CN103349637A - 具有美白保湿功效的中药复方提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，公开了一种具有美白保湿功效的中药复方提取物及其制备方法与应用。该中药复方提取物由下述按质量份数计的中药原料制备而成：白及10～50份，川芎10～50份，泽泻10～50份，鱼腥草10～35份，女贞子10～35份，香附10～35份。本发明运用超临界提取技术和ZLUPD高压差连续式低温高效提取对中草药中的有效成分进行提取，具有质量可控性高、提取效率高、利用率高、运行成本低和环境污染低等优点。

Description

具有美白保湿功效的中药复方提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于中药领域，特别涉及一种具有美白保湿功效的中药复方提取物及其制备方法与应用。

背景技术

目前市面上很多美白保湿产品多采用化学合成品以治标为主，虽有疗效快的优点，但毒副作用明显，而且疗效很不稳定。中药美白保湿是一个非常传统天然的方法，讲究的是调理为主，通过调节皮肤的代谢和微循环来改善皮肤的质地，安全无毒，疗效稳定。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种具有美白保湿功效的中药复方提取物。

本发明的又一目的在于提供上述具有美白保湿功效的中药复方提取物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述具有美白保湿功效的中药复方提取物的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种具有美白保湿功效的中药复方提取物，该中药复方提取物由下述按质量份数计的中药原料制备而成：

白及     10～50份

川芎     10～50份

泽泻     10～50份

鱼腥草   10～35份

女贞子   10～35份

香附     10～35份。

优选地，该中药复方提取物由下述按质量份数计的中药原料制备而成：

白及     35～45份

川芎     35～45份

泽泻     20～30份

鱼腥草   15～25份

女贞子   10～20份

香附     10～20份。

上述具有美白保湿功效的中药复方提取物的制备方法，包括以下操作步骤：

（1）将10～50质量份川芎、10～35质量份鱼腥草和10～35质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度35～55℃，萃取压力20～50Mpa，萃取时间为1～3h，CO₂流速为10～25L/h；所述分离采用温度35～55℃，压力为3～10Mpa；

（2）将10～50质量份白及、10～50质量份泽泻和10～35质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在2～7℃；

（3）抽真空：在20～50秒内将压差提取器抽真空至-50MPa～-100MPa，保持2～5分钟，喷入15℃的水溶液进行提取；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，在1～3分钟内使压差提取器内压力升至0MPa；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持2～5分钟；

（6）减压：停止加压，再次抽真空使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）将步骤（3）～（6）循环操作；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液过滤，滤液浓缩，得浓缩液；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物。

步骤（3）所述水溶液的用量为中药原料质量的5倍。

步骤（7）所述循环的次数为5～7次；步骤（8）所述过滤是采用通过中空纤维过滤器进行过滤，所述浓缩液在25℃的相对密度为1.02。

上述的一种具有美白保湿功效的中药复方提取物在制备美白保湿护肤品中的应用。

所述具有美白保湿功效的中药复方提取物在美白保湿护肤品中的质量百分含量为0.1～20%，优选质量百分含量为1～8%。

所述美白保湿护肤品中还可以含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、表面活性剂、醇类化合物或水。

所述美白保湿护肤品为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、奶液、护肤液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂。

各种中药原料的药理疗效如下：

本发明复方中药提取物中的白及是兰科植物白及的干燥块茎。富含白及胶质、淀粉、葡萄糖、挥发油、粘液质及蒽醌衍生物、白及素B等多种化学成分，具有美白祛斑、收敛止血、消肿生肌的功效，外敷治创伤出血、痈肿、烫伤、疔疮等；外用涂擦，可消除脸上痤疮般下的痕迹，有效平衡肌肤，保持肌肤水润。多用于头面部美容治疗及美容保健，能促进上皮细胞修复，直接参与受损组织和细胞的修复和代谢过程。尤其是所含的白及胶质即白及葡聚糖长久以来被认为是免疫***中的非待定刺激物，通常会引起巨噬细胞活化，而巨噬细胞活化会引起一连串的反应，首先会引起纤维原细胞和角化细胞的迁移，从而产生表皮细胞生长因子（ECGF）和血管生成因子（AF）来对抗衰老起皱的皮肤，同时促进胶原蛋白和弹性蛋白的生成，从而改善皮肤外观，消除皱纹。

