CN103439449B - 一种用于补肺活血的药物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于补肺活血的药物的检测方法，所述药物由黄芪、赤芍和补骨脂制成，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定。本发明提供的检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪和/或赤芍的含量。此外，所述检测方法还包括检测药物性状和赤芍显微鉴别。本发明的检测方法可以有效控制药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其临床疗效。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，尤其涉及一种用于治疗肺心病、慢性阻塞性肺疾病的补肺活血药物的检测方法。
背景技术
复方中药是中医临床用药的主要形式，是中医药学的特色与精髓。中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，其化学成分的多样性与复杂性是其疗效的物质基础，建立符合中医药特点的现代质量控制体系，攻克中药质量分析与评价的难题，改进中药现有质量控制方法已成为人们积极研究的课题。
现代中药制剂“补肺活血胶囊”（国药准字Z20030063）具有益气活血，补肺固肾之功效，适用于肺肾气虚血瘀症。该药物主要由君药黄芪、臣药赤芍和佐药补骨脂制成，剂型为胶囊剂。方中君药黄芪，甘、微温，入肺脾二经。益肺健脾，培土生金，大补肺肾之气。臣药赤芍，苦、平，入肝、脾二经，能通血脉，化瘀血，行血中之滞。补骨脂，辛、大温，入脾、肾经。补肾助阳，壮火益土，纳气平喘。与黄芪合用，一补后天，两顾脾胃；二补先天，壮之阳，消阴翳。使肾气充足，摄纳正常，气归下元，虚喘自平；使肾阳充足，温煦有根，腰膝酸软、肢寒畏冷等症状得以改善。与赤芍相伍，温通血脉，是为佐药。三药合用，益气化瘀，温阳纳气，具有协同之功效。而每味药物归经直达所所需之脏，故可不用使药。纵观全方，益气化瘀、补肺固肾，具有恢复脏腑功能的作用，为治本之方。
对于这类药物的成分含量检测，2012年公开了胶囊剂的芍药苷含量测定方法（谢清春等人，“补肺活血胶囊中芍药苷的含量测定”，《中药材》，2012年第35卷第8期），该方法采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，但是未涉及其它成分的测定，因此存在检测指标不全面、未对其有效成分的含量进行控制等不足。
因此，目前仍需要提供一种能够简单、准确且全面地检测药物活性成分含量的方法，以便能够更有效控制和保证这种药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其临床疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于补肺活血的药物的检测方法，所述检测方法能全面有效地控制此类药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其疗效。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种用于补肺活血的药物的检测方法，按重量份数计，所述药物由黄芪38-42份、赤芍38-42份和补骨脂16-24份制成，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定，包括以下步骤：
1）制备对照品溶液：取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合液，即得；
2）制备供试品溶液：取所述药物约3g，加沸点30～60℃的石油醚20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
3）测定：吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选地，所述用于补肺活血的药物由黄芪40份、赤芍40份和补骨脂20份制成；更优选地，所述用于补肺活血的药物根据以下制备方法制成：
1）取部分赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80℃下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达60%（体积比），充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80℃下相对密度为1.35-1.40；
2）加入赤芍细粉，搅拌均匀，进行干燥与粉碎；
3）采用90%乙醇（体积比）制粒。
其中，所述步骤1）中粉碎的赤芍的质量优选为赤芍总质量的1/4；优选地，所述步骤3）还包括制粒后，干燥，然后加辅料适量，混匀；进一步优选地，所述辅料为滑石粉。
所述用于补肺活血的药物可以为片剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液，优选为胶囊剂。更优选地，所述用于补肺活血的药物为补肺活血胶囊。在制成胶囊的情况下，本文提供的检测方法为检测胶囊的内容物。
为进一步准确、全面检测所述药物的活性成分含量，本发明提供的上述检测方法还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪的含量，包括以下步骤：
1）制备供试品溶液：将所述药物研细，取1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
2）制备对照品溶液：称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；
3）测定：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl～20μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为32:68的乙腈-水；
流速：1mL/min；
检测：蒸发光散射检测器；
理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
