CN103518781B - 一种核心生防菌素及含该核心生防菌素的有机肥 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物肥料领域，具体是一种核心生防菌素及含该核心生防菌素的有机肥。本发明核心生防菌素的有效成分为哈茨木霉（harzianum）和刺孢吸水链霉菌(hygrospinocus var.beigingenis)。本发明含所述核心生防菌素的有机肥，由以下重量份的组分组成：核心生防菌素3～7份，茶皂素3～7份，有机质75～89份，植物营养素5～11份。本发明还提供制备含核心生防菌素的有机肥的方法。本发明的含核心生防菌素的有机肥，所含核心生防菌素能有效预防或减轻因重茬种植所带来的病虫危害，具有微生物修复土壤污染的功能；所含茶皂素具有的驱避害虫和生物素的作用；所含有机质能促进土壤团粒结构的形成。
Description
技术领域
本发明涉及微生物肥料领域，具体是一种核心生防菌素及含该核心生防菌素的有机肥。
背景技术
生态农业的生产需要土壤提供作物生长繁殖的营养物质和生存环境，但农业的过度开发，尤其是长期偏施单质化肥，产生许多问题。如养分单一，土壤结构破坏，肥料利用率低，果蔬味道变差等。生物有机肥是一种能提高作物品质、改良土壤、供肥均衡、肥效明显的资源节约型、环境友好型肥料。我国现有生物肥均以有机质为基础，然后配以菌剂和无机肥混合而成。生物肥料在农业上的应用已逐渐被人们所认可。为了广泛改善这种传统性生物肥料的现状，研究者致力于开发出新的生物肥料产品，使其既能提供作物营养，又能改良土壤，同时还能够对土壤进行消毒和杀灭地下害虫，即利用生物分解和消除土壤中的污染物，对土壤起到修复作用。
发明内容
本发明的目的在于针对现状，提供一种核心生防菌素及含该核心生防菌素的有机肥。
本发明提供的一种核心生防菌素，其有效成分为哈茨木霉（harzianum）和刺孢吸水链霉菌(hygrospinocus var.beigingenis)。哈茨木霉购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号为1511C0001ACCC30371，刺孢吸水链霉菌购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号：1511C0001ACCC40052。
所述核心生防菌素中哈茨木霉的有效活菌数为8.0×108～9.0×108cfu/g，刺孢吸水链霉菌的有效活菌数为2.0×108～6.0×108cfu/g，总有效活菌素为10.0×108～15.0×108cfu/g，优选为核心生防菌素中哈茨木霉的有效活菌数为8.5×108cfu/g，刺孢吸水链霉菌的有效活菌数为4.0×108cfu/g，总有效活菌素为12.5×108cfu/g。
所述核心生防菌素还含有酶活物质，所述酶活物质为蛋白粉和活性酶，且蛋白粉和活性酶的重量份比为（2～4）:（1～3），优选为3:2。
本发明还提供所述核心生防菌素的制备方法，包括如下步骤：对哈茨木霉和刺孢吸水链霉菌分别进行斜面培养、摇床培养及发酵罐培养后，将得到的发酵液浓缩干燥得到孢子粉，按比例与酶活物质混匀即得核心生防菌素。具体步骤为：
1）刺孢吸水链霉菌孢子粉的制备：
①斜面培养：将刺孢吸水链霉菌的原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在29±1℃条件下培养36-48h，
②摇床培养：将步骤①培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在pH值6.5-7.0、温度为30℃条件下，140-160r/min摇床培养36-48h，
③发酵罐培养：将步骤②培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在pH值7.0-8.0、罐压0.5kg、温度为30℃、通风量1:0.8-1.1条件下，培养48-56h后，菌数大于1.0×1010个/mL，80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液，
④将步骤③中得到的发酵液，经过浓缩干燥制备成刺孢吸水链霉菌孢子粉，
其中，步骤①所述的斜面培养基的配方如下：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、水1000mL、琼脂15g，
其中，步骤②所述的液体培养基配方如下：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.2g、水1000mL，
其中，步骤③所述的发酵罐培养基配方如下：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg、加水至600kg。
2）哈茨木霉孢子粉的制备：
a将哈茨木霉的原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28±1℃条件下培养48h，
b摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在pH值6.5-7.0、温度为30℃条件下，160-200r/min摇床培养24h，
