CN103304573A - 石蒜碱类化合物在制备抗肿瘤药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及石蒜碱类化合物(A)在抗肿瘤药物方面的应用，还涉及其各种光学异构体，药学上可接受的盐，溶剂合物以及前药在制备抗肿瘤药物的应用。本发明还涉及含有式(A)结构石蒜碱类化合物的药物组合物在制备抗肿瘤药物的应用。

Description

石蒜碱类化合物在制备抗肿瘤药物的应用

技术领域

本发明是关于石蒜碱类化合物、药物组合物，以及这类化合物的合成方法、制剂方法。具体地，本发明提供一类石蒜碱类化合物，含有这类化合物的药物组合物及这类化合物在抗肿瘤方面的用途。

发明背景

石蒜(Lycoris Herb)属于单子叶植物纲石蒜科(Amaryllidaceae)，在全世界共有20多种。石蒜属植物很早就被用作药用植物来治病疗伤，据《本草纲目》记载：石蒜不仅具有解毒、祛痰、利尿、催吐等多种功效，还可用于咽喉肿痛、痈肿疮毒、瘰疬、水肿等。石蒜碱(Lycorine)是一种异喹啉类生物碱，最初于1895年从石蒜的鳞茎中分离得到，具有抗炎、抗病毒、抗疟疾、保护心血管以及诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。

恶性肿瘤是危害人类健康的最危险的疾病之一，近期的研究表明，石蒜碱对人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞Colo-205、人离体鼻咽癌细胞等有明显的抑制作用。石蒜碱对小鼠纤维肉瘤有很强的抑制作用，对小鼠皮下植入Lewis肺癌的抑制率为80.5％，其作用机制可能是抑制DNA和蛋白质的合成。石蒜碱抑制培养的K-ras-NRK细胞的蛋白质合成作用已经得到证实，为石蒜碱可以作为蛋白质合成的抑制剂的开发奠定了基础。研究发现石蒜碱能够显著降低HL60、K562、ARH77等多种类型血液肿瘤细胞的存活率，显示出广谱抗白血病作用。石蒜碱可以将人急性早幼粒白血病细胞(HL60)阻断在G2/M期，其作用机制是下调Bcl-2的表达，提高Bax/Bcl-2的比率；增强caspase-8、caspase-9和caspasc-3的活性，从而使细胞凋亡；最新研究表明，石蒜碱抑制HL-60细胞增殖的分子机制还与上调p21基因表达有关。

本发明基于前期的研究，针对石蒜碱的结构位点进行了化学修饰和改造，合成了一系列衍生物。通过生物活性实验发现化合物5，9，20等对HL-60，A549，Hela等肿瘤细胞显示了非常好的抑制活性，但作用机制未明。

本发明的目标是提供一类石蒜碱化合物在制备抗肿瘤药物的应用。

发明内容：

本发明涉及式(A)的石蒜碱类化合物和/或药学上可接受的盐和/或水合物制备抗肿瘤药物的应用。这些化合物作为其药学上可接受的盐和/或水合物，或者作为药物组合物成分(无论其是否与其他抗肿瘤制剂，免疫调节剂或抗生素同时给药)而用于抑制肿瘤生长。

更具体的说，本发明涉及式(A)化合物和/或药学上可接受的盐和/或水合物制备抗肿瘤药物的应用：

其中

R₁，R₂，R₃，R₄可以独立地取自于以下基团：-H，-OH，-SH，-NH₂，羰基，-卤素，-O-烷基，-O-环烷基，-O-杂烷基，-O-杂环烷基，-O-杂环基，-O-链烯基，-O-环烯基，-O-杂烯基，-O-杂环烯基，-O-链炔基，-O-环炔基，-O-杂炔基，-O-环杂炔基，-O-芳基，-O-芳烷基，-O-杂芳基，-O-杂芳烷基，-S-烷基，-S-环烷基，-S-杂烷基，-S-杂环烷基，-S-杂环基，-S-链烯基，-S-环烯基，-S-杂烯基，-S-杂环烯基，-S-链炔基，-S-环炔基，-S-杂炔基，-S-环杂炔基，-S-芳基，-S-芳烷基，-S-杂芳基，-S-杂芳烷基，-N-烷基，-N-环烷基，-N-杂烷基，-N-杂环烷基，-N-杂环基，-N-链烯基，-N-环烯基，-N-杂烯基，-N-杂环烯基，-N-链炔基，-N-环炔基，-N-杂炔基，-N-环杂炔基，-N-芳基，-N-芳烷基，-N-杂芳基，-N-杂芳烷基；烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基，杂环基，链烯基，环烯基，杂烯基，杂环烯基，链炔基，环炔基，杂炔基，环杂炔基，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基；

R₅和R₆可以独立地取自于以下基团：-H，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基，杂环基，链烯基，环烯基，杂烯基，杂环烯基，链炔基，环炔基，杂炔基，环杂炔基，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基。

本发明范围内包括的药物组合物，包含抗肿瘤有效量的式(A)化合物或其治疗上可接受的盐，与在药学上可接受的药物载体或助剂。

本发明的一个重要方面，涉及在哺乳动物中，通过对该哺乳动物给予有效抗肿瘤的含量的式(A)化合物，或其在治疗上可接受的盐或酯，或上述组合物，以***药物的方法。

本发明其他的方面涉及的药物组合物，可另外包括其他抗肿瘤药物，如细胞毒药物，胸苷酸合成酶抑制剂，二氢叶酸还原酶抑制剂等。

优选方案的详细说明

定义：

如本文所述，除非另行提及，均适用下列的定义：

关于实例，(R)或(S)用于指明不对称中心的绝对构型，这指明是用于整个化合物的说明而不是单独取代基的说明。

在本文中使用“P1，P2，P3”标识时，意指从肽类似物的C-端开始，并朝向N-端延伸的氨基酸的残基的位置，即P1代表从C端开始的第一个位置，P2为从C端开始的第二个位置(参见Berger A.&Schechter I.，Transactions of the RoyalSociety London series B257，249-264(1970))。

