CN103340921B - 一种治疗脾肾阳虚的中药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗脾肾阳虚的中药，它由包括下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴6~15份、黄芪6~15份、淫羊藿3~8份、补骨脂3~8份、山茱萸3~8份。药效试验结果表明：本发明可以显著降低肾脏的脏器指数，提高精囊的脏器指数，对肾阳虚大鼠肾脏及生殖器病变具有一定的改善作用；此外，本发明能够显著降低血清尿素氮水平，缓解肾阳虚大鼠肾脏功能的损害，因此，本发明对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠有一定的治疗作用。本发明还可以通过增加氢化可的松所致肾阳虚小鼠的体重、增强肾阳虚小鼠生殖器官功能等途径对肾阳虚小鼠起到一定的治疗作用。

Description

一种治疗脾肾阳虚的中药及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药，具体涉及一种治疗肾阳虚的中药及其制备方法。

背景技术

脾肾阳虚证以脾肾阳虚、阴寒内盛为特征。脾肾两脏阳气虚衰，温煦、运化、固摄作用减弱测下利清谷，泄泻滑脱或五更泄泻；阳气虚，阴寒内盛，则畏寒肢冷，小腹冷痛，面色(白光)白；肾阳虚，膀胱气化失司，则腰膝酸软，小便不利；阳气虚，水气泛滥，则面目肢体浮肿；舌淡胖，苔白滑，脉沉细，为阳虚阴盛之象。脾肾阳虚常见于虚劳、泄泻、 痢疾、水肿、鼓胀、肾风，以及西医的慢性肠胃炎、慢性肾炎、慢性肾功能衰竭等疾病。临床表现主要为：腰膝酸痛，或腰背冷痛，筋骨痿软，畏寒肢冷，尤以下肢为甚；头目眩晕，精神萎靡，面色白或黎黑；舌淡胖苔白，脉沉弱；男性易阳痿早泄，妇女易宫寒***；或大便久泄不止，完谷不化，五更泄泻；或浮肿，腰以下为甚，按之凹陷不起，甚则腹部胀痛，心悸咳喘等。

现代医学研究表明，脾肾阳虚与神经内分泌免疫***（NEIS）有关，肾阳虚证在下丘脑-垂体-靶腺（肾上腺皮质、甲状腺、性腺、胸腺）轴均有不同环节、不同程度的功能紊乱，且主要的发病环节在下丘脑（或更高级中枢）的调节功能紊乱。

中医认为，肾主水，脾主运化，肾阳对水液有气化蒸腾作用，若肾阳不足，蒸腾气化无力，则出现小便清长等表现，故脾肾阳虚证存在着肾脏的病理改变。肾阳虚证与内分泌功能关系最早研究开始于1959年，邝安堃等用糖皮质激素造成了肾阳虚小鼠模型，并发现模型小鼠的甲状腺、肾上腺、垂体重量和耗氧量发生病理性改变，处于一种严重的消耗状态，呈现肾阳虚。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肾阳虚的中药及其制备方法。

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由包括下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴6~15份、黄芪6~15份、淫羊藿3~8份、补骨脂3~8份、山茱萸3~8份。

本方胡芦巴辛温味咸，温补肾阳除脏寒，黄芪甘温补中，健脾益气，尚兼利水消肿，两药合用，温补之力大增，可补先后天之不足，共为君药；淫羊藿辛温味甘，甘温补肾阳，辛温助行散，补骨脂味苦辛温，补肾阳而纳肺肾之气，山茱萸酸涩而温，滋补肝肾之阴而固涩肾精，三药合用温肾阳、纳肾气、敛肾精共为臣药。

