CN103331036B - 一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 - Google Patents
一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103331036B CN103331036B CN201310252025.6A CN201310252025A CN103331036B CN 103331036 B CN103331036 B CN 103331036B CN 201310252025 A CN201310252025 A CN 201310252025A CN 103331036 B CN103331036 B CN 103331036B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chromatographic column
- eluent
- target components
- eluant
- operation cycle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明提供一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，为多个操作周期构成的循环操作过程，包含两个循环进行的步骤：（1）吸附目标组分：将原料中的目标组分吸附到色谱柱上，分离弱保留组分；（2）脱附目标组分：将洗脱剂2注入色谱柱，洗脱色谱柱内的目标组分；如果原料中有强保留组分，则在上述步骤（2）后进行步骤（3）操作，即脱附强保留组分：将洗脱剂3注入色谱柱，洗脱色谱柱内的强保留组分；本发明能够同时实现目标组分的分离与富集，即在提高目标组分纯度的同时还能增加目标组分在产品溶液中的浓度，从而减轻从产品溶液中回收目标组分的负担，该方法尤其适合于分离和纯化含量很低的微量组分。
Description
技术领域
本发明涉及一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法。
背景技术
色谱分离方法是常用的一种从混合物中分离目标组分的方法，在诸如药物分离、天然产物分离纯化等许多领域有着广泛应用。一般地，单纯的色谱分离工艺得到的只是产品溶液，故还需辅以回收操作，如蒸发或结晶等，才能从中得到纯的目标组分。显然，产品溶液浓度越高，则越有利于回收操作。
然而，由于存在传质阻力和轴向弥散等非理想因素，在大多数的色谱分离过程中，目标组分总是被稀释，其在产品溶液中的浓度要低于其在原料液中的浓度。回收操作负担因此而被加重，使得其在总分离成本中占有很大的比重。在某些分离工艺中，如天然产物分离纯化，因目标组分的含量很低，回收操作可能决定整个分离过程的成本。以从红豆杉树叶中提取和分离紫杉醇为例，由于紫杉醇含量很低，仅为万分之三左右，经溶剂浸提后也只能将含量提高到千分之三左右，此时如采用色谱分离，将浸膏配制成原料液，假设浓度50mg/mL，则原料液中紫杉醇浓度仅约0.15mg/mL。因产品在获得分离纯化的同时往往伴随着产品溶液的稀释，色谱分离获得的产品溶液中紫杉醇浓度将远小于0.15mg/mL，从如此稀的溶液中回收紫杉醇成本很大，故先采取多个前处理操作，将紫杉醇富集到一定程度后再用色谱分离精制，这种方法并未从根本上解决问题，只是将回收操作的负担部分转移前处理操作中。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种能够在分离纯化目标组分的同时，将目标组分浓缩和富集，即同步实现从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法。
为了解决上述技术问题，本发明的第一个技术解决方案是这样实现的：
一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，包括由色谱柱和两种洗脱剂组成的分离***；色谱柱内装填有能吸附目标组分的吸附剂；
所述洗脱剂包括洗脱剂1和洗脱剂2；所述洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量高于洗脱剂1中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量；
所述吸附剂为硅胶、聚酰胺树脂、吸附树脂或离子交换树脂。
假设原料中目标组分在色谱柱上的保留最强，具体分离和富集过程为由多个操作周期构成的循环操作过程，第一个操作周期包括以下两个步骤：