c发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在pH值6.5-7.0、罐压0.5kg、温度为27-28℃、通风量为1:0.7-0.8，在培养48h后，菌丝体约占总体积的20%时终止发酵，进行固体发酵产孢，
d固体发酵产孢：将步骤c经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养48h，使其产孢量达到90%，
e将步骤d中产孢后的培养基浸在清水，从而得到哈茨木霉孢子悬浮液，
f将步骤e中得到的哈茨木霉孢子悬浮液浓缩干燥制备成哈茨木霉孢子粉，
其中，步骤a所述的斜面培养基的配方如下：葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g、水1000mL，pH自然，
其中，步骤b所述的液体培养基配方如下：白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g、水1000mL，
其中，步骤c所述的发酵罐培养基配方如下：淀粉12kg、豆饼粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠0.12kg、加水至600kg，
其中，步骤d所述的固体发酵培养基配方如下：固体料与水的重量比为1:0.8，其中，所述固体料由如下重量百分比的组份组成：棉籽壳25%、玉米粉10%、麸皮65%。
3）按比例与酶活物质混匀
按比例将步骤1）制备的刺孢吸水链霉菌孢子粉、步骤2）制备的哈茨木霉孢子粉与酶活物质混匀即得核心生防菌素。
本发明的一种含所述核心生防菌素的有机肥，由以下重量份的组分组成：核心生防菌素3～7份，茶皂素3～7份，有机质75～89份，植物营养素5～11份。
本发明的一种含所述核心生防菌素的有机肥，优选由以下重量份的组分组成：核心生防菌素5份，茶皂素5份，有机质82份，植物营养素8份。
所述的茶皂素（Tea Saponin）是从野生山茶果中提炼的三萜类皂苷物质。本发明的茶皂素采用水提醇沉法提取（即水提取之后再醇沉）。所述水提的工艺条件优选为浸提温度60℃，液固比10:1，浸提时间2h，浸提次数3次，混匀后既得茶皂素浸提液。所述醇沉的工艺条件优选为乙醇浓度90%，乙醇与茶皂素浸提液体积比4:1，醇沉温度75℃，醇沉时间2.5h后既得茶皂素。
所述有机质是由菜籽饼、豆饼、芝麻饼粉碎混匀后，利用微生物发酵而成，其中，菜籽饼:豆饼:芝麻饼的重量份比为（3～7）:（2～4）:（1～3），优选地菜籽饼、豆饼、芝麻饼的重量份比为5:3:2。所述微生物发酵是将枯草芽孢杆菌、哈茨木霉、米曲霉和酵母分别按照有效活菌素5.0×108、1.0×108、1.0×108、3.0×108的比例混合制成的核心料，然后按照1kg核心料与1～2t底物（菜籽饼、豆饼、芝麻饼粉碎后的混合物）的比例拌匀堆沤7～10d酵解而成。
所述植物营养素为活性矿物质和微量元素，所述活性矿物质为钾长石粉，微量元素为硼、锌、镁，所述植物营养素是将数7～13重量份的钾长石粉与1～5重量份的微量元素混匀制备而成，所述微量元素硼、锌、镁的重量份比为（1～3）:（0.3～0.7）:（0.3～0.7），优选地所述植物营养素是将10重量份的钾长石粉与3重量份的微量元素混匀制备而成，且所述微量元素硼、锌、镁的重量份比为2:0.5:0.5。所述钾长石粉、硼、锌、镁均过120目筛。
本发明还提供所述含核心生防菌素有机肥在作物种植中的应用。
所述应用具体为在作物种植过程中作基肥（沟施或穴施或撒施）或作追肥使用。用量为300～1000kg/hm2，可根据不同的作物和土壤肥力，酌情增减。
本发明的优点在于：
1、本发明含核心生防菌素的有机肥中所含微生物种类及其搭配合理，哈茨木霉能产生多种蛋白酶和拮抗物质，能迅速在植物根际定植形成“保护膜”，而刺孢吸水链霉菌能产生多肽类抗生素，当它们搭配后，能增强有益微生物的蛋白酶活性、拮抗和直接杀死作物病原菌的能力，有效预防或减轻作物因连年重茬种植所带来的病虫危害，特别是对烟草花叶病［包括烟草普通花叶病Tobacco mosaic virus(TMV)和黄瓜花叶病Cucumber mosaic virus(CMV）］和茄科类花叶病（obacco mosaic virus），以及由半知菌亚门的链格孢菌[Alternariaalternata(Fries)Keissler]侵染所引起的赤星病等的防治有特效。
2、本发明含核心生防菌素的有机肥所含核心生防菌素的制备方法先进科学，简便可行，菌种孢子数含量高，活性强，存活时间长。
3、本发明含核心生防菌素的有机肥通过添加核心生防菌素，使土壤中有益微生物区系分布及定植繁衍的微环境得到了改善，大量衍生物的产生在一定程度上螯合或阻断了重金属对作物的直接危害，具有微生物修复土壤污染的功能。
4、本发明含核心生防菌素的有机肥添加的茶皂素具有的驱避害虫和生物素的作用，其本身就是很好的生物农药，还能刺激作物生长，并对于难以防治的地下虫害，如地老虎、蚯蚓、线虫等具有有效的杀灭作用，而且不会造成土壤污染，有利于环境保护。
5、本发明含核心生防菌素的有机肥中含有的有机质在土体中与无机胶体结合形成有机-无机胶体复合体，促进土壤团粒结构的形成，具有改善土壤理、化性能，增强土壤保水、保肥能力的功效，其中的有机质含有大量的可供植物直接吸收利用的营养物质，具有良好的稳定植物细胞酸碱度和提高作物自身抗逆的能力。