优选地，所述原料还包括下述重量配比的中药材：大黄1~5份。

大黄泄浊解毒，为佐药；大黄尚有活血化瘀之功，兼为使药。

进一步优选地，所述原料还包括下述重量配比的中药材：肉桂3~8份、黄连2~6份。

肉桂辛甘性热芳香，温肾阳而引火归源，导浮游之火入肾，增强下焦气化之功，黄连解毒燥湿，黄连之苦寒还可制约肉桂之辛热，交通心肾，调和阴阳，共为佐药。

组方配伍体现了传统理论与现代研究的有机结合：胡芦巴与补骨脂相配合，温肾助阳、祛寒固肾之功效愈为显著，名为补骨脂丸，出自《简要济众方》；临床观察及实验研究均表明胡芦巴具改善蛋白尿之功，而补骨脂具有调节免疫的功能，能强骨平喘，改善蛋白尿。肉桂与黄连配合，一温一寒，调和阴阳，交通心肾，名为交泰丸，出自《韩氏医通》，两药合用调和了各自的寒热偏性，减少了不良反应。山茱萸与淫羊藿配合，一阴一阳，有收有散，滋补肝肾，强肾敛精，现代医学研究表明具有泌尿生殖***的良好保护作用。大黄能显著改善蛋白尿，与黄连合用，泄浊解毒之力增强，而且缓解了黄连久服容易导致便秘的不良反应。黄芪保护肾脏，益气解毒，减轻蛋白尿，在中医肾病临床已经成为经典认识。全方补中有行，补中有泄，以补为主；温阳敛阴，温寒并用，温阳为主；该方组方特色鲜明、重点突出、统筹兼顾，主要适用于脾肾阳虚证的治疗。而全方合用可共奏补肾健脾，扶阳解毒之功。

再进一步优选地：所述原料的重量配比是：胡芦巴8~12份、黄芪8~12份、淫羊藿4~6份、补骨脂4~6份、山茱萸3~5份、肉桂3~5份、黄连2~4份、大黄1~3份。

最佳地，所述原料的重量配比是：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、肉桂4份、黄连3份、大黄2份。

制备所述中药除了上述原料外，还可以有辅料，所述辅料可以是蔗糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁、山梨醇、甘露醇、乳糖、微晶纤维素、微粉硅胶、羧甲基纤维素、水、矫味剂、防腐剂等这些药物制剂中常规辅料的一种或多种的组合，具体选择哪一种或哪几种辅料应根据所需要制成的剂型来确定。由于根据剂型需要来选择适当的辅料是本领域技术人员都能掌握的常规手段，因此没有将制备本发明药物所需要的辅料纳入到专利要求保护的范围内。

所述中药可以是适合于临床使用的任何一种剂型，例如：汤剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、膏剂、合剂、糖浆剂等。例如，可以将所述原料粉碎成细粉，灭菌后制成散剂直接服用，也可以按照最传统的方式，将所述原料用水煎熬，制成汤剂服用，还可以将所述原料经提取、精制、浓缩后再加入辅料制成适当的剂型。

本发明优选的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液体制剂。当然，要制成这几种剂型，最好是先对原料进行充分、有效地提取、精制，提取精制的目的主要有以下几点：1）富集有效成分，除去无效成分，从而提高药物的疗效，降低药物的副作用；2）尽可能地减少服用剂量，从而提高患者的服药顺应性；3）便于制剂成型。

然而，由于中药的作用机理和成分非常复杂，它采用的是辨证施治，与西药有本质区别，有效和无效成分之间并没有明显的界限，本领域技术人员也不可能通过常规的技术手段分析出中药中究竟哪些是有效成分，哪些是无效成分，也就是说，本领域技术人员不可能在现有技术的教导下，推测出某一中药该采用何种方法进行提取和精制，而是要通过大量创造性试验，用药效或临床进行验证才能得出。否则，提取精制方法选取不当，将会直接影响药物的疗效。

本发明通过大量试验，最终采取分步提取的方法对原料进行提取，其中，黄芪采用水提；黄连、大黄采用醇提；胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂采用水提醇沉。具体的制备方法如下：

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4~10倍水提取1~4次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入4~10倍的50~70%乙醇回流提取1~3次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4~12倍水提取1~4次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1~1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40~70%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35~1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

优选的制备方法是：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加入6倍的60%乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

试验证明：按照上述方法制备的中药药效最好，副作用最低，服用剂量最少，患者的用药顺应性最佳，制备成型最容易。

药效试验结果表明：本发明可以显著降低肾脏的脏器指数，提高精囊的脏器指数，对肾阳虚大鼠肾脏及生殖器病变具有一定的改善作用；此外，本发明能够显著降低血清尿素氮水平，缓解肾阳虚大鼠肾脏功能的损害，因此，本发明对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠有一定的治疗作用。本发明还可以通过增加氢化可的松所致肾阳虚小鼠的体重、增强肾阳虚小鼠生殖器官功能等途径对肾阳虚小鼠起到一定的治疗作用。