（1）吸附目标组分：将原料溶于洗脱剂1配制成原料液，注入色谱柱，在色谱柱尾部收集得到洗脱液1。此步操作的目的在于选择性地将原料液中的目标组分吸附到色谱柱上，而保留时间比目标组分短的弱保留组分则流出色谱柱。
（2）脱附目标组分：将洗脱剂2注入色谱柱，洗脱色谱柱内的目标组分，目标组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液2。
从第二个操作周期开始，在每一个操作周期的步骤(1)中，将原料液与在上一个操作周期内所收集的洗脱液2合并注入色谱柱，其余同第一个操作周期；
分离过程中，弱保留组分在每一个操作周期的步骤(1)中都会流出色谱柱而进入洗脱液1中，故其能与目标组分得到分离；而目标组分则在每一个操作周期的步骤(2)中都被脱附至洗脱液2中，然后与新补充原料液中的目标组分合并，于下一个操作周期的步骤(1)中被一同吸附至色谱柱。故目标组分被逐步浓缩至洗脱液2中或富集至色谱柱内，意即在第1个到第n个操作周期内加入的所有原料液中的目标组分被洗脱至第n个操作周期内的洗脱液2中，或被吸附到第n个操作周期内的色谱柱中。若假设每一个操作周期内添加的原料液体积相同，均为V1，使用洗脱剂2体积亦相同，均为V2，则上述分离过程相当于将总体积为n·V1的原料液中的目标组分浓缩到一个体积为V2的洗脱液2中，或将总体积为n·V1的原料液中的目标组分富集到一个色谱柱中，从而实现从混合物中分离与富集目标组分的目的。显然，操作周期数越多，则浓缩和富集程度越高。通常，将先于目标组分出峰的组分统称为弱保留组分，将晚于目标组分出峰的组分称为强保留组分，即保留时间比目标组分短的组分为弱保留组分，保留时间比目标组分长的组分为强保留组分。
作为上述分离方法的改进，可在每一个操作周期的步骤(2)之后为步骤(3)，即用洗脱剂1平衡色谱柱，具体过程为将洗脱剂1注入色谱柱，直至色谱柱出口流出液组成与洗脱剂1的组成相同为止；则当原料中目标组分的保留最强时，三个步骤循环进行：步骤(1)吸附目标组分→步骤(2)脱附目标组分→步骤(3)平衡色谱柱→……。
上述分离技术方案的要点在于：
首先，洗脱剂2的洗脱能力强于洗脱剂1的洗脱能力，这可以通过改变洗脱剂1、洗脱剂2的组成来实现。如此，在每一个操作周期的吸附目标组分阶段，因将原料液与上一个操作周期内的洗脱液2合并，故会减弱液相洗脱能力，当其流过色谱柱时，通过控制原料液注入体积，可保证弱保留组分从色谱柱流出，而目标组分则不从色谱柱泄漏；在脱附目标组分阶段，因洗脱剂2的洗脱能力增强，只需使用少量体积的洗脱剂2即可将色谱柱上的目标组分完全脱附。可见每经过一次操作周期，目标组分均可获得一定程度的富集和浓缩。
其次，每一个操作周期内收集得到的洗脱液2不作为最终产品溶液，而是将其与新补充原料液合并后再次加入色谱柱中。这一措施能将目标组分在每一次循环操作中所获得的富集与浓缩效应累积，使目标组分的富集与浓缩程度越来越高。
在上述分离方法中，目标组分在色谱柱内逐步累积和富集，最终必然使色谱柱达到饱和而不能再吸附更多的目标组分。此时如果继续在步骤(1)中补充新鲜原料液，新补充原料液中的目标组分将从洗脱液1中泄漏，这并不能增加色谱柱的利用率，反而只是浪费时间和动力；反过来，如果色谱柱尚未达到饱和即停止循环操作，则不能充分利用色谱柱。故应尽可能让色谱柱刚好达到饱和，这可通过检测每一个操作周期内的洗脱液1是否含有目标组分来予以判断，如果在某一个操作周期的步骤(1)尚未结束时，目标组分即已从洗脱液1中泄漏，则表明色谱柱已达到饱和。因此，当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，停止循环操作过程。此时，色谱柱内主要含有被富集的目标组分，同时还残留有非目标组分。如果对目标组分的纯度要求不高，则只需用洗脱剂2或其它任一种可洗脱目标组分的溶剂将富集于色谱柱内的目标组分洗脱出色谱柱，在色谱柱尾部收集得到被浓缩的目标组分；如果对目标组分纯度要求高，则可在接下来的操作周期中，用洗脱剂1代替步骤(1)中的新补充原料液，即在步骤(1)中洗脱液2不再与补充的原料液合并，而是将洗脱液2与洗脱剂1合并注入色谱柱，继续循环操作。如此，色谱柱内的非目标组分将被继续洗脱出色谱柱，而目标组分则仍然被浓缩于洗脱液2中或富集于色谱柱内。
