CN103355168A

CN103355168A - 一种地枇杷的快速繁殖方法

Info

Publication number: CN103355168A
Application number: CN2013103024018A
Authority: CN
Inventors: 夏新界; 黄丽芳
Original assignee: Institute of Subtropical Agriculture of CAS
Current assignee: Institute of Subtropical Agriculture of CAS
Priority date: 2013-07-16
Filing date: 2013-07-16
Publication date: 2013-10-23
Anticipated expiration: 2033-07-16
Also published as: CN103355168B

Abstract

本发明公开了一种地枇杷的快速繁殖方法。该方法是将地枇杷的带茎段的顶芽或腋芽在初代培养基中培养获得无菌苗，在增殖培养基上诱导丛生芽，在生根培养基上生根；采用本发明所提供的成套技术方法进行地枇杷组织培养，不仅周期短、繁殖系数高、成本低廉，还具有很强的工厂化生产能力。而且利用本发明的方法繁殖，能够更有效地保护和开发利用地枇杷。

Description

一种地枇杷的快速繁殖方法

技术领域

本发明属于地枇杷的快速繁殖技术领域，特别涉及一种地枇杷(Ficus tikoua)的组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

地枇杷(Ficus tikoua)属桑科榕属，又称地瓜，地瓜藤，地胆紫，地石榴。多年生落叶匍匐灌木，全株有乳汁，产于广西、贵州、湖南等地，在贵州和湘西作为苗族***滑肌、抗肿瘤、抗菌等作用。地枇杷还可作水果食用，味美香甜，色泽鲜艳，其果实如图1所示。地枇杷亦可作观果、观叶吊挂盆景，柔韧翠绿的茎蔓潇洒飘逸，具有“万条垂下绿丝绦”的美景。地枇杷也适宜于公园或易遭游人践踏的场所绿化，可承受众多游人践踏。地枇杷因为这种坚韧而繁茂的茎蔓总是纵横交错地生长着，这样就会自然的“织”成一张“巨型渔网”，能将表面松土、沙土牢牢地“网住”，再加上有茂密的叶子长年“封面”，酷似加盖了一张永久性的绿色地毯，这种防沙固土的特殊功效是其它地被植物所不能及的，堪称防沙固土的绝品。综上所述，地枇杷是集食用、药用、绿化、观赏于一体的多用途植物。

地枇杷人工繁殖主要采用扦插繁殖，但野生资源极为有限，常规的繁殖技术无法在很短的时间内提供数量庞大的种苗，很难进行商业开发。只有解决人工快速繁殖，扩大地枇杷的种植数量，建立商业化开发利用的种植基地才能使这一宝贵资源得到最有效的保护和开发，实现其资源的真正价殖。据查询，目前国内外没有地枇杷组织培养研究和专利申请的报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种地枇杷(Ficus tikoua)，组织培养快速繁殖的方法；该方法能快速诱导大量的地枇杷丛生芽，且增殖系数和生根率高，操作方便，具有很好的应用前景。

本发明的目的是通过以下方式实现的。

一种地枇杷的快速繁殖方法，包括以下步骤：

取地枇杷（Ficus tikoua）2～3cm长的带茎段的顶芽或腋芽接种到初代培养基MS+6-BA0.5-1.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L中培养得到无菌苗，然后将无菌苗进行继代增殖和生根培养，最后进行炼苗和移栽。

上述方法中初代培养基中6-BA的浓度优选为0.8mg/L；IAA的浓度优选为0.3mg/L。

上述方法中继代增殖所用的培养基为：N6培养基的大量元素+MS培养基的微量元素+MS培养基的有机成分+MS培养基的铁盐+6-BA1.0-2.5mg/L+KT0.2-0.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L+多效唑0.5-2.0mg/L。

上述方法中继代增殖培养基中6-BA的浓度优选为1.0mg/L；KT的浓度优选为0.5mg/L；IAA的浓度优选为0.2mg/L；多效唑的浓度优选为1.0mg/L。

上述方法中生根培养所用的培养基为：MS+IAA0.1-0.8mg/L+NAA0.1-0.8mg/L+KT0.5-1.0mg/L+多效唑0.2-1.0mg/L。

上述方法中生根培养基中IAA的浓度优选为0.2mg/L；NAA的浓度优选为0.5mg/L；KT的浓度优选为0.5mg/L；多效唑的浓度优选为0.5mg/L。

上述方法中试管苗炼苗和移栽过程：将生根的试管苗，在自然光下炼苗5～7天，洗掉根部培养基，移栽到沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合的基质中，喷雾保持空气中湿度达到85%～95%，20～30℃培养，30～40天移栽大田。

