发明内容
本发明的目的是在于提供了一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,保护水产动物肝脏不受或减轻损伤,避免了因肝脏损伤而引起并发其它疾病,减少了水产动物疾病的发生。植物源性药物,不存在环境污染及耐药性的问题,安全有效。
本发明的另一个目的是在于提供了一种水产养殖动物保肝护肝中药姜黄浸膏散的制备方法。该方法提取的姜黄素、总姜黄素含量高,配方合理,效果好,且该方法易行,操作方便,尤其适用于当前水产养殖的集约化、规模化生产的需要。
为了达到上述目的,本发明采用以下技术措施:
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由以下重量份的原料制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 1-10
辅料量(玉米淀粉) 1-12。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 2-9
辅料量(玉米淀粉) 2-11。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 3-8
辅料量(玉米淀粉) 3-10。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 4-7
辅料量(玉米淀粉) 4-9。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 5-6.5
辅料量(玉米淀粉) 5-8。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 5.8-6.2
辅料量(玉米淀粉) 6-7。
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
生药量(姜黄浸膏) 5
辅料量(玉米淀粉) 7.5。
一种水产养殖动物保肝护肝中药制剂的制备方法,其步骤是:
1、取50g姜黄药材粉末(30-50目),用500mL80%(v/v)乙醇回流提取2-4次,每次80-100分钟;
2、过滤提取液,合并,用旋转蒸发仪浓缩至500mL,获得了姜黄提取物;
3、将姜黄提取物转移至烧杯中,78-82℃水浴挥干至250mL,获得了姜黄浸膏,加入400-500g玉米淀粉混合均匀;
4、再置于烘箱中,78-82℃下干燥9-11h;
5、取出干燥药物过6号筛,最终得到保肝护肝的中药制剂(姜黄浸膏散)。
所述的姜黄是一种多年生有香味的草本植物,既有药用价值,又可以作食品调料。辛香轻淡,略带胡椒、麝香味及甜橙与姜之混合味道,略有辣味、苦味。
原产于印度的姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎磨制成的姜黄粉,用作调味品和黄色着色剂,是家庭使用的普通调味料,用于咖喱粉、调味料等。姜黄是一种多年生有香味的草本植物,既有药用价值,又可以作食品调料。辛香轻淡,略带胡椒、麝香味及甜橙与姜之混合味道,略有辣味、苦味。
姜黄呈不规则卵圆形、圆柱形或纹锤形,常弯曲,有的具短叉状分枝,长2~5cm,直径1~3cm,表面深黄色、粗糙,有皱缩纹理和明显环节,并有圆形分枝痕及须根痕。质坚实,不易折断,断面棕黄色至金黄色,角质样,有蜡样光泽。内皮层环纹明显,维管束呈点状散在。气香特异,味苦、辛。
姜黄色素能够抑制人体某些部位癌细胞的生长,使用“姜黄色素”和其他化学治疗方法可以有效抑制乳腺癌等癌细胞的扩散。实验中,得克萨斯大学的科学家给患有乳腺癌的60只小白鼠做了肿瘤切除手术,之后分别给这些小白鼠服用“姜黄色素”。仅过一段时间之后,科学家发现每日饮食中含有“姜黄色素”的小白鼠患乳腺癌的几率明显要低于其他小白鼠。