本文所用的“卤素”一词是指卤素取代基，即选自碘，溴，氯或氟。

本文所用的“C1-12卤烷基”一词，单独使用或与另一取代基组合使用时，是指非环形的、直链或支链烷基取代基，它包含1到12个碳原子，具有一个或多个选自氟，氯，溴或碘卤素取代的氢。

本文所用的“C1-12烷基”一词，单独使用或与另一取代基组合使用时，是指非环形的、直链或支链烷基取代基，它包含1到12个碳原子，包括例如甲基、乙基、丙基、丁基、己基、叔丁基，异丁基，十二烷基等。

本文所用的“C1-12烷基酰基”一词，单独使用或与另一取代基组合使用时，是指非环形的、直链或支链烷基酰基取代基，它包含1到12个碳原子，包括例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、3-甲基戊酰基、十二烷基酰基等。

本文所用的“C1-12卤烷基酰基”一词，单独使用或与另一取代基组合使用时，是指直链或支链、非环形的卤代烷基酰基取代基，它包含1到12个碳原子，包括例如卤代乙酰基、卤代丙酰基、卤代丁酰基、卤代3-甲基戊酰基、卤代十二烷基酰基等，其中包括一个或者多个卤素选自氟、氯、溴或碘。

本文所用的“C1-6烷基硅烷基”一词，单独使用或者与另一取代基组合使用时，是指硅原子的三个取代基为直链或支链、非环形的烷基取代基，它包括1到6个碳原子，包括例如三甲基硅，叔丁基二甲基硅等。

本文所用的“C1-6烷基磺酰基”一词，单独使用或者与另一取代基组合使用时，是指磺酰基的取代基为直链或支链、非环形的烷基取代基，它包括1到6个碳原子，包括例如甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、丁基磺酰基、己基磺酰基、叔丁基磺酰基等。

本文所用的“C1-6硫烷基”词，单独使用或与另一取代基组合使用时，是指非环形的、直链或支链烷基取代基，含有硫醇基团，例如硫丙基。

本文所用的“C3-8环烷基”一词，不管单独使用或与另一取代基组合使用时，是指非环形的直链或支链烷基取代基，它包含3到8个碳原子，包括例如环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基及环辛基。

本文所用的“C3-8环烷氧基”一词，不论单独使用或与另一取代基组合使用时，意指取代基包含3到8个碳原子的-O-C_3-8环烷基，包括例如-O-环丙基，-O-环戊基，-O-环己基等。

本文所用的“芳基”一词，意指含有6个碳原子的芳香族单环***，或含有10个原子的芳香族双环***，例如苯基和萘基-环***。

本文所用的“杂芳基”一词，单独使用或与另一取代基组合使用时，意指由碳原子和杂原子(如氮、氧、硫等)构成的五元，六元或七元不饱和环状结构，移除氢而衍生的单价取代基。适当的杂环实例如：吡啶，吡嗪，嘧啶，噻吩，呋喃，吡咯，咪唑，吡唑，噻唑，喹啉，噁唑，异噁唑，苯并噁唑，苯并噻唑，1，2，3-***，1，2-噻二唑，1，2，4-三嗪。

本文中“药物上可接受的盐”一词是指式(A)化合物的药物上可接受的酸加成盐和药物上可接受的碱加成盐，其在正常医学治疗中，适用于人及动物的组织接触而无毒性，无过敏反应，无刺激性等。一般是水溶性或油溶性，或是易分散的，并在其使用上是有效的。

“药物上可接受的酸加成盐”一词是指保持生物活性及游离态碱的性质，并且是非生物上或其他方面不需要的，其与无机酸如硫酸，盐酸，硝酸，磷酸，氢溴酸，氨基磺酸等，及有机酸如醋酸，三氟醋酸，三氯醋酸，丙酸，抗坏血酸，苯甲酸，苯磺酸，肉桂酸，柠檬酸，马来酸，丙二酸，草酸，硬脂酸，己二酸，藻酸，烟酸，丁二酸，水杨酸，天冬氨酸，乙醇酸，苹果酸，乳酸，酒石酸，对氨基苯磺酸，三甲基苯磺酸，对甲基苯磺酸，扁桃酸，果胶酯酸，苦味酸等所形成的盐。

“药物上可接受的碱加成盐”一词是指保持生物活性及游离态酸的性质，并且是非生物上或其他方面不需要的，其是与无机碱如氨或铵或金属阳离子如，钠，镁，铜，锌，钙，钾，铝等的氢氧化物或碳酸盐所形成的盐，特别优选的是钠，钾，钙，镁，铵盐。由药物上可接受的有机的非毒性的碱衍生的盐包括们胺，仲胺及叔胺，季铵化合物，经取代的胺，包括天然的经取代的胺，环胺以及碱离子交换树脂，如甲基胺，二甲基胺，三甲基胺，乙基胺，二乙基胺，三乙基胺，三丙基胺，异丙基胺，三丁基胺，乙醇胺，二乙醇胺，二环己基胺，赖氨酸，精氨酸，组氨酸，咖啡因，胆碱，甜菜碱，亚乙基二胺，葡糖胺，甲基葡糖胺，可可碱，哌嗪，哌啶，嘌呤，四甲基铵化合物，四乙基铵化合物，吡啶，N，N二甲基苯胺，N-甲基哌啶，N-甲基吗啉，N，N-二苄基苯乙胺等所形成的盐。特别优选的有机非毒碱是异丙基胺，二乙基胺，乙醇胺，三甲基胺，二环己基胺，胆碱，咖啡因。