上述方法中初代培养前将带茎段的顶芽或腋芽消毒，具体过程为：

取地枇杷带茎段的顶芽或腋芽，首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5～7次，用70%酒精浸润1分钟，再放入0.1%的升汞溶液中灭菌12～18分钟，无菌水冲洗5～6次。

上述方法中的培养条件均为在24±2℃，每天10±2h）光照，光照强度为1500-2000lx。

上述方法中将地枇杷的带茎段的顶芽或腋芽在初代培养基中培养4周后，外植体均长出2-5个节，高度为3-6cm的无菌苗；然后将无菌苗剪成茎段，每个茎段带一个顶芽或一个腋芽；将茎段接种在继代增殖培养基中进行培养，培养4周后，每个茎段均又长出2-6个节的无菌苗，同时从茎段基部长出3个以上的丛生芽；将初代培养或者继代增殖培养获得的无菌苗剪成带芽的茎段接种到生根培养基中培养4周后从茎段基部长出2-4条根。

本发明以地枇杷带茎段的顶芽或腋芽为外植体,利用本发明的培养基,开辟了一种快速繁殖地枇杷无菌苗并保持其亲本植物遗传特性的新方法。本发明方法具有以下优点和有益效果：

1）本方法克服了传统方法繁殖慢的缺陷，在很短的时间内可以大规模繁殖所需要的种苗；本方法取材容易，获得无菌苗的过程简单，繁殖系数高，4周增殖倍数能达到10以上，组培苗生根率达到80%以上，移栽成活率可达90%以上；

2）本方法生产成本低，应用价值高，出苗快，稳定高，种苗品质好，抗性强，具有很强的工厂化生产能力；

3）利用本发明的方法繁殖地枇杷组培苗，能够更有效地保护和开发利用地枇杷。

附图说明

图1为地枇杷食用果实的照片；

图2为本发明地枇杷初代培养的顶芽和腋芽生长情况的照片；

图3为本发明地枇杷继代增殖培养1代丛生芽生长情况的照片；

图4为本发明地枇杷继代增殖培养5代丛生芽生长情况的照片；

图5为本发明地枇杷试管苗生根情况的照片；

图6为本发明地枇杷试管苗移栽成活情况的照片。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1、组织培养快速繁殖地枇杷无菌苗

一、培养基配制和灭菌

初代培养基：MS+6-BA0.8mg/L+IAA0.3mg/L；

继代培养基：N6大量元素+MS微量元素+MS有机成分+MS铁盐+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.2mg/L+多效唑（CCC）1.0mg/L；

生根培养基：MS+IAA0.2mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+多效唑（CCC）0.5mg/L；

以上培养基121℃下，灭菌20分钟。

二、初代培养

取地枇杷（Ficus tikoua）带茎段的顶芽或腋芽（茎段和芽的总长2-3cm），首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5～7次，用70%酒精浸润1分钟，再放入0.1%的升汞溶液中灭菌12～18分钟，无菌水冲洗5～6次，将带茎段的顶芽或腋芽转入装有初代培养基上三角瓶子（容量50毫升）中，每个三角瓶外植体个数为3个，在下述培养条件下进行培养：24℃左右，每天10小时光照，光照强度为1500-2000lx；

顶芽接种9个，腋芽接种21个。培养4周，该30个顶芽和腋芽均长出2-5个节无菌苗，无菌苗高度为2-6cm，每一株组培苗为一个株系。顶芽和腋芽生长情况如图2所示。

三、继代增殖培养

取上述30个株系中的20个株系进行继代繁殖，具体方法如下：将长出2-5个节的无菌苗剪成茎段，每个茎段带一个顶芽或一个腋芽。将上述茎段接种在继代培养基中进行培养，培养条件同步骤二；

上述茎段，在增殖培养基中，培养4周后，每个茎段均长出2-6个节的无菌苗，同时从茎段基部长出3个以上的丛生芽。丛生芽生长情况如图3所示；

该无菌苗再按照上述方法每4周继代一次，继代5次。继代1次，每个茎段均长出2-6个节的无菌苗，无菌苗高度为3-6cm，同时从茎段基部长出4-6个丛生芽，繁殖系数达10以上。丛生芽生长情况如图4所示。

四、生根培养

将上述无菌苗按上述方法，剪成茎段，转接到N6+IAA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+KT-1.0mg/L+多效唑（CCC）0.5的生根培养基上，培养条件同步骤二；培养4周，每个茎段均长出2-6个节的无菌苗，无菌苗高度为3-6cm，从茎段基部长出2-4条根，生根率达到85%以上。生根苗生长情况如图5所示。