用姜黄粉可以提取姜黄色素也即是姜黄素,是一种天然的、无毒的功能性色素,被许多的国家认可可以添加到食品、药品、化妆品等领域且是没有限制用量的是根据需要量添加。
姜黄粉是将原药材粉碎所得,本发明的姜黄浸膏是将原药材姜黄粉碎50目后,通过用10倍量80%的乙醇提取,提取三次,每次1.5h所得,本发明的姜黄浸膏散是由姜黄浸膏与淀粉按一定比例混配制得。
本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:
A、首次将姜黄提取物应用于水产动物的保肝护肝;
B、优选的醇提法,有效成分姜黄素和总姜黄素得率高,效果好;
C、能够有效解决因配合饲料等问题引起的肝损伤问题,对草鱼、鲫鱼等肝损伤的预防有效率达到97.5%,治愈率达到90%;
D、方法操作简单、易行,中药粉剂,拌饲投喂,在生产实际中易于操作。
E、植物源药物,安全无毒副作用,对水环境无污染,不存在耐药性问题。
具体实施方式:
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1:
一种水产养殖动物保肝护肝的中药制剂,它由下列原料按重量份制成:
原料 重量份
姜黄浸膏 3.5
玉米淀粉 8.5
一种水产养殖动物保肝护肝中药制剂的制备方法,其步骤是:
A、将姜黄药材粉末用500mL80%(v/v)乙醇回流提取2或3或4次,每次80或85或90或95或100分钟;
B、过滤提取液,合并,用旋转蒸发仪浓缩至500mL,获得了姜黄提取物;
C、将姜黄提取物转移至烧杯中,80℃水浴挥干至250mL,获得了姜黄浸膏,加入400g玉米淀粉混合均匀;
D、再置于烘箱中,78或79或80或81或82℃下干燥9或10或11h;
E、取出干燥药物过6号筛,最终得到保肝护肝的中药制剂(姜黄浸膏散)。
所述的姜黄粉中的任何一个重量份与另一种玉米淀粉中的任何一个重量份相混合,均能得到一种该药物的组合物。混配比例是:
实施例 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
姜黄浸膏 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
5 |
7 |
7.5 |
8 |
8.5 |
9 |
9.5 |
10 |
玉米淀粉 |
12 |
11 |
10 |
9 |
8 |
7 |
6 |
5.5 |
4 |
2.5 |
2 |
1.5 |
1 |
总计 |
13 |
13 |
13 |
13 |
13 |
13 |
13 |
13 |
12 |
11 |
11 |
11 |
11 |
效果评价:
1、姜黄浸膏散对草鱼肝损伤修复作用研究:
1.1试验鱼及药品:
试验草鱼购自武汉市青菱乡鱼种场,平均体重(200±5)g。选择外观健壮、游动活泼、无外伤的作为试验鱼,解剖内脏均患有不同程度的肝胆综合症。
试验药物姜黄浸膏散,姜黄素含量1.349mg/g,湖北中医大学提供;对照药物肝胆利康散,武汉中博水产生物技术有限公司生产,生产批号130304。
1.2试验分组及饲养:
试验在容积为98cm×60cm×100cm的水族箱中进行,每组设3个平行,每个平行放鱼20尾。水源为经曝气去氯后的自来水,水温平均为(25.8±2.8)℃,水中溶氧大于7mg/L,pH值为6.80±0.01。药物均匀拌饲投喂,给药组姜黄浸膏散的饲料添加量为1‰,对照药物组肝胆利康散的饲料添加量为2‰,空白对照组投喂基础饲料,每天上午9时和下午4时各投喂一次,5%的投喂量,连续饲喂7d。
1.3血清生化指标的测定:
试验结束时,每箱随机取鱼5尾,尾静脉取血,室温下待凝后,于4℃条件下3000r/min离心10min,合并上层血清备用。谷丙转氨酶(AST)和谷草转氨酶(ALT)用日本森美康(Sysmex)的全自动生化分析仪(Chemix-800)测定,于中国水产科学研究院长江水产研究所进行;乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA),采用南京建成生物科技有限公司的检测试剂盒进行测定。