本发明通过改变洗脱剂1、洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的含量，从而使洗脱剂1洗脱能力比洗脱剂2洗脱能力更强。在每一个操作周期的步骤(2)中，保证洗脱剂2用量足以达到使目标组分从色谱柱中全部脱附的程度，即步骤(2)结束后色谱柱中不含有目标组分。作为优选，在每一个操作周期的步骤(2)之后增加步骤(3)，即用洗脱剂1平衡色谱柱，具体步骤为将洗脱剂1注入色谱柱，直至色谱柱出口流出液组成与洗脱剂1的组成相同为止。
本发明的优点和有益效果：本发明采用的一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，能够同时实现目标组分的分离与富集，即在提高目标组分纯度的同时还能增加目标组分在产品溶液中的浓度，从而减轻从产品溶液中回收目标组分的负担。该方法尤其适合于分离和纯化含量很低的微量组分。
本发明的另一个技术解决方案是：
一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：包括由色谱柱和至少三种洗脱剂组成的分离***；所述色谱柱内装填有能吸附目标组分的吸附剂；
所述洗脱剂包括洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3；所述洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量高于洗脱剂1中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量；所述洗脱剂3中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量不低于洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量。
所述吸附剂为硅胶、聚酰胺树脂、吸附树脂或离子交换树脂；
假设原料含有弱保留组分、目标组分和强保留组分，在色谱柱上的保留依次增强，具体分离与富集过程为由多个操作周期构成的循环操作过程，第一个操作周期包括以下三个步骤：
（1）吸附目标组分：将原料溶于洗脱剂1配制成原料液，注入色谱柱，在色谱柱尾部收集得到洗脱液1。此步操作的目的在于选择性地将原料中的目标组分吸附到色谱柱上，与此同时，强保留组分也被吸附到色谱柱上，而保留时间比目标组分短的弱保留组分则流出色谱柱。
（2）脱附目标组分：将洗脱剂2注入色谱柱，洗脱色谱柱内的目标组分，目标组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液2；保留时间比目标组分长的强保留组分仍然被吸附在色谱柱内；
（3）脱附强保留组分：将洗脱剂3注入色谱柱，洗脱色谱柱内的强保留组分，强保留组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液3；
从第二个操作周期开始，在每一个操作周期的步骤(1)中，将原料液与在上一个操作周期内所收集的洗脱液2合并注入色谱柱，其余同第一个操作周期；
分离过程中，弱保留组分在每一个操作周期的步骤(1)中被洗脱出色谱柱，强保留组分在每一个操作周期的步骤(3)中被洗脱出色谱柱，故其与目标组分得以分离；而目标组分则在每一个操作周期的步骤(2)中被脱附至洗脱液2中，然后与新补充原料液中的目标组分合并，于下一个操作周期的步骤(1)中被一同吸附至色谱柱，故目标组分被逐步浓缩至洗脱液2中或富集于色谱柱内。
作为上述分离方法的改进，可在每一个操作周期内再添加一个步骤，即用洗脱剂1平衡色谱柱，具体过程为将洗脱剂1注入色谱柱，直至色谱柱出口流出液组成与洗脱剂1的组成相同为止；则四个步骤循环进行：(1)吸附目标组分→(2)脱附目标组分→(3)脱附强保留组分→(4)平衡色谱柱→……。
上述分离技术方案的要点在于：
首先，洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3的洗脱能力依次增强，这可以通过改变洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3的组成来实现。如此，在每一个操作周期的吸附目标组分阶段，因将原料液与上一个操作周期内的洗脱液2合并，故会减弱液相洗脱能力，当其流过色谱柱时，通过控制原料液注入体积，可保证弱保留组分从色谱柱流出，而目标组分则不从色谱柱泄漏；在脱附目标组分阶段，因洗脱剂2的洗脱能力增强，只需使用少量体积的洗脱剂2即可将色谱柱上的目标组分完全脱附。可见每经过一次操作周期，目标组分均可获得一定程度的富集和浓缩。