6、本发明含核心生防菌素的有机肥为粉状或颗粒状剂型，施用方法简便实用，在种植田土中做底肥沟施或穴施或撒施，也可用作追肥。
7、本发明含核心生防菌素的有机肥的田间应用效果好：将本本发明含核心生防菌素的有机肥以300kg/hm2做底肥沟施，225kg/hm2做烟苗移栽时的穴肥，其整个烟草的全生长期可不必再追肥，与采用同样方法施用等量的浓度为30%的氮、磷、钾比例为8:11:11的复合肥相比，使用本发明的肥料产品，烟株根系发达，单叶重增加11%，适时落黄色泽好，提早成熟5天，烟草花叶病减少50%，赤星病减少28%，经烘烤后上等烟叶比例增加23%，香味增加，吸味品质提高，产量达到3270kg/hm2，比对照增产13%，且耐储藏。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1核心生防菌素和茶皂素的制备和应用
1核心生防菌素制备
1.1本发明的核心生防菌素其有效成分为哈茨木霉（harzianum）8.5×108cfu/g和刺孢吸水链霉菌(hygrospinocus var.beigingenis)4.0×108cfu/g，总有效活菌数为12.5×108cfu/g。其中哈茨木霉（harzianum）购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号：1511C0001ACCC30371，刺孢吸水链霉菌(hygrospinocus var.beigingenis)购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号：1511C0001ACCC40052。
1.2核心生防菌素的制备过程如下：
1）刺孢吸水链霉菌孢子粉的制备：
①斜面培养：将刺孢吸水链霉菌的原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在29℃条件下培养48h，
②摇床培养：将步骤①培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在pH值7.0、温度为30℃条件下，160r/min摇床培养48h，
③发酵罐培养：将步骤②培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在pH值7.0、罐压0.5kg、温度为30℃、通风量1:0.8条件下，培养48h后，菌数大于1.0×1010个/mL，80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液，
④将步骤③中得到的发酵液，经过浓缩干燥制备成刺孢吸水链霉菌孢子粉，
其中，步骤①所述的斜面培养基的配方如下：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、水1000mL、琼脂15g，
其中，步骤②所述的液体培养基配方如下：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、K2HPO40.5g、MgSO40.2g、水1000mL，
其中，步骤③所述的发酵罐培养基配方如下：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg、加水至600kg。
2）哈茨木霉孢子粉的制备：
a将哈茨木霉的原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28℃条件下培养48h，
b摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在pH值7.0、温度为30℃条件下，180r/min摇床培养24h，
c发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在pH值7.0、罐压0.5kg、温度为28℃、通风量为1:0.8，在培养48h后，菌丝体约占总体积的20%时终止发酵，进行固体发酵产孢，
d固体发酵产孢：将步骤c经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养48h，使其产孢量达到90%，
e将步骤d中产孢后的培养基浸在清水，从而得到哈茨木霉孢子悬浮液，
f将步骤e中得到的哈茨木霉孢子悬浮液浓缩干燥制备成哈茨木霉孢子粉，
其中，步骤a所述的斜面培养基的配方如下：葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g、水1000mL，pH自然，
其中，步骤b所述的液体培养基配方如下：白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g、水1000mL，
其中，步骤c所述的发酵罐培养基配方如下：淀粉12kg、豆饼粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠0.12kg、加水至600kg，
其中，步骤d所述的固体发酵培养基配方如下：固体料与水的重量比为1:0.8，其中，所述固体料由如下重量百分比的组份组成：棉籽壳25%、玉米粉10%、麸皮65%。
3）按比例与酶活物质混匀