1.4组织病理观察:
实验结束时,取草鱼小块肝脏组织,置于Bouin氏固定液中固定3h。经洗涤、脱水、透明、渗透与包埋后,切成5μm厚薄片,贴片后,用HE染色法进行染色,再经脱水和透明后用中性树胶封片,显微镜下观察。
1.5数据分析:
采用spss17.0统计分析软件进行单因素方差分析和LSD多重比较进行统计分析。
2、结果:
2.1肉眼观察:
患肝胆综合症草鱼,外观正常,解剖后发现肝胰腺颜色变淡,或呈黄色,部分呈绿色,易碎。投喂含有姜黄素饲料7d后,解剖发现草鱼肝脏色泽均匀、呈血红色,少数呈现黄色。肝胆利康散组有相似现象,而空白对照组草鱼肝脏颜色发白、发黄情况严重。
2.2血清生化指标:
由表1、表2可以看出,与空白对照组相比,姜黄素作用下,MDA含量、AST、ALT及LDH活性均显著降低(p<0.01);SOD、CAT和GSH-PX活性均显著增加(p<0.01);姜黄浸膏散组MDA含量、AST活性显著小于阳性对照组(p<0.05),SOD、CAT和GSH-PX活性显著大于阳性对照组(p<0.05)。
表1草鱼血清中AST、ALT和LDH活性变化(n=15)
注:同一列中上标字母不同表示显著性,小写字母不同表示差异显著(p<0.05),大写字母不同表示差异极显著(p<0.01)。
表2草鱼血清中T-SOD、CAT、GSH-PX和MDA活性变化(n=15)
注:同一列中上标字母不同表示显著性,小写字母不同表示差异显著(p<0.05),大写字母不同表示差异极显著(p<0.01)。
2.3组织病理观察:
肝组织切片显示:患肝脏综合症病的草鱼肝细胞核偏离中心,肝细胞细胞间界限不清,部分出现肝细胞形态消失,细胞膜、细胞核不可分辨,颗粒性变性,空泡变性(a)。使用姜黄浸膏散后的草鱼,肝细胞索以中央静脉为中心,向四周呈放射状排列;肝细胞间界限清楚,细胞形态正常,大部分细胞的细胞核位于细胞中央,只有少数细胞的细胞核偏离中央(b)。由图1可以看出,姜黄浸膏散对肝损伤草鱼肝组织的病理改变有明显的改善作用。
3、讨论:
姜黄浸膏散的主要有效成分为姜黄素,姜黄素(curcumin)是从姜黄(Curcuma longa L.)中提取出来的一种脂溶性酚类色素,是姜黄的主要活性成分。研究表明,姜黄素具有抗肿瘤、抗微生物、清除自由基等多方面的药理作用[2,3]。其对肝脏的保护作用已在小鼠的研究中得到证实[2,6]([2]许东晖,王胜,金晶等.姜黄素的药理作用研究进展[J].中草药,2005,36(11):1737-1740.[6]林海燕,许建华,温彩霞,等.姜黄素固体分散体对小鼠实验性慢性肝损伤的保护作用[J].中药药理与临床,2007,23(2):25-26.),目前尚未见到在鱼类上面的应用研究,本文首次考察了姜黄素对草鱼肝损伤的修复作用。
服用姜黄浸膏散一周后,草鱼血清中AST、ALT和LDH含量显著下降(p<0.01)。通常在肝损伤发生时,血液中三种酶含量会上升,通过它们可以判断肝脏的健康状况[7]([7]黄凯,杨鸿昆,甘晖,等.饲料中添加胆碱预防罗非鱼脂肪肝病变的作用[J].中国水产科学,2007,14(2):257-262.),三者含量的下降,反映了草鱼肝脏损伤得到恢复。草鱼血清中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-PX活性显著增强(p<0.01),脂质过氧化产物MDA含量显著降低(p<0.01),说明在姜黄素作用下,草鱼机体清除自由基活力增强,肝脏抗氧化功能得到恢复。推断姜黄浸膏散通过增强草鱼机体抗脂质过氧化、抗自由基的能力,避免肝脏进一步受损,从而促进机体自我修复[5,8]([5]刘永刚,刘永忠,王晓东.