其次，每一个操作周期内收集得到的洗脱液2不作为最终产品溶液，而是将其与新补充原料液合并后再次加入色谱柱中。这一措施能将目标组分在每一次循环操作中所获得的富集与浓缩效应累积，使目标组分的富集与浓缩程度越来越高。
在上述分离方法中，目标组分在色谱柱内逐步累积和富集，最终必然使色谱柱达到饱和而不能再吸附更多的目标组分。此时如果继续在步骤(1)中补充新鲜原料液，新补充原料液中的目标组分则将从洗脱液1中泄漏，这并不能增加色谱柱的利用率，反而只是浪费时间和动力；反过来，如果色谱柱尚未达到饱和即停止循环操作，则不能充分利用色谱柱。故应尽可能让色谱柱刚好达到饱和，这可通过检测每一个操作周期内的洗脱液1是否含有目标组分来予以判断，如果当某一个操作周期的步骤(1)尚未结束时，目标组分即已从洗脱液1中泄漏，则表明色谱柱已达到饱和。因此，当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，停止循环操作过程。此时，色谱柱内主要含有被富集的目标组分，同时还残留有非目标组分。如果对目标组分的纯度要求不高，则只需用洗脱剂2或其它任何一种可洗脱目标组分的溶剂将富集于色谱柱内的目标组分洗脱出色谱柱，收集得到的洗脱液2即为被富集的目标组分的溶液；如果对目标组分纯度要求高，则可在接下来的操作周期中，用洗脱剂1代替步骤(1)中的新补充原料液，即在步骤(1)中洗脱液2不再与补充的原料液合并，而是将洗脱液2与洗脱剂1合并注入色谱柱，继续循环操作。如此，色谱柱内的非目标组分将被继续洗脱出色谱柱，而目标组分则仍然被浓缩于洗脱液2中或富集于色谱柱内。
本发明通过改变洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3中具有强洗脱能力的溶剂的含量，从而使洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3的的洗脱能力依次增强。在每一个操作周期的步骤(2)中，保证洗脱剂2用量足以达到使目标组分从色谱柱中全部脱附的程度，即步骤(2)结束后色谱柱中不含有目标组分，在每一个操作周期的步骤(3)中，保证洗脱剂3用量足以达到使强保留组分从色谱柱中全部脱附的程度，步骤(3)结束后色谱柱中不含有强保留组分。作为优选，在每一个操作周期的步骤(3)之后增加步骤(4)，即用洗脱剂1平衡色谱柱，具体步骤为将洗脱剂1注入色谱柱，直至色谱柱出口流出液组成与洗脱剂1的组成相同为止。
本发明的优点和有益效果：本发明采用的一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，能够同时实现目标组分的分离与富集，即在提高目标组分纯度的同时还能增加目标组分在产品溶液中的浓度，从而减轻从产品溶液中回收目标组分的负担。该方法尤其适合于分离和纯化含量很低的微量组分。
附图说明
图1为本发明采用从混合物中分离与富集目标组分(保留最强)的色谱分离方法示意图。
图2为本发明采用从混合物中分离与富集目标组分(保留最强)的色谱分离方法示意图，与图1相比，多了一个平衡色谱柱的步骤。
图3为本发明采用从混合物中分离与富集目标组分(保留不是最强)的色谱分离方法示意图。
图4为本发明采用从混合物中分离与富集目标组分(保留不是最强)的色谱分离方法示意图，与图3相比，多了一个平衡色谱柱的步骤。
图5为辣椒总碱的液相色谱分析谱图。
图6为实施例1所获得的二氢辣椒碱溶液的液相色谱分析谱图。
图7为实施例3所获得的高辣椒碱溶液的液相色谱分析谱图。
具体实施方式
下面以从辣椒总碱中分别分离与富集二氢辣椒碱和高辣椒碱作为例子，详细说明本发明的技术方案。辣椒总碱原料购自郑州贝拜欧生物技术有限公司。如图5所示，在碳十八烷基键合硅胶柱上，辣椒总碱中各个单体的出峰顺序依次为降二氢辣椒碱、辣椒碱、二氢辣椒碱和高辣椒碱，其中二氢辣椒碱和高辣椒碱含量依次为28%和1%。采用本发明提出从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，从辣椒总碱中分别分离与富集二氢辣椒碱和高辣椒碱。
色谱分离***
色谱分离***主要包括输液泵、色谱柱（内径2cm）以及3个洗脱剂。洗脱剂1和洗脱剂2为甲醇水溶液，其中洗脱剂1中甲醇体积百分含量60%，洗脱剂2中甲醇体积百分含量80%，洗脱剂3为纯甲醇，因此，洗脱剂1、洗脱剂2、洗脱剂3的洗脱能力依次增强。将辣椒总碱溶于洗脱剂1中配制成原料液，总浓度20mg/mL。
成品检验
高效液相色谱分析产品纯度。高效液相色谱***组成：德国Knauer K501泵，美国Agilent TC-C18柱（4.6×150mm，5μm），德国Knauer K2501检测器；液相色谱分析条件：流动相为甲醇/水（体积比70/30），流速0.5mL/min，检测波长280nm，柱温:30℃。