将步骤1）制备的刺孢吸水链霉菌孢子粉、步骤2）制备的哈茨木霉孢子粉按照4:8.5的比例混合，加入到酶活物质中。所述酶活物质为蛋白粉和活性酶，且蛋白粉和活性酶的重量份比为3:2。混匀即得核心生防菌素，其中哈茨木霉的有效活菌数为8.5×108cfu/g，刺孢吸水链霉菌的有效活菌数为4.0×108cfu/g，总有效活菌素为12.5×108cfu/g。
2茶皂素的制作
茶皂素（Tea Saponin）是从野生山茶果中提炼的三萜类皂苷物质。本发明的茶皂素采用水提醇沉法提取（即水提取之后再醇沉）。所述水提的工艺条件为浸提温度60℃，液固比10:1，浸提时间2h，浸提次数3次，混合既得茶皂素浸提液。所述醇沉的工艺条件为乙醇浓度90%，乙醇与茶皂素浸提液体积比4:1，醇沉温度75℃，醇沉时间2.5h后既得茶皂素。
本实施例将核心生防菌素与茶皂素按重量比1:1的比例混合后，作为核心生防菌素混合体进行应用。
3核心生防菌素及茶皂素的应用
3.12012年在湖南省宁远县中和镇新淌头村采用上述的核心生防菌素混合体进行试验，实验面积5亩，土壤肥力中等，土壤类型属黄泥田。
3.2在烟叶作物上进行试验，品种为“湘烟4号”，是由中南站、湖南永州市烟草公司和湖南中烟共同选育，在全国区试、生产示范和工业评价中表现突出。试验田设有核心生防菌素实验区3亩和对照处置区2亩。分别进行定标观察，记录取样。
3.3试验方法
3.3.1核心生防菌素混合体试验田：将核心生防菌素混合体分2次使用，即第一次进行条施或沟施基肥时将配制好的母液兑水施于沟中（畦面开沟），同时基肥的量与对照区相比减少25%。即烟草专用复合肥（总养分≥30%（8-11-11），购自湖南金叶众望科技股份有限公司）390kg/hm2，对照区为525kg/hm2。第二次于移栽后35天左右，将母液兑水叶面喷施一次。
3.3.2对照试验田：第一次施基肥与施用核心生防菌素混合体的试验田同时进行，即烟基专用肥每亩525kg/hm2，其他肥料相同。
3.3.3施肥时间：
a.施基肥的时间为2012年3月2日；
b.第二次喷施核心生防菌素混合体的时间为2012年4月18日。
3.3.4试验记录方法
各试验田内选定烟株50棵进行观察，记录，然后取样。
3.4生产阶段记录
3月12日移栽，3月15日返苗，伸根期为3月15日-4月29日，5月1-3日现蕾，5月18日打顶，5月28日采收下部烟。
产量、性状及等级对比见表1，生理性状记录见表2。
表1应用核心生防菌素混合体与对照的烟草产量、性状及等级对比结果
表2应用核心生防菌素混合体与对照的烟草生理性状记录
4试验结果
田间观察结果表明，生育期、团棵期与初蕾期无明显的差别，打顶后至成熟期有较大差别，主要表现为：
4.1成熟较对照表现更集中，分层落黄好。
4.2抗病能力，特别抗花叶病和赤星病能力较强，核心生防菌素区与对照区的发病率分别为0.26%和1.3%。地下害虫危害明显减轻，烟苗成活率高达98%。
4.3从表2可以看出，使用核心生防菌素混合体在基肥减少25%用量的情况下，其烟株高度和最大叶片与对照差别不大，而茎围和有效叶片数均高于对照区。
4.4从上表1可以看出，施用核心生防菌素混合体具有促进烟株健康生长发育的作用，其效果显著优于常用肥料。
实施例2含核心生防菌素的有机肥的制备
1制备
1.1含核心生防菌素的有机肥的组成（按重量份计）核心生防菌素5份，茶皂素5份，有机质82份，植物营养素8份。
其中核心生防菌素的制备方法见实施例1中的“1核心生防菌素制备”，茶皂素的制备方法见实施例1中的“2茶皂素的制作”。所述有机质是由菜籽饼、豆饼、芝麻饼粉碎混匀后，利用微生物发酵而成，菜籽饼、豆饼、芝麻饼的重量份比为5:3:2。微生物发酵是先将枯草芽孢杆菌（购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号为1511C0001ACCC10118）、哈茨木霉（哈茨木霉购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号为1511C0001ACCC30371）、米曲霉（购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号为1511C0001ACCC30155）和酵母（购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，平台资源号为1511C0001ACCC21092）分别按照有效活菌素5.0×108、1.0×108、1.0×108、3.0×108的比例混合制成的核心料，然后按照1kg核心料与1～2t底物（菜籽饼、豆饼、芝麻饼粉碎后的混合物）的比例拌匀堆沤7～10d酵解而成。
所述植物营养素为活性矿物质和微量元素，所述活性矿物质为钾长石粉，微量元素为硼、锌、镁，所述植物营养素是将10重量份的钾长石粉与3重量份的微量元素混匀制备而成，且所述微量元素硼、锌、镁的重量份比为2:0.5:0.5。所述钾长石粉、硼、锌、镁均过120目筛。
2含核心生防菌素的有机肥的制备
按核心生防菌素5份，茶皂素5份，有机质82份，植物营养素8份的重量份数混合搅拌均匀，经特殊的加工工艺造粒后，获得含核心生防菌素的有机肥。
实施例3含核心生防菌素的有机肥的施肥效果试验
