CN103349667A

CN103349667A - 淫羊藿苷在防治创伤性脑损伤中的用途

Info

Publication number: CN103349667A
Application number: CN2013101391811A
Authority: CN
Inventors: 石京山; 陈澜; 龚其海; 李明刚
Original assignee: Zunyi Medical University
Current assignee: Zunyi Medical University
Priority date: 2013-04-22
Filing date: 2013-04-22
Publication date: 2013-10-16

Abstract

本发明公开了淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损伤药物中的应用。本发明采用淫羊藿苷作为制备防治创伤性脑损伤的药物，利用了淫羊藿苷的多靶点神经保护作用，根据动物体内实验证明，淫羊藿苷具有明显的改善神经行为学功能，明显降低脑水含量，以及明显降低TNF-α、IL-1βmRNA表达的作用。本发明发掘了已知中草药淫羊藿中的特异性单体淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损的新用途，开拓了新的应用领域。

Description

淫羊藿苷在防治创伤性脑损伤中的用途

技术领域

本发明属于药学领域，尤其是淫羊藿苷的多靶点神经保护作用在制备防治创伤性脑损伤的药物组合物中的应用。

背景技术

创伤性脑损伤是临床上致死致残的重要原因之一，已成为威胁人们生命的重要疾患，对社会和病人家庭造成极大的经济和心理负担。TBI是由于直接机械外力作用于神经元、轴索、胶质细胞以及血管等脑组织造成原发性脑损伤，临床表现为头痛、头昏、恶心呕吐、逆行性遗忘以及意识的障碍；伤后数分钟或数小时在原发性脑损伤基础上引发继发性脑损伤，出现一系列细胞、神经生化和代谢变化，临床表现为颅内血肿出现急性颅内压增高症状，头痛进行性加重，烦燥不安，频繁呕吐等。继发性脑损伤是一个极为复杂的病理过程，包括谷氨酸兴奋性神经毒性，钙离子超载，脂质过氧化，血脑屏障破坏，过度免疫炎症反应以及细胞凋亡等多种机制参与，并且相互作用。继发性脑损伤是造成TBI病人死亡和残疾的病理基础，TBI治疗主要针对继发性脑损伤的防治。

研究表明，TBI后，血脑屏障很快被破坏后，血液中白细胞和一些分子进入脑组织，从而启动一系列分子和细胞级联反应，导致免疫激活和炎症反应，炎症因子的过度表达会造成组织损伤，这些炎症因子包括肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素1β（IL-1β）等，而这一系列的炎性反应会导致或加重脑水肿，脑水肿后易导致颅内压增高和脑疝，是TBI后导致死亡的重要原因之一。

国内外一些研究者根据现有对TBI病理机制的认识和了解，开展了大量对TBI神经保护治疗的研究，发现了许多神经保护药物，特别是近30多年来TBI神经保护的研究取得较大的进展。有百余种神经保护剂实验室研究证实对TBI动物模型有效，但至今为止，临床试验尚未

证实一个能降低重型TBI病人死亡率和有效改善患者伤后神经功能的药物。其中原因非常复杂，一个重要原因可能是目前神经保护剂往往阻断TBI某一个靶点或病理途径，如氧自由基清除剂、钙通道阻滞刹、改善脑微循环和脯缺血药物、能量代谢支持剂等。

TBI有着多机制的非常复杂的病理级联反应过程，备病理机制之间均相互联系，相互影响。从理论上来看，单一靶点神经保护剂或治疗方法疗效必然有限。如果能同时阻断多个TBI靶点，其神经保护作用应该比单一靶点神经保护剂更有效。因此，有学者提出多效神经保护的概念，即同时能阻断多个靶点，对各类型脑损伤包括TBI发挥多种效果的神经保护作用，以期达到较理想的疗效。

淫羊藿为我省的道地中药材，是使用悠久的传统中药之一，属小檗科淫羊藿植物，目前贵州产淫羊藿多达15种以上，其中，巫山淫羊藿为《中国药典》收载品种；粗毛淫羊藿、天平山淫羊藿、黔岭淫羊藿、毡毛淫羊藿，为《贵州省中药材、民族药材质量标准》收载品种。具有“补肾阳，强筋骨，祛风湿，益气力，强志”等功效。