实施例1—采用碳十八烷基键合硅胶从辣椒总碱中分离与富集二氢辣椒碱
色谱柱内装填碳十八烷基键合硅胶(粒径15微米)，柱长15cm。
具体分离与富集过程为一循环操作过程，第一个操作周期包括以下三个步骤：
步骤1—吸附二氢辣椒碱：将180mL原料液用泵输送至色谱柱，流量6mL/min，在色谱柱尾部收集洗脱液1；
步骤2—脱附二氢辣椒碱：将90mL洗脱剂2用泵输送至色谱柱，流量6mL/min，在色谱柱尾部收集洗脱液2，此时二氢辣椒碱被洗脱出色谱柱；
步骤3—脱附高辣椒碱：将40mL洗脱剂3用泵输送至色谱柱，流量6mL/min，在色谱柱尾部收集洗脱液3，高辣椒碱从色谱柱中被脱附。
从第二个操作周期起，在每一个操作周期的步骤(1)中将90mL原料液与上一个操作周期的步骤2中收集到的90mL洗脱液2合并，其余同第一个操作周期。在前4个操作周期中的每一个操作周期内所收集到的洗脱液1中均只含有降二氢辣椒碱和辣椒碱，而洗脱液3中则只含有高辣椒碱。故前4个周期内所加入的原料液(总体积450mL)中的目标组分----二氢辣椒碱被全部洗脱至第四个周期的90mL洗脱液2中，这相当于目标组分被浓缩5倍。当操作周期继续进行，目标组分在第五个操作周期的步骤1中从色谱柱中泄漏，这表明色谱柱已开始达到饱和。此时在色谱柱内除了被富集的目标组分外，还残留有少量的非目标组分。如对二氢辣椒碱的纯度要求不高，则将色谱柱内所有组分全部洗脱即可。如要求获得高纯度二氢辣椒碱，则从第五个操作周期开始，只需将步骤1中的90mL原料液更换为90mL洗脱剂1即可。实验结果表明，当继续运行至第七个操作周期时，色谱柱内残存的非目标组分被脱除，可获得99.5%的二氢辣椒碱(如图6)。
实施例2-采用大孔吸附树脂从辣椒总碱中分离与富集二氢辣椒碱
具体实施步骤同实施例1，不同的是色谱柱内装填非极性大孔吸附树脂(ADS-8)，柱长30cm；此外，还在每一个操作周期内添加步骤4即用洗脱剂1平衡色谱柱，四个步骤循环进行：1吸附目标组分→2脱附目标组分→3脱附强保留组分→4平衡色谱柱……，经过七个操作周期，最终获得99.7%的二氢辣椒碱。
实施例3—采用碳十八烷基键合硅胶从辣椒总碱中分离与富集高辣椒碱
色谱柱内装填聚酰胺树脂(粒径15微米)，柱长15cm。
具体分离与富集过程为一循环操作过程，第一个操作周期包括以下两个步骤：
步骤1—吸附高辣椒碱：将130mL原料液用泵输送至色谱柱，流量6mL/min，在色谱柱尾部收集洗脱液1。
步骤2—脱附高辣椒碱：将40mL洗脱剂3用泵输送至色谱柱，在色谱柱尾部收集洗脱液2，流量6mL/min，此时高辣椒碱被洗脱出色谱柱。
从第二个操作周期起，在每一个操作周期的步骤(1)中将90mL原料液与上一个操作周期的步骤2中收集到的40mL洗脱液合并，其余同第一个操作周期。在前60个操作周期中的每一个操作周期内收集到的洗脱液1中均只含有降二氢辣椒碱、辣椒碱和二氢辣椒碱。故前60个操作周期内所加入的原料液(总体积5440mL)中的目标组分----高辣椒碱被全部洗脱至第60个周期的40mL洗脱液2中，这相当于目标组分----高辣椒碱被浓缩136倍。当操作周期继续进行，高辣椒碱在第61个操作周期的步骤1中开始从色谱柱中泄漏，这表明色谱柱已开始达到饱和。此时在色谱柱内除了被富集的高辣椒碱外，还残留有少量的其它组分。如对高辣椒碱的纯度要求不高，则将色谱柱内所有组分全部洗脱即可。如要求获得高纯度的高辣椒碱，则从第61个操作周期开始，只需将步骤1中的90mL原料液更换为90mL洗脱剂1即可。实验结果表明，当继续运行至第66个操作周期时，色谱柱内残存的非目标组分被脱除，可获得99.6%的高辣椒碱(如图7)。
实施例4—采用离子交换树脂从辣椒总碱中分离与富集高辣椒碱
具体实施步骤同实施例3，不同的是色谱柱内装填有离子交换树脂，柱长30cm；此外，在步骤2之后还添加一个步骤3，即用洗脱剂1平衡色谱柱，三个步骤循环进行：1吸附目标组分→2脱附目标组分→3平衡色谱柱……，经过70个操作周期，最终获得99.8%的高辣椒碱。
以上实施例是对本发明的说明和进一步解释，而不是对本发明的限制，在本发明的精神和权利保护范围内所做的任何修改，都落入本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：包括由色谱柱和至少两种洗脱剂组成的分离***；所述色谱柱内装填有能吸附目标组分的吸附剂；