长期以来由于大量施用化肥，有机肥用量越来越少，甚至不用。由于化肥开始使用时确实对作物增产起到明显作用，人们就忽略有机肥施用。导致土壤板结，透气性保水性差，有机质下降，病虫害明显增加，作物品质下降，特别是蔬菜、水果类产品更是失去了原有的品味。因此越来越多的人开始了有机肥特别是生物有机肥生产和使用技术研究，目前已有许多品牌的生物有机肥面市，且占有相当比例。但在速生叶菜类中生物有机肥的应用并不多见，如何评价它们的肥效还缺乏有利的试验数据。为此本试验从田间小区试验出发，探索生物有机肥在小白菜生产中的可用性。
1试验材料与方法
1.1试验地点：试验在湖南省永州市零陵区菱角塘镇江边村3组罗贤云蔬菜地。
1.2供试土壤：试验地土种为河砂泥，土壤有机质25.6g/kg，碱解氮153mg/kg，有效磷13.2mg/kg，速效钾94mg/kg，pH值6.0。
1.3供试肥料：生物有机肥为本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥，复合肥为48%阿康复合肥（16-16-16)，含硝态氮，俄罗斯阿康公司生产，北京永盛丰农资有限公司经销。
1.4供试作物及品种
作物为小白菜，品种为上海青，湖南省农科院蔬菜研究所提供。
1.5主要栽培管理措施：选用抗热、抗风雨、抗病、生长迅速的小白菜良种，培育适龄壮苗，及时移栽，合理密植，加强肥水管理，及时中耕除草，适时防治病虫等。
1.6试验方法：试验共设计4个处理，重复3次，计12个小区，随机区组排列，小区面积33.3m2。
①处理一施用含核心生防菌素的有机肥：撒施48%阿康复合肥750kg/hm2+本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥2250kg/hm2作基肥，45kg/hm2尿素作追肥。
②处理二施用灭活生物有机肥：撒施48%阿康复合肥750kg/hm2+灭活后本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥2250kg/hm2作基肥，45kg/hm2尿素作追肥。灭活方式为：用干热灭菌箱在160℃条件下维持2小时进行灭菌。
③处理三CKⅠ施用复合肥：撒施48%阿康复合肥750kg/hm2作基肥，45kg/hm2尿素作追肥。
④处理四CKⅡ空白对照:不施有机肥，不施化肥。
1.7田间管理：遵循“最适”和“一般”的原则，与大面积生产一致。其它管理措施各个处理完全保持一致，且符合生产要求，由专人负责同日内完成。
1.8试验实施情况：供试小白菜上海青于7月25日播种育苗，7月28日出苗，8月5日按不同处理施基肥，8月6日移栽，苗龄12天，每小区栽16行，每行栽52株，共832株，折24960株/hm2，由专人负责在同一天内栽完。移栽返青后于8月20日撒施尿素45kg/hm2做追肥（处理四CKⅡ空白对照除外），8月15日由专人负责除草一次，8月16日用2%阿维菌素乳油1000倍液防治一次小菜蛾和菜青虫，晴天早、晚全田喷灌一次，并保持土壤湿润，其他管理措施各处理完全保持一致，且符合生产要求，由专人负责同日内完成。供试小白菜于9月1日田间测产，9月3日收获。每个处理小区单收、单计产量。
2试验结果与分析
2.1对小白菜根茎和地上部生长的影响：试验调查表明，含核心生防菌素的有机肥对小白菜生物性特性和经济性状有较大的影响。株高：处理一平均株高比处理二增高0.8cm，比处理三CKⅠ施复合肥增高1.0cm，比处理四（空白对照）增高6.6cm。叶长：处理一平均叶长比处理二增长1.6cm，比处理三增长2.1cm，比处理四增长6.5cm。叶宽：处理一平均叶宽比处理二增加0.3cm，比处理三增加0.4cm，比处理四增加1.5cm。完全叶数：处理一平均完全叶数比处理二增加0.2片，比处理三增加0.4片，比处理四增加1.2片。根颈粗：处理一平均根颈粗比处理二增加0.1cm，比处理三增加0.2cm，比处理四增加0.3cm。单株鲜重：处理一平均单株鲜重53.27g，比处理二增加10.06g，比处理三增加12.09g，比处理四增加29.89g。
2.2对小白菜产量的影响：表3显示：处理一平均产量13290kg/hm2，比处理二增加2505kg/hm2，增产率为23.2%，比处理三3015kg/hm2，增产率为29.3%，比处理四（空白对照）增加6210kg/hm2，增产率为87.7%。经F检验，处理间差异极显著（表4）。新复极差多重比较（表5），处理一与处理二比较，增产效果达显著水平，处理一与处理三和处理四比较，增产效果均达极显著水平。
表3不同施肥处理对小白菜产量的影响
表4不同施肥处理对小白菜产量影响的F检验表
| 变异来源 | 自由度 | 平方和 | 均方 | F值 | F0.05 | F0.01 |
| 处理间 | 3 | 651.153 | 217.051 | 24.919 | 4.757 | 9.780 |
| 重复间 | 2 | 0.852 | 0.426 | 0.049 | 5.143 | 10.925 |
| 误差 | 6 | 52.262 | 8.710 | － | － | － |
| 总平方和 | 11 | 704.267 | － | － | － | － |
表5不同施肥处理对小白菜产量影响的新复极差多重比较（Se＝1.704）