以黄芪甲苷计，所述药物含黄芪不得少于0.60mg/0.35g药物。
或者，本发明提供的上述检测方法还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物中赤芍的含量，包括以下步骤：
1）制备对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得；
2）制备供试品溶液：取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，每分钟3000转离心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
3）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为60:40的0.05mol∕ml磷酸二氢钾溶液-甲醇；
流速：1mL/min；
紫外检测器检测波长：230nm；
理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
以芍药苷计，所述药物含赤芍不得少于4.5mg/0.35g药物。
或者，本发明提供的检测方法可以同时包括补骨脂薄层鉴定以及黄芪和赤芍的含量的检测。具体而言，本发明的检测方法包括以下步骤：
一、补骨脂薄层鉴定
1）制备对照品溶液：取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合液，即得；
2）制备供试品溶液：取所述药物约3g，加沸点30～60℃的石油醚20ml，超声处理15分钟（功率250W，频率40kHz），滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
3）测定：照中国药典2010年版一部附录ⅥB的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
二、黄芪含量检测
1）制备供试品溶液：将所述药物研细，取1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次，所述正丁醇体积分别为30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
2）制备对照品溶液：称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；
3）测定：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl～20μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为32:68的乙腈-水；
流速：1mL/min；
检测：蒸发光散射检测器；
理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；
优选地，所述药物含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.60mg/0.35g药物。
三、赤芍含量检测
1）制备对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得；
2）制备供试品溶液：取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，每分钟3000转离心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
3）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为60:40的0.05mol∕ml磷酸二氢钾溶液-甲醇；
流速：1mL/min；
检测波长：230nm；
理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000；
优选地，所述药物含赤芍以芍药苷计，不得少于4.5mg/0.35g药物。
此外，本发明提供的上述检测方法还包括检测药物性状，本发明的药物（制成胶囊的情况下为硬胶囊内容物）为棕黄色至棕褐色的细颗粒和粉末；气微香，味微酸，苦。
并且，上述检测方法还包括赤芍显微鉴别：取本发明的药物，置显微镜下观察，草酸钙簇晶直径11～35μm，散在或存在于薄壁细胞中，常数个至数十个排列成行。
此外，上述用于补肺活血的药物如为胶囊剂，应符合胶囊剂项下有关各项规定（中国药典2010年版一部附录ⅠL）。
制得的胶囊通常每粒装0.35g，密封贮藏。使用时为口服，一次4粒，一日3次。
综上，本发明提供了用于补肺活血的药物、特别是补肺活血胶囊的有效成分检测方法。本发明的检测方法能够准确、全面、有效检测补肺活血药物中的有效成分，对其质量进行全面监测，从而更好地确保药物的临床疗效。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1A-1C分别显示了实施例1中采用高效液相色谱对对照品、供试品和阴性对照溶液进行黄芪含量测定的色谱图；
图2显示了实施例1中采用高效液相色谱对黄芪甲苷对照品溶液进行测定的线性关系图；
图3A-3C显示了实施例1中采用不同色谱柱对供试品溶液中黄芪含量的测定结果，其中3A为Dikma Diamonsil C18，3B为资生堂C18ACR，3C为Ultimate XB-C18；
图4A-4C显示了实施例3中赤芍含量测定方法的专属性试验结果，其中4A为对照品，4B为供试品，4C为阴性供试品；
图5显示了实施例3中赤芍含量测定方法的线性关系试验结果；
图6A-6J显示了实施例4中制备的不同批次补肺活血胶囊供试品的赤芍显微特征鉴别结果；
图7为显示了实施例5中采用不同提取溶剂的薄层鉴定结果，其中试样1提取溶剂为石油醚（沸点30～60℃），试样2提取溶剂为氯仿，试样3提取溶剂为乙酸乙脂，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
图8为显示了实施例5中采用不同沸点的石油醚的薄层鉴定结果，其中试样1为石油醚（30～60℃），试样2为石油醚（60～90℃），试样3为石油醚（90～120℃），试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
