CN103308669B - 用于自动免疫荧光检测的流式血球仪及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，包括依次连接的阀门a、血稀释模块、阀门b、溶血模块、阀门c、离心洗涤模块，还包括阀门e、自动孵育模块、阀门d、阀门f、流式检测模块。本发明还提供了相应的使用方法。本发明可以实现血常规和特异性细胞，如外周血造血干细胞等的自动化联合检测，降低造血干细胞检测的费用，增加了检测的实时性，扩展了血球仪的检测功能。
Description
技术领域
本发明涉及免疫组化、光学、机械电子、统计数学，具体是一种用于流式血球仪的自动免疫荧光检测通道及其使用方法。
背景技术
目前市场上五分类血球仪，如Sysmex XE-5000除了采用传统的电阻抗法和射频法外，逐步应用了流式细胞技术，并采用免疫荧光技术，逐步实现了对某些特异性细胞的检测，如外周血造血干细胞。但是，目前的免疫荧光检测并未实现自动化检测，而是人工进行稀释、溶血、孵育和反复离心洗涤等工作，过程费时且操作繁重。因此，实现免疫荧光细胞的自动化检测，对缩短检测时间，推广临床应用，具有重要意义。
发明内容
本发明针对上述需求以及现有技术中存在的不足，提供了一种流式血球仪的自动免疫荧光检测通道及其使用方法。
根据本发明的一个方面，提供一种用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，包括依次连接的阀门a、血稀释模块、阀门b、溶血模块、阀门c、离心洗涤模块，还包括阀门e、自动孵育模块、阀门d、阀门f、流式检测模块，其中：
离心洗涤模块包括离心振荡台、重悬液加注针头、上清液汲取针头、上清夜汲取器、重悬液加注器、样本汲取针头，上清夜汲取器通过上清液汲取针头连接离心振荡台，重悬液加注器通过重悬液加注针头连接离心振荡台，离心振荡台连接样本汲取针头的一端，样本汲取针头的另一端依次通过阀门e、自动孵育模块、阀门d连接回离心振荡台，并且，样本汲取针头的另一端通过阀门f连接至流式检测模块；
血稀释模块用于对血样进行检测前的抗凝和稀释；
溶血模块具有红细胞裂解液加注口，并包含有振动混匀装置；
离心洗涤模块用于对样本进行洗涤纯化；
自动孵育模块具有抗体加注口，采用悬滴方式加注抗体，并包含有振动混匀和温控装置；
流式检测模块具有滤色片组，用于针对不同的荧光试剂进行滤光切换，以对最终样本进行检测。
优选地，还包括控制模块和统计分析模块，其中，控制模块用于对阀门a、血稀释模块、阀门b、溶血模块、阀门c、离心洗涤模块、阀门e、自动孵育模块、阀门d、阀门f、流式检测模块的运转进行控制和检测，统计分析模块用于对流式检测模块采集到的光电信号进行处理，获得荧光免疫细胞的密度、体积参数。
优选地，离心洗涤模块能够进行回转离心运动和微振荡混匀运动。
优选地，离心振荡台包括偏心振动轮和分离重悬管，其中，分离重悬管固定在偏心振动轮上，通过偏心振动轮旋转产生振动，保证重悬的效果。
优选地，离心振荡台的分离重悬管的底端设有凹槽，以容留样本沉淀，保证上清液汲取过程中不丢失样本。
优选地，离心振荡台的分离重悬管与重悬液加注口、上清液汲取针头、样本汲取针头按照需求进行工位对齐，保证分离、洗涤、重悬的进行。
根据本发明的另一个方面，还提供一种所述用于自动免疫荧光检测的流式血球仪的使用方法，包括如下步骤：
步骤1，打开阀门a，外周血血样进入血稀释模块，对血样加注抗凝剂、稀释液并振荡混匀，进行抗凝和稀释；
步骤2，打开阀门b，血样进入溶血模块，对抗凝稀释后样本加注溶血剂进行溶血，自动混匀后自动保持若干分钟作为裂解时间；
步骤3，打开阀门c，血样进入离心洗涤模块对溶血后样本重复进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍；
步骤4，样本汲取针头汲取样本，通过阀门e送入自动孵育模块，洗涤纯化的溶血样本进行样本荧光素加注和自动孵育；
步骤5，打开阀门d，完成单独清洁冲刷后的离心洗涤模块对孵育后样本进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍；
步骤6，样本汲取针头汲取洗涤后孵育样本，通过阀门f送入流式检测模块，流式检测模块对最终样本进行检测；
步骤7，统计分析模块对PMT得到的识别结果与外周血血常规结果整合。
步骤8，对整个检测通道中的液路进行清洁，反向冲刷若干遍。
优选地，在步骤1中，外周血稀释倍数为10-100倍。
优选地，在步骤4中，孵育温度为30-40摄氏度，孵育时间为10-15分钟，荧光素为FITC。
优选地，在步骤6中，流式检测模块采用的激光波长为488nm，流式检测模块包含的荧光探测器为PMT。
与现有技术相比，本发明的优势在于，可以实现血常规和特异性细胞，如外周血造血干细胞等的自动化联合检测，降低造血干细胞检测的费用，增加了检测的实时性，扩展了血球仪的检测功能。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1是本发明结构原理图；
图2是分离重悬管的样本容留凹槽设计。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
参见图1和图2，
本发明包含如下技术方案：一种流式血球仪的自动免疫荧光检测通道，包括抗凝稀释模块，溶血模块，自动孵育模块，离心洗涤模块，流式检测模块，控制模块，统计分析模块。所述抗凝稀释模块与流式血球仪的血常规稀释***共用，通过一个阀门a联通，对所述自动免疫荧光检测通道进行开关控制，其主要功能是对样本进行检测前的抗凝和稀释。所述溶血模块具有红细胞裂解液加注口，并有振动混匀装置。所述自动孵育模块具有抗体加注口，采用悬滴方式加注抗体，并有振动混匀和温控装置。所述离心洗涤模块具有振动离心室和分离重悬管，并配有定位装置、重悬液加注针头、上清液汲取针头、样本汲取针头，可以对样本进行洗涤纯化。所述流式检测模块具有滤色片组，可以针对不同的荧光试剂进行滤光切换。所述控制模块对流式血球仪的工作模式进行选择，对血球仪的各通道开关，子模块的运转进行控制和检测。所述统计分析模块对流式检测模块采集到的光电信号在上位机进行处理，获得荧光免疫细胞的密度、体积等参数。
进一步的，所述溶血模块、所述自动孵育模块分别通过阀门b和阀门c与所述离心模块联通，以保证溶血样本和荧光标定样本可以根据需要，分别进入离心洗涤模块进行洗涤纯化。
进一步的，所述离心洗涤模块可以实现两种运动，即回转离心运动和微振荡混匀运动。
进一步的，所述离心洗涤模块通过定位装置使分离重悬管与重悬液加注口、上清液汲取针头、样本汲取针头按照需求进行工位对齐，保证分离、洗涤、重悬的进行。
进一步的，所述分离重悬管具有独特凹槽设计，容留样本沉淀，保证上清液汲取过程中不丢失样本。
进一步的，所述离心洗涤模块的振动混匀装置设计是将所述分离重悬管固定在一个偏心振动轮上，通过偏心轮旋转产生振动，保证重悬的效果。
进一步的，所述抗凝稀释模块，溶血模块，自动孵育模块，离心洗涤模块，流式检测模块具有单独的冲刷洗涤装置，可以进行单独的冲刷。
相应地，本发明提供的方法包括如下步骤：
步骤1，打开阀门a，外周血血样进入检测通道的血稀释模块1，对血样加注抗凝剂、稀释液并振荡混匀，进行抗凝和稀释，主要特征在于外周血稀释倍数为10-100倍。
步骤2，打开阀门b，血样进入溶血模块2，对抗凝稀释后样本加注溶血剂进行溶血，其主要特征在于自动混匀后自动保持若干分钟作为裂解时间。
步骤3，打开阀门c，血样进入离心洗涤模块3对溶血后样本重复进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍，其主要特征在于分离重悬管310的样本沉淀容留凹槽设计（见图2）、离心振荡台31的混匀微振荡设计，上清液汲取针头33和上清液汲取器34设计，重悬液加注针头32和重悬液加注器35设计。
步骤4，样本汲取针头36汲取样本，通过阀门e送入自动孵育模块4，洗涤纯化的溶血样本进行样本荧光素加注和自动孵育。其主要特征在于孵育温度为30-40摄氏度，孵育时间为10-15分钟，本实施例中荧光素为FITC。
步骤5，打开阀门d，完成单独清洁冲刷后的离心洗涤模块3对孵育后样本进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍。
步骤6，样本汲取针头36汲取洗涤后孵育样本，通过阀门f送入流式检测模块5。流式检测模块5对最终样本进行检测，本实施例中激光波长为488nm，荧光探测器为PMT。
步骤7，统计分析模块对PMT得到的识别结果与外周血血常规结果整合。
步骤8，对整个检测通道中的液路进行清洁，反向冲刷若干遍。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (10)
1.一种用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，包括依次连接的阀门a、血稀释模块、阀门b、溶血模块、阀门c、离心洗涤模块，还包括阀门e、自动孵育模块、阀门d、阀门f、流式检测模块，其中：
离心洗涤模块包括离心振荡台、重悬液加注针头、上清液汲取针头、上清夜汲取器、重悬液加注器、样本汲取针头，上清夜汲取器通过上清液汲取针头连接离心振荡台，重悬液加注器通过重悬液加注针头连接离心振荡台，离心振荡台连接样本汲取针头的一端，样本汲取针头的另一端依次通过阀门e、自动孵育模块、阀门d连接回离心振荡台，并且，所述另一端通过阀门f连接至流式检测模块；
血稀释模块用于对血样进行检测前的抗凝和稀释；
溶血模块具有红细胞裂解液加注口，并包含有振动混匀装置；
离心洗涤模块用于对样本进行洗涤纯化；
自动孵育模块具有抗体加注口，采用悬滴方式加注抗体，并包含有振动混匀和温控装置；
流式检测模块具有滤色片组，用于针对不同的荧光试剂进行滤光切换，以对最终样本进行检测。
2.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，还包括控制模块和统计分析模块，其中，控制模块用于对阀门a、血稀释模块、阀门b、溶血模块、阀门c、离心洗涤模块、阀门e、自动孵育模块、阀门d、阀门f、流式检测模块的运转进行控制和检测，统计分析模块用于对流式检测模块采集到的光电信号进行处理，获得荧光免疫细胞的密度、体积参数。
3.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，离心洗涤模块能够进行回转离心运动和微振荡混匀运动。
4.根据权利要求1所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，离心振荡台包括偏心振动轮和分离重悬管，其中，分离重悬管固定在偏心振动轮上，通过偏心振动轮旋转产生振动，保证重悬的效果。
5.根据权利要求4所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，离心振荡台的分离重悬管的底端设有凹槽，以容留样本沉淀，保证上清液汲取过程中不丢失样本。
6.根据权利要求4所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪，其特征在于，离心振荡台的分离重悬管与重悬液加注口、上清液汲取针头、样本汲取针头按照需求进行工位对齐，保证分离、洗涤、重悬的进行。
7.一种权利要求1至6中任一项所述用于自动免疫荧光检测的流式血球仪的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，打开阀门a，外周血血样进入血稀释模块，对血样加注抗凝剂、稀释液并振荡混匀，进行抗凝和稀释；
步骤2，打开阀门b，血样进入溶血模块，对抗凝稀释后样本加注溶血剂进行溶血，自动混匀后自动保持若干分钟作为裂解时间；
步骤3，打开阀门c，血样进入离心洗涤模块对溶血后样本重复进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍；
步骤4，样本汲取针头汲取样本，通过阀门e送入自动孵育模块，洗涤纯化的溶血样本进行样本荧光素加注和自动孵育；
步骤5，打开阀门d，完成单独清洁冲刷后的离心洗涤模块对孵育后样本进行离心分离、上清液汲取、重悬稀释、振动混匀步骤若干遍；
步骤6，样本汲取针头汲取洗涤后孵育样本，通过阀门f送入流式检测模块，流式检测模块对最终样本进行检测；
步骤7，统计分析模块对PMT得到的识别结果与外周血血常规结果整合；
步骤8，对整个检测通道中的液路进行清洁，反向冲刷若干遍。
8.根据权利要求7所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪的使用方法，其特征在于，在步骤1中，外周血稀释倍数为10-100倍。
9.根据权利要求7所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪的使用方法，其特征在于，在步骤4中，孵育温度为30-40摄氏度，孵育时间为10-15分钟，荧光素为FITC。
10.根据权利要求7所述的用于自动免疫荧光检测的流式血球仪的使用方法，其特征在于，在步骤6中，流式检测模块采用的激光波长为488nm，流式检测模块包含的荧光探测器为PMT。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140709 |