2.3对小白菜经济效益的影响：试验结果表明，小白菜按当地当时市场价格4元/kg，本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥按1000元/t，48%阿康复合肥按4400元/t，尿素按2800元/t计，处理一和处理二的肥料成本5670元/hm2，加上施肥的人工成本300元/hm2，合计成本5970元/hm2，处理三合计成本3420元/hm2。处理一比处理三分别增加纯收入9510元/hm2，投入产出比达到1:4.7，经济效益十分明显。
2.4对小白菜还原糖、维生素C和粗纤维含量的影响：还原糖是人类营养中最重要的糖源之一，小白菜还原糖含量是其营养价值的重要指标之一。表6显示，处理一小白菜还原糖含量明显增加，各个处理的小白菜还原糖含量比处理四（空白对照）增加9.2%～34.84%，平均增加20.1%，其中处理一分别比处理二和处理三增加15.9%和23.4%，达极显著水平。说明含核心生防菌素的有机肥能显著提高小白菜的还原糖含量和营养价值。
表6显示，各个处理的维生素C含量比处理四（空白对照）增加7.7%～13.7%，平均增加10.8%；其中处理一分别比处理二和处理三增加4.1%和5.6%，说明生物有机肥能显著提高小白菜维生素C的含量，从而提高其品质。
粗纤维含量是评价蔬菜营养价值重要指标。表6显示，各个处理的小白菜粗纤维含量比处理四（空白对照）降低11.6%～23.4%，平均降低17.1%。其中处理一降低了23.4%，达极显著水平，分别比处理二和处理三降低了9.4%和16.5%，达显著水平。说明处理一能显著降低小白菜粗纤维含量，提高品质。从口感评定上看，施用有机肥后小白菜口感好，商品性好，市场销售好。
表6含核心生防菌素的有机肥对小白菜内在养分含量的影响
2.5对改良土壤的效应：从播前和收获后土壤检测结果表明，各处理土壤pH值相同，速效氮、磷、钾及有机质含量均有明显变化，处理一施生物有机肥收获后的氮、磷、钾及有机质含量高于处理二、处理三和处理四；处理二的速效氮、磷、钾及有机质含量也高于处理三和处理四，表明处理一和处理二在自然环境条件下对改良土壤、培肥地力，提高肥料利用率有较好的作用，且处理一优于处理二（见表7）。
表7播种前及收获后土壤主要养分含量
3试验结论
3.1施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥比施复合肥更能促进上海青小白菜的生长发育，同时对小白菜内在化学成分含量有一定的提高。其中还原糖含量比施复合肥增加24.3%，维生素C含量比施复合肥增加5.3%，粗纤维含量比施复合肥降低16.2%，使小白菜的产量和品质得到较大的提高。投入产出比达到1:4.7，经济效益明显。
3.2施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥可加快上海青小白菜的生长出叶速度，平均增长了1片叶，且根茎增粗，单株鲜重增加，改善了上海青小白菜的主要经济性状，并对提高产量有极显著效果。产量平均比施复合肥增加3015kg/hm2，增产率为29.3%，达到极显著水平。
3.3施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥，能提高土壤有机质含量8.09%～10.13%，对培肥地力，提升土壤有机质含量，改善土壤理化性能具有较好的作用。这是由于施用生物有机肥后，根际有效微生物大量增加，其活动不仅可分泌较多的维生素和生长激素等，促进上海青小白菜的生长，而且能促进土壤有机物分解转化，增强土壤肥力，提高肥料利用率。本产品同时具有生物驱赶和杀灭地下害虫的能力，提高了小白菜的成苗率，增强了抗逆性，促进了小白菜的健康发育。
实施例4本发明的含核心生防菌素的有机肥施用效果试验
1材料与方法
1.1供试菌肥名称及来源：本发明实施例2制备的含核心生防菌素的有机肥；抗枯黄萎菌肥，有效活菌素≥10.0×108cfu/g，湖北省老河口市宝丰源生物科技有限公司产销；烟草专用复合肥，总养分≥30%（8-11-11），即浓度为30%，氮、磷、钾的比例为8:11:11，购自湖南金叶众望科技股份有限公司。烤烟品种为湘烟4号。
1.2试验处理：试验采用随机区组设计，试验涉及2种生物肥和1个对照，按常规施肥方法，每处理3次重复，单行区，每小区植烟30株。将分别本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥和抗枯黄萎菌肥450kg/hm2做底肥沟施，225kg/hm2做烟苗移栽时的穴肥，在烟草的全生长期不再追肥。以采用同样方法施用等量的烟草专用复合肥作为对照（CK）。
1.3观察记载：对叶面积指数、株高、茎围等农艺性状进行观测。
各小区挂牌采烤，烟叶分级按国家40级标准分别分级、称重计产。考核指标：产量、产值、均价、上等烟比例、中上等烟比例。每处理取中桔三（烟叶等级）0.5kg做烟叶品质常规分析，包括：蛋白质、烟碱、还原糖、总糖、施木克值、K含量。
2结果分析
2.1不同处理对烟株生物学性状的影响：通过对试验处理的烟株生物学性状调查（表8）可以看出，各处理烟株生长发育有先后，但最终的叶面积指数、株高和茎围差异不大。经方差分析也没有表现出差异显著性。
表8不同肥料处理对烟草生物学性状的影响