图9为显示了实施例5中采用不同用量的溶剂的薄层鉴定结果，其中试样1为石油醚（30～60℃）10ml，试样2为石油醚（30～60℃）20ml，试样3为石油醚（30～60℃）30ml，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
图10为显示了实施例5中采用不同超声时间的薄层鉴定结果，其中试样1为超声提取10分钟，试样2为超声提取15分钟，试样3为超声提取25分钟，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。其中因超声25分钟，溶液挥干，不能继续后面的检测工作，因此试样3无斑点。
图11A和11B显示了实施例5中补骨脂薄层鉴定结果，其中11A为Merck板，T：21.7℃，RH：42%；11B为手铺板，T：21.6℃，RH：42%；展距8cm；试样1为050504批样品，试样2为050505批样品，试样3为060301批样品，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品，试样5为补骨脂阴性对照。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例中采用的补肺活血药物为以黄芪720g、赤芍720g、补骨脂360g作为原料药，根据以下方法制成胶囊剂：
1）取180g赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80℃下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达60%（体积比），充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80℃下相对密度为1.35-1.40；
2）加入赤芍细粉，搅拌均匀，进行干燥与粉碎；
3）采用90%乙醇（体积比）制粒，干燥，然后加适量滑石粉，混匀后装入胶囊。
在测定时取其内容物。
实施例1黄芪含量测定方法的选择
试验材料
1.仪器Agilent1100高效液相色谱仪；Alltech2000ES
蒸发光检测器；色谱柱：Ultimate XB-C18、Dikma Diamonsil C-18、资生堂C18ACR。
2.试剂乙腈（色谱纯），水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
3.对照品黄芪甲苷（含量测定用，批号110781－200613），购于中检所。
4.供试品100101、100102、100103、100104、100302、100303、100501、100502、100601、100602。
5.黄芪阴性对照品根据上述胶囊的制备方法，不加黄芪制得黄芪阴性对照。
6.色谱柱参照中国药典2010年版一部黄芪含量测定项下的测定方法；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
7.检测方式参照中国药典2010年版一部黄芪含量测定项下的测定方法；选用蒸发光散射检测器进行检测。
8.流动相采用中国药典2010年版一部黄芪的含量测定项中所用的流动相：乙腈－水（32:68体积比）为流动相。
（一）供试品溶液的制备选择
参照补肺活血胶囊的国家药品标准及中国药典2010年版一部黄芪项下，对供试品进行“索氏－回流提取”方法（方法一）、“加热回流法”（方法二）及“超声法”（方法三）的提取考察。具体试验如下：
方法一：取同一批补肺活血胶囊（批号100103），研细，分别取供试品两份，每份约3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流提取，提取液回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按表1回流时间进行了试验并测定黄芪甲苷的含量，测定结果如表1。
表1索氏提取法选择不同提取时间测定结果
从表1结果可知，提取至无色的结果稍有偏高，但两者差异不大，而且提取时间过长，不便于日常检测工作开展。
方法二：取同一批补肺活血胶囊（批号100103），研细，分别取供试品4份，每份约1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按表2回流时间进行了试验并测定黄芪甲苷的含量，结果如表2。
表2加热回流法选择不同提取时间测定的结果
从表2结果可知，回流提取时间每次2小时与每次1小时及第一次1小时，第二次0.5小时，含量测定结果差异不大，每次0.5小时含量测定结果稍偏低。
提取溶剂的比较：
取同一批补肺活血胶囊（批号100103），分别取供试品2份，每份1g，精密称定，按方法二下内容以及表4所用提取时间及提取溶剂体积进行了试验，结果如表3。
表3回流溶剂体积选择的结果
从表3结果可知，使用不同体积提取溶剂所测定的含量结果偏差不大，从环保角度考虑，最后选择50ml甲醇作为提取溶剂所使用的体积。
方法三：取同一批补肺活血胶囊（批号100103），研细，分别取供试品3份，每份约1g，精密称定，加甲醇50ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）提取，滤过，用少量甲醇洗涤滤纸及漏斗，合并洗液和提取液并回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按表3提取时间进行了试验并测定黄芪甲苷的含量，结果如表4。
表4超声法选择不同提取时间测定的结果
从表4结果可知，经比较，超声2小时含量测定结果最高，但图谱显示，杂质较多。
上述实验结果表明：方法一，供试品提取至溶液无色（约7小时）黄芪甲苷含量2.709mg/g、供试品提取5小时2.605mg/g；方法二，供试品提取加热回流时间两次分别2h/2h，黄芪甲苷含量2.721mg/g，供试品提取加热回流两次时间分别为1h/1h，黄芪甲苷含量2.632mg/g，供试品提取加热回流两次时间分别为1h/0.5h，黄芪甲苷含量2.625mg/g，供试品提取加热回流两次时间分别为0.5h/0.5h，黄芪甲苷含量2.417mg/g；方法三，供试品超声提取时间在1-2小时，结果分别为2.446mg/g、2.718mg/g、2.598mg/g。
经上述方法学考察比较，方法一5小时、方法二1.5小时与方法三2小时结果基本一致，偏差不大。考虑到方法一时间较长，方法三超声提取可能会提取出较多的杂质成份，最终确定方法二作为供试品溶液的制备方法，并列入标准正文：
取本品装量差异项下的内容物，研细，取约1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
确定供试品溶液制备方法后，制备对照品溶液：
精密称取黄芪甲苷对照品0.01010g，置20ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀即得（每1ml含黄芪甲苷0.505mg）。
并制备阴性对照溶液：取黄芪阴性对照样品约1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，20ml，20ml，20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液、阴性对照溶液10μl～20μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量。对供试品、对照品和阴性对照溶液按上文发明内容部分所述色谱条件与***适应性试验进行高效液相色谱测定，发现对照品的黄芪甲苷峰达到基线分离，峰形对称，保留时间适中；对照品的黄芪甲苷峰类似对照品，峰形清晰；阴性对照无干扰。参见图1A至1C的色谱图。
（二）方法学验证
1.准确度
取同一批补肺活血胶囊（批号100103，在下文精密度试验中测得含黄芪甲苷为2.623mg/g）供试品9份，其高中低浓度各取3份，低浓度每份0.15g，中浓度每份0.5g，高浓度每份1g，按当前取样含量约1:1分别精密加入黄芪甲苷对照品（低浓度0.4964mg/ml×1ml、中浓度0.5050mg/ml×3ml、高浓度0.4964mg/ml×6ml），按含量测定方法测定，计算黄芪甲苷的回收率。结果低浓度平均回收率为95.0％；中浓度平均回收率为96.2％，；高浓度平均回收率为98.2％，平均RSD为1.7%。见表5。
表5准确度试验结果
结果表明：该方法平均回收率为96.5％，RSD为1.7%(n=9)，说明方法的准确度较好。
2.精密度\重复性试验
取同一批补肺活血胶囊（批号100103），研细，取约1g，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表6。
表6重复性试验结果
结果：六次操作黄芪甲苷含量平均值为2.623mg/g，RSD为1.74％，说明本方法重现性良好。
3.专属性
依供试品溶液的制备方法制备黄芪阴性对照液，进样15μl，结果表明黄芪阴性对照无干扰。
（三）线性关系的考察
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（0.101mg/ml和0.505mg/ml），分别进样10、l5、20μl和5、10、l5、20、25、35μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表7：
表7线性关系的考察结果
以进样量（μg）的对数（X）为横坐标，峰面积的对数（Y）为纵坐标，线性回归方程为：y=1.6787x+6.3590，r2=0.9996。结果表明：黄芪甲苷在1.0100～10.1000μg的范围内，线性关系良好，结果见图2。
（四）耐用性
1.溶液的稳定性试验
取同一批补肺活血胶囊（批号100602），按样品制备方法制备供试品溶液，精密吸取10μl注入液相色谱仪，0h、2.5h、5h、7h、14h测定其含量，结果见表8。
表8稳定性实验测定结果
结果表明：样品在14小时内稳定。
2.不同色谱柱的比较
取同一批补肺活血胶囊（批号100602），按含量测定方法，分别用A：Dikma Diamonsil C18（150mm×4.6mm，5μ，柱号：8012957），B：资生堂C18 ACR（250mm×4.6mm，5μ，柱号：AGAD01433），C：Ultimate XB-C18（250mm×4.6mm，5μ，柱号：210802182）三种品牌的色谱柱测定。结果用三种品牌的色谱柱测定，结果无明显差异，见表9和图3A至3C。
表9不同色谱柱的测定结果
3、不同检测仪器的比较
取批号为100104、100601的补肺活血胶囊按上文配制方法已配制好的供试液，采用以下两台不同的的仪器（仪器1：Agilent1100高效液相色谱仪；Alltech2000ES蒸发光检测器P3000A仪器2：高效液相色谱仪；ELSD-UM3000蒸发光检测器）按拟定的含量测定方法测定样品中的黄芪甲苷含量，结果见表10。
表10 2批不同仪器含量测定结果
| 批号 | 平均含量（mg/粒） | 平均含量（mg/粒） |
| 100104 | 0.80 | 0.82 |
| 100601 | 0.96 | 0.91 |
结果无明显差异。
经上述方法学验证试验，结果表明所建立的试验方法在小的变动范围内对测定无影响，适用于本品中黄芪甲苷的含量测定。
实施例2采用实施例1确定的方法测定10批样品并确定含量限度
按拟定的含量测定方法测定了10批样品中的黄芪甲苷含量，结果见表11。
表11 10批样品含量测定结果
| 批号 | 平均含量（mg/粒） |
| 100101 | 0.76 |
| 100102 | 0.86 |
| 100103 | 0.92 |
| 100104 | 0.80 |
| 100302 | 0.73 |
| 100303 | 0.78 |
| 100501 | 0.82 |
| 100502 | 0.85 |
| 100601 | 0.91 |
| 100602 | 0.93 |
| 平均值 | 0.84 |
含量限度的确定：综上所述，考虑到仪器差异、药材来源及大生产等因素，将平均值下浮20%-30%拟定本品黄芪甲苷含量测定的限度为0.60mg/粒。
实施例3赤芍含量测定
1、超声处理时间的比较。
取同一批样品，分别取装量差异项下的本品内容物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，采用不同的浸泡/超声处理方式，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心（每分钟3000转），精密量取上清液5ml，加甲醇稀释至20ml，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定的含量结果如下表12。
表12
从上表12结果表明：取样量为0.3g，浸泡36小时后超声处理时间30分钟和浸泡48小时后30分钟测得结果最高，但与超声处理时间60分钟相比，相差6%，但从检验周期看，增加了一天半到两天，故为了减少检验周期，采用超声处理时间60分钟。
2、提取溶剂的选择
从《中国药典》的“滋心阴口服液等四十四个品种”含量测定项下赤芍中的芍药苷含量测定中可知，超声提取赤芍中芍药苷的溶剂有甲醇和稀乙醇，故在用超声提取时间为60分钟，取样为0.3g时，我们对两种溶剂进行了比较，试验结果如下表13。
表13
| 提取溶剂 | 甲醇 | 稀乙醇 |
| 芍药苷(%) | 0.96 | 1.16 |
从上表13结果表明：用稀乙醇超声提取60分钟高于用甲醇，故我们选用稀乙醇作为溶剂。
3、超声功率的选择
取同一批样品，分别取装量差异项下的本品内容物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，采用不同的超声强度处理，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心（每分钟3000转），精密量取上清液5ml，加甲醇稀释至20ml，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定的含量结果见如下表14。
表14
| 超声条件及时间 | 芍药苷含量（％） |
| 超声（100W,40Hz）0.5h | 0.88 |
| 超声（100W,40Hz）1h | 0.96 |
| 超声（250W,40Hz）0.5h | 0.98 |
| 超声（250W,40Hz）1h | 1.16 |
结果表明，采用不同功率的超声仪，超声提取的时间、溶剂相同的情况下，得到不同的检测结果，结果相差很大，故我们在标准中将标明超声仪的功率。选用超声（250W，40Hz）超声1小时。
4、供试品溶液的制备
确定的供试品溶液制备方法为：
取装量差异项下的本品内容物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时（功率250W，频率40kHz），放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心（每分钟3000转），精密量取上清液5ml，加稀乙醇稀释至20ml，滤过，取续滤液，即得。
5、对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品适量，用稀乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
二、方法验证
1、仪器、试药
仪器高效液相色谱仪（P680DIONEX公司）；
色谱柱：KromasilTMC18(150×4.6mm，5μm，Packed by Dikma)。
试药芍药苷对照品（paeoniflorin，供含量测定用；由中国药品生物制品检定所提供，批号：110736-200320）；甲醇为色谱纯，化学试剂均为分析纯。
赤芍阴性对照品：按上述补肺活血胶囊制备方法，不加赤芍制备赤芍阴性对照品。
补肺活血胶囊（批号：110302，110304，110305）。
2、色谱条件
流动相：0.05mol/mL磷酸二氢钾-甲醇（60：40）；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：室温。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
3、专属性试验
按上文所述方法制备对照品溶液，按供试品溶液制备法制备供试品和赤芍阴性对照品溶液，依法测定，结果无干扰（结果见图4A、图4B、图4C）。
4、线性
取芍药苷对照品适量，精密称定，用稀乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为储备液，精密吸取储备液1.0ml，用稀乙醇稀释至20.0ml，分别精密吸取此溶液4、6、8、10、12、14、16μl，注入液相色谱仪记录峰面积，以芍药苷浓度量X（μg）对峰面积积分值Y进行线性回归，回归方程为：Y＝20.231X-0.105，r＝0.9998。结果表明：芍药苷进样量在0.1968～0.7872μg范围内与峰面积具有良好的线性关系（参见表15和图5）。
表15线性考察数据
5、精密度试验--仪器精密度试验
精密吸取浓度为49.2μg/mL的对照品溶液，连续测定5次，峰面积积分值的RSD为1.22%，结果见表16。试验结果证实，精密度符合要求。
表16精密度考察数据
6、重复性试验
精密量取同一批号的供试品约0.3g，共六份，按含量测定项下的方法提取并制备成供试品溶液。取上述六份供试品溶液，测定六次，计算出含量，作为重复性试验。结果表明：此方法重复性良好，符合要求。结果见表17：
表17重复性试验结果
7、供试品溶液稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，每间隔一定时间进样测定，共测定5次，结果表明供试品溶液在12小时内基本稳定。结果见表18。
表18
8、加样回收试验
采用加样回收法，取已知含量的本品内容物0.15g，精密称定，置25ml容量瓶中，精密加入1.081mg/mL芍药苷对照品溶液2.5mL，加入稀乙醇至刻度，超声处理1小时，放冷，补加稀乙醇至刻度，摇匀，离心（每分钟3000转），精密量取上清液5ml，加稀乙醇稀释至20ml，滤过，精密吸取续滤液10μl，注入色谱仪，记录色谱图，按峰面积外标法计算，结果见表19。
表19回收率试验结果(n=6)
9、11批补肺活血胶囊样品的测定
取装量差异项下的本品内容物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声（250W，40kHz）处理1小时，放冷，在称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心（每分钟3000转），精密量取上清液5ml，加稀乙醇稀释至20ml，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；另取芍药苷对照品适量，精密称定，用稀乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得对照品溶液；分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算，即得。含量测定结果见表20：
表20 11批补肺活血胶囊样品的测定结果
| 批号 | 含量（％） | 每粒含芍药苷量(mg) |
| 040701 | 1.46 | 5.11 |
| 040901 | 1.40 | 4.90 |
| 041001 | 1.37 | 4.79 |
| 041101 | 1.37 | 4.79 |
| 041201 | 1.68 | 5.88 |
| 050301 | 1.60 | 5.60 |
| 050302 | 1.52 | 5.32 |
| 050303 | 1.55 | 5.42 |
| 050304 | 1.34 | 4.69 |
| 050305 | 1.37 | 4.81 |
| 050401 | 1.32 | 4.62 |
| 平均 | 1.45 | 5.08 |
10、含量限度
本品每粒含赤芍以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于4.5mg。
实施例4赤芍显微鉴别
制成10批（批号：100101、100102、100103、100104、100302、100303、100501、100502、100601、100602）。取本品内含物，置显微镜（仪器：显微镜OLYMPUS BX41/C1368；显微摄影放大倍数：10×40）下观察。
由图6A-6J可知，制得的内含物显微特征专属，易见。
实施例5补骨脂提取鉴定
仪器与试药：
Mettler AE100电子天平；
ZF-90型多功能暗箱式紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂）；
补肺活血胶囊（批号050504，050505，060301）；
补骨脂素（批号110739-200511），异补骨脂素（批号110738-200511），以上对照品均为中国药品生物制品检定所提供；
补骨脂阴性对照品：按上述补肺活血胶囊制备方法，不加补骨脂制备而得。
硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；
所用试剂均为分析纯。
（一）提取溶剂的选择
参照中国药典一部补骨脂药材的薄层鉴别方法，取本品内容物约3g三份，分别加石油醚（沸点30～60℃）、氯仿、乙酸乙脂20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素，异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯分别制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365nm）下检视。
试验结果表明，石油醚（沸点30～60℃）提取的溶液颜色浅，且斑点清晰，而氯仿、乙酸乙酯提取的溶液颜色较前者深，背景干扰较大，且提出来的杂质较多，故选择石油醚作为供试品液的提取溶剂。薄层图谱结果见图7。
（二）石油醚的选择
根据石油醚沸点分，常用的石油醚试剂有“30～60℃”、“60～90℃”、“90～120℃”三种，分别取此三种石油醚按上述方法进行提取、鉴别：
取本品内容物约3g三份，分别加石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、石油醚（90～120℃）20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素，异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯分别制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365nm）下检视。
试验结果表明，石油醚（30～60℃）提取的溶液颜色浅，且斑点清晰，而石油醚（60～90℃）、石油醚（90～120℃）提取的溶液颜色较前者深，背景干扰较大，且提出来的杂质较多，且石油醚（30～60℃）沸点低，挥干时间短，便于实际生产检验，故选择石油醚（30～60℃）作为供试品液的提取溶剂。薄层图谱结果见图8。
（三）提取溶剂用量的选择
取本品内容物约3g三份，分别加石油醚（30～60℃）10ml、20ml、30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素，异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯分别制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365nm）下检视。
试验结果表明，用10ml石油醚（30～60℃）提取内容物3g，溶剂量太少，倒到内容物中后，被内容物吸收后，剩余溶液量较少，超声效果差。20ml、30ml石油醚（30～60℃）提取内容物3g，提取出来的溶液颜色浅，且斑点清晰，鉴于选择20ml溶剂挥干时间短，且可节省容剂，故选择20ml石油醚（30～60℃）作为供试品液的提取溶剂。薄层图谱结果见图9。
（四）超声时间的选择
取本品内容物约3g三份，各加石油醚（30～60℃）20ml，分别超声处理10分钟、15分钟、25分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素，异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯分别制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365nm）下检视。
试验结果表明，超声10分钟，提取不全，斑点不够清晰；超声15分钟提取全面，斑点清晰；超声25分钟，溶剂挥尽，无法进行下一步的操作。因此选用超声时间为15分钟。薄层图谱结果见图10。
（五）对照品浓度的选择：
鉴于上述条件筛选过程中，对照品对应斑点比供试品对应斑点深很多，因此选用每1ml各含补骨脂素、异补骨脂素1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
最终确定供试品溶液的制备方法为：