附图说明

图1：腺嘌呤造模后的各组大鼠体重变化趋势图。

图2：本发明对氢化可的松所致肾阳虚小鼠脏器指数的影响（与正常组比较：**P<0.05，与模型组比较：^△△P<0.05）。

图3：本发明对氢化可的松所致肾阳虚小鼠每10min自主活动次数的影响（各组间无显著性差异）。

图4：本发明对氢化可的松所致肾阳虚小鼠低温游泳时间的影响（各组间无显著性差异）。

具体实施方式

实施例1

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、肉桂4份、黄连3份、大黄2份。

制备方法是：将黄芪按重量加8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加6倍的60%乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入适量甘露醇、糊精制粒，干燥，制成颗粒剂。

按上述制备方法提取后得到的稠膏中，经检测，黄芪甲苷的含量达25.6mg/g，大黄素含量达8.9mg/g，淫羊藿苷的含量达12.7mg/g，转移率（稠膏中的待测成分总量占药材中待测成分总量的比例）分别为56.4%、32.8%和42.3%。提取效果明显优于常规方法。

性状：本品为棕色颗粒，味苦、微甜。

规格：每袋装12g

用法用量：每次一袋，一日3次。

实施例2

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、大黄2份。

制备方法是：将黄芪按重量加8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将大黄按重量加6倍的60%乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸先按重量加8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入适量甘露醇、糊精制粒，干燥，制成颗粒剂。

实施例3

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份。

制备方法是：将黄芪按重量加8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸先按重量加8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上两种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入适量甘露醇、糊精制粒，干燥，制成颗粒剂。

实施例4  本发明对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠的治疗作用研究

为观察实施例1~3对肾阳虚大鼠的治疗作用，按以下方法对其进行药效学研究。

1、供试品、对照品和试剂

供试品：取实施例1~3用适量双蒸水配制成试验所需浓度，现配现用。

对照品：右归丸，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂提供（国药准字Z11021040），规格：每丸重9g。

试剂：腺嘌呤，AMRESCO公司提供，批号：A0183，规格：100g

尿素氮试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，生产批号：20121026，规格：100T/96样。

肌酐试剂盒：南京建成生物工程研究所提供，生产批号：20121102，规格：100T/96样

2、实验***

实验动物：Wistar大鼠，SPF级，湖北省疾病预防控制中心提供。

动物体重：适应期前3天内称量，体重大概在200~250g。动物的实际体重范围可以有一定的偏差，但须记录在研究记录中。

动物数：雄性60只

实验动物的挑选：研究开始前将所有适用于实验的动物称重。去除一定数量的体重大及体重小的动物后，将剩余的实验所需动物根据体重随机分组。所有用于实验的动物体重都在平均体重的±20%之间。如果在研究中没有足够的动物满足研究所需的体重范围，通知专题负责人以便采取合理的措施。

实验仪器：紫外分光光度仪（上海奥谱勒仪器有限公司）；FA1004型电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16A高速离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）

3、造模方法

大鼠每日灌胃给予2%腺嘌呤混悬液2mL，连续4周。观察其活动、排尿、体毛光泽度及脱落情况，以评价造模效果。

4、给药方法

4.1给药方式：供试品通过灌胃方式给予。

本发明临床给药途径为口服。本实验给药方式采用与临床人用药的给药方式进行。

4.2给药频率和周期：每天一次，共给药三周。

本发明临床给药为“每日三次， 每次一袋”，但动物实验不便于每日三次给药。因此，实验时调整给药剂量，给药频率变为每日一次。

4.3分组与给药剂量

空白对照组：给予等剂量的生理盐水；

模型对照组：给予等剂量的生理盐水；

阳性对照组：给予右归丸；

实施例1组：剂量为3.6g/kg；

实施例2组：剂量为3.6g/kg；

实施例3组：剂量为3.6g/kg；

4.4给药体积：1ml/200g

按照本发明“口服给药每日三次， 每次一袋”，临床剂量以36g/60kg人/日计，则人公斤体重剂量为0.6g/kg；同时，依据《药理学实验方法》第四版（人民卫生出版社）动物剂量换算表设定，大鼠等效剂量为人用剂量的6倍，即3.6g/kg。