川芎辛温香燥，有活血行气，祛风止痛的作用。主要的化学成分有蒿本内酯、川芎嗪、阿魏酸、叶酸、维生素A等，常用于皮肤科疾患。通过改善皮肤血液循环和抑制皮肤组织细胞内衰老代谢常物而达到活化皮肤细胞及延缓皮肤老化的目的，其所含的维生素A有一定的滋养作用，还有抗维生素E缺乏及抑制络氨酸酶的作用，使面部皮肤增白、润滑光泽，能防止痤疮和各种色素斑的产生。川芎中含有的阿魏酸是科学界公认的美容因子,它能防止因日晒而形成的色斑及雀斑，还能抑制自由基的过量产生，改善肤质，调节内分泌，使肌肤细腻光泽,富有弹性。其作用机理是通过抑制色素细胞的酪氨酸脢（Tyrosinase）与铜离子反应，来减少黑色素的形成与沉淀。

泽泻味甘、淡、寒，能利水渗湿、清湿热，驻颜泽面。主要成分含脂肪酸、氨基酸、卵凝脂、糖类及多种微量元素，可营养和润泽皮肤，使皮肤光滑柔嫩，皱纹舒展。还含有泽泻醇A、B、C及乙酸酯等，有增强免疫、抗炎、抗病毒、抑菌的作用，可加速皮层的血液循环，有抑制黑色素形成作用，具有柔滑、润泽和调理皮肤的作用。现代皮肤科常用于治疗各种皮肤疾患，对湿疹、炎症性及粗糙皮肤有明显的疗效。

鱼腥草是一种多年生的草本植物，能清热解毒；排脓消痈。全草含挥发油，内含抗菌有效成分为癸酰乙醛（即鱼腥草素）、月桂醛、a-蒎烯和芳樟醇等，具有抗菌、抗病毒的作用，所含的槲皮素、槲皮甙及异槲皮甙等黄酮类化合物亦有显著抗炎作用，能显著抑制炎症早期的毛细血管亢进。同时还具有抗辐射作用和增强机体免疫功能的作用，且无任何毒副作用，

女贞子为木樨科植物的干燥成熟果实，味甘、苦，性凉，归肝肾二经。具有滋补肝肾、益阴养血之功。女贞子中含有齐墩果酸、熊果酸、甘露醇、磷脂以及糖类如女贞子多糖、***糖、葡萄糖等，还含有15种氨基酸，11种微量元素及挥发油等。现代医学研究证明女贞子有降血糖及降血脂并有抗动脉粥样硬化作用，还有抗菌、抗病毒作用，女贞子煎剂对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌和大肠杆菌均有抑制作用，且具有显著的免疫增强作用，清除自由基从而抗衰老。

香附主要含有挥发油类成分，此外，还有糖类、生物碱、甙类、黄酮类、酚类和三萜类化合物等。香附挥发油中含有多种单萜、倍半萜及其氧化物。现代药理实验表明，香附挥发油有轻度***样活性，可使上皮细胞完全角质化，在挥发油成分中，以香附子烯的作用最强。香附中含有的黄酮类成分是一种有效的自由基清除剂，具有抗氧化作用，对人体的祛黄褐斑作用也十分明显。

本发明的原理是：

本发明的复方中药提取物是利用ZLUPD高压差连续式低温高效提取技术提取制备而成。当采用高压差特别是低温条件下提取时，能有效防止药材复杂成分的变化，提取液通过多级膜进行物理分离和浓缩，能有效的除去溶媒不溶部分，能有效阻隔了可致使皮肤细胞毛孔堵塞的鞣质等大分子物质、灰尘等杂质。高压差低温提取的方法不仅提高了药物有效成分的利用率，而且大部分的溶媒可循环利用，质量可控程度高，耗能少。

CO₂超临界流体萃取（Supeporitical Fluid Extraction,SFE）技术是近年发展起来的一项新技术。在超临界状态下流体兼有气液两相的双重特点，既具有与气体相当的高扩散系数和低粘度，又具有与液体相近的密度和对物质良好的溶解能力，因此可作为溶剂进行萃取。对中药挥发油的提取，传统的方法是水蒸气蒸馏法，但它有许多弊端，如有效成分易被破坏，提取时间过长等。SFE技术与之比较其主要优点有如：挥发油的收率明显、提取时间缩短、没有残留的有机溶剂等。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：本发明运用超临界提取技术和ZLUPD高压差连续式低温高效提取对中草药中的有效成分进行提取，具有质量可控性高、提取效率高、利用率高、运行成本低和环境污染低等优点。本发明所述的复方中药提取物，现代药理研究发现这些药物可增强SOD活性，清除自由基，抗脂质过氧化，降低血浆纤维蛋白原浓度，促进细胞解聚，降低血液粘度，扩张血管，改善血流状况，调节内分泌，增加面部营养，能有效的除去老化角质，改善皮肤的新陈代谢，增加皮肤活性，促进血液循环，减少皱纹；改善皮肤的柔润程度。具有的抗衰老、美白、保湿的效果；同时因纯天然的植物成分，安全、无毒，对皮肤刺激性小，性质稳定。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