取本品内容物约3g，加石油醚（30～60℃）20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。
确定供试品溶液制备方法后，制备对照品溶液：
取补骨脂素，异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯分别制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
并制备阴性对照溶液：
取补骨脂阴性对照品约3g，按供试品溶液制备方法制成补骨脂阴性对照溶液。
照薄层色谱法（中国药典一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（8：2体积比）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照没有相同的荧光斑点。具体结果见图11。
耐用性：取供试品，在下述条件下操作，均不影响补骨脂素和异补骨脂素的薄层鉴别的观察，试验结果见表21。
表21
| 日期 | 温度（℃） | 湿度（%） | 薄层板 | 结果 |
| 2006-4-17 | 20.4 | 44 | 手铺板 | 清晰，理想 |
| 2006-4-18 | 21.6 | 42 | 手铺板 | 清晰，理想 |
| 2006-4-19 | 21.7 | 42 | Merck板 | 清晰，理想 |
| 2006-4-20 | 24.6 | 91 | 手铺板 | 清晰，理想 |
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (3)
1.一种用于补肺活血的药物的检测方法，按重量份数计，所述药物由黄芪40份、赤芍40份和补骨脂20份制成，其特征在于，所述用于补肺活血的药物根据以下制备方法制成：
1)取部分赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80℃下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达体积比为60％，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80℃下相对密度为1.35-1.40；其中粉碎的赤芍的质量为赤芍总质量的1/4；
2)加入赤芍细粉，搅拌均匀，进行干燥与粉碎；
3)采用体积比为90％的乙醇制粒；制粒后，干燥，然后加辅料适量，混匀，其中所述辅料为滑石粉；
并且所述用于补肺活血的药物为胶囊剂，为补肺活血胶囊；
其中，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定，包括以下步骤：
1)制备对照品溶液：取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合液，即得；
2)制备供试品溶液：取所述药物3g，加沸点30～60℃的石油醚20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
3)测定：吸取供试品溶液6μl，对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
并且，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪的含量，包括以下步骤：
1)制备供试品溶液：将所述药物研细，取1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，所述正丁醇体积分别为30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
2)制备对照品溶液：称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；
3)测定：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl～20μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为32:68的乙腈-水；
流速：1mL/min；
检测：蒸发光散射检测器；
理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；
所述药物含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.60mg/0.35g药物；
以及，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中赤芍的含量，包括以下步骤：
1)制备对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得；
2)制备供试品溶液：取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，每分钟3000转离心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：体积比为60:40的0.05mol/ml磷酸二氢钾溶液-甲醇；
流速：1mL/min；
检测波长：230nm；
理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000；并且所述药物含赤芍以芍药苷计，不得少于4.5mg/0.35g药物。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括检测药物性状，所述药物为棕黄色至棕褐色的细颗粒和粉末；气微香，味微酸，苦。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括赤芍显微鉴别，将所述药物置显微镜下观察，草酸钙簇晶直径11～35μm，散在或存在于薄壁细胞中，数个至数十个排列成行。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106474207B (zh) * | 2016-12-02 | 2017-09-29 | 广东雷允上药业有限公司 | 补肺活血胶囊治疗或预防pm2.5引起的肺部损伤药物的用途 |
| CN106511502B (zh) * | 2016-12-06 | 2017-09-29 | 广东雷允上药业有限公司 | 一种用于补肺活血的中药胶囊及其制备方法 |
| CN107505418B (zh) * | 2017-06-29 | 2020-03-06 | 中山大学 | 一种补肺活血胶囊hplc指纹图谱的构建方法及标准指纹图谱 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1768854A (zh) * | 2005-10-26 | 2006-05-10 | 三九医药股份有限公司 | 一种具有补脾益肠作用的中药胶囊制剂 |
| CN1903325A (zh) * | 2006-07-28 | 2007-01-31 | 贵州泰尔医药研究所 | 治疗糖尿病的降糖甲制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101293008A (zh) * | 2007-04-26 | 2008-10-29 | 浙江新光药业有限公司 | 一种治疗慢性支气管炎的药物组合物及其制备方法 |
| CN101342230A (zh) * | 2008-08-28 | 2009-01-14 | 四川百利药业有限责任公司 | 一种黄芪颗粒及其质量控制方法 |
| CN101551365A (zh) * | 2009-05-18 | 2009-10-07 | 郑州市协和制药厂 | 当归补血口服液中黄芪甲苷含量的测定方法 |
| CN102068507A (zh) * | 2009-11-20 | 2011-05-25 | 广东永康药业有限公司 | 一种用于补肺活血的中药胶囊制备方法 |
| CN102614378A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-08-01 | 陕西方舟制药有限公司 | 养阴降糖中药组合物及其制备方法和检测方法 |
| CN102749299A (zh) * | 2012-07-13 | 2012-10-24 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法 |
| CN103115984A (zh) * | 2013-02-25 | 2013-05-22 | 山西振东制药股份有限公司 | 一种治疗白细胞减少症药物的质量控制方法 |
-
2013
- 2013-07-25 CN CN201310317350.6A patent/CN103439449B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1768854A (zh) * | 2005-10-26 | 2006-05-10 | 三九医药股份有限公司 | 一种具有补脾益肠作用的中药胶囊制剂 |
| CN1903325A (zh) * | 2006-07-28 | 2007-01-31 | 贵州泰尔医药研究所 | 治疗糖尿病的降糖甲制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101293008A (zh) * | 2007-04-26 | 2008-10-29 | 浙江新光药业有限公司 | 一种治疗慢性支气管炎的药物组合物及其制备方法 |
| CN101342230A (zh) * | 2008-08-28 | 2009-01-14 | 四川百利药业有限责任公司 | 一种黄芪颗粒及其质量控制方法 |
| CN101551365A (zh) * | 2009-05-18 | 2009-10-07 | 郑州市协和制药厂 | 当归补血口服液中黄芪甲苷含量的测定方法 |
| CN102068507A (zh) * | 2009-11-20 | 2011-05-25 | 广东永康药业有限公司 | 一种用于补肺活血的中药胶囊制备方法 |
| CN102614378A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-08-01 | 陕西方舟制药有限公司 | 养阴降糖中药组合物及其制备方法和检测方法 |
| CN102749299A (zh) * | 2012-07-13 | 2012-10-24 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法 |
| CN103115984A (zh) * | 2013-02-25 | 2013-05-22 | 山西振东制药股份有限公司 | 一种治疗白细胞减少症药物的质量控制方法 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| HPLC-ELSD法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量;王春怡 等;《辽宁中医药大学学报》;20081005;第10卷(第10期);第144-145页 * |
| HPLC-ELSD法测定鹿尾补肾丸中黄芪甲苷的含量;欧国灯 等;《中药材》;20080825;第31卷(第8期);第1259-1260页 * |
| HPLC-ELSD法测定黄龙咳喘胶囊中黄芪甲苷的含量;袁杰;《现代中药研究与实践》;20081215;第22卷(第6期);第46-47页 * |
| HPLC-蒸发光散射检测法测定健血颗粒中黄芪甲苷的含量;李桂本 等;《食品与药品》;20130720;第15卷(第4期);第264-265页 * |
| 三康胶囊质量标准的提高;涂宏海 等;《解放军药学学报》;20101020;第26卷(第5期);第432页"2.3 含量测定"小节 * |
| 国家药典委员会.补肺活血胶囊(YBZ01112003-2009Z).《国家药品标准 新药转正标准 第82册》.2011, * |
| 补肺活血胶囊中芍药苷的含量测定;谢清春 等;《中药材》;20120825;第35卷(第8期);第1335-1336页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103439449A (zh) | 2013-12-11 |
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