优选的方案

R₁和R₂：本发明的优选方案包括式(A)化合物，其中R₁和R₂优选氢、C1-6烷基酰基、芳基酰基；更优选的是氢、乙酰基和苯甲酰基。

R₃和R₄：本发明的优选方案包括式(A)化合物，其中R₃和R₄优选氢、C1-6烷基酰基、C1-6卤代烷基酰基和芳基酰基；更优选的是氢、己酰基和4-氯丁酰基。

R₅和R₆：本发明的优选方案包括式(A)化合物，其中R₅和R₆优选氢、C1-6烷基，环烷基，链烯基，链炔基，芳基，芳烷基；更优选的是氢，丁基，苯基。

本发明的石蒜碱类化合物可以游离形式或以盐形式存在。本领域技术人员已知许多化合物类型的药学上可接受的盐及其制备方法。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐，包括这样的化合物碱与无机或有机酸形成的季铵盐。

本发明的化合物可形成水合物或溶剂合物。本领域技术人员已知将化合物与水一起冻干时所形成的水合物或在溶液中与合适的有机溶剂浓缩时形成溶剂合物的方法。

本发明包含含有治疗量本发明化合物的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它们的结合物。载体或赋形剂还可以包括本领域已知的时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，还可包括蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，异丁烯酸甲酯等等。如果需要，该组合物还可以包含较小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。该组合物可以是液体，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，持续释放制剂或粉末。该组合物可以用传统的黏合剂和载体如三酸甘油酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体如药物品级的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素和碳酸镁等等。视需要制剂而定，配制可以设计混合，制粒和压缩或溶解成分。在另一个途径中，该组合物可以配制成纳米颗粒。

本发明的药物组合物可以以各式各样的药物形式给药。使用的药物载体可以为固体或者液体。

如果使用固体载体，制剂可以为片剂，被放入硬胶囊中的粉末或小药丸形式或锭剂或糖锭形式。固体载体的量在很大程度上变化，但是优选从约25mg到约1.0g。典型的固体载体包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石粉，凝胶，琼脂，果胶，***胶，硬脂酸镁，硬脂酸等等。固体载体可以包括一种或多种可能同时作为增香剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填料，助流剂，压缩助剂，粘合剂或片剂-崩解剂的物质；它还可以是包封材料。在粉末中，载体为精细粉碎的固体，它与精细粉碎的活性成分的混合。在片剂中活性成分与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合，以需要的形状和大小压缩。粉末和片剂优选包含至多99％活性成分。

如果使用液体载体，制剂可以为糖浆，乳剂，软胶囊，在安瓿或小瓶或非水的液体悬浮液中的无菌注射溶液或悬浮液。典型的液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，水，等等。液体载体用于制备溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，酊剂和密封的组合物。活性成分可以溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂，二者的混合物或药学上可接受的油类或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂如增溶剂，乳化剂，缓冲剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定形成渗透压-调节剂。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适的例子包括水(部分地包含如同上述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠盐溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它们的衍生物，和油类(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体还可以为油脂如油酸乙酯和异丙基肉豆蔻酸盐。无菌的液体载体用于肠胃外给药的无菌的液态组合物。用于加压组合物的液体载体可以为卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。无菌溶液或悬浮溶液液体药物组合物可以用来，例如，静脉内，肌内，腹膜内或皮下注射。可根据本领域的已知技术，使用适当的分散剂或湿润剂(如吐温80)和悬浮剂来调配该悬浮液。注射时可单次推入或逐渐注入30分钟的经脉内灌注。该化合物还可以以液体或者固体组合物的形式口服给药。本文中所用的肠胃外词，包括皮下、皮内、肌肉内、静脉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内和病灶内注射或输液技术。

为了获得稳定的水溶性的剂型，可以将化合物或基药学上可接受的盐溶于有机或无机酸的水溶液，0.3M琥珀酸或柠檬酸溶液。选择性地，酸性的衍生物可以溶于合适的碱性溶液。如果得不到可溶形式，可将化合物溶于合适的其溶剂或它们的结合。这样的合适的共溶剂的例子包括，但是不局限于，浓度范围从0-60％总体积的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羟脂肪酸酯等等。

本发明的药物组合物可口服、非经肠胃或通过植入的储存器给药，口服给药或通过注射给药时优选的。各种释放***是已知的并且可以用于化合物或其他各种制剂的给药，这些制剂包括片剂，胶囊，可注射的溶液，脂质体中的胶囊，微粒，微胶囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮肤的，皮内，肌内，腹膜内的，静脉内的，皮下的，鼻腔内的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常优选的)口服途径。化合物可以通过任何方便的或者其它适当的途径给药，例如通过注入或快速浓注，通过上皮的或粘膜线路(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜，等等)吸收或通过负载药物的支架以及可以于其他生物活性剂一起给药。可以全身或局部给药。用于鼻，支气管或肺疾病的治疗或预防时，优选的给药途径为口服，鼻给药或支气管烟雾剂或喷雾器。

可供上文提及的调配物和组合物使用的其他适当的赋形剂或载体，可在标准药理学教科书中找到，例如在“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，第19版中。在单一治疗中，在本文中所描述的石蒜碱衍生物，在约0.01到约100mg/kg体重每天之间的剂量范围是有用的，优选的是0.5到75mg/kg体重每天之间。通常，本发明的药物组合物将每天给药约1到5次，或另外一连续的输液。这类药物可用作慢性或急性的治疗。可与载体物质混合，产生单一剂量形式的活性成分的含量，可根据待处理的宿主和给药的特定模式而改变。代表性的制剂将含有约5％到约95％活性成分(重量/重量)。优选的是，这类制剂含有约20％到约80％的活性化合物。