（1）将10质量份川芎、35质量份鱼腥草和35质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，萃取压力35Mpa，萃取时间为150min，CO₂流速为20L/h，所述分离采用温度45℃，压力为7Mpa；

（2）将10质量份白及、10质量份泽泻和35质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅰ。

实施例2

（1）将35质量份川芎、15质量份鱼腥草和10质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，萃取压力35Mpa，萃取时间为150min，CO₂流速为20L/h；所述分离采用温度45℃，压力为7Mpa；

（2）将35质量份白及、20质量份泽泻和10质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅱ。

实施例3

（1）将40质量份川芎、20质量份鱼腥草和15质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，提取压力35Mpa，提取时间为150min，CO₂流速为20L/h，在分离温度45℃，分离压力7Mpa下收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；

（2）将40质量份白及、25质量份泽泻和15质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅲ。

实施例4

（1）将45质量份川芎、25质量份鱼腥草和20质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度35℃，提取压力20Mpa，提取时间为3h min，CO₂流速为25L/h；所述分离采用温度35℃，压力为3Mpa；

（2）将45质量份白及、30质量份泽泻和20质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在2℃；

（3）抽真空：20秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持2分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时1分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持2分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅳ。

实施例5

（1）将50质量份川芎、15质量份鱼腥草和10质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度55℃，提取压力50Mpa，提取时间为1h，CO₂流速为10L/h；所述分离采用温度55℃，压力为10Mpa；

（2）将50质量份白及、50质量份泽泻和10质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在7℃；

（3）抽真空：50秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持5分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时3分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持5分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环5次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅴ。

对比例1

（1）将40质量份川芎和15质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，提取压力35Mpa，提取时间为150min，CO₂流速为20L/h；所述分离采用温度45℃，压力为7Mpa；

（2）将25质量份泽泻和15质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环7次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅵ

对比例2

（1）将20质量份鱼腥草和15质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，提取压力35Mpa，提取时间为150min，CO₂流速为20L/h；所述分离采用温度45℃，压力为7Mpa；

（2）将40质量份白及和15质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅶ

对比例3

（1）将40质量份川芎和20质量份鱼腥草分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉放入萃取釜，采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度45℃，提取压力35Mpa，提取时间为150min，CO₂流速为20L/h；所述分离采用温度45℃，压力为7Mpa；

（2）将40质量份白及和25质量份泽泻分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在4℃；

（3）抽真空：30秒内，利用真空站抽真空，使压差提取器内形成真空，真空度控制在-50MPa～-100MPa，保持3分钟，喷入15℃的水溶液，其质量相当于步骤（1）和（2）所使用中药原料质量的5倍；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，使压差提取器内压力逐渐升至0Mpa，需时2分钟；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持3分钟；；

（6）减压：停止加压，启动抽真空，使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）循环提取：继续步骤（3）～（6），循环6次；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液通过孔径为1.0μm的中空纤维过滤器过滤至澄清；将滤液浓缩，浓缩至相对密度为1.02（25℃测量，以水的密度为基准）；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物Ⅷ

效果实施例：

一、检测方法

用二甲基亚砜分别将前述实施例所得复方中药提取物配制成浓度为质量体积比1％的活性成分溶液，进行以下的实验。

（1）自由基清除作用的测定

取活性成分溶液2ml及浓度为100μmol/L的二苯基苦基苯肼（DPPH）溶液（该溶液的溶剂是为水）2ml先后加入同一具塞试管中，摇匀；室温下静置30分钟，以溶剂为空白于517nm波长下测定样品吸光度。

抑制率：K%=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%；

Ai：2ml DPPH溶液+2ml活性成分溶液的吸光度；

Aj：2ml活性成分溶液+2ml溶剂（即二甲基亚砜）的吸光度；

Ac：2ml DPPH溶液+2ml溶剂（即二甲基亚砜）的吸光度。

（2）抗紫外线性能测定

在280～400nm波长范围内，每隔10nm进行扫描，确定各波长下活性成分溶液的透光率，计算波长范围的平均吸收率。

（3）抑制小鼠黑色素细胞中酪氨酸活力试验

将处于对数生长期的B16小鼠黑色素细胞（中科院细胞库）接种于96孔板中，培养基为RPMI1640+体积百分比10%的小牛血清，每孔100μl（10⁴个细胞/well），置37℃、5%CO₂培养箱中培养24h后，添加过滤除菌后的活性成分溶液50μl。继续培养3d后，弃去上清液，用pH值为6.8的0.15%（w/v）聚丁二酸丁二醇酯冲洗两遍，每孔加90μl含1%（体积分数）Triton X-100的PBS（pH值7.4）。冰浴中超声破碎，每孔加10μl10mmol/L的L-多巴（L-dopa），37℃孵育60min，于475nm处比色，空白孔调零，测各孔吸光度值。

抑制率=（1-药物组平均吸光度值+对照组平均吸光度值）×100%

（4）抑制小鼠黑色素细胞中黑色素合成试验

将B16小鼠黑素瘤细胞以1×10⁵个/ml的密度接种于直径为9cm的培养皿，在37℃、5%CO₂的条件下培养2天，弃上清液，加入过滤除菌后的活性成分溶液18-22ml，接着培养3天，弃上清液，PBS洗涤，每孔加入0.5ml质量百分比0.2%的胰酶溶液消化细胞3min，每皿加2ml维持液终止消化。吹打混匀后，每种浓度取出0.5ml做细胞计数。其余细胞悬液以2500r/min离心5min，弃上清液，于沉淀中加入NaOH溶液，加热使黑色素溶解，选择490nm波长的酶联免疫检测仪上测吸光度值。

黑色素合成抑制率=[1-(药物孔吸光度值+药物孔细胞密度)+（对照孔吸光度值+对照孔细胞密度）]×100%

（5）保湿效果的检测：

皮肤角质层水合率试验：工作原理是以电容器为仪器探头，由于水是皮肤上介质常数最大的物质，当皮肤水分含量发生变化时，皮肤的电容值也发生变化，所以可以通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面水分含量。常用的仪器是Corneometer CM825。通过测量使用产品前后皮肤角质层电容值的变化来衡量角质层含水量的变化，从而来评价化妆品的保湿功效此种方法对皮肤角质层的水分含量进行定量化，能够灵敏地反应皮肤水分含量的变化，且重现性好，是目前保湿化妆品功效评价常用的方法之一。

实验方法：在应试者左右前臂屈侧划出3×3cm²大小的正方形实验区域，以左臂作为保湿品的测试区域，右臂相应的对称区域为空白对照，然后用Corneometer CM825测试检测每个试验部位的水分含量，分别重复5次，得出平均值。用式（1）计算水合率。

二、实验结果：

（1）自由基清除作用的测定，结果如表1所示：

表1自由基清除作用检测结果

	抑制率（%）
		实施例1	87.4
实施例2	88.5
		实施例3	88.2
实施例4	88.8
		实施例5	87.9
对比例1	75.7
		对比例2	65.8
对比例3	80.1

（2）抗紫外线性能测定，结果如表2所示：

表2抗紫外线性能测定结果

	吸收率（%）
		实施例1	47.6
实施例2	51.0
		实施例3	51.8
实施例4	49.9
		实施例5	48.5
对比例1	25.6
		对比例2	40.2
对比例3	43.5

（3）抑制小鼠黑色素细胞中酪氨酸活力试验，结果如表3所示：

表3酪氨酸活力试验结果

	抑制率（%）
		实施例1	54.7
实施例2	55.9
		实施例3	56.7
实施例4	56.1
		实施例5	55.7
对比例1	43.8
		对比例2	32.7
对比例3	48.2

（4）抑制小鼠黑色素细胞中黑色素合成试验，结果如表4所示：

表4黑色素合成试验结果

	抑制率（%）
		实施例1	58.6
实施例2	61.1
		实施例3	62.3
实施例4	59.8
		实施例5	58.8
对比例1	51.1
		对比例2	40.3
对比例3	53.9

（5）保湿效果的检测，结果如表5所示：

表5保湿效果实验结果

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	对比例1	对比例2	对比例3
									1h	80%	81%	83%	84%	82%	58%	73%	75%
2h	73%	75%	76%	73%	72%	42%	66%	69%
									4h	52%	53%	55%	50%	52%	36%	44%	48%
6h	48%	46%	48%	48%	49%	29%	37%	43%
									8h	43%	45%	44%	45%	47%	25%	33%	40

上述实验结果表明，本发明的复方中药提取物能有效抑制酪氨酸酶活性、抑制黑色生成，同时具有清除自由基和抗紫外线的功能，美白保湿效果显著。

应用实施示例

（1）美白保湿霜的制备

本发明取上述复方中药提取物配制成美白保湿霜，配方如下（按质量百分比计）：

美白保湿霜的制作工艺如下：

（1）在油相锅里加入油相A中的霍霍巴油、牛油果树果脂、环聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛酸/甘油三酯、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基葡糖倍半硬脂酸酯和四-（二丁基烃基氢化肉桂酸）季戊四醇酯，边搅拌边加热至85℃；