5、检测指标

5.1笼边观察

所有动物每天至少进行一次笼边观察，观察内容包括发病、死亡率、损害和供食供水情况。健康状况较差的动物要标出，并进一步观察，根据SOP如有必要须实施安乐死。

5.2详细临床观察

实验过程中所有动物，每天一次进行详细临床观察，观察包括但不仅限于：皮肤，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸腔，腹部，外生殖器，四肢和脚，呼吸道及循环***，自主效应（如流涎），神经***（如震颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。同时，根据中医肾阳虚症状“耗竭”现象（神淡、精神不振、反应迟钝、被毛疏松、失去光泽及脱毛、消瘦、肢尾冷、畏寒肢冷、拱背卷曲等外形衰弱及寒象）初步确定模型成功。

5.3给药后观察

造模成功后开始给药，观察给药期间大鼠各项指标，以及各组之间的差别。主要观察进食情况、体重变化、精神状态、应激反应、皮毛状况等体征。实验结束时，摘取眼球取血，试剂盒测定血清肌酐含量；取睾丸、附睾、***囊、***，去尽***，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脏器指数。

6、实验结果

6.1肾阳虚状态  此实验过程中观察到，肾阳虚大鼠神淡，精神不振，被毛疏松，失去光泽及脱毛，消瘦，拱背卷曲等。经本发明药物治疗后，上述症状明显好转，大鼠精神振奋，活动增加，被毛柔顺且有光泽，体重恢复。

6.2体重变化  体重数据可知，大鼠给予腺嘌呤造模后，除空白对照组体重增加，其余造模动物体重呈下降趋势。造模四周后，空白组和造模动物的体重存在显著性差异（P<0.01）。分组给药后，模型组体重基本维持在原有水平，各给药组大鼠体重均有所增加，其中本发明实施例组体重显著高于模型组（P<0.05），大鼠体重增加高于阳性组。实验结果见图1。

6.3脏器指数  实验结果表明，本发明给药组对肾阳虚大鼠肾脏、睾丸、附睾、***以及精囊等脏器指数均有一定的改善作用。其中，实施例2组可使精囊指数明显增加(P<0.05)，提示本发明可以改善肾阳虚大鼠生殖器官功能。同时，实施例1组和实施例3的肾脏脏器指数低于模型组，与模型组相比具有显著性差异(P<0.05)，提示本发明对于肾阳虚大鼠肾脏结构的病变具有改善作用。结果见表1。

表1  各组大鼠脏器指数

注：*与空白组比较P<0.01；^△与模型组相比P<0.01；^△△与模型组相比P<0.05；**与空白组比较P<0.05。

6.4血清肌酐浓度  血清肌酐含量的结果显示，本发明实施例1组血清肌酐含量低于模型组，但与模型组相比无显著性差异；实施例2、3组血清肌酐含量均高于模型组。阳性组血清肌酐含量明显低于模型组和各给药组，提示本发明对血清肌酐的影响不及阳性药右归丸。实验结果见表2。

表2 各组大鼠血清肌酐浓度（μmol/L）

组别	浓度(μmol/L)
		空白组	81.41±28.89
模型组	108.82±64.16
		阳性组	73.19±16.23
实施例1组	88.05±23.26
		实施例2组	109.65±32.47
实施例3组	116.06±56.07

注：各组间无显著性差异

6.5血清尿素氮浓度  血清尿素氮含量结果显示，本发明各实施例组及阳性组血清尿素氮含量均低于模型组，其中阳性组和实施例1、实施例3组与模型组相比具有显著性差异(P<0.01)。提示本发明可以缓解肾阳虚大鼠肾功能的损害，实施例3组疗效与阳性药相当。结果见表3。

表3 各组大鼠血清尿素氮浓度（mmol/L）

组别	浓度（mmol/L）
		空白组	6.97±1.71△
模型组	24.23±13.34*
		阳性组	10.21±2.53△
实施例1组	12.77±5.17△
		实施例2组	20.84±5.55*
实施例3组	10.57±4.60△