熟悉本领域这将理解可能需要比上文提及的更高或更低的剂量。对特定患者的特定剂量和处理方式应该按照各种因素而定，包括所使用的特定化合物的活性，患者的年龄、体重、性别、一般的健康状态、饮食、给药的时间、代谢率、药物的组合，以及感染的严重性和过程、患者对感染的倾向，还有处理医师的判断。一般而言，以实质上低于该化合物的最佳剂量的小剂量开始治疗。随后通过少量的增加而增加剂量，直到在该情况下达到最佳的效果为止。一般而言，要求以通常足以产生有效的抗肿瘤效果，但不引起任何有害或不利的副作用的浓度含量来给予该化合物。

当本发明的组合物包括式(A)化合物与一种或多种另外的治疗或预防剂组合时，该化合物与另外的制剂的存在量应该以约10到100％之间的剂量含量提供，更优选的是约10至80％的剂量，通常以单次治疗法给予。

当这些化合物或其在药学上可接受的盐类与在药学上可接受的载体一起调配时，将所得的组合物在活体内给予哺乳动物，如人类，以便***。也可使用本发明化合物与下列制剂混合，来完成这类治疗，包括但不局限于：细胞毒药物，胸苷酸合成酶抑制剂，二氢叶酸还原酶抑制剂等；或其组合物。可将另外的制剂与本发明化合物混合，以产生单一的剂量形式。另外，也可将这类另外的制剂可分别投予哺乳动物，成为多个剂量形式的一部分。因此，本发明其他的具体方案提供一种在哺乳动物中，通过给予式(A)化合物，其中取代基如同上文定义，来达到抗肿瘤的效果。

工艺流程：

根据在流程I，II，III，IV和V中说明的普通程序来合成本发明化合物。

流程I：

化合物1-2到1-5是通过流程I合成得到的。在该流程中，以盐酸石蒜碱为起始原料，在吡啶中用乙酸酐将石蒜碱的1，2位羟基乙酰化，然后在甲醇中用盐酸将2位的乙酰基选择性脱掉，随后以吡啶为溶剂，选用不同的酰氯与二位羟基成酯从而得到这一系列化合物。

步骤I-11，2-二乙酰基石蒜碱(1-2)

盐酸石蒜碱(323mg，1mmol)溶于15ml无水吡啶中，冰浴中15ml乙酸酐逐滴缓慢加入，滴加完毕后50℃搅拌过夜。10ml甲醇缓慢加入，50℃搅拌30min，减压蒸除溶剂，残留物用50ml二氯甲烷溶解，分别用40ml水，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得自色固体(350mg，95％)。

步骤I-21-乙酰基石蒜碱(1-3)

1，2-二乙酰基石蒜碱(371mg，1mmol)溶于50ml甲醇中，室温下搅拌中逐滴加入10ml浓盐酸，滴加完毕后45℃搅拌1.5小时，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH到7，加入二氯甲烷萃取水相，TLC检测直到水相中无产物为止，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，层析柱分离，得到白色固体(277mg，84％)。

步骤I-31-乙酰基-2-苯甲酰基石蒜碱(1-4)

1-乙酰基石蒜碱(330mg，1mmol)溶于5ml无水吡啶中，苯甲酰氯溶于2ml无水二氯甲烷中，在冰浴条件下边搅拌逐滴缓慢加入到1-乙酰基石蒜碱的吡啶溶液中，反应30min，减压蒸除溶剂，残留物用15ml二氯甲烷溶解，分别用20ml水，20ml饱和碳酸氢钠水溶液和20ml饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，层析柱分离，得到淡黄色油状物(346mg，80％)。

步骤I-41-乙酰基-2-4-氯丁酰基)石蒜碱(1-5)

1-乙酰基石蒜碱(330mg，1mmol)溶于5ml无水吡啶中，4-氯丁酰氯溶于2ml无水二氯甲烷中，在冰浴条件下边搅拌逐滴缓慢加入到1-乙酰基石蒜碱的吡啶溶液中，反应30min，减压蒸除溶剂，残留物用15ml二氯甲烷溶解，分别用20ml水，20ml饱和碳酸氢钠水溶液和20ml饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，层析柱分离，得到淡黄色油状物(355mg，82％)。

流程II：

化合物2-2到2-4等是通过流程II合成得到的。以1-乙酰基石蒜碱为原料，通过Swern氧化反应将2位羟基氧化为羰基而得到化合物2-2，然后在甲醇中用浓盐酸将1位羟基的乙酰基脱掉而得到化合物2-3，以吡啶为溶剂和缚酸剂，化合物2-3与不同的酰氯反应得到化合物2-4等系列化合物。

步骤II-1  1-乙酰基-2-羰基石蒜碱(2-2)

草酰氯(0.22ml，2.5mmol)溶于5ml无水二氯甲烷中，将温度降到-78℃，低温下逐滴加入溶于5ml的DMSO(0.24ml，3.1mmol)，-78℃搅拌15min，缓慢加入溶于5ml无水二氯甲烷的1-乙酰基石蒜碱(329mg，1mmol)，滴加完毕后-78℃反应1.5小时，三乙胺缓慢加入淬灭反应，减压蒸除溶剂，残留物用20ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得白色固体(280mg，86％)。

步骤II-2  2-羰基石蒜碱(2-3)