所述洗脱剂包括洗脱剂1和洗脱剂2；所述洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量高于洗脱剂1中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量；
所述吸附剂为硅胶、吸附树脂或离子交换树脂；
具体分离与富集过程为由多个操作周期构成的循环操作过程，第一个操作周期包括以下两个步骤：
(1)吸附目标组分：将原料溶于洗脱剂1配制成原料液，注入色谱柱，将目标组分吸附到色谱柱上，而保留时间比目标组分短的弱保留组分则流出色谱柱，收集得到洗脱液1；
(2)脱附目标组分：将洗脱剂2注入色谱柱，洗脱色谱柱内的目标组分，目标组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液2；
从第二个操作周期开始，在每一个操作周期的步骤(1)中，将原料液与在上一个操作周期内所收集的洗脱液2合并注入色谱柱，其余同第一个操作周期；
分离过程中，弱保留组分在每一个操作周期的步骤(1)中流出色谱柱，与目标组分分离；目标组分则在每一个操作周期的步骤(2)中被脱附至洗脱液2中，然后与新补充原料液中的目标组分在下一个操作周期的步骤(1)中被吸附至色谱柱，故目标组分被逐步浓缩至洗脱液2中或富集至色谱柱内，从而实现从混合物中分离与富集目标组分的目的。
2.根据权利要求1所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：在所述每一个操作周期的步骤(2)之后为步骤(3)，所述步骤(3)为用洗脱剂1平衡色谱柱；分离与富集过程为步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)循环进行。
3.根据权利要求1或2所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，停止循环操作过程，用洗脱剂2将富集于色谱柱内的目标组分洗脱出色谱柱，在色谱柱尾部收集得到被浓缩的目标组分。
4.根据权利要求1或2所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，在步骤(1)中用洗脱剂1代替原料液，继续循环操作，将残留在色谱柱内的非目标组分除去，而目标组分则继续被浓缩于洗脱液2中或富集于色谱柱内。
5.一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：包括由色谱柱和至少三种洗脱剂组成的分离***；所述色谱柱内装填有能吸附目标组分的吸附剂；
所述洗脱剂包括洗脱剂1、洗脱剂2和洗脱剂3；所述洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量高于洗脱剂1中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量；所述洗脱剂3中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量不低于洗脱剂2中具有强洗脱能力的溶剂的体积百分含量；
所述吸附剂为硅胶、吸附树脂或离子交换树脂；
具体分离与富集过程为多个操作周期构成的循环操作过程，第一个操作周期包括以下三个步骤：
(1)吸附目标组分：将原料溶于洗脱剂1配制成原料液，注入色谱柱，将目标组分吸附到色谱柱上，与此同时，保留时间比目标组分长的强保留组分也被吸附在色谱柱上，而保留时间比目标组分短的弱保留组分则流出色谱柱，收集得到洗脱液1；
(2)脱附目标组分：将洗脱剂2注入色谱柱，洗脱色谱柱内的目标组分，目标组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液2；而保留时间比目标组分长的强保留组分仍然被吸附在色谱柱内；
(3)脱附强保留组分：将洗脱剂3注入色谱柱，洗脱色谱柱内的强保留组分，强保留组分从色谱柱尾部流出，收集得到洗脱液3；
从第二个操作周期开始，在每一个操作周期的步骤(1)中，将原料液与在上一个操作周期内所收集的洗脱液2合并注入色谱柱，其余同第一个操作周期；
分离过程中，弱保留组分在每一个操作周期的步骤(1)中被洗脱出色谱柱，强保留组分在每一个操作周期的步骤(3)中被洗脱出色谱柱，与目标组分分离；而目标组分则在每一个操作周期的步骤(2)中被脱附至洗脱液2中，然后与新补充原料液中的目标组分在下一个操作周期的步骤(1)中一同被吸附至色谱柱，故目标组分被逐步浓缩至洗脱液2中或富集于色谱柱内，从而实现从混合物中分离与富集目标组分的目的。