五、炼苗移栽

当试管苗茎段基部长出2-4条根时，在自然光下炼苗5～7天，洗掉根部培养基，移栽到沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合的基质中，喷雾保湿85%～95%，保温20～30℃培养，30～40天移栽大田，成活率达90%以上。试管苗移栽成活情况如图6所示。

本发明所提供的地枇杷组织培养繁殖方法，带茎段的顶芽或腋芽为外植体，取材容易，数量大，遗传稳定性高，生长良好等优势。在培养过程中，不仅顶芽或腋芽生长速度快，而且茎段基部能同步诱导出丛生芽，繁殖系数大。生根培养同样可将无菌苗切成顶芽或茎段转入生根培养基中，不仅顶芽或腋芽生长速度快，而且能同步诱导出根。

实施例2、组织培养快速繁殖地枇杷无菌苗

培养基配制和灭菌

初代培养基：MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L；

继代培养基：N6大量+MS微量+MS有机+MS铁盐+6-BA1.0mg/L+KT0.3mg/L+IAA0.2mg/L+多效唑（CCC）0.5mg/L；

生根培养基：MS+IAA0.3mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.5mg/L+多效唑（CCC）0.5mg/L。

以上培养基121℃下，灭菌20分钟；

取地枇杷（Ficus tikoua）顶芽或茎段，基本操作方法同实施例1一致，增殖，生根效果稍稍差于实施例1，但也能达到很好。

实施例3、组织培养快速繁殖地枇杷无菌苗

初代培养基：MS+6-BA0.5-1.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L

继代增殖培养基为：N6培养基的大量元素+MS培养基的微量元素+MS培养基的有机成分+MS培养基的铁盐+6-BA1.0-2.5mg/L+KT0.2-0.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L+多效唑0.5-2.0mg/L。

生根培养培养基为：MS+IAA0.1-0.8mg/L+NAA0.1-0.8mg/L+KT0.5-1.0mg/L+多效唑0.2-1.0mg/L。

在上述几种培养基的浓度范围内，按照实施例1的操作步骤进行，也基本能达到较满意的效果。

Claims

1.一种地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

取地枇杷（Ficus tikoua）2～3cm长的带茎段的顶芽或腋芽，接种到初代培养基MS+6-BA0.5-1.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L中培养得到无菌苗，然后将无菌苗进行继代增殖和生根培养，最后进行炼苗和移栽。

2.根据权利要求1所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于：初代培养基中6-BA的浓度为0.8mg/L；IAA的浓度为0.3mg/L。

3.根据权利要求1所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，继代增殖所用的培养基为：N6培养基的大量元素+MS培养基的微量元素+MS培养基的有机成分+MS培养基的铁盐+6-BA1.0-2.5mg/L+KT0.2-0.5mg/L+IAA0.1-0.8mg/L+多效唑0.5-2.0mg/L。

4.根据权利要求3所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，继代增殖培养基中6-BA的浓度为1.0mg/L；KT的浓度为0.5mg/L；IAA的浓度为0.2mg/L；多效唑的浓度为1.0mg/L。

5.根据权利要求1所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，生根培养所用的培养基为：MS+IAA0.1-0.8mg/L+NAA0.1-0.8mg/L+KT0.5-1.0mg/L+多效唑0.2-1.0mg/L。

6.根据权利要求5所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，生根培养基中IAA的浓度为0.2mg/L；NAA的浓度为0.5mg/L；KT的浓度为0.5mg/L；多效唑的浓度为0.5mg/L。

7.根据权利要求1所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于，试管苗炼苗和移栽过程：将生根的试管苗，在自然光下炼苗5～7天，洗掉根部培养基，移栽到沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合的基质中，喷雾保持空气中湿度达到85%～95%，20～30℃培养，30～40天移栽大田。

8.根据权利要求1所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于：初代培养前将带茎段的顶芽或腋芽消毒，具体过程为：

9.根据权利要求1-8中任一项所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于：所述方法中的培养条件均为在24±2℃，每天10±2h光照，光照强度为1500-2000lx。

10.根据权利要求1-8任一项所述的地枇杷的快速繁殖方法，其特征在于：将地枇杷的带茎段的顶芽或腋芽在初代培养基中培养4周后，外植体均长出2-5个节，高度为3-6cm的无菌苗；然后将无菌苗剪成茎段，每个茎段带一个顶芽或一个腋芽；将茎段接种在继代增殖培养基中进行培养，培养4周后，每个茎段均又长出2-6个节的无菌苗，同时从茎段基部长出3个以上的丛生芽；将初代培养或者继代增殖培养获得的无菌苗剪成带芽的茎段接种到生根培养基中培养4周后从茎段基部长出2-4条根。