1-乙酰基-2-羰基石蒜碱(327mg，1mmol)溶于15ml甲醇中，缓慢加入5ml浓盐酸，50℃搅拌2小时，减压蒸除溶剂，残留物用20ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得淡黄色固体(225mg，79％)。

步骤II-3  1-丁酰基-2-羰基石蒜碱(2-4)

2-羰基石蒜碱(285mg)溶于5ml无水吡啶中，冰浴中缓慢加入溶于2ml无水二氯甲烷的丁酰氯，0℃条件下反应30min，减压蒸除溶剂，残留物用10ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得淡黄色固体(302mg，85％)。

流程III：

化合物3-2到3-4等是通过流程III合成得到的。以石蒜碱为起始原料，在DMF中以咪唑为缚酸剂与叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)反应得到2位羟基TBS取代的化合物3-2，然后将化合物3-2与乙酰氯反应得到1位羟基乙酰基取代2位羟基TBS取代的化合物3-3，同样的方法化合物3-2与甲磺酰氯(MsCl)反应得到1位羟基甲磺酰基取代2位羟基TBS取代的化合物3-4.

步骤III-1  2-TBS-石蒜碱(3-2)

盐酸石蒜碱(100mg，0.35mmol)溶于15ml无水DMF中，咪唑(150mg，2.1mmol)与叔丁基二甲基氯硅烷(110mg，0.7mmol)一次性加入，室温搅拌2小时，减压蒸除大部分DMF，残留物用20ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得无色油状物(126mg，90％)。

步骤III-2  1-乙酰基-2-TBS-石蒜碱(3-3)

2-TBS-石蒜碱(401mg，1mmol)溶于5ml无水吡啶中，冰浴中缓慢加入溶于2ml无水二氯甲烷的乙酰氯，0℃条件下反应30min，减压蒸除溶剂，残留物用10ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得无色油状物(377mg，85％)。

步骤III-3  1-甲磺酰基-2-TBS-石蒜碱(3-4)

2-TBS-石蒜碱(401mg，1mmol)溶于5ml无水吡啶中，冰浴中缓慢加入溶于2ml无水二氯甲烷的甲磺酰氯，0℃条件下反应1.5小时，碱压蒸除溶剂，残留物用10ml二氯甲烷溶解，分别用水，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，层析柱分离，得淡黄色固体(397mg，83％)。

流程IV：

化合物4-2和4-3等是通过流程IV合成得到的。以1，2-二甲基石蒜碱IV-1为起始原料，首先用三溴化硼将五元氧环打开，然后在PTSA的催化下，用丙酮保护苯环上的邻二羟基重建五元氧环得到化合物4-2。类似的，将丙酮改为2-戊酮则得到化合物4-3。

步骤IV-1  12，12-二甲基-石蒜碱(4-2)

1，2-二甲酰基石蒜碱(60mg，0.16mmol)溶于5mL无水二氯甲烷中，缓慢滴加三溴化硼(80mg，0.32mmol)，0℃条件下反应1.5小时，5mL无水甲醇缓慢加入以淬灭反应，减压蒸除反应溶剂，溶质溶于5mL无水甲醇中，加入3mL丙酮和PTSA(6mg，0.03mmol)，70℃条件下回流6小时，减压蒸除溶剂，层析柱分离，得灰色固体(18mg，36％)。

步骤IV-2  12-甲基-12-丙基-石蒜碱(4-3)

1，2-二甲酰基石蒜碱(60mg，0.16mmol)溶于5mL无水二氯甲烷中，缓慢滴加三溴化硼(80mg，0.32mmol)，0℃条件下反应1.5小时，5mL无水甲醇缓慢加入以淬灭反应，减压蒸除反应溶剂，溶质溶于5mL无水甲醇中，加入3mL2-戊酮和PTSA(6mg，0.03mmol)，70℃条件下回流6小时，减压蒸除溶剂，层析柱分离，得灰色固体(15mg，29％)。

流程V：

化合物5-2到5-5等是通过流程V合成得到的。以1-乙酰基石蒜碱(5-1)为原料，在无水二氯甲烷中用三氯氧磷将2-位羟基转化为氯原子得到1-乙酰基-2-氯石蒜碱(5-2)，碱性条件下在石蒜碱C1-C2位形成一个环氧丙烷的结构得到1，2-环氧石蒜碱(5-3)，然后用叠氮钠在甲醇溶液中将环氧结构打开在石蒜碱中引入叠氮基团得到2-叠氮石蒜碱(5-4)，最后用四氢铝锂将叠氮结构还原为氨基聪的得到了2-氨基石蒜碱(5-5)。

步骤V-1  1-乙酰基-2-氯石蒜碱(5-2)

5mg(0.1mmol)氯化钠溶于2mL三氯氧磷中，然后加入1-乙酰基石蒜碱(V-1)(159mg，0.47mmol)，该溶液在30℃条件下搅拌1小时，然后0.1mL浓盐酸逐滴加入到反应体系中，30℃条件下继续反应2小时。反应溶液缓慢倒入冰水中，用饱和的碳酸氢钠水溶液调pH到8后用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后减压蒸除溶剂，柱层析分离得到白色固体(132mg，80.9％)

步骤V-2  1，2-环氧石蒜碱(5-3)

500mg(1.44mmol)1-乙酰基-2-氯石蒜碱(5-2)溶于100mL甲醇中，然后加入甲醇钠(1.0g)，该反应溶液冰浴条件下搅拌20分钟，减压蒸除大部分溶剂，然后溶于50mL二氯甲烷后水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析分离得到白色固体(166mg，42.9％)。

步骤V-3  2-叠氮石蒜碱(5-4)