6.根据权利要求5所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：在所述每一个操作周期的步骤(3)之后为步骤(4)，所述步骤(4)为用洗脱剂1平衡色谱柱；分离与富集过程为步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)、步骤(4)循环进行。
7.根据权利要求5或6所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，停止循环操作，用洗脱剂2将富集于色谱柱内的目标组分洗脱出色谱柱，在色谱柱尾部收集得到被浓缩的目标组分。
8.根据权利要求5或6所述的从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法，其特征在于：当目标组分在色谱柱内部不断积累，直到色谱柱饱和以至于目标组分从洗脱液1中泄漏时，在步骤(1)中用洗脱剂1代替原料液，继续循环操作，将残留在色谱柱内的非目标组分除去，而目标组分则继续被浓缩于洗脱液2中或富集于色谱柱内。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310252025.6A CN103331036B (zh) | 2013-06-21 | 2013-06-21 | 一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310252025.6A CN103331036B (zh) | 2013-06-21 | 2013-06-21 | 一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103331036A CN103331036A (zh) | 2013-10-02 |
| CN103331036B true CN103331036B (zh) | 2014-11-26 |
Family
ID=49239282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310252025.6A Active CN103331036B (zh) | 2013-06-21 | 2013-06-21 | 一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103331036B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018011102A1 (en) * | 2016-07-13 | 2018-01-18 | Chromacon Ag | Purification method and uses thereof |
| CN111551542B (zh) * | 2019-12-31 | 2022-11-29 | 常德市正阳生物科技股份有限公司 | 一种洗脱剂的切换检测方法 |
| CN112451996B (zh) * | 2020-11-10 | 2021-09-24 | 浙江大学 | 一种多柱连续流层析捕获蛋白的优化方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1116088C (zh) * | 1994-06-17 | 2003-07-30 | 代科化学工业株式会社 | 模拟移动床色谱分离方法 |
| FI20020592A (fi) * | 2002-03-27 | 2003-09-28 | Danisco Sweeteners Oy | Menetelmä sokereiden, sokerialkoholien, hiilihydraattien ja niiden seosten erottamiseksi niitä sisältävistä liuoksista |
| DE102004025000A1 (de) * | 2004-05-21 | 2005-12-08 | Bayer Technology Services Gmbh | Verfahren zur Herstellung von chemischen und pharmazeutischen Produkten mit integrierter Mehrsäulen-Chromatographie |