 注：*与空白组比较P<0.01；^△与模型组比较P<0.01。

7、实验结论

腺嘌呤所致肾阳虚模型的病理学基础是当动物摄入大剂量腺嘌呤后，在黄嘌呤氧化酶的作用下，转变成极难溶解于水的2，8－二羟基嘌呤，沉积于肾小管，引起肾功能衰竭。同时，由于其毒性作用，使肾组织中与糖、脂肪、蛋白质代谢有关的多种酶活性受到抑制，表现出温煦生化功能不足，水液代谢障碍及生殖机能减退等类似肾阳虚的症状。

此实验过程中观察到，本发明对肾阳虚症状有一定的缓解作用，给药动物未出现神淡、精神不振、反应迟钝、被毛疏松、失去光泽及脱毛、消瘦、肢尾冷、畏寒肢冷、拱背卷曲等症状。

肾阳虚大鼠肾组织通常可见肾小球充血、囊腔扩大、间质纤维组织增生及大量炎细胞浸润、肾小管呈代偿性扩张，即其肾脏出现肿大的现象。本实验中肾脏脏器指数显示，实施例1组和实施例3组的肾脏脏器指数低于模型组，与模型组相比具有显著性差异(P<0.05)，提示本发明可降低肾阳虚大鼠肾脏肿大等结构病变。此外，肾阳虚大鼠也表现精囊、***、附睾萎缩，体积减少症状。本实验结果表明，实施例2组可使精囊指数明显增加(P<0.05)，各给药组的附睾、***指数也高于模型组。提示本发明可以防止肾阳虚大鼠生殖器官的萎缩，从而改善生殖器官的功能。

尿素氮和肌酐是人体蛋白质新陈代谢的产物，在肾脏功能正常时能将多余的尿素氮及肌酐排出体外，使其血液中保持恒定的浓度。当肾功能受到重度损害时，毒物***减少，血中尿素氮及肌酐水平升高。血清肌酐检测结果显示，本发明实施例1组血清肌酐含量有所降低。

血清尿素氮含量结果显示，实施例1组和实施例3组的尿素氮浓度低于模型组，与模型组相比具有显著性差异(P<0.01)，其药效和阳性药物相当。实施例2组的尿素氮浓度也低于模型组但无显著性差异。提示本发明可以缓解肾阳虚大鼠肾功能的损害。

综上所述，本发明可以显著降低肾脏的脏器指数，提高精囊的脏器指数，对肾阳虚大鼠肾脏及生殖器病变具有一定的改善作用。此外，本发明能够显著降低血清尿素氮水平，缓解肾阳虚大鼠肾脏功能的损害。因此，本发明对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠有一定的治疗作用。

实施例5 本发明对氢化可的松所致肾阳虚小鼠的治疗作用研究

为研究本发明对氢化可的松所致肾阳虚小鼠模型的治疗作用，按照以下方法进行试验。

1、供试品、对照品和试剂

供试品：取实施例1~3用适量双蒸水配制成实验所需浓度，现配现用。

对照品：右归丸，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂提供，生产批号：2013225，取右归丸用适量双蒸水配制成实验所需浓度。

试剂：注射用氢化可的松琥珀酸钠，规格：100mg/盒。

2、实验***

实验动物：昆明小鼠，SPF级，湖北省实验动物研究中心提供。

动物体重：适应期前3天内称量，体重大概在20g。动物的实际体重范围可以有一定的偏差，但须记录在研究记录中。

动物数：雄性60只

实验动物的挑选：研究开始前将所有适用于实验的动物称重。去除一定数量的体重大及体重小的动物后，将剩余的实验所需动物根据体重随机分组。

实验仪器：YLS-1A型多功能小鼠自主活动记录仪（山东省医学科学院设备站）；FA1004型电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）。

3、实验设计

表4  实验设计表

4、给药方法

4.1给药方式：供试品通过灌胃（ig）方式给予，给药前混匀。

本发明临床给药途径为口服。本实验给药方式采用与临床人用药的给药方式接近的方式进行。

4.2给药频率和周期

造模：每日一次，共10次。

给药：每日一次，共18次。

4.3给药频率依据

本发明临床给药为“每日三次， 每次一袋”，但动物实验不便于每日三次给药。因此，实验时调整给药剂量，给药频率变为每日一次。

4.4给药剂量

造模：

空白组：给予氯化钠注射液0.01mL/g；

造模组：给予氢化可的松25mg/kg。

给药：

空白组对照组（生理盐水）：0.01mL/g;