166mg(0.62mmol)1，2-叠氮石蒜碱溶于10mL 甲醇中，然后加入叠氮钠(401mg，6.2mmol)，反应体系在80℃条件下回流20分钟，减压蒸除溶剂，柱层析分离得到灰色固体(150mg，77.5％)。

步骤V-4  2-氨基石蒜碱(5-5)

69mg(0.22mmol)2-氨基石蒜碱溶于2mL无水四氢呋喃中，缓慢加入溶于3mL无水四氢呋喃中的四氢铝锂(168mg，4.4mmol)。反应体系在冰浴中搅拌1小时，缓慢加入水以猝灭反应。加入10mL二氯甲烷和水，分出有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析分离得到灰色固体(40mg，63.5％)。

实施例

通过下列不受限制的实例，更详细地说明本发明，但本发明不局限于以下实例。

以摄氏度数提供温度。在Bruker400MHz的分光计上记录核磁共振(NMR)广谱；以百万分之一(ppm)表述化学位移(δ)，并参考内部的氘代试剂。

在实施例中所使用的缩写包括DMF：二甲基甲酰胺；Ac：乙酰基；TBS：叔丁基二甲基硅；MS：甲磺酰基；Py：吡啶；FBS：胎牛血清；PBS溶液：磷酸缓冲液；PBST：磷酸缓冲液加上Tween-20；ESI-MS：电喷雾质谱分析；MS：质谱分析；HPLC：高效液相色谱法。

实施例1.合成1-乙酰基-2-苯基石蒜碱(1-4)和1-乙酰基-2-(4-氯丁酰基)石蒜碱(1-5)

按照步骤I-3和I-4合成化合物1-乙酰基-2-苯基石蒜碱(1-4)和1-乙酰基-2-(4-氯丁酰基)石蒜碱(1-5)。

1-乙酰基-2-苯基石蒜碱(1-4)：ESI-MS：m/z 434[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.04(d，J＝7.7Hz，2H)，7.55(t，J＝7.3Hz，1H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.60(s，1H)，5.90(s，2H)，5.67(s，1H)，5.56(s，1H)，4.21(d，J＝14.1Hz，1H)，3.65(d，J＝14.1Hz，1H)，3.54-3.37(m，1H)，3.11(d，J＝10.5Hz，1H)，2.99(d，J＝10.5Hz，1H)，2.71(s，2H)，2.55(m，1H)，1.99(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ170.0，165.2，146.7，146.5，145.8，133.2，132.1，129.8，129.8，129.0，128.4，128.0，126.5，114.2，107.4，105.1，101.1，70.9，69.0，61.1，56.4，53.5，40.1，28.8，20.9。

1-乙酰基-2-(4-氯丁酰基)石蒜碱(1-5)：ESI-MS：m/z 434[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.74(s，1H)，6.57(s，1H)，5.92(s，2H)，5.72(s，1H)，5.52(s，1H)，5.28(s，1H)，4.16(d，J＝14.0Hz，1H)，3.61(t，J＝6.4Hz，2H)，3.53(d，J＝14.4Hz，1H)，3.38(m，1H)，2.87(d，J＝10.8Hz，1H)，2.78(d，J＝10.4Hz，1H)，2.65(m，2H)，2.54(m，2H)，2.40(m，1H)，2.11(m，2H)，1.95(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ171.4，170.0，146.5，146.4，146.3，129.4，126.5，113.6，107.3，105.0，101.0，71.1，69.2，61.2，56.9，53.6，44.0，40.5，31.3，28.7，27.6，21.0。

实施例2.2-TBS-石蒜碱(3-2)和1-乙酰基-2-TBS-石蒜碱(3-3)的合成

按照流程III-1的步骤合成化合物2-TBS-石蒜碱(3-2)，无色油状物。

2-TBS-石蒜碱(3-3)：ESI-MS m/z：552(M+H)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.79(s，1H)，6.56(s，1H)，5.89(s，2H)，5.39(s，1H)，4.37(s，1H)，4.24(s，1H)，4.10(d，J＝14.0Hz，1H)，3.45(d，J＝14.0Hz，1H)，3.30(m，1H)，2.77(d，J＝10.4Hz，1H)，2.68(d，J＝10.4Hz，1H)，2.57(m，2H)，2.30(m，IH)，0.87(s，9H)，0.12(s，3H)，0.09(s，3H)。¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)δ：146.3，146.0，141.8，130.1，128.2，118.3，107.6，104.6，100.8，72.5，72.0，60.9，57.1，53.9，40.8，28.6，25.9，18.1，-4.4，-4.7。

按照流程III-2的步骤合成化合物1-甲磺酰基-2-TBS-石蒜碱(3-3)，淡黄色固体。

1-甲磺酰基-2-TBS-石蒜碱(3-3)：ESI-MS m/z：444(M+H)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.73(s，1H)，6.57(s，1H)，5.91(d，J＝2.0Hz，2H)，5.56(s，1H)，5.39(s，1H)，4.18(s，1H)，4.15(d，J＝14.4Hz，1H)，3.52(d，J＝14.0Hz，1H)，3.36(m，1H)，2.94(d，J＝10.4Hz，1H)，2.74(d，J＝10.4Hz，1H)，2.62(m，2H)，2.38(m，1H)，1.94(s，3H)，0.89(s，9H)，0.19(s，3H)，0.11(s，3H).¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)δ：170.4，146.4，146.1，142.1，129.5，127.8.118.2，107.3，104.8，100.1，69.7，61.5，57.0，53.8，39.3，28.6，25.8，21.1，18.0，-4.7。