2.2不同处理对烤烟产量的影响：含微生物有机肥的施用对烤烟的产量有一定的影响（表9），各处理产量由高到低的顺序依次为本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥、抗枯黄萎菌肥和对照。经过方差分析和多重比较可以看出：不同处理间产量达到显著水平，本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥、抗枯黄萎菌肥与对照差异达到显著水平，本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥与对照达到极显著水平。据大田观察综合分析，地下害虫的危害明显减轻，烟苗成活率高达98%。
表9不同肥料处理烤烟产量比较
注：a、b、c表示处理组之间差异的极显著性（5%）测定，ab表示该处理组与a、b处理组间差异不显著，A、B表示处理组之间差异的显著性（1%）测定，AB表示该处理组与A、B处理组间差异不显著。
2.3不同处理对烤烟质量的影响：通过挂牌采烤，分级计算，各个处理不同等级烟叶所占百分比情况见表10。结果表明2种微生物肥料对烤烟的等级表现较好的作用，抗枯黄萎菌肥、本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥的上等烟比例比对照分别提高14.7%和22.7%，2种微生物肥料的中、上等烟比例比对照分别提高2.9%和9.5%。
本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥对烤烟的影响在产值上表现也相当明显，实施例2的含核心生防菌素的有机肥、抗枯黄萎菌肥的小区产值分别比对照高33.38%和28.64%，均价由高到低的顺序依次是本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥、抗枯黄萎菌肥和对照。
表10不同肥料处理对烤烟质量的影响
| 处理 | 上等烟/% | 中等烟/% | 下等烟/% | 产值/元·hm-2 | 均价/元·kg-1 |
| CK对照 | 34.7 | 49.1 | 16.2 | 14869.80 | 9.25 |
| 抗枯黄萎菌肥 | 49.4 | 37.3 | 13.3 | 19128.15 | 9.78 |
| 实施例2的肥料 | 57.4 | 35.9 | 8.2 | 19833.15 | 10.72 |
2.4含微生物有机肥肥对烤烟内在化学成分的影响：从不同处理对烟叶的内在化学成分的影响（表11）来看，数值虽有一定的变动，但总体上来说变幅不大，都在优质烟含量范围。
表11不同肥料处理对烟叶内在化学成分的影响
2.5含微生物有机肥肥对土壤主要养分含量的影响烤烟采烤结束后，立即对不同处理土壤中的氮、磷、钾和有机质含量进行了测定，结果见表12。
表12不同肥料处理对对土壤主要养分含量的影响
通过测定结果表明，供试的2种生物菌肥都有一定的增肥效果，有机质、速效钾、碱解氮和有效磷的含量都高于对照。由此说明微生物菌肥施到土壤后，通过一系列的生命活动，提高了土壤中主要的肥力要素。
从试验结果来看，2种含微生物有机肥对烤烟的生物学特性没有表现出明显的效应。但试验中，2种含微生物有机肥对烤烟的产量、质量和均价等指标都表现出明显的积极作用，这主要表现在青烟叶在烘烤时的烘烤特性，2种含微生物有机肥表现好的处理烟叶容易烘烤，烤出的高等级烟叶比例大，相比之下，对照的有一部分烟叶烘烤结束变成了等外级。
实施例5含核心生防菌素的有机肥的施用效果试验
为探索生物有机肥料在主要农作物上的应用效果，根据湖南省农业厅土肥站的安排，湖南省澧县土肥站选择了本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥和“森林人牌”生物有机肥，在油菜上进行了生物有机肥的田间小区对比试验，现将试验结果总结如下：
1、试验材料
1.1试验地点：湖南省澧县孟溪镇百胜村于继勋的责任田内。
1.2供试品种：华湘油10号（湖南亚华种业科学研究院提供）。
1.3供试肥料：本发明实施例2生物有机肥；森林人牌生物有机肥（高效三合一），沧州市绿园肥业有限公司生产。
2、试验方法
2.1试验设计：试验区设置3个处理，3次重复，共9个小区，随机区组排列，小区为长方形，面积33.3m2。前作晚稻，油菜于2011年9月11日播种，10月15日单株移栽，2012年4月18日收获，种植密度112500株/hm2。试验地四周保护行1.5cm宽。
处理1（CK1）：土杂肥15000kg/hm2作基肥条施；
处理2（CK2）：森林人牌生物有机肥1500kg/hm2作基肥条施；
处理3：本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥1500kg/hm2作基肥条施。
2.2田间管理：各处理的其他田间管理措施一致。蕾薹期追施复合肥375kg/hm2，幼苗期、蕾薹期各喷施0.2%硼肥一次，盛花期喷施80%多菌灵1000倍液防治菌核病。
调查时，每小区按五点取样法取平均值，收获时，各小区单收、单打、单晒、单独计算产量。
3、试验结果与分析
3.1不同处理对油菜经济性状的影响：对经过不同处理的油菜株高、有效分枝数、千粒重等经济性状进行调查并记录，结果见表13、表14。
表13不同处理对油菜经济性状的影响结果
表14不同处理间油菜经济性状的比较结果
由表14可知，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥的处理3与其他对照相比，经济性状得到较大改善。与施用森林人牌生物有机肥的处理2相比，处理3的株高、单株有效分枝数、单株有效角果数、每角粒数和千粒重分别增加了1cm、0.4个、7.2个、1.3粒和0.2g。与施用土杂肥的处理1相比，处理3的株高、单株有效分枝数、单株有效角果数、每角粒数和千粒重分别增加了3cm、1.1个、25.7个、1.7粒和0.3g。由此可见，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥能很好的改善油菜的经济性状。大田观察调查评估结果表明，其地下害虫危害明显减轻，油菜成活率高达97%。
3.2不同处理对油菜产量的影响：对经过不同处理的各小区油菜产量进行统计，结果见表15。
表15不同处理对油菜产量的影响结果
表16不同处理对油菜产量的影响方差分析表
| 变异来源 | 自由度 | 平方和 | 均方 | F值 | 显著水平 |
| 重复间 | 2 | 2.3356 | 1.1678 | 9.915 | 0.0282 |
| 处理间 | 2 | 3.1622 | 1.5811 | 13.425 | 0.0168 |
| 误差 | 4 | 0.4711 | 0.1178 | / | / |
| 总变异 | 8 | 5.9689 | / | / | / |
表17不同处理对油菜小区产量差异显著性分析（LSD法）
由表15可知，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥的处理3比施用土杂肥的处理1增产270kg/hm2，增产率为16.1%，比施用森林人牌生物有机肥的处理2增产300kg/hm2，增产率达到10.9%。通过表16、表17的差异显著性分析可知，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥能促进油菜高产，增产效果极显著。
3.3不同处理对油菜经济效益的影响：土杂肥按100元/吨、森林人牌生物有机肥按1200元/吨、本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥按1000元/吨、油菜籽按市场收购均价4.2元/kg计算，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥的处理3比施用土杂肥的处理1增加纯收入1755元/hm2，比施用森林人牌生物有机肥的处理2增加纯收入1560元/hm2，具体结果见表18。
表18不同处理对油菜经济效益的影响结果
4、总结
上述试验结果表明，本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥与传统的土杂肥及其他品牌生物有机肥相比，施用本发明实施例2的含核心生防菌素的有机肥不仅能改善油菜的经济性状，增强油菜抗倒伏、抗病虫害等抗逆能力，而且能促进油菜高产优质，达到增产增收的目的，在生产上具有较好的应用效果，值得推广。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种核心生防菌素，其特征在于，其有效成分为哈茨木霉(harzianum)和刺孢吸水链霉菌(hygrospinocus var.beigingenis)；
哈茨木霉的有效活菌数为8.0×108～9.0×108cfu/g，刺孢吸水链霉菌的有效活菌数为2.0×108～6.0×108cfu/g，总有效活菌素为10.0×108～15.0×108cfu/g。
2.根据权利要求1所述的核心生防菌素，其特征在于，哈茨木霉的有效活菌数为8.5×108cfu/g，刺孢吸水链霉菌的有效活菌数为4.0×108cfu/g，总有效活菌素为12.5×108cfu/g。
3.根据权利要求1～2任意一项所述的核心生防菌素，其特征在于，所述核心生防菌素还含有酶活物质，所述酶活物质为蛋白粉和活性酶，且蛋白粉和活性酶的重量份比为(2～4):(1～3)。
4.制备权利要求1～3任意一项所述核心生防菌素的方法，其特征在于，包括如下步骤：对哈茨木霉和刺孢吸水链霉菌分别进行斜面培养、摇床培养及发酵罐培养后，将得到的发酵液浓缩干燥得到孢子粉，按比例与酶活物质混匀即得核心生防菌素。
5.含权利要求1～3任意一项所述核心生防菌素的有机肥，其特征在于，由以下重量份的组分组成：核心生防菌素3～7份，茶皂素3～7份，有机质75～89份，植物营养素5～11份。
6.根据权利要求5所述的含核心生防菌素的有机肥，其特征在于，所述的茶皂素采用水提醇沉法提取。
7.根据权利要求5所述的含核心生防菌素的有机肥，其特征在于，所述有机质是由菜籽饼、豆饼、芝麻饼粉碎混匀后，利用微生物发酵而成，其中，菜籽饼:豆饼:芝麻饼的重量份比为(3～7):(2～4):(1～3)。
8.根据权利要求5所述的含核心生防菌素的有机肥，其特征在于，所述植物营养素为活性矿物质和微量元素，所述活性矿物质为钾长石粉，微量元素为硼、锌、镁，所述植物营养素是将数7～13重量份的钾长石粉与1～5重量份的微量元素混匀制备而成，所述微量元素硼、锌、镁的重量份比为(1～3):(0.3～0.7):(0.3～0.7)。
9.权利要求5～8任意一项所述含核心生防菌素的有机肥在作物种植中的应用。
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