淫羊藿苷(Icariin，ICA)是淫羊藿的主要活性成分之一，分子式为C₃₃H₄₀O₁₅，分子量676.67，结构式为：

现代药理学研究表明，ICA具有抗肿瘤、增强免疫功能、改善心脑血管功能、调节内分泌、抗骨质疏松等作用。有文献报道，发现ICA对脑缺血、缺氧有保护作用，其作用机制与ICA阻滞钙通道促进血管扩张有关；ICA可通过降低海马炎症介质而减轻LPS诱导大鼠学习记忆减退；ICA可以改善永久性结扎双侧颈总动脉法所致血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，其作用机制可能包括：（1）升高SOD活性，减少MDA生成，抑制神经细胞内脂质过氧化作用；（2）促进神经细胞功能的恢复，增加ChAT及AChE表达；（3）增强线粒体的功能，抑制神经细胞凋亡有关；结合上述文献报道及实验研究，我们推断ICA具有多靶点的神经保护作用。未见有关ICA对创伤性脑损伤的保护作用的报道。

发明内容

本发明的目的是：提供一种淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损伤药物中的应用，将淫羊藿苷用于制备防治创伤性脑损伤的药物组合物中，具有良好的防治效果，以克服现有技术的不足。

本发明是这样实现的：淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损伤药物中的应用。

所述的创伤性脑损伤包括原发性脑损伤和继发性脑损伤。

为了验证本发明的实验效果，进行了以下体内实验：

1、试验材料：实验所采用的淫羊藿苷的分子式为：C₃₃H₄₀O₁₅（可市购）。

2、试验方法：通过Feeney’s法诱导大鼠TBI模型实验研究，检测淫羊藿苷对脑含水量的影响；对炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素1β（IL-1β）mRNA表达的影响；以及对行为学特征的影响。

试验1、淫羊藿苷对SD大鼠神经行为学功能的影响

雄性SD大鼠(体重250-350 g)随机分为Control对照组、Model、Model＋ICA10、ICA20 mg/kg治疗组，造模前一周连续灌胃给药，每天两次，空白组灌胃等量生理盐水，TBI后24小时取材。模型制备步骤：采用改进后的Feeney自由落体脑损伤装置，造成中度脑损伤，具体方法和步骤为：7％水合氯醛 0.5mL/100g，经腹腔麻醉，将大鼠固定于立体定位仪上，剪毛后消毒铺巾，矢状切开头皮，显露左顶骨，于中线左侧旁开约2.5mm，前囱后约2.5mm处钻开颅骨，保护硬膜完整，扩大骨窗至直径约5mm。用20g聚乙烯击锤从30c m高处撞击头，造成右侧大脑半球中度脑损伤。撞击后，大鼠出现短暂的四肢抽搐、呼吸暂停数秒钟，表明致伤成功，随后拆开致伤装置，清创、止血，缝合头皮，动物清醒后分笼喂养。

取材前按照下述方法进行神经行为学评分（8分法）：

铁网法：0分=大鼠快速攀爬铁网；1分=攀爬缓慢；2分=攀爬静止不前；3分=30-60s之间掉下铁网；4分=30s之内掉下；

平衡法（木块宽1.5cm）：0分=自由行走；1分=60s内保持平衡；2分=抱住木头超过60s；3分=30s-60s掉下；4分=30s之内掉下。

检测结果如图1所示，Control对照组的神经行为学评分为0.9、Model组的神经行为学评分为5.1、Model＋ICA10的神经行为学评分为1.6、Model+ICA20治疗组为2.9，根据检测结果得知，采用了淫羊藿苷进行治疗的中度脑损伤的雄性SD大鼠，其神经行为学评分明显比没有经过淫羊藿苷治疗的低，因此证明，具有明显的改善神经行为学功能的作用。

试验2、淫羊藿苷对SD大鼠脑含水量的影响

雄性SD大鼠(体重250-350 g)随机分为Control对照组、Model、Model＋ICA10、Model+ICA20治疗组，造模前一周连续灌胃给药，每天两次，空白组灌胃等量生理盐水，TBI后24小时取材。制模步骤与同试验1，取材后用精密天平称取整个大脑湿重，于100℃烤箱中烘烤24h，称取干重，按公式计算脑含水量。脑含水量/％ =( 湿重-干重 )/湿重 ×100%。

检测结果如图2所示，Control对照组的脑含水量为77.8%、Model组的脑含水量为78.2%、Model＋ICA10治疗组的脑含水量为77.95%、Model+ICA20治疗组脑含水量为77.87%，根据检测结果得知，采用了淫羊藿苷进行治疗的中度脑损伤的雄性SD大鼠，其脑含水量明显比没有经过淫羊藿苷治疗的低，因此证明，具有明显的降低脑含水量的作用。

试验3、淫羊藿苷对SD大鼠炎症因子TNF-α、IL-1βmRNA表达的影响

雄性SD大鼠(体重250-350 g)随机分为Control对照组、Model、Model＋ICA10、Model+ICA20 mg/kg治疗组，造模前一周连续灌胃给药，每天两次，空白组灌胃等量生理盐水，TBI后24小时取材。制模步骤与同试验1，取材后采用real time RT-PCR法测定其TNF-α、IL-1β mRNA表达。

检测结果如图3、4所示：

图3为TNF-α mRNA的表达，Control对照组的mRNA表达量为100、Model组的mRNA表达量为606、Model＋ICA10治疗组的mRNA表达量为343、Model+ICA20治疗组的mRNA相对表达量为为211，根据检测结果得知，采用了淫羊藿苷进行治疗的中度脑损伤的雄性SD大鼠，其TNF-α mRNA的表达明显比没有经过淫羊藿苷治疗的低，因此证明，具有明显的降低TNF-α mRNA的表达的作用。

图4为IL-1β mRNA的表达，Control对照组的mRNA表达量为100、Model组的mRNA表达量为6864、Model＋ICA10治疗组的mRNA表达量为854、Model+ICA20治疗组的mRNA相对表达量为为619，根据检测结果得知，采用了淫羊藿苷进行治疗的中度脑损伤的雄性SD大鼠，其IL-1β mRNA的表达明显比没有经过淫羊藿苷治疗的低，因此证明，具有明显的降低IL-1β mRNA的表达的作用。

根据以上试验的检测结果显示，所述的淫羊藿苷能够降低脑含水量；能够降低炎症因子肿瘤坏死因子和白介素1β mRNA的表达；能够改善行为学功能。淫羊藿苷具有多靶点神经保护作用，可应用于制备药物组合物防治创伤性脑损伤，包括原发性脑损伤和继发性脑损伤。

本发明采用淫羊藿苷作为制备防治创伤性脑损伤的药物，它利用了淫羊藿苷的多靶点神经保护作用，根据动物体内实验证明，淫羊藿苷具有明显的改善神经行为学功能，明显降低脑水含量，以及明显降低TNF-α、IL-1β mRNA表达的作用。本发明发掘了已知中草药淫羊藿中的特异性单体淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损的新用途，开拓了新的应用领域。本发明材料来源广泛，易于获取，用于制备药物简单易行、治疗效果好。

附图说明

图1 是淫羊藿苷（ICA）改善神经行为学功能；

其中，Control为空白对照组，Model为模型组，ICA10代表淫羊藿苷10mg/kg治疗，ICA20代表淫羊藿苷20mg/kg治疗，Neurological deficit score为神经行为学评分，分值越高，表明神经行为学功能损伤越严重，*：和模型相比，P<0.05。

图2 是淫羊藿苷降低脑含水量；

其中，Control为空白对照组，Model为模型组，ICA10代表淫羊藿苷10mg/kg治疗，ICA20代表淫羊藿苷20mg/kg治疗，Brain water content（%）为脑含水量，*：和模型相比，P<0.05。

图3 是淫羊藿苷降低TNF-α mRNA的表达；

其中，Control为空白对照组，Model为模型组，ICA10代表淫羊藿苷10mg/kg治疗，ICA20代表淫羊藿苷20mg/kg治疗，TNF-α 为肿瘤坏死因子，relative transcript levels (% of Control)代表TNF-α mRNA的相对转录水平，Control设定为100，以占空白对照组的百分之多少表示，*：和模型组相比，P<0.05。

图4 是淫羊藿苷降低IL-1β mRNA的表达；

其中，Control为空白对照组，Model为模型组，ICA10代表淫羊藿苷10mg/kg治疗，ICA20代表淫羊藿苷20mg/kg治疗，IL-1β为白介素1β，relative transcript levels (% of Control)代表IL-1β mRNA的相对转录水平，Control设定为100，以占空白对照组的百分之多少表示，*：和模型组相比，P<0.05。

具体实施方式

本发明的实施例1：取淫羊藿苷5g、药用淀粉75 g、微晶纤维素20 g，将药用淀粉先干燥，过120目筛，再与淫羊藿苷、微晶纤维素混合，过两次120目筛，填入硬胶囊中，制成1000粒本发明胶囊。每粒硬胶囊含主药成分0.5 mg。

本发明的实施例2：淫羊藿苷 5g、羟丙甲纤维素6g、羧甲淀粉钠10g，微晶纤维素8g，乳糖115g、淀粉50g，硬脂酸镁1g；将主药与辅料充分混匀后投入高速搅拌机中，喷雾加水适量，整粒，水分控制在3~4%，然后压片，制成1000片，包薄膜衣。

本发明的实施例3：淫羊藿苷5g，加入400 ml聚乙二醇200溶解，再加入适量蒸馏水进行稀释，然后再加入适量蔗糖并调整体积至1000 ml，搅匀，过滤，灌装成10 ml 或20 ml 每只，灭菌包装。

Claims

1.淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的淫羊藿苷在制备防治创伤性脑损伤药物中的应用，其特征在于：所述的创伤性脑损伤包括原发性脑损伤和继发性脑损伤。