实施例3.1-乙酰基-2-羰基-石蒜碱(2-2)，2-羰基-石蒜碱(2-3)和1-丁酰基-2-羰基-石蒜碱的合成。

按照流程II-1的步骤合成化合物1-乙酰基-2-羰基-石蒜碱(2-2)，白色固体。

1-乙酰基-2-羰基-石蒜碱(2-2)：ESI-MS m/z：328(M+H)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.67(s，1H)，6.52(s，1H)，5.94(s，1H)，5.93(s，1H)，5.89-5.85(m，2H)，4.12(d，J＝14.0Hz，1H)，3.56(d，J＝14.0Hz，1H)，3.41(m，1H)，3.21(d，J＝10.4Hz，1H)，3.13(d，J＝9.6Hz，1H)，2.82(dm，2H)，2.48(q，J＝8.6Hz，1H)，1.91(s，3H).¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)δ：192.9，169.5，169.1，146.7，146.6，128.9，125.2，120.3，107.3，105.3，101.0，69.0，62.3，56.3，53.2，45.5，30.0，20.7.

按照流程II-2的步骤合成化合物2-羰基-石蒜碱(2-3)，淡黄色固体。

2-羰基-石蒜碱(2-3)：ESI-MS m/z：286(M+H)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.75(s，1H)，6.59(s，1H)，5.99-5.89(m，3H)，4.54(d，J＝3.0Hz，1H)，4.16(d，J＝14.4Hz，1H)，3.61(d，J＝14.4Hz，1H)，3.45(m，1H)，3.23(d，J＝9.6Hz，1H)，3.12(d，J＝9.6Hz，1H)，2.89-2.80(m，2H)，2.51(q，J＝8.7Hz，1H)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ：197.5，169.2，146.7，146.6，129.2，126.1，119.7，107.5，105.0，101.1，70.3，61.8，56.4，53.4，46.0，30.0。

按照流程II-2的步骤合成化合物1-丁酰基2-羰基-石蒜碱(2-4)，白色固体。

1-丁酰基2-羰基-石蒜碱(2-4)：ESI-MS：m/z 356[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.73(s，1H)，6.58(s，1H)，6.05-5.97(m，2H)，5.92(s，2H)，4.18(d，J＝14.1Hz，1H)，3.61(d，J＝14.1Hz，1H)，3.47(dd，J＝8.8，4.4Hz，1H)，3.28(d，J＝9.9Hz，1H)，3.18(d，J＝9.7Hz，1H)，2.87(s，2H)，2.54(d，J＝8.6Hz，1H)，2.18(td，J＝7.3，4.0Hz，2H)，1.51(dd，J＝14.7，7.3Hz，2H)，0.78(t，J＝7.4Hz，3H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)：δ193.1，172.1，169.0，146.6，146.6，128.8，125.3，120.4，107.3，105.6，101.1，68.7，62.4，56.3，53.2，45.5，35.9，30.0，18.4，13.3。

实施例4.12，12-二甲基-石蒜碱(62)和12-甲基-12-丙基-石蒜碱(64)的合成。

按照流程IV-1的步骤合成化合物12，12-二甲基-石蒜碱(62)，灰色固体。

12，12-二甲基-石蒜碱(62)：ESI-MS：m/z 316[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ6.97(s，1H)，6.74(s，1H)，5.80(s，1H)，5.12(d，J＝5.6Hz，1H)，4.80(s，1H)，4.31(d，J＝13.6Hz，1H)，4.13(d，J＝13.6Hz，1H)，3.66(d，J＝11.6Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.37-3.44(m，1H)，3.03(d，J＝11.2Hz，1H)，2.79(m，2H)，1.44(s，3H)，1.32(s，3H)；¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)：δ146.5，142.5，140.9，127.1，124.7，120.9，115.1，113.3，110.2，75.9，73.1，62.1，55.4，54.7，43.5，30.0，27.5，25.8。

按照流程IV-2的步骤合成化合物12-甲基-12-丙基-石蒜碱(64)，灰色固体。

12-甲基-12-丙基-石蒜碱(64)：ESI-MS：m/z 344[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.00(s，1H)，6.76(s，1H)，5.84(s，1H)，5.15(d，J＝5.2Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.42(d，J＝13.6Hz，1H)，4.14(d，J＝13.6Hz，1H)，3.73(m，2H)，3.42(m，1H)，3.07(d，J＝11.2Hz，1H)，2.82(m，2H)，1.56(m，2H)，1.43(s，3H)，1.32(m，2H)，0.84(t，J＝6.8Hz，3H)；¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)：δ147.2，145.8，140.1，129.9，122.9，122.2，115.3，113.4，111.7，75.0，72.2，62.0，54.9，54.5，43.3，42.7，30.4，24.0，17.9，14.6。

实施例5.1，2-环氧石蒜碱(5-3)，2-叠氮石蒜碱(5-4)和2-氨基石蒜碱(5-5)的合成。

按照流程V-2，V-3和V-4的步骤分别合成化合物1，2-环氧石蒜碱(5-3)，2-叠氮石蒜碱(5-4)和2-氨基石蒜碱(5-5)。

1，2-环氧石蒜碱(5-3)：ESI-MS：m/z 270[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.04(s，1H)，6.60(s，1H)，5.94(d，J＝4.4Hz，2H)，5.76(d，J＝1.6Hz，1H)，4.08(d，J＝14.0Hz，1H)，3.96(d，J＝4.0Hz，1H)，3.58(d，J＝14.0Hz，1H)，3.51(t，J＝4.0Hz，1H)，3.21(m，1H)，2.80(t，J＝13.6Hz，2H)，2.61(m，1H)，2.43(m，1H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)：δ147.9，146.4，146.2，129.5，129.2，112.6，107.5，105.4，101.0，63.1，57.0，54.5，54.0，49.5，40.8，29.3。

2-叠氮石蒜碱(5-4)：ESI-MS：m/z 313[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.67(s，1H)，6.58(s，1H)，5.91(d，J＝3.2Hz，2H)，5.51(s，1H)，4.34(s，1H)，4.07(d，J＝14.0Hz，1H)，3.91(s，1H)，3.49(d，J＝14.0Hz，1H)，3.28(m，1H)，2.82(d，J＝10.0Hz，1H)，2.63(m，2H)，2.57(d，J＝10.4Hz，1H)，2.37(m，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ146.8，146.4，145.8，129.5，127.1，112.6，107.8，104.7，101.1，69.3，62.7，60.9，56.9，53.7，41.2，28.7。

2-氨基石蒜碱(5-5)：ESI-MS：m/z 287[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ6.79(s，1H)，6.55(s，1H)，5.83(s，2H)，5.41(s，1H)，4.49(s，1H)，4.05(d，J＝14.2Hz，1H)，3.59(s，1H)，3.48(d，J＝14.0Hz，1H)，3.26(m，2H)，2.85(d，J＝10.0Hz，1H)，2.68-2.45(m，3H)，2.44-2.33(m，1H)；¹³C NMR(100MHz，CD₃OD)：δ148.3，147.9，146.2，130.3，128.6，115.8，108.4，106.2，102.4，69.9，62.2，57.8，55.9，54.7，41.45，29.6。

实施例6.目标化合物抑制细胞增殖的活性试验(In vitro)

细胞生长检测(MTT法)NCI-H460细胞悬液调整至1×10⁵/ml，接种于96孔板(50μl/孔)，10⁴个细胞/孔。铺板4h后，每孔中加入50μl含不同浓度化合物的培养基，使孔中化合物终浓度分别为：800、600、400、200、100μg/ml，每个浓度设三个复孔，不加细胞的孔读数时作空白，加细胞不加化合物的孔作化合物空白孔。于37℃，5％CO₂中孵育48h，每孔加入10μl 0.5％的MTT染色液，继续孵育4h后，2500rpm，离心30min，然后抛板弃孔中培养基，加入DMSO，100μl/孔。酶标仪上于570nm处测定每孔的吸光度OD值，计算细胞生长抑制率，进而得到目标化合物的活性结果。细胞实验结果表明，化合物3的IC₅₀为13.081μM，化合物7的IC₅₀为3.286μM。

Claims (8)

1.一种具备如下结构通式A的化合物或其各种光学异构体、药物活性的代谢物、可药用盐、溶剂化物或其前药，在抗肿瘤药物的应用：

其中，

R₁，R₂，R₃，R₄可以独立地取自于以下基团：-H，-OH，-SH，-NH₂，羰基，-卤素，-O-烷基，-O-环烷基，-O-杂烷基，-O-杂环烷基，-O-杂环基，-O-链烯基，-O-环烯基，-O-杂烯基，-O-杂环烯基，-O-链炔基，-O-环炔基，-O-杂炔基，-O-环杂炔基，-O-芳基，-O-芳烷基，-O-杂芳基，-O-杂芳烷基，-S-烷基，-S-环烷基，-S-杂烷基，-S-杂环烷基，-S-杂环基，-S-链烯基，-S-环烯基，-S-杂烯基，-S-杂环烯基，-S-链炔基，-S-环炔基，-S-杂炔基，-S-环杂炔基，-S-芳基，-S-芳烷基，-S-杂芳基，-S-杂芳烷基，-N-烷基，-N-环烷基，-N-杂烷基，-N-杂环烷基，-N-杂环基，-N-链烯基，-N-环烯基，-N-杂烯基，-N-杂环烯基，-N-链炔基，-N-环炔基，-N-杂炔基，-N-环杂炔基，-N-芳基，-N-芳烷基，-N-杂芳基，-N-杂芳烷基；烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基，杂环基，链烯基，环烯基，杂烯基，杂环烯基，链炔基，环炔基，杂炔基，环杂炔基，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基；

R₅和R₆可以独立地取自于以下基团：-H，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基，杂环基，链烯基，环烯基，杂烯基，杂环烯基，链炔基，环炔基，杂炔基，环杂炔基，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基。

2.如权利要求1所述的化合物、药物活性的代谢物、可药用盐、溶剂化物、前药或其光学异构体，R₁，R₂，R₃，R₄可以是氢，氨基，酰基，烷基，烯基，炔基，芳基和杂环芳基。其中芳基和杂芳基酰基任选得被1到5个取代基所取代，包括卤素，羟基，硝基，氰基，叠氮基，三氟甲基，卤C1-6烷基，C1-6烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-6烷硫基，C1-8烷氧羰基。

3.如权利要求1所述的化合物、药物活性的代谢物、可药用盐、溶剂化物、前药或其光学异构体，R₅和R₆可以是-H，烷基，烯基，炔基，芳基，芳烷基。

4.根据权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤药物的应用，其中所述的化合物包括以下实例但不局限于此：

5.一种药物组合物，其包括有效量的权利要求1-4中任何一项所述的化合物，或其在药物上可接受的盐，与其在药学上可接受的载体介质或助剂，在制备治疗抗肿瘤药物的应用。

6.根据权利要求5的药物组合物，其进一步包括选自其他类别抗肿瘤药物，免疫调节剂和抗感染的第二治疗剂，在制备抗肿瘤药物的应用。

7.按照权利要求5，6的方法，其中所述的其他抗肿瘤药物，包括细胞毒药物，胸苷酸合成酶抑制剂，二氢叶酸还原酶抑制剂，核苷酸还原酶抑制剂等。

8.按照权利要求5的药物组合物，其用于制造供治疗哺乳动物的恶性肿瘤的药品。