模型组（生理盐水）：0.01mL/g;

阳性对照组（右归丸）：剂量为5.4 g/kg;

实施例1组：剂量为3.6g/kg；

实施例2组：剂量为3.6g/kg；

实施例3组：剂量为3.6g/kg。

4.5给药体积

造模：

空白组：0.01mL/g；

造模组：0.01mL/g。

给药：

空白组对照组（生理盐水）：0.01mL/g；

模型组（生理盐水）：0.01mL/g；

阳性对照组（右归丸）：0.01mL/g；

实施例1组：0.01mL/g；

实施例2组：0.01mL/g；

实施例3组：0.01mL/g。

按照本发明临床给药说明书“口服给药每日三次，每次一袋”，临床剂量以36g/60kg人/日计，则人公斤体重剂量为0.6g/kg；同时，依据《药理学实验方法》第四版（人民卫生出版社）动物剂量换算表设定，小鼠等效剂量为人用剂量的12倍，即3.6g/kg。

5、检测指标

5.1造模期间观察

5.1.1笼边观察

所有动物每天至少进行一次笼边观察，观察内容包括发病、死亡率、损害和供食供水情况。健康状况较差的动物要标出，并进一步观察，根据SOP如有必要须实施安乐死。

5.1.2详细临床观察

实验过程中所有动物，每天一次进行详细临床观察，观察包括但不仅限于：皮肤，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸腔，腹部，外生殖器，四肢和脚，呼吸道及循环***，自主效应（如流涎），神经***（如震颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。同时，根据中医肾阳虚症状“耗竭”现象（神淡、精神不振、反应迟钝、被毛疏松、失去光泽及脱毛、消瘦、肢尾冷、畏寒肢冷、拱背卷曲等外形衰弱及寒象）初步确定模型成功。

5.2给药后观察

造模成功后开始给药，观察给药期间小鼠各项指标，以及各组之间的差别。主要观察进食情况、体重变化、精神状态、应激反应、皮毛状况等体征。

实验结束，用自主活动仪测定小鼠每10min自主活动次数；将小鼠放入水温为15℃、水深为20cm的（50× 30 ×30）cm³的水池内，每次一只，测定小鼠低温游泳存活时间；小鼠呼吸停止后，去***与***囊，去尽***，用滤纸吸干脏器表面血污，称其重量，计算脏器指数***。

6、实验结果

6.1本发明对肾阳虚小鼠一般状态的影响

给予氢化可的松10天后，模型组小鼠出现神淡，精神不振，被毛疏松，光泽度差及脱毛，消瘦，拱背卷曲、畏冷、应激反减慢、多尿等肾阳虚症状。给予本发明药物治疗后，上述症状明显好转，大鼠精神振奋，活动增加，被毛柔顺且有光泽，体重恢复。右归丸阳性对照组此症状亦有所改善。

6.2本发明对肾阳虚小鼠体重的影响

给予小鼠氢化可的松造模后，与空白组比较，造模小鼠体重增加缓慢，造模第12天后模型组体重显著性低于空白组（P<0.05）。分组给药后，模型组体重基本维持在原有水平，实施例1组和实施例3组体重高于模型组。右归丸阳性对照组体重略高于模型对照组。（见表5）

表5   本发明对肾阳虚小鼠体重的影响

注：**与空白组比较P<0.05，单位g。

6.3本发明对肾阳虚小鼠脏器指数的影响

实验结果显示，模型组小鼠***指数显著性低于空白组，本发明实施例1~3小鼠***脏器指数较模型组均有提高，其中实施例2、实施例3组显著性高于模型组（P<0.05）；而阳性对照药物右归丸对小鼠***指数无提高作用。模型组小鼠精囊脏器指数与空白组比较无显著性差异，本发明各给药治疗组精囊脏器指数高于模型组。（见图2）。提示本发明可以改善肾阳虚大鼠生殖器官功能。

6.4本发明对肾阳虚小鼠每10min自主活动、低温游泳的影响

与空白对照组比较，模型组小鼠每10min自主活动次数减少，实施例3组小鼠每10min自主活动次数较模型组有所提高，但无显著性差异；实施例1、2组小鼠每10min自主活动次数略低于模型组；阳性组小鼠每10min自主活动次数高于模型组，但无显著性差异。（见图3）

实验结果显示，模型组小鼠低温游泳时间与空白组比较无明显差异，本发明给药组小鼠低温游泳时间与模型组比较均无显著性差异；阳性组小鼠低温游泳时间高于模型组，但无显著性差异。（见图4）

7、实验结论

肾阳虚，即肾脏阳气虚衰，是肾脏阳气衰竭表现的症候。肾阳虚弱，温煦无力，气化失常，阴寒内生，并使性与生殖能力减退的病理变化。根据《中医虚证辨证参考标准》中肾阳虚诊断标准，肾阳虚模型主要通过观察动物的外观表现来判断其与肾阳虚证的符合程度，确定模型是否成功。一般肾阳虚模型会出现体重下降、体温下降、活动减少、反应迟钝、弓背蜷缩、畏寒、体毛枯疏、失去光泽、采食量、饮水量减少等症状。

实验中，本发明各实施例组对肾阳虚小鼠活动减少、反应迟钝、弓背蜷缩、畏寒、体毛枯疏等肾阳虚症状有显著改善，与阳性药物作用相当。证明本发明具有温补肾阳，填精益髓之功效。实验显示，实施例1、实施例3可缓解肾阳虚小鼠的体重下降，且优于阳性对照药物。同时，实施例2、3可显著性增加肾阳虚小鼠***指数，而阳性药物右归丸无此作用；本发明治疗组精囊脏器指数高于模型组。由此可见，本发明可以改善肾阳虚大鼠生殖器官功能。

本发明对肾阳虚小鼠每10min自主活动次数、低温游泳时间无显著性影响，虽弱于阳性药物右归丸，但差异无显著意义。

综上，本发明可以通过增加氢化可的松所致肾阳虚小鼠体重、增强肾阳虚小鼠生殖器官功能等途径对肾阳虚小鼠起到一定的治疗作用。

实施例6

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴15份、黄芪15份、淫羊藿8份、补骨脂8份、山茱萸8份、大黄5份、肉桂8份、黄连6份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4倍水提取4次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08的清膏；将黄连、大黄按重量加入4倍的70%乙醇回流提取3次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4倍水提取4次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例7

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴6份、黄芪6份、淫羊藿3份、补骨脂3份、山茱萸3份、大黄1份、肉桂3份、黄连2份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入10倍水提取1次， 2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入10倍的50%乙醇回流提取1次，2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入12倍水提取1次，2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达70%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例8

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：

胡芦巴8份、黄芪8份、淫羊藿6份、补骨脂4份、山茱萸3份、肉桂3份、黄连4份、大黄3份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入6倍水提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.12的清膏；将黄连、大黄按重量加入8倍的55%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.12的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入10倍水提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达50%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.12的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例9

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：

胡芦巴12份、黄芪12份、淫羊藿4份、补骨脂6份、山茱萸5份、肉桂5份、黄连2份、大黄1份。

按常规方法制备。

Claims (5)

1.一种治疗脾肾阳虚的中药，其特征在于：它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴6～15份、黄芪6～15份、淫羊藿3～8份、补骨脂3～8份、山茱萸3～8份、大黄1～5份、肉桂3～8份、黄连2～6份，

制备方法是：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4～10倍水提取1～4次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入4～10倍的50～70％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4～12倍水提取1～4次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1～1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40～70％，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35～1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

2.根据权利要求1所述的治疗脾肾阳虚的中药，其特征在于：所述中药材的重量配比是：胡芦巴8～12份、黄芪8～12份、淫羊藿4～6份、补骨脂4～6份、山茱萸3～5份、肉桂3～5份、黄连2～4份、大黄1～3份。

3.根据权利要求1所述的治疗脾肾阳虚的中药，其特征在于：所述中药材的重量配比是：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、肉桂4份、黄连3份、大黄2份。

4.根据权利要求1-3任何一项所述治疗脾肾阳虚的中药，其特征在于所述制备方法是：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加入6倍的60％乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达60％，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

5.根据权利要求1所述治疗脾肾阳虚的中药，其特征在于：所述剂型为颗粒剂或片剂或胶囊剂或口服液体制剂。