳质量分数为2.0％。

表10海藻酸钠质量分数的影响(n＝3)

氯化钙质量分数

在2.0％海藻酸钠(380mPa.s)、海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比为0.5条件下，氯化钙质量分数分别为2.0％、3.0％、4.0％、5.0％，制备一系列微囊，观察其形态，测定其载药量和包封率，结果见表11。试验结果表明，虽然氯化钙质量分数越低，微囊的载药量越高，但是当氯化钙质量分数为3.0％或4.0％时，微囊的圆整度和硬度最佳。因此综合考虑载药量、圆整度和硬度，氯化钙的最佳质量分数为3.0％。

表11氯化钙质量分数的影响(n＝3)

优化处方的验证

按照单因素实验得出的最优工艺和处方条件，制备白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊3批，测得结果见表12。

表12验证实验结果表(n＝3)

结果表明，该制备工艺的最优工艺和处方条件为海藻酸钠粘度为380mPa.s、海藻酸钠与白藜芦醇与靛玉红的组合质量比0.5、海藻酸钠质量分数为2.0％、氯化钙质量分数为3.0％。验证试验表明该工艺稳定可靠，载药量和包封率较高。

实施例2实验样品的制备

按白藜芦醇和靛玉红1:10的比例称取药物单体并混合，按实施例1最优的制备方法，制备得到实验组Ⅰ。

按白藜芦醇和靛玉红10:1的比例称取药物单体并混合，按实施例1最优的制备方法，制备得到实验组Ⅱ。

按白藜芦醇和靛玉红8:1的比例称取药物单体并混合，按实施例1最优的制备方法，制备得到实验组Ⅲ。

按白藜芦醇和靛玉红1:7的比例称取药物单体并混合，按实施例1最优的制备方法，制备得到实验组Ⅳ。

按白藜芦醇和靛玉红2:3的比例称取药物单体并混合，按实施例1最优的制备方法，制备得到实验组Ⅴ。

称取白藜芦醇单体，按实施例1最优的制备方法，制备得到白藜芦醇组。

称取靛玉红醇单体，按实施例1最优的制备方法，制备得到靛玉红组。

实施例3白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊对动物移植性肿瘤抑制作用

取雌性昆明小鼠，18～22g，大鼠，60～80g，无菌条件下，取接种7天之腹水瘤(H22肝癌)，制成悬液，按1:10稀释计数、调整瘤细胞数为10⁷个/ml，接种于小鼠右腋皮下，0.2ml/只，每只小鼠接种瘤细胞数为2×10⁶,次日称重后随机分9组，每组10只；分别给药实施例2中制备的各样品组，空白对照组、实验组Ⅰ-Ⅴ组、白藜芦醇组、靛玉红组和环磷酰胺组。实验组Ⅰ-Ⅴ组、白藜芦醇组和靛玉红组每天灌胃给药(ig)二次(给药量以活性成分含量计算),连续给药10天，环磷酰胺组皮下给药(sc)，每天给药一次连续给药10天。空白对照组则给予相应体积蒸馏水，末次给药后停药一天，脱颈处死动物、称体重、剖瘤称重。按下公式计算肿瘤抑制率并用t检验比较组间的显著性差异。

，连续给药10天对H₂₂肝癌有明显抑制作用。结果见表13。

表13白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊对H₂₂肝癌移植性瘤株的抑制作用

注：与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

分别取对数生长期的H₂₂肝癌肿瘤细胞，用胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配成浓度为1×10⁴个·mL^-1的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔190μL，置含5％CO₂的37℃细胞培养箱中，培养24h后，待贴壁细胞贴壁完全后，每孔加入不同的药物10μL，按实验设计分别加入实施例2中制备的实验组Ⅰ-Ⅴ组、白藜芦醇组和靛玉红组；阳性对照药环磷酰胺10μL，另设不加药的对照组。于培养箱中培养48h后，随后每孔加入10μL的MTT(1mg·mL^-1)溶液，振荡混匀后37℃继续培养4h，小心弃去上清液，加入200μLDMSO溶解，平板振荡仪振荡10min，在酶标仪上用波长492nm，参比波长为570nm的条件下测定各孔吸光度(OD)值，计算抑制率[抑瘤率(％)＝(1-实验组OD值/对照组OD值)×100％]。结果见表14。

表14白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊体外对H₂₂肝癌肿瘤细胞株的抑制作用

注：与对照组比较*<0.05，**P<0.01。

由表14可见；白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊均可抑制H22肝癌肿瘤细胞株的增殖；见表14，提示白藜芦醇靛玉红组合药物组合微囊有一定直接杀伤体外培养H₂₂肝癌肿瘤细胞株的作用；白藜芦醇和靛玉红的组合物对癌症的活性作用由于同等剂量两者的单体的活性，具有联合增效的作用。

Claims

1.一种白藜芦醇靛玉红组合药物的缓释微囊剂，是以海藻酸钠作为载体材料，以白藜芦醇和靛玉红为活性成分的缓释微囊剂，其特征在于：所述缓释微囊剂中白藜芦醇和靛玉红的重量比为1-10:1-10。

2.根据权利要求1所述的白藜芦醇靛玉红组合药物的缓释微囊剂，其特征在于：所述中白藜芦醇和靛玉红的重量比为2:3。

3.权利要求1-2任一项所述的白藜芦醇靛玉红组合药物的缓释微囊剂在制备治疗癌症药物中的应用。