姜黄素抗大鼠肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的研究[J].中成药,2004,26(10):829-832.[8]Pulla Reddy A Ch,Lokesh B R.Effect of curcumin and eugenol on iron-induced hepatic toxicity in rats[J].Toxicology,1996,107:39-45.),其具体机制还需进一步研究。组织病理切片反映了姜黄浸膏散作用后,肝脏组织病变得到了明显的改善,进一步证明草鱼肝脏得到了修复。另外,姜黄浸膏散作用下,各指标降低或增强程度大于阳性对照组,说明姜黄浸膏散作用效果优于阳性对照药物肝胆利康散。
综上所述,姜黄浸膏散对鱼类肝脏损伤具有一定的修复作用,应用姜黄浸膏散开发渔用保肝护肝药物具有良好前景。
2、姜黄浸膏散大塘应用试验:
2.1材料:
2.1.1实验动物:
姜黄浸膏散预防肝损伤的实验对象:武汉市龚家铺某个体养殖户的三个养殖池塘,池塘水深平均1.5m,均为3亩,主养草鱼。依次编号为1号、2号、3号。选取1号池塘为空白对照组,2号、3号池塘为试验组。
姜黄浸膏散治疗肝损伤的实验对象:武汉市东西湖三个个体养殖户的养殖池塘。依次编号为1号、2号、3号。其中1号试验池塘面积12.7亩,草鱼约1000尾。2号试验池塘面积11.4亩,草鱼约1000尾,3号池塘面积20.5亩,草鱼约2000尾。1号池塘设置为对照组,2号池塘为阳性药物(国标中药肝胆利康散)组,3号池塘为姜黄浸膏散试验组。
2.1.2实验药物:
试验药物姜黄素浸膏散,含量1.349mg/g,湖北中医大学提供;对照药物肝胆利康散,武汉中博水产生物技术有限公司生产,生产批号130304。
2.2试验方法与结果:
2.2.1预防试验方法:
用姜黄浸膏散拌饲料投喂试验组池塘,添加量为饲料量的1‰,空白对照组投喂空白商品饲料,1日2次,共30d。试验结束后,在3组试验池塘各随机捞取草鱼20尾,解剖观察肝脏形态。
2.2.2治疗试验方法:
治疗所选取的3个池塘的草鱼均有患病情况,经解剖确定草鱼患肝胆综合症,且3个池塘草鱼平均的患病程度相当。2号试验组的饲料添加阳性药肝胆利康散,添加量为饲料量的2‰。3号试验组的饲料添加姜黄浸膏散,添加量为饲料量的1‰,1号空白对照组投喂空白饲料。1日2次,连续投喂7d。试验结束后,在3组试验池塘各随机捞取草鱼20尾,解剖观察肝脏形态。
2.2.3姜黄浸膏散预防肝损伤的试验结果:
试验结束后,解剖发现空白对照组草鱼肝脏颜色发白,呈贫血状态,有些肝脏发黄,而试验组草鱼肝脏色泽均匀,呈鲜红色,有弹性。
姜黄浸膏散对草鱼保护率达97.5%,而未使用姜黄浸膏散的空白试验组草鱼肝损伤率达到95%,结果见表3。
表3姜黄浸膏散预防肝损伤试验结果
2.2.4姜黄浸膏散治疗肝损伤试验结果:
试验前解剖草鱼,发现肝脏发白、发黄、易碎,试验结束后,用药草鱼肝脏颜色鲜红、有弹性,而空白对照组,草鱼肝脏发白、发黄情况严重。姜黄浸膏散治疗肝损伤的治愈率达到90%,阳性药肝胆利康散的治愈率达到85%,空白试验组的自然痊愈率只有5%,结果见表4。
表4姜黄浸膏散治疗肝损伤试验结果
3讨论
预防试验中,拌饲投喂30d,空白对照组中草鱼有95%出现肝损伤,而试验组投喂拌有姜黄浸膏散的饲料后出现肝损伤的草鱼只有2.5%,预防试验结果可知,本实验研制的姜黄浸膏散具有良好的保肝护肝的作用。治疗试验中,姜黄浸膏散对草鱼肝损伤的治愈率达到90%,而阳性药肝胆利康散对肝损伤的治愈率达到85%,没有用药的空白对照组的自然痊愈率只有5%,治疗试验结果可知,姜黄浸膏散对鱼类肝损伤具有良好的修复作用。
大塘试验证明,姜黄浸膏散对肝损伤有很好的预防和修复作用,可以应用于草鱼养殖过程中对肝胆综合症的预防和治疗。