（2）在水相锅里加入水相B中的去离子水、卡波姆、泛醇、甘油和EDTA二钠，边搅拌边加热至85℃；

（3）对乳化锅进行抽真空后分别抽油相和水相到乳化锅匀质搅拌均；

（4）待温度降至65℃后加入C相三乙醇胺再均质，冷却至45℃后加入D相中的（日用）香精，甲基异噻唑啉酮，在搅拌状态下加入E相复方中药提取物（上述实施例和对比例制备得到的）；

（5）待温度降至36℃后停止搅拌，出料，得到复方中药提取物美白保湿保湿霜。

美白保湿霜分别由复方天然植物提取物I、II、III、IV、V按照上述方法制得美白保湿霜I、II、III、IV、V。

将上述制备得到的美白保湿霜进行临床试用观察。

观察对象：年龄20～45岁妇女。选面部有不同程度的色素沉淀、暗黄、干燥等问题皮肤的女性20例。

观察方法：每天晚上睡觉前清洁皮肤后，涂上上述美白保湿霜。连续使用28天为一个疗程。

疗效标准：（1）显效：色素暗黄消退达90%以上，皮肤有明显的美白润泽光滑感；（2）有效：色素暗黄消退50%以上，皮肤较美白润泽光滑；（3）无效：治疗前后无变化。结果如表6所示：

	显效	有效	无效	总有效率
					美白保湿霜I	14	3	3	85%
美白保湿霜II	15	2	3	85%
					美白保湿霜III	16	3	1	95%
美白保湿霜IV	17	1	2	90%
					美白保湿霜V	15	3	2	90%

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有美白保湿功效的中药复方提取物，其特征在于：该中药复方提取物由下述按质量份数计的中药原料制备而成：

白及     10～50份

川芎     10～50份

泽泻     10～50份

鱼腥草   10～35份

女贞子   10～35份

香附     10～35份。

2.根据权利要求1所述的一种具有美白保湿功效的中药复方提取物，其特征在于：该中药复方提取物由下述按质量份数计的中药原料制备而成：

白及     35～45份

川芎     35～45份

泽泻     20～30份

鱼腥草   15～25份

女贞子   10～20份

香附     10～20份。

3.根据权利要求1所述的一种具有美白保湿功效的中药复方提取物的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：

（1）将10～50质量份川芎、10～35质量份鱼腥草和10～35质量份香附分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉采用CO₂超临界流体萃取，分离收集挥发性有效成分和脂溶性有效成分；所述CO₂超临界流体萃取的萃取温度35～55℃，萃取压力20～50Mpa，萃取时间为1～3h，CO₂流速为10～25L/h；所述分离采用温度35～55℃，压力为3～10Mpa；

（2）将10～50质量份白及、10～50质量份泽泻和10～35质量份女贞子分别干燥、粉碎过筛，得到粗粉；将所得粗粉和步骤（1）经CO₂超临界流体萃取后的药渣置于压差提取器中；所述压差提取器采用冷凝水温在2～7℃；

（3）抽真空：在20～50秒内将压差提取器抽真空至-50MPa～-100MPa，保持2～5分钟，喷入15℃的水溶液进行提取；

（4）减真空：通入经净化的压缩空气，在1～3分钟内使压差提取器内压力升至0MPa；

（5）加压：继续通入经净化的压缩空气，使压差提取器内的压力达到3MPa，保持2～5分钟；

（6）减压：停止加压，再次抽真空使压差提取器内压力降至0Mpa；

（7）将步骤（3）～（6）循环操作；

（8）分离，浓缩：通过离心进行固液分离，离心液过滤，滤液浓缩，得浓缩液；

（9）将步骤（2）所得挥发性有效成分和脂溶性有效成分与步骤（8）所得浓缩液混合均匀，得到用于美白保湿的复方中药提取物。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述水溶液的用量为中药原料质量的5倍。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（7）所述循环的次数为5～7次；步骤（8）所述过滤是采用通过中空纤维过滤器进行过滤，所述浓缩液在25℃的相对密度为1.02。

6.根据权利要求1所述的一种具有美白保湿功效的中药复方提取物在制备美白保湿护肤品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述具有美白保湿功效的中药复方提取物在美白保湿护肤品中的质量百分含量为0.1～20%。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述具有美白保湿功效的中药复方提取物在美白保湿护肤品中的质量百分含量为1～8%。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述美白保湿护肤品中含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、表面活性剂、醇类化合物或水。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述美白保湿护肤品为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、奶液、护肤液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂。