CN103333813A - 一种复合微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合微生物菌剂及其制备方法，环保和微生物领域，其包含EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌。本发明采用互补拮抗的微生物菌种制成复合微生物菌剂，该菌剂具有种类全、配伍合理、功能性强、经济效益高等优点。本发明的复合微生物菌剂在生物除臭、植物防虫上都具有很好的效果。

Description

一种复合微生物菌剂及其制备方法

技术领域

本发明属于环保和微生物领域，具体涉及一种复合微生物菌剂及其制备方法。

背景技术

1、恶臭，是一种发生源众多，污染面积广的感觉公害。它不仅使人感到不快和厌恶，而且臭气中的不少有害物质直接危害人体健康。为此，自20世纪60年代开始逐渐引起了国内外环境科技工作者的重视和关注，并取得了多方面的成果。日本1971年颁布了《恶臭防治法》，美国1971年颁布了《清洁空气法》，德国1993年在《环境大气中有关臭气的指令》中规定了臭气的频度、臭气时间测定方法。我国对臭气污染的研究起步较晚，参考日本经验，于1994年1月15日和2003年7月1日起分别实施了《恶臭污染物排放标准》（GB1455421993）和《城镇污水处理厂污染物排放标准》（GB1891822001）对臭气浓度，及8种臭气物质，即:氨、三甲胺、硫化物、甲硫醚、二甲二硫、二硫化碳、苯乙烯，并对其测定方法也做出了具体规定。恶臭物质很多，目前大气中检出的物质可分8类，即：1、硫化物。2、脂肪胺。3、烃类。4、羰基化合物。5、醇类。6、酚类。7、低级脂肪酸。8、吲哚共147种气体。           

 现阶段，全球恶臭污染的处理方法主要有洗气法、臭氧氧化法、直接燃烧法、吸附法、氧化处理法、空气氧化法、掩蔽法、空气稀释法、酸碱洗涤法、生物化学分解法。而目前市场上有的除臭剂主要有化学除臭剂和植物除臭剂。植物除臭剂提取工艺复杂，生产成本高；化学除臭剂除成本较高外还会造成二次污染。因此成本低廉，工艺简单，使用环保的微生物除臭剂成为了科研人员关注和研发的热点。但是目前市场上出现的所有生物除臭剂均存在着只能降解硫化物（如：硫化氢）和氨，对有机物（总烃）降解能力存在缺陷。                                                

2、植物害虫主要指危害农作物及其产品的昆虫和螨类等。种类多、分布广、繁殖快、数量大，除直接造成农作物及其产品的严重损失外，还是传播植物病害的媒介。

园林病虫害的发生危害现状：

园林病虫害的发生存在是一种正常的自然现象，无树不虫、无树不病，园林病虫是园林生态***中伴生的一个重要组成部分，是天敌生存、繁衍不可少的食料园林植物具有自我修饰、自我补偿能力。

环境中也具有病虫的许多自然控制作用，通常状态下绿化植物、病虫害和天敌处于一种平衡状态。但城市生态相对脆弱，自然调节力有限，城市园林对周围环境有很强的依赖性，城市园林的健康生长受多种因索影响，不合理地管护、天气的异常变动、城市空气的污染以及其它人为的干扰随时会打破已形成的平衡状态，诱发园林病虫害的严重发生，并发展为自然灾害。园林病虫暴发成灾是一种不难常见现象，是受到一些不良因素影响而导致生态平衡破坏的结果。因此应客观地认识和看待园林病虫害的发生，遵循其客观规律，科学地去进行治理。我国园林病虫害的相关研究起步较晚，自８０年以后才得到迅速发展，通过普查，初步摸清了我国园林病虫害的种类，分布和危害情况，掌握了大多数园林病虫的发生规律，也找到了许多有效地治理措施。

园林绿化植物种类繁多，其病虫害更是多种多样，据报道我国共有各种园林病害５６００多种，园林害虫８２６５种，其中成灾病虫数百种。园林病虫害危害方式多样，例如害虫可咬食根及幼苗、蚕食叶片、蛀食枝干、嫩梢、叶片，吸食汁液和产卵危害等；病害可危害根、茎、叶、花或整个植株，产生黄化、斑点、腐烂、畸形等症状，并可形成黑点、霉层、粉状物等，从而造成植株生长衰弱，甚至死亡，观赏价值降低，影响市容市貌和城市生态环境。园林病虫害区域性很强，不同省市、不同地区会因为环境条件、绿化植物组成、防治基础等不同而导致病虫害种类分布、危害程度、发生规律等存在较大差别，不能照办照抄，不同地区园林病虫的优势种群会有较大差异。总之，园林病虫害危害非常严重，害虫危害明显重于病害。

当前，城市化进程不断加快，城市绿化倍受重视，公园、社区、景点等各种绿化蓬勃发展，城市森林覆盖率和人均绿地面积持续增长，大力建设生态家园已成各城市共同追求。随着绿化规模的不断扩大。新的绿化物种的引进以及绿化布局的多样性，原本种类繁多、发生分散的园林植物病虫害危害更加严重，种类不断增加，且呈现出了许多新的态势，病虫害发生此起彼伏，新问题层出不断。

但园林植保却相对薄弱，落后于绿化发展步伐，尤其在鲁西北地区园林病虫害的***调查和相关研究仍处于空白，对园林病虫害的种类分布和发生规律不能掌握，相关投入少，病虫防治策略不合理、措施不得力，并且严重存在绿化与植保分离的现象，很多绿化工程单位忙于工程建设。疏于病虫害治理，盲目引进物种。造成了部分病虫害的传播、蔓延，园林植物遭受着严重危害，严重影响了市容市貌以及绿化工作的成效。因此，针对我地具体实际进行相关调查研究，彻底摸清主要绿化植物病虫害种类组成和危害水平，掌握主要种类的发生规律，用以指导防治已刻不容缓。

现在植物病虫害的处理主要分为：

1.农业防治。

2.化学防治，人类使用那些对害虫产生致命作用的有毒有害物质，这些有毒有害物质大都是人类通过化学手段所合成的，著名DDT就是其中一种，在人们对其显著的杀虫作用欢欣鼓舞的时候恶果也随之而来，由于是人工合成生态环境很难将其代谢降解，长期在生物体内和土壤中存留，并对生物造成巨大伤害，对环境污染严重，对人体健康造成很大影响，同时也造成二次污染，现在人们也越来越认识到化学方法的很多弊端。

3.利用其他有益动物防治害虫，除捕食性和寄生性天敌昆虫外，还有鸟类、蛙类及其它动物，对控制害虫数量的发展有很大作用。

4.生物防治，首先是以虫治虫，利用天敌昆虫防治害虫称为以虫治虫，其中包括益螨的利用。其次以生物菌治虫，以菌治虫就是利用害虫的病原微生物（真菌、细菌、病毒等）防治害虫，其中以细菌和真菌应用最广。因此使用环保的微生物除虫剂是科学发展的趋势。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何提供一种既能除臭又能防虫的复合微生物菌剂，解决现有的菌剂种类单一、功能性差、经济效益不高的缺点。

本发明的技术方案为：一种复合微生物菌剂，其包含EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌。

进一步地，所述复合微生物菌剂由EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液混合而成。

进一步地，所述复合微生物菌剂中的有效菌总活菌数不少于20×10⁸cfu/ml，每一种有效菌的数量不少于0.01亿/ml。

复合微生物菌剂的制备方法为：首先分别制备EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液；

将上述发酵液按下述重量配比混合即得成品：EM菌发酵液4～8份，枯草芽孢杆菌发酵液3份，白僵菌发酵液1份，苏云金杆菌1份。

进一步地，所述EM菌发酵液的制备方法为：

用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。冷却到40℃时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35～37℃) 3～5天，第3天可以放气一次，打开容器口闻到有酸甜味即活化成功，作为液体菌种使用。

将活化好的液体菌种加入二级发酵罐密闭发酵(35～37℃) 3～5天，接种量10%。二级发酵液的配比：红糖10%、维生素0.3%、氨基酸0.1%；成品标准：气味酸甜、PH值=4.0～6.0、活菌含量≥100亿/ml。

所述枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法为：

将枯草芽孢杆菌接种至培养基中，培养基配方为无水葡萄糖3.50 g／L、蛋白胨0.83 g／L、酵母膏0.50 g／L、磷酸二氢钾0.35 g／L和碳酸钙0.25 g／L，温度34±2℃ ，培养16 h。

所述白僵菌发酵液的制备方法为：

将白僵菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：玉米浆：2，蔗糖：3，KH₂PO₄ ：0.226%，MgSO₄·7H₂O：0.0123%，FeSO₄·7H₂0：0.0023%，ZnSO₄：0.002%，CaCO₃：0.4，马铃薯汁：20，葡萄糖：20，磷酸二氢钾：3 ，琼脂：15，蛋白胨：5，酵母膏：5，pH6。发酵条件为：在恒温25度，振荡140r/min ,培养96h ,接种量5％ 。

所述苏云金杆菌发酵液的制备方法为：

将苏云金杆菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：蛋白胨 ：5，牛肉膏 ：30，NaCl : 5，琼脂 ：15，玉米淀粉、葡萄糖、蔗糖为碳源：10 ，黄豆饼粉：1.5，酵母粉： 0.4，K₂HPO₄：0.03，MgSO₄·７H₂O：0.02，CaCO₃：0.04，ZnSO₄：0.02，pH 7.0-7.2。

发酵条件为：初始pH 7.2，高压灭菌20min．以体积分数为1%接种菌种，置于28℃，200 r/min的摇床内进行发酵培养；92 h后对发酵液中的芽孢含量进行测定。

本发明的复合微生物菌剂在生物除臭或植物防虫上的应用。

EM菌剂

EM菌（Effective Microorganisms）是由大约80种微生物组成，EM菌由日本琉球大学的比嘉照教授1968年研究成功,于80年代投入市场。EM菌是以光合细菌、乳酸菌、酵母菌和放线菌为主的 6 个属56余个微生物复合而成的一种微生活菌制剂。作用机理是形成EM菌和病原微生物争夺营养的竞争,由于EM菌在土壤中极易生存繁殖,所以能较快而稳定地占据土壤中的生态地位,形成有益的微生物菌的优势群落,从而控制病原微生物的繁殖和对作物的侵袭。

EM菌剂主要有下列几大菌群组成：

1 、光合菌群：EM菌液中的光合菌群（好氧性和厌氧性）属于独立营养微生物，它能利用土壤接受的太阳热能或以紫外线为能源，将土壤中的硫化氢和碳氢化合物中的氢分离出来，变有害物质为无害物质，并以植物根部的分泌物、有机物、有害气体（硫化氢等）及二氧化碳、氮等为基质，合成糖类、氨基酸、维生素类、氮素化合物和生理活性物质等，是肥沃土壤和促进动植物生长的主力部队。光合菌的代谢物质或者被植物直接吸收，或者成为其它微生物繁殖的养分，光合细菌如果能够增殖，其它的有益微生物也会增殖。

2 、乳酸菌群：乳酸菌（厌氧型）, 它以摄取光合细菌酵母菌产生的糖类等物质为基础，产生乳酸。乳酸具有很强的杀菌能力，能有效抑制有害微生物的活动，以及有机物的急剧腐败分解。乳酸菌能够使常态下不易分解的木质素和纤维素等变得容易分解，并且消除未分解有机物产生的种种弊端，在有机物发酵分解上发挥突击队的重要作用，它将未腐熟的有机物质转化成对动植物有效的养分。乳酸菌还能有效抑制连作障碍产生的致病菌增殖。

3 、酵母菌群： 酵母菌（好氧型）利用氨基酸、糖类及其它有机物质，通过发酵，产生出促进细胞***的活性化物质。酵母菌在 EM菌集团军中对于促进其它的有效微生物增殖所需要的基质（食物）的生产提供重要的营养保障。此外，酵母菌生产的单细胞蛋白是动物不可缺少的有效养分。

4 、革兰氏阳性放线菌群（好气性）。 它从光合细菌中获取氨基酸、氮素等作为基质，产生出各种抗生物质、维生素及酶，可以直接抑制病原菌。它提前获取有害霉菌和细菌增殖所需要的基质，从而抑制它们的增殖，并创造出其它有益微生物增殖的生存环境。放线菌和光合细菌混合后的净菌作用比放线菌单兵作战的杀伤力要大得多。它对难分解的物质，如木质素、纤维素、甲壳素等具有降解作用，并容易被动植物吸收，增强动植物对各种病害的抵抗力和免疫力。放线菌也会促进固氮菌和 VA 菌根菌增殖。

5 、发酵系的丝状菌群（嫌气性）。 以发酵酒精时使用的曲霉菌属为主体，它能和其他微生物共存，尤其对土壤中酯的生成有良好效果。因为酒精生成力强，能防止蛆和其他害虫的发生，并可以消除恶臭。

由上可见，各类微生物都各自发挥着重要作用，核心作用是光合细菌和嗜酸性乳杆菌为主导，其合成能力支撑着其他微生物的活动，同时也利用其他微生物产生的物质，形成共生共荣的关系，保证 EM菌液状态稳定，功能齐全，发挥出集团军作战的强大能量。EM菌液的主要功能是造就良性生态。只要施用恰当，它就会与所到之处的良性力量迅速结合，产生抗氧化物质，清除氧化物质，消除腐败，抑制病原菌，形成适于动植物生长的良好环境，同时，它还产生大量易为动植物吸收的有益物质，如氨基酸、有机酸、多醣类、各种维生素、各种生化酶、促生长因子、抗生素和抗病毒物质等，提高动植物的免疫功能。

枯草芽孢杆菌剂

枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。

1．枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。

2．枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长。

3．刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力。

4．枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用。

5．能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。

白僵菌剂

白僵菌(Beauveria Vuillemin)属于丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、白僵菌属，是一种广谱性的昆虫病原真菌，是由昆虫病原真菌半知菌类丛梗孢目丛孢科白僵菌属发酵、加工成的制剂。

对多种有害昆虫具有寄生性, 致病性强、适应性强。能快速、有效地控制虫口（害虫 ），同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，相对于高残留、高毒性、高抗性的传统化学农药，有较强优势。

主要通过昆虫表皮接触感染，其次也可经消化道和呼吸道感染。侵染的途径因昆虫的种类、虫态、环境条件等的不同而异。 

扫描电镜或荧光染色观察发现,球孢白僵菌高毒菌株在棉铃虫幼虫体壁上短暂生长即形成入侵结构,而低毒菌株在幼虫体壁上产生细长的匍匐菌丝，这些菌丝会从害虫体内吸收营养，最终导致害虫死亡。 

白僵菌剂为低毒类微生物农药，对人、畜无致病作用，属弱的***反应源，无“三致”问题。该制剂对人畜无毒，对果树安全。

苏云金芽孢杆菌菌种

苏云金芽孢杆菌（ Bacillus thuringiensis）属于芽孢杆菌科细菌，一种能产生伴孢晶体和芽孢的***，有些亚种还能产生α和β外毒素，苏云金杆菌是目前产量最大、使用最广的生物杀虫剂。它的主要活性成分是一种或数种杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins，ICPs)，又称δ-内毒素，对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目、同翅目等昆虫，以及动植物线虫、蜱螨等节肢动物都有特异性的毒杀活性，而对非目标生物安全。

苏云金芽孢杆菌的杀虫活性物质主要有二种,即晶体和孢子.晶体又叫原毒素,它是一种蛋白质。完整的晶体对昆虫不具活性,只有当晶体通过害虫取食进入中肠后,在中肠液碱性条件下溶解,再经蛋白酶分解成更小的分子--毒性肽,才是真正具有致病力的物质, 毒性肽破坏昆虫中肠细胞,肠道碱性内含物漏入血腔, 孢子和菌体通过被破坏的肠壁进入体腔,并在其内生长繁殖,最后导致败血病而死亡。

另一种情况，蛋白毒素破坏肠壁导致肠胃麻痹，害虫在饥饿和组织破坏双重作用下而死亡。但并不是所有害虫肠胃的酸碱性相同，这就是有的害虫对苏云金芽孢杆菌敏感有的对之则不敏感的原因所在。

苏云金芽孢杆菌（BT）杀虫剂的主要优点： 

1）BT杀虫剂对人畜安全，但要避免与眼及伤口接触。  

2）BT杀虫剂可以长时间施用直致收获季节，这是与其它杀虫剂的不同之处。  

3）可以连续使用，不需要时间间隔。  

4）BT不同菌株防治具有专一性，对益虫和非目标害虫安全。  

5）鸟类和动物可以安全食由BT致死的害虫。  

6）施用BT对植物不产生危害，对环境无污染及不杀伤害虫天敌。  

7）不产生抗性，但要注意过量施用BT。  

8）防治效果好。  

9）使用方便。 

本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明采用互补拮抗的微生物菌种制成复合微生物菌剂，该菌剂具有种类全、配伍合理、功能性强、经济效益高等优点。

本发明的复合微生物菌剂在生物除臭、植物防虫上都具有很好的效果。

具体实施方式

一种复合微生物菌剂，其包含EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌。

进一步地，所述复合微生物菌剂由EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液混合而成。所述复合微生物菌剂中的有效菌总活菌数不少于20×10⁸cfu/ml，每一种有效菌的数量不少于0.01亿/ml。

实施例

复合微生物菌剂的制备方法为：首先分别制备EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液；然后将上述发酵液按下述重量配比混合即得成品，EM菌发酵液4～8份，枯草芽孢杆菌发酵液3份，白僵菌发酵液1份，苏云金杆菌1份。

EM菌发酵液的制备方法为：

用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。冷却到40℃时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35～37℃) 3～5天，第3天可以放气一次，打开容器口闻到有酸甜味即活化成功，作为液体菌种使用。

将活化好的液体菌种加入二级发酵罐密闭发酵(35～37℃) 3～5天，接种量10%。二级发酵液的配比：红糖10%、维生素0.3%、氨基酸0.1%；成品标准：气味酸甜、PH值=4.0～6.0、活菌含量≥100亿/ml。

枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法为：

将枯草芽孢杆菌接种至培养基中，培养基配方为无水葡萄糖3.50 g／L、蛋白胨0.83 g／L、酵母膏0.50 g／L、磷酸二氢钾0.35 g／L和碳酸钙0.25 g／L，温度34±2℃ ，培养16 h。

白僵菌发酵液的制备方法为：

将白僵菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：玉米浆：2，蔗糖：3，KH₂PO₄ ：0.226%，MgSO₄·7H₂O：0.0123%，FeSO₄·7H₂0：0.0023%，ZnSO₄：0.002%，  CaCO₃：0.4，马铃薯汁：20，葡萄糖：20，磷酸二氢钾：3 ，琼脂：15，蛋白胨：5，酵母膏：5，pH6。发酵条件为：在恒温25度，振荡140r/min ,培养96h ,接种量5％ 。

苏云金杆菌发酵液的制备方法为：

将苏云金杆菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：蛋白胨 ：5，牛肉膏 ：30，NaCl : 5，琼脂 ：15，玉米淀粉、葡萄糖、蔗糖为碳源：10 ，黄豆饼粉：1.5，酵母粉： 0.4，K₂HPO₄：0.03，MgSO₄·７H₂O：0.02，CaCO₃：0.04，ZnSO₄：0.02，pH 7.0-7.2。

发酵条件为：初始pH7.2，高压灭菌20min．以体积分数为1%接种菌种，置于28℃，200 r/min的摇床内进行发酵培养；92ｈ后对发酵液中的芽孢含量进行测定。

表1：复合微生物菌剂的技术指标

表2：复合微生物菌剂的无害化指标

实验例1 室内垃圾除臭试验

于一间密封的房间内放一堆已高度腐烂的产生恶臭的垃圾，将配置好的复合微生物菌剂在使用前用自来水稀释20倍，直接喷洒在垃圾堆放区域。在垃圾周围设置不同的采集地点进行采样，测定喷洒前及喷洒后15分钟恶臭气体中的硫化氢和氨浓度，采样点离臭源边缘1米，采样高度为1.4米，6点采样，取平均值。臭气浓度采用三点比较式臭袋法（GB/T14675）；氨采用次氯酸钠-水杨酸分光光度法（GB/T14679）；硫化氢采用聚乙烯醇磷酸铵吸收-亚甲基蓝比色法（GB/T16489）；细菌总数采用撞击法（GB/T17093）。测试结果见表3      

表3：复合微生物菌除臭剂室内垃圾除臭效果实验

 注 ：臭气浓度单位：无量纲；菌总数单位：cfu/m3。

 试验结果表明复合菌剂都有很好的除臭效果。

实验例 2

1.制备试验用菌剂。

按前述菌种培养方法获得菌液，将各种菌液按比例混配：EM菌液  5份 ，枯草芽孢杆菌液 3份 ，白僵菌液 1 份 ，苏云金杆菌液 1份 ，装入试管中。

2.试验用的害虫有：蝗虫 、松毛虫 、柏大蚜虫 、地老虎、 尺蠖、苍蝇、天牛虫 、蚜虫。

3. 试验方法。

取试验用混合菌液200 mL，分别将80条害虫用小瓶分装封上纱布，置常温室内25℃以下，再用不同的稀释液喷洒在装虫的瓶中。48小时观察检查并计算害虫死亡率。鉴定死亡的方法为：在试验小瓶中加入1—5滴5％NaCl溶液，2钟后观察死虫僵直、活虫则卷曲或扭动。

死亡率=  （活虫数 – 试验后活虫数 ）÷ 总活虫数 × 100％

表4：复合菌剂原液2倍稀释液杀虫种类对照表

表5：不同浓度的复合菌剂对除虫的效果

复合菌剂浓度	24h死亡率％	48h死亡率％	72死亡率％
				复合菌剂5倍稀释液	40	80	100
复合菌剂10倍稀释液	40	75	100
				复合菌剂20倍稀释液	30	70	100
复合菌剂30倍稀释液	30	60	95
				复合菌剂50倍稀释液	20	60	90

结果表明：本发明的复合微生物活菌制剂对表中所列植物的害虫有良好的杀灭效果，有很广的杀虫谱。

Claims (9)

1.一种复合微生物菌剂，其特征在于：其包含EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌。

2.根据权利要求1所述的一种复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂由EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液混合而成。

3.根据权利要求2所述的一种复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂中的有效菌总活菌数不少于20×10⁸cfu/ml，每一种有效菌的数量不少于0.01亿/ml。

4.一种复合微生物菌剂的制备方法：其特征在于，首先分别制备EM菌、枯草芽孢杆菌、白僵菌、苏云金杆菌的发酵液；然后将上述发酵液按下述重量配比混合即得成品：EM菌发酵液4～8份，枯草芽孢杆菌发酵液3份，白僵菌发酵液1份，苏云金杆菌1份。

5.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述EM菌发酵液的制备方法为：

先将红糖0.1公斤加入1公斤的水中，配制成溶液后加入EM菌种10克，密闭发酵：发酵温度35～37℃，发酵时间3～5天，即得活化液体菌种；将活化好的液体菌种加入二级发酵罐密闭发酵，发酵温度35～37℃，发酵时间3～5天，接种量10%；二级发酵液的配比：红糖10%、维生素0.3%、氨基酸0.1%；成品标准：气味酸甜、PH值=4.0～6.0、活菌含量≥100亿/ml。

6.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法为：

将枯草芽孢杆菌接种至培养基中，培养基配方为无水葡萄糖3.50 g／L、蛋白胨0.83 g／L、酵母膏0.50 g／L、磷酸二氢钾0.35 g／L和碳酸钙0.25 g／L，温度34±2℃ ，培养16 h。

7.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述白僵菌发酵液的制备方法为：

将白僵菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：玉米浆：2，蔗糖：3，KH₂PO₄ ：0.226%，MgSO₄·7H₂O：0.0123%，FeSO₄·7H₂0：0.0023%，ZnSO₄：0.002%，  CaCO₃：0.4，马铃薯汁：20，葡萄糖：20，磷酸二氢钾：3 ，琼脂：15，蛋白胨：5，酵母膏：5，pH6；发酵条件为：在恒温25度，振荡140r/min ,培养96h ,接种量5％ 。

8.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述苏云金杆菌发酵液的制备方法为：

将苏云金杆菌接种至培养基中，培养基配方为（g/L）：蛋白胨 ：5，牛肉膏 ：30，NaCl : 5，琼脂 ：15，玉米淀粉、葡萄糖、蔗糖为碳源：10 ，黄豆饼粉：1.5，酵母粉： 0.4，K₂HPO₄：0.03，MgSO₄·７H₂O：0.02，CaCO₃：0.04，ZnSO₄：0.02，pH 7.0-7.2；

发酵条件为：初始pH７.２，高压灭菌20min．以体积分数为1%接种菌种，置于28℃，200 r/min的摇床内进行发酵培养；92ｈ后对发酵液中的芽孢含量进行测定。

9.根据权利要求1～4任一项所述的一种复合微生物菌剂在生物除臭或植物防虫上的应用。