| DK2401048T3 (da) * | 2009-02-25 | 2019-09-23 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Separationsfremgangsmåde |
| CN102580352B (zh) * | 2012-01-31 | 2014-07-09 | 厦门大学 | 一种天然产物的分离方法 |
-
2013
- 2013-06-21 CN CN201310252025.6A patent/CN103331036B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103331036A (zh) | 2013-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104713973B (zh) | 具有在线富集功能的二维制备色谱仪器***及其应用 | |
| Wang et al. | Simultaneous separation of hydrophilic and hydrophobic compounds by using an online HILIC‐RPLC system with two detectors | |
| CN101272838B (zh) | 分离混合物组分的方法和装置 | |
| CN103961902B (zh) | 从原料液中分离与浓缩目标组分的模拟移动床色谱分离***及其方法 | |
| CN103331036B (zh) | 一种从混合物中分离与富集目标组分的色谱分离方法 | |
| US8722932B2 (en) | Method for separating a mixture comprising three components by simulated moving bed chromatography | |
| CN103724389B (zh) | 一种分离制备抗肿瘤成分灵芝酸c1和灵芝酸f的方法 | |
| CN106349301B (zh) | 一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法 | |
| CN100528891C (zh) | 从西兰花籽中分离制备葡萄糖莱菔子苷的方法 | |
| CN1090516C (zh) | 以减小长度校正死体积的色谱法模拟移动床分离方法 | |
| CN104422735A (zh) | 一种制备型循环色谱装置 | |
| CN101402003A (zh) | 改进的模拟移动床色谱分离*** | |
| CN100528892C (zh) | 从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷的方法 | |
| US20140008300A1 (en) | Separation process by means of high flow continuous chromatography and corresponding device | |
| CN104645667B (zh) | 扩张床色谱与逆流色谱在线联用方法、应用及装置 | |
| CN109053433B (zh) | 一种组合制备银杏酸的方法 | |
| Wei et al. | A twin‐column recycling chromatography with solvent gradient for reinforcing the isolation of minor impurities | |
| CN108250273A (zh) | 纽莫康定高效分离纯化方法 | |
| CN105504162B (zh) | 金属离子为桥接剂的18β‑甘草次酸分子印迹聚合物和整体柱 | |
| CN107376420A (zh) | 驱散流动相逆流层析分离方法 | |
| CN209405739U (zh) | 一种组合式净化柱 | |
| CN102516340A (zh) | 一种采用d150大孔树脂分离纯化羟钴胺素的方法 | |
| CN108250272A (zh) | 卡泊芬净高效分离纯化方法 | |
| CN101723927A (zh) | 一种儿茶素单体egcg工厂化生产分离纯化方法 | |
| CN104910258A (zh) | 一种精细纯化卡泊芬净的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |