CN103298487B - 陪伴动物治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用P2X7免疫疗法来使陪伴动物体内癌症进展实现最小化。

Description

陪伴动物治疗
发明领域
本发明涉及兽医肿瘤学，包括陪伴动物体内癌症的治疗。
发明背景
本说明书中对任何现有技术的提及不是并且不应当视为承认或以任何形式暗示这种现有技术形成在澳大利亚或任何其他管辖权的公知常识的部分或者可以合理地预期这项现有技术由本领域技术人员确认、理解和视为相关的。
癌症在陪伴动物(如狗和猫以及其他类似的动物)中的发病率在不断增加，并且目前认为癌症是年长动物死亡的首要原因。据信，在狗体内每年癌症的发病率是约2％到2.5％(约和人类一样)而猫的是1.5％到2％。
在狗体内具有最高发病率的癌症按以下顺序：淋巴瘤(约20％)；肥大细胞瘤(约18％)；软组织肉瘤(约10％)；血管肉瘤(约10％)；骨肉瘤(约9％)。其余部分典型地包括鳞状细胞癌、乳癌、黑色素瘤、组织细胞瘤和纤维肉瘤。
在猫体内具有最高发病率的癌症按以下顺序：淋巴瘤(约25％)；肥大细胞瘤(约占皮肤肿瘤的22％)；鳞状细胞癌(大于皮肤肿瘤的11％)；乳癌(约10％)；并且其余的部分包括血管肉瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、皮脂腺增生/腺瘤。
在兽医肿瘤学中癌症治疗的方法包括外科手术、放疗、热疗、光动力学疗法和化疗。基因疗法和免疫疗法还未被广泛应用。
除了Palladia(toceranib磷酸盐；辉瑞(Pfizer))，还没有其他药物一几个能被施用上市许可，用作化疗药物，用于陪伴动物中的癌症治疗。这主要是因为与获得上市许可有关联的高成本。
在大多数司法管辖区，兽医肿瘤学家具有“标签外”药物使用特权。标签外药物使用指的是兽医肿瘤学家可以自由地使用被批准用于一个物种(包括人类)的药物用于另一物种。有了这些特权，在兽医肿瘤学中已经出现一种惯例，由此肿瘤学家们倾向于选择那些在人类肿瘤中已经获得显著的临床经验的化疗药物用于陪伴动物中的癌症治疗。
目前在兽医肿瘤学中使用的化疗药物的实例以及的相关的适应症在表1中示出。
表1
就这些化疗药物而言有很多问题和限制。例如，如在人类治疗中观察到的，这些化合物与非特异性作用对抗包括骨髓、胃肠道上皮以及毛囊的***细胞有关的毒性相关。副作用包括免疫抑制、贫血、恶心和呕吐、伤口治愈的延迟、生殖障碍以及脱发。某些特定的器官也可能变得易感，包括心脏、肾脏和中枢神经***(CNS)。
另外，使用单一的化学治疗剂对治愈癌症很少有效，因为不是所有的肿瘤细胞都会被单一的制剂有效的杀死。其中一个原因是，随着癌细胞的发展，突变的发生率也发展由此可能导致耐药性表型的产生。因此，在大多数情况下，为给定的临床案例研发一种组合化疗法是必要的。
对陪伴动物癌症的一种替代方案或改进的治疗存在一种需要，并且尤其是那些在陪伴动物体内具有高发病率的癌症。
对于狗类体内的癌症的替代性或改进性治疗同样存在一种需要。
对治疗狗体内的淋巴瘤、肥大细胞瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、骨肉瘤、鳞状细胞癌、乳癌、黑色素瘤、组织细胞瘤以及纤维肉瘤存在一种需要。
对猫类癌症的一种替代方案或改进的治疗存在一种需要。
对治疗猫体内的淋巴瘤、肥大细胞瘤、鳞状细胞癌、乳癌、血管肉瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、皮脂腺增生/腺瘤存在一种需要。
发明概述
本发明的目的是要解决上述需求中的一个或多个，并且在第一方面，提供了用于使一个陪伴动物体内的癌症进展最小化的方法，该方法包括以下步骤：
提供一个将要减小其中癌症进展的陪伴动物；并且
向该动物体内提供一个包括一个可变结构域的全抗体或其一个片段，用于结合到一个由该动物表达的非功能性P2X7受体上；
由此最小化该动物体内的癌症进展。
在第二个方面，本发明提供了一种用于最小化一个陪伴动物体内的癌症进展的方法，该方法包括以下步骤：
提供一个需要癌症治疗的陪伴动物；以及
在该陪伴动物体内形成一种针对非功能性P2X7受体的一个免疫应答；
由此最小化该陪伴动物体内的癌症进展。
在第三方面，本发明提供了一种用于最小化一个陪伴动物体内的癌症进展的方法，该方法包括以下步骤：
提供一个已经接受一个非自体抗原结合位点用于癌症治疗的陪伴动物；
在该陪伴动物体内形成一种针对非功能性P2X7受体的免疫应答；
由此最下化在该陪伴动物体内的癌症进展。
在本发明的另一个方面，提供了以下的用途：
一个包括一个可变结构域的全抗体，或者其一个片段用于结合到一个非功能性P2X7受体上；或
一个P2X7受体，或者一个P2X7受体的一个片段；
在用于陪伴动物癌症治疗的一种药剂的制造中。
仍在另一个方面，本发明提供了以下用途：
一个包括一个可变结构域全抗体，或者其一个片段用于结合到一个非功能性P2X7受体；或
一个P2X7受体，或者一个P2X7受体的一个片段；
用于陪伴动物癌症治疗。
仍在另外的方面，本发明提供了一种试剂盒或组合物用于陪伴动物体内的癌症治疗，该试剂盒包括：
一个包括一个可变结构域全抗体，或者其一个片段用于结合到一个非功能性P2X7受体上；或
一个P2X7受体，或者一个P2X7受体的一个片段；
用于一种方法或以上权利要求中的任一项中的书面说明。
本发明的另外的方面以及描述于前面段落的这些方面的另外的实施例从以下的说明中、通过实例给出以及参照附图将会变得显而易见。
附图简要说明
图1.P2X7受体的氨基酸序列。
图2.犬类和人P2X7受体的氨基酸序列的对比。
图3.ELISA(酶联免疫吸附测定)检测的抗E200抗体应答。
实施方案的详细说明
现在将更详细地提及本发明的某些实施例。虽然本发明将结合这些实施例进行描述，将理解的是并不旨在将本发明局限于这些实施例。相反，本发明旨在将覆盖如在由权利要求书所定义的可以包括在本发明的范围内的所有替代方案、修改、以及等效物。
本领域的技术人员将会认识到，类似于或等同于在此描述的那些的许多方法和材料，它们可以用于本发明的实践中。本发明绝非限于所描述的这些方法和材料。
将理解的是，在本说明书中披露并且定义的本发明扩展到所提及的或从上下文或附图中明显的两个或更多个动物特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的不同替代方面。
所有在此提及的专利和出版物通过引用以其全文结合在此。
A定义
出于解释本说明书的目的，以下定义将总体上应用并且在适当时，所使用的单数术语将还包括复数并且反之亦然。在所列出的任何定义与通过引用结合在此的任何文献冲突的情况下，以下列出的定义将优先。
如在此使用的，除了上下文另外要求以外，术语“包括(comprise)”，以及该词语的变体，例如“包括着(comprising)”以及“包括了(comprises)”和“包括有(comprised)”不旨在排除其他的添加物、组分、完整事物或步骤。
“陪伴动物”通常是指一个是宠物的动物或者一个人的“陪伴”的动物。猫(猫)和狗(犬)是实例。
“嘌呤受体”通常是指使用嘌呤(例如ATP)作为配体的一种受体。
“P2X7受体”通常指一个由三个蛋白亚基或单体形成的嘌呤受体，其中至少一个所述单体具有一个大体上如图1所示的氨基酸序列或者大体上如图2所示的犬序列。到了该P2X7受体由三个单体形成的程度，它是一个“三聚体”或“三聚物”。“P2X7受体”可以是如下描述的功能或非功能性受体。“P2X7受体”涵盖天然发生的P2X7受体变体，例如其中P2X7单体是剪接变体、等位基因变体以及包括天然发生的形成P2X7受体的截短的或分泌形式的单体的同种型(例如由细胞外结构域序列组成的形式或其截短的形式)、天然发生的变体形式(例如，可替代地剪接形式)以及天然发生的等位基因变体。在本发明的某些实施例中，披露在此的自然序列P2X7单体多肽是成熟的或者是包括图1所示的全长氨基酸序列的全长的自然序列多肽，或者是大体上如图2所示的犬序列。在某些实施例中，该P2X7受体可以具有一个被修饰的氨基酸序列，例如在图1中所示的序列中的不同氨基酸或是一个大体上如图2所示的犬序列可以被取代、删除或可以***一个残基。
“功能性P2X7受体”通常是指具有用于结合到ATP上的结合位点或裂缝的P2X7受体的一种形式。当结合到ATP上时，该受体形成了非选择性钠/钙通道，该通道转换到一种孔状结构，该结构使得钙离子能够进入胞质溶胶中，其一个结果可以是程序性细胞死亡。在正常稳态中，功能性P2X7受体的表达通常限制于经历程序性死亡的细胞，例如胸腺细胞、树突状细胞、淋巴细胞、巨噬细胞以及单核细胞。还可以在红细胞上存在一些功能性P2X7受体表达。
“非功能性P2X7受体”一般是指P2X7受体的一种形式，该形式具有一个构型由此该受体不能够形成一个凋亡孔。一个实例出现在这些单体中的一个或多个在Pro210处具有一个顺势异构体的情况下(根据SEQ ID号：1)。在人类或非人类哺乳动物单体中，这种异构化可能是从导致该单体错折叠的任何分子事件产生的，包括例如单体基本序列的突变或异常的翻译后加工。异构化的一个结果是在该三聚体上的一个或多个ATP结合位点上，该受体不能够结合到ATP上，并且由此扩大了该通道的开口。具体地，当三个单体中的一个被错误地包装并且因此破坏了两个ATP结合位点。在这些情况下，该受体不能形成孔并且这限制了钙离子可以进入到胞质溶胶中的程度。仅维持了部分通道活性。非功能性P2X7受体表达在广泛的上皮癌和造血癌上。
“E200表位”通常指代一个存在于一个非功能性P2X7受体上的一个表位。在人类中，该序列是GHNYTTRNILPGLNITC。在犬类中，该序列是GHNYTTRNILPDINITC。
“E300表位”通常指代一个存在于一个非功能性P2X7受体上的一个表位。在人类和犬类中，该序列是相同的，即KYYKENNVEKRTLIKVF。
“复合表位”通常指的是一种由E200和E300表位的并置形成的表位。E200在犬类和人类之间的差别的点不包含在犬类复合表位，意味着犬类和人类的复合表为是相同的。尽管猫P2X7受体序列还没有被表征，在此的血清学数据证实了猫复合表位与犬和人类复合表位相同或大体上一样。
“抗体”或“免疫球蛋白”或“Ig”是在脊椎动物的血液、或其他体液中发现的γ球蛋白蛋白，它们在免疫***中起作用以结合抗原，由此识别和/或中和外来物。
抗体通常是由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。每个L链通过一个共价的二硫键连接到一个H链上。这两个H链通过一个或多个二硫键(取决于该H链的同种型)彼此连接。每个H和L链还具有规则地间隔开的链内二硫桥。
H和L链定义了特异性lg结构域。更具体地，每个H链在N端具有关于可变结构域(VH)，之后是三个恒定域(CH)(对于每个α和γ链)和四个CH结构域(对于μ和ε的同种型)。每个L链在N端具有一个可变结构域(VL)，之后在其另一端是一个恒定域(CL)。VL与VH比对并且CL与重链的第一恒定域(CH1)比对。
抗体可以指定到不同的类别或同种型。存在五种类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，具有分别指定为α、δ、ε、γ和μ的重链。γ和α类别基于在CH序列和功能方面的较小差异而进一步分成多个亚类，例如人类表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2。来自任何脊椎动物种类的L链基于其恒定域的氨基酸序列可以被指定为两个明显不同的类型之一，称为κ和λ。
该恒定域包括Fc部分，该部分包括通过二硫化合物结合在一起的全部两个H链的羧基端部分。通过在Fc区中的序列确定抗体(例如ADCC)的效应子功能，该区也是通过在某种类型的细胞上发现的Fc受体(FcR)识别的部分。
VH和VL的配对一起形成了一个“可变区”或“可变结构域”，包括抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。V结构域包含一个“抗原结合位点”，该抗原结合位点影响了抗原结合并且限定了一种具体抗体对其具体抗原的特异性。V区跨过了约110个氨基酸残基并且由15-30个氨基酸的被称为框架区(FR)(通常约4)的相对不变伸展段(relatively invariant stretch)组成，该相对不变伸展段被极度易变的称为各自一般具有9-12个氨基酸长的“高变区”(通常约3)的更短的区域分开。这些FR大部分采取β片构型并且高变区形成了连接β片结构的环，并且在一些情况下形成了β片结构的一部分。
“高变区”是指一个抗体可变结构域的区域，这些区域在序列方面是高变的和/或形成在结构上定义的环。通常，抗体包括六个高变区；三个在VH(H1、H2、H3)中，并且三个在VL(L1、L2、L3)中。
“框架”或“FR”残基是除了在此定义的高变区残基以外的那些可变结构域残基。
“用于形成抗原结合位点的肽”通常是指可以形成针对抗原赋予抗体特异性的构型的肽。实例包括全抗体或全抗体相关结构，包括一个可变结构域的全抗体片段、其可变结构域和片段，包括轻和重链，或包括一些但并非所有的高变区或恒定区的轻以及重链的片段。
“抗原结合位点”通常指代包括至少把抗原结合功能分给一个V结构域所必须的高变区和框架区的一个分子。在表述在此的方法中，一个抗原结合位点可以处于一个抗体或一个抗体片段的形式(例如一个dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2或scFv)。
“完整的”或“全”抗体是包括抗原结合位点，连同CL以及至少重链恒定域CHI、CH2和CH3的抗体。恒定域可以是天然序列的恒定域(例如，人类天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。
“包括一个可变结构域的全抗体片段”包括Fab、Fab′、F(ab′)2、和Fv片段；双链抗体、线性抗体、单链抗体分子；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。
“Fab片段”由整个L链与H链的可变区结构域(VH)以及一个重链的第一恒定域(CHI)组成。每个Fab片段相对于抗原结合是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。
“Fab′片段”与Fab片段的区别在于在CHI结构域的羧基端具有额外的很少残基，包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。Fab′-SH在此是对于Fab′命名的，其中该恒定域的一个或多个半胱氨酸残基带有一个游离的巯基。
“F(ab′)2片段”大致地对应于两个具有二价抗原结合活性的二硫化物连接的Fab的片段并且仍然是能够交联抗原。
“Fv”是包含一个完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由以紧密的非共价缔合的一个重链的以及一个轻链的可变区结构域的二聚物组成。
在一个单链Fv(scFv)种类中，一个重链以及一个轻链可变结构域可以通过一个柔性肽连接物共价连接，使得该轻链和重链可以在一个类似于两链Fv种类的一个“二聚体”结构中缔合。从这两个结构域的折叠发散出六个高变环(3个环各自来自H和L链)，这些环有助于氨基酸残基用于抗原结合并且赋予对抗体的抗原结合特异性。
“单链Fv”还缩写为“sFv”或“scFv”，是包括连接形成一个单一的多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，该scFv多肽进一步包括在该VH和VL结构域之间的一个多肽连接物，使得该scFv能够形成了希望的用于抗原结合的结构。
“单一可变结构域”是Fv的一半(仅包括三个对于抗原特异的CDR)，该Fv具有识别并且结合抗原的能力，尽管比整个结合位点的亲和力更低。
“双链抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，这些片段包括连接到在同一多肽链(VH-VL)中的一个轻链可变结构域(VL)上的重链可变结构域(VH)。小的抗体片段通过在该VH与VL结构域之间构建具有短连接物(约5-10个残基)的sFv片段(参见以上段落)而制备，使得实现了V结构域的链间配对但不是链内配对，由此导致了一个二价片段，即，具有两个抗原结合位点的片段。
双链抗体可以是二价的或双特异性的。双特异性的双链抗体是两个“交换型”sFv片段的异源二聚体，其中这两个抗体的VH与VL结构域在不同的多肽链上存在。三链抗体和四链抗体通常也是本领域已知的。
“分离的抗体”是已经从其预先存在的环境中的组分鉴定并且分离和/或回收的抗体。污染组分是将会干扰对于抗体的治疗用途的材料并且可以包括酶、激素以及其他蛋白质性溶质或非蛋白质性溶质。
“单克隆抗体”是指从基本上均质性抗体的群体获得的一种抗体，即，包括该群体的动物抗体是相同的，除了可能以较小的量存在的可能的天然发生的突变以外。单克隆抗体是高度特异性的，其直接针对在抗原上的单一抗原位点或决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体有利的是它们可以通过其他抗体未受污染地合成。单克隆抗体可以通过杂交瘤方法学制备。这些“单克隆抗体”还可以从使用这些技术从噬菌体抗体库分离。
在此的单克隆抗体包括“嵌合的”抗体，其中重和/或轻链的一部分与衍生自一个具体种类的抗体的或属于一个具体抗体种类或亚类的对应序列相同或同源，而该一个或多个链的其余部分是与衍生自另一种类的抗体的或属于另一抗体种类或亚类的抗体连同此种抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要他们表现出所希望的生物活性即可。
术语“抗-P2X7受体抗体”或“结合到P2X7受体上的抗体”是指能够以足够的亲和力结合到P2X7受体上，使得该抗体作为一种诊断和/或治疗剂在靶向P2X7受体(典型地非功能性P2X7受体)中是有用的抗体。优选地，将一种P2X7受体抗体结合到不相关联的P2X7受体蛋白上的程度小于如所测量(例如通过放射免疫测定(RIA))的该抗体结合到P2X7受体上的约10％。在某些实施例中，结合到P2X7受体上的抗体具有的解离常数(Kd)＜1μM、＜100nM、＜10nM、＜1nM、或＜0.1nM。抗非功能性P2X7受体抗体通常是具有一些或所有这些血清学特征并且结合到非功能性P2X7受体上而不是功能性P2X7受体上的抗体。
一种“亲和力成熟的”抗体是在其一个或多个高变区中具有一个或多个改变的抗体，这种改变与不拥有一个或多个那种改变的母源抗体相比，导致了抗体对抗原的亲和力的改进。优选的亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔的对于靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体是通过本领域已知的程序产生的。
“封闭性”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低了该抗体结合的抗原的生物活性的抗体。优选的封闭性抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制了该抗原的生物活性。
如在此使用，“激动剂抗体”是一种模拟感兴趣的多肽的功能性活性中的至少一种的抗体。
“结合亲和力”通常是指在一个分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另外指明，如在此所使用的“结合亲和力”指的是内在结合亲和力，反映了在一个结合对(例如，抗体和抗原)的成员之间的一种1：1的相互作用。分子X对于其配偶体Y的亲和力通常可以通过解离常数(Kd)表示。可以通过本领域已知的方法测量亲和力，包括在此描述的那些。低亲和力抗体通常缓慢地结合到抗原上并且倾向于很容易地解离，而高亲和力抗体通常更快地结合到抗原上并且倾向于保持结合更久。测量结合亲和力的许多种方法是本领域已知的，其中任何方法可以用于本发明的目的。
“治疗”通常指的是疗法治疗和预防的或预防性措施这二者。
需要治疗的动物包括已经具有一个良性的、肿瘤前的、或非转移性肿瘤的那些连同其中将要阻止其癌症发病率或复发的那些。
治疗的目的或结果可以是来减少癌细胞数；减小原发性肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓并且优选地停止)癌细胞浸润到周边器官；抑制(即在一定程度上减缓并且优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与该失调相关联的症状中的一种或多种。
可以通过评价存活的持续时间、疾病进展的时间、应答速度(RR)、应答的持续时间和/或生活质量来测量治疗的功效。
在一个实施例中，该方法对延长疾病进展的时间是特别有用的。
在一个实施例中，该方法对延长动物的存活率，包括总的存活时间连同无进展存活率，是特别有用的。
在一个实施例中，该方法对于提供一个对治疗完整的应答是特别有用的，由此响应于治疗的所有癌症迹象已经消失。这并不总意味着癌症已经治愈了。
在一个实施例中，该方法对于提供对治疗的一个部分应答是特别有用的，由此响应于治疗，在一个或多个肿瘤或病变的大小上或者在身体中的癌症的程度上已经有一个降低。
“癌前期”或“肿瘤前期”通常指的是典型地进行成或发展为一种癌症的一种病况或生长。“癌前期”生长可能具有以异常的细胞周期调控、增殖或分化为特征的细胞，这些细胞可以通过细胞周期的标志物确定。
“[与癌症]相关联的病况或症状”可以是作为癌症的结果产生的、在癌症之前的或是由癌症进展的任何病理。例如，当该癌症是皮肤癌时，该病况或相关症状可以是微生物感染。当该癌症是一种继发性肿瘤，该病况或症状可以涉及具有肿瘤转移的相关器官的器官功能障碍。在一个实施例中，在此描述的治疗方法是用于一个动物体内的病况或症状的最小化或治疗，该症状或病况与该动物体内的癌症相关。
“非自体”分子，例如“非自体”抗原结合位点或“非自体”抗体通常是指一个已经由体外产生的或是外源的分子，其中该分子将被提供，例如用于治疗。作为一个实例，合成的或重组的分子是“非自体”的。进一步，一个产生于一个动物而被施用到另一个动物用于治疗的分子是“非自体”的。“非自体”抗原结合位点和抗体可以根据本发明被用于免疫性的继承性转移，例如在抗体输注时发生的。相反，一个在一个动物体内产生并用该分子治疗该动物的分子，通常是一种“自体”或“内源的”分子。“自体”分子的一个实例是一种产生自或由一种对免疫原的适应性免疫应答产生的抗原结合位点或抗体。
动物体内的“循环的非自体抗原结合位点的水平”通常是指抗原结合位点在体液中的浓度，优选在外周血。
“在循环中大体上不可检出的非自体抗原结合位点水平”通常是指外源性抗原结合位点(即那些已经通过过继转移施用的)的浓度至少是施用该抗原结合位点时这些抗原结合位点在循环中的浓度的一半，优选地为所述浓度的25％、或10％、或5％、或1％，或者另外小于该动物的0.001mg/kg。该短语还指代一种情况，期中已经被施用用于癌症免疫治疗的抗原结合位点根本不能被检测到。
“大体上不可检出”的癌症通常是其中指治疗已经减少了一种癌症的大小、体积或其他物理量度的情况，使得使用相关标准检测技术(例如活体成像)，该癌症作为该治疗的结果不是清楚地可检出。该短语还指代其中该癌症根本不能被检测的情况。
“形成一个免疫应答”通常是指经由适应性免疫***引起或诱导抗原特异性免疫。如在本领域中一般理解的，抗原特异性免疫的诱导不同于免疫的继承性转移，通过外源性或非自体性抗体的施用进行的标准癌症免疫治疗是后者的一个实例。
B.通过抗体输注进行的癌症免疫治疗
尽管非功能性P2X7受体在正常的、肿瘤前的或肿瘤的人类组织中的组织表达谱在本发明的时候是理解的，但是关于非功能性P2X7受体在非人类动物(尤其是陪伴动物例如猫和狗)中的组织表达，很少是已知的。
具体地，三聚体非功能性受体是否在陪伴动物体内的活体组织中表达以及具体的在哪些组织上表达是未知的。进一步，该表达是否可以在癌症组织上发现以及如果发现了，该表达会被限制到癌组织是何种程度是未知的。因此，某些陪伴动物癌症是否表达非功能性P2X7受体，或者用抗体的治疗对正常细胞是否将具有显著毒性都是未知的。
进一步，在人类中活体癌组织上观察到的癌症特异性表位是否存在于陪伴动物癌症组织中是未知的。在本发明的时候，这与怎样在陪伴动物体内产生抗癌抗体的问题是直接相关的。特别是，猫P2X7受体序列完全是未知的。
已知狗P2X7序列与人类P2X7受体在狗序列对应于人中E200的区域显著不同，在其中对关键脯氨酸210(已知在人体中产生人受体的非功能性)立即加羧基，已知该狗序列如在人体中一样，用带负电荷的天冬氨酸非保守性替代中性的甘氨酸。进一步，在狗和人类之间其他氨基酸差异中，已知这些中的至少约55％为非保守性替代，并且有一个***在人类中未发现。具体参加图2。
综上所述，在在本发明时，未知非功能性P2X7受体是否存在于陪伴动物(包括狗和猫)中，因此未知P2X7受体是否可以如已经用于人类那样被用作一个生物标记用于陪伴动物体内的癌症治疗。
如在此所描述，诸位发明人已经示出，针对用具有E200表位的一个肽免疫而培育的绵羊抗体对在陪伴动物体内具有更高发病率的多种癌症的治疗是高度有效的，并且具有最小副作用或毒性。由此诸位发明人已经认识到在狗和猫体内某些活癌细胞表达非功能性P2X7受体。考虑到最小毒性，这些受体的表达似乎受限于肿瘤前的或肿瘤的组织。另外，并且尽管有差异(例如在狗和人类P2X7序列之间)，但这些陪伴动物受体似乎具有很像在其上已经找到人类E200表位的一个细胞外构型。
另外，并且令人惊讶地，诸位发明者已经认识到，抗异种P2X7免疫原而培育的异种抗体对治疗陪伴动物(包括猫和狗)中的癌症是高度有效的。
因此，在第一方面，本发明提供了一种用于一个陪伴动物体内的癌症进展最小化的方法，该方法包括以下步骤：
提供一个要最小化其中癌症进展的陪伴动物；并且
在该动物体内提供一个包括一个可变结构域的全抗体或其一个片段，用于结合到一个由该动物表达的非功能性P2X7受体上；
由此最小化该动物体内的癌症进展。
在另外的方面，本发明提供了一种全抗体或其一个片段在一种用于陪伴动物癌症治疗的药剂的制造中的用途，该全抗体或其一个片段包括一个可变结构域，用于结合到一个非功能性P2X7受体上。
仍在另外的方面，本发明提供了一种全抗体或其一个片段用于治疗一个陪伴动物体内的癌症的用途，该全抗体或其一个片段包括一个可变结构域，用于结合到一个非功能性P2X7受体上。
根据本发明的第一方面的方法，一个要被治疗的动物可以是已经接受、或者是即将接受任何一种指明用于肿瘤的治疗性抗体的动物。
在第一方面的一个实施例中，一个抗体的抗原结合位点可以是区别功能性和非功能性P2X7受体的抗原结合位点，由此结合到非功能性受体而不是功能性受体。这些抗原结合位点的实例是结合到E200表位、E300表位或者复合表位的那些，例如在PCT/AU2002/000061、PCT/AU2002/001204、PCT/AU2007/001540、PCT/AU2007/001541、PCT/AU2008/001364、PCT/AU2008/001365、PCT/AU2009/000869以及PCT/AU2010/001070中，所有这些都通过引用结合。
一个抗原结合位点可以采取一个全抗体的形式、或一个全抗体片段的形式(例如一个Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv)、一个单链Fv、或一个单可变结构域。
抗原结合位点相对于该将要接受它用于癌症治疗的陪伴动物可以是同系的、同种异系的或异种的。
典型地，该抗原结合位点是非自体性的或外源的，意味着已经在根据本发明的方法治疗的动物以外将其发现或分离。
该抗原结合位点可以是亲和成熟的。
该抗原结合位点可以具有多种特异性或化合价。
该抗原结合位点可以被适配，由此适合通过一个选择的方法施用。
该抗体可以是任何同种型的一个全抗体。该抗体可以是从单克隆抗体或多克隆抗血清中获得的抗体。该抗体可以从杂交瘤中产生，或通过重组表达，或者可以从血清中获得(例如从一种哺乳动物，特别是人或小鼠中可获得)。该抗体还可以从一种鸟类中获得。
该抗体可以是嵌合的，即一种包含人类可变结构域和非人类恒定结构域的抗体。可替代地，它可以是人源化的，即通过将非人类CDR接枝到一个人类抗体框架上形成的抗体。仍进一步，该抗体可以是全人源的。
该抗体可以相对于效应子功能被修饰由此来增强，例如用来增强该抗体在治疗癌症中的有效性。
在该抗体是一种抗体片段的情况下，该抗体片段选自下组，该组由以下各项组成：dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab’)2、scFv以及CDR。
以下对剂量的量值、剂量频率、施用途径等进行了详细描述。
制备抗体和将抗体施用对其有需要的动物的方法对于本领域那些技术人员是熟知的，或者是容易由本领域那些技术人员确定的。施用途径可以是，例如，口服、肠胃外(例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、皮内、直肠或***)，通过吸入或局部施用。施用的一个形式会是用于注射的一种溶液，特别是用于静脉注射或动脉注射或滴注，该溶液包括一种缓冲液(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液)、一种表面活性剂(例如聚山梨酯)，任选地一种稳定剂(例如白蛋白)。在其他方法中，可以直接将抗体递送到疾病位点，由此增加病变细胞或组织对抗体的暴露。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水(水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质)或非水(非水溶剂是丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)以及可注射有机酯(例如油酸乙酯))溶液、悬浮液以及乳液。药学上可接受的载体包括0.01M-0.1M并且优选0.05M的磷酸盐缓冲液或0.9％盐水。其他普通肠胃外运载体包括磷酸钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液、或固定油。静脉内运载体包括流体和营养素补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏葡萄糖的那些)、以及类似物。还可以存在防腐剂和其他添加剂，例如像抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂以及惰性气体，以及类似物。
更具体地，适合可注射用途的药物组合物包含无菌的水性溶液(适当时是水溶性的)或分散体以及用于无菌可注射溶液或分散体的即时制备的无菌粉末，在这样的情况下，该组合物必须是无菌的并且应当是以容易注射的程度存在的流体。它应该是在制造以及存储条件下稳定的并且优选地针对微生物(例如细菌和真菌)的污染作用而保存的。该载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇以及液体聚乙二醇，以及类似物)、以及它们的适合混合物的溶剂和分散介质，。适当的流动性可以例如通过使用一种涂层(例如卵磷脂)，通过保持在分散体的情况下所需要的粒径并且通过使用表面活性剂来维持。用于在此披露的治疗方法中的适合配制品描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿氏药学科学)，Mack Publishing Co.公司，16版(1980)中。
防止微生物的作用可以通过不同的抗细菌以及抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞以及类似物来实现。在许多情况下，将优选的是在该组合物中包括等张剂，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇)、或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括一种延缓吸收的药剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。
在任何情况下，无菌可注射溶液可以通过将在适当溶剂中的一种活性化合物(例如，抗原结合位点)以所需要的量与如所需要的一种或一个组合的在此列举的成分结合，接着过滤灭菌来制备。通常，通过将该活性化合物结合到一种无菌运载体中来制备分散体，该运载体含有一种基础分散体介质以及所需要的来自以上列举的那些的其他成分。在用于制备无菌的可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥以及冷冻干燥，这产生了活性成分加任何额外的来自以上的其无菌过滤溶液的所希望的成分的粉末。对用于注射的制剂进行加工，过滤到容器例如安瓿、袋、瓶子、注射器或小瓶中，并且在根据本领域已知的无菌条件下进行密封。此外，这些制剂可以按试剂盒的形式包装并且出售。这样的制造物品优选具有标签或包装说明书(package insert)，指明相关组合物对于治疗患有失调或易患失调的受试者是有用的。
本发明的组合物用于治疗如在此描述的失调的有效剂量取决于许多不同因素而改变，包括施用手段、目标位置、患者的生理状态，患者是否是人或动物、施用的其他药物治疗，以及治疗是预防性还是治疗性的。治疗剂量可以使用本领域那些普通技术人员已知的常规方法逐步增高以优化安全性和功效。
对于用一种抗体治疗某些失调，剂量的范围可以是例如从约宿主体重的0.0001mg/kg至100mg/kg，并且更通常是0.01mg/kg至5mg/kg(例如0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、等)。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1mg/kg-10mg/kg范围内，优选至少1mg/kg。在以上范围内的剂量中间值也是旨在本发明的范围内。可以对受试者每天、隔天、每周或根据经验分析确定的任何其他方案施用此剂量。示例性治疗要求在一个延长的时期(例如，至少六个月)内以多个剂量施用。额外的示例性治疗方案要求每两周一次或每个月一次或每3至6个月一次施用。示例性剂量方案包括1mg/kg-10mg/kg或15mg/kg持续连续天，隔天30mg/kg或每周60mg/kg。在一些方法中，同时施用具有不同的结合特异性的两种或更多种抗原结合位点，在这种情况下，所施用的每种抗原位点的剂量落在所指明的范围内。
可以在多种情况下，施用用于结合到表达在一个细胞上的一个非功能性P2X7受体的抗体。单一剂量之间的间隔可以是每周、每月或每年。间隔还可以是不规则的，如通过测量患者中的目标多肽或目标分子的血液水平所指示的。在一些方法中，对剂量进行调节以实现1μg/mL-1000μg/mL的血浆多肽浓度，并且在一些方法中是25μg/mL-300μg/mL。可替代地，该抗体可以作为持续释放配制品施用，在这种情况下需要更低频率的施用。剂量和频率取决于患者中的抗体的半生期而改变。抗体的半生期还可以经由融合到一个稳定的多肽或部分，例如白蛋白或PEG上而延长。通常，人源化抗体显示出最长的半生期，接着是嵌合抗体以及非人抗体。在一个实施例中，该抗体可以按未结合的形式施用。在另一个实施例中，该抗体可以按未结合的形式施用多次施用。在某些治疗应用中，有时候要求较高剂量(例如，高达400mg/kg的抗P2X7结合分子，例如每剂量的抗体)，以较短间隔直至疾病的进展降低或结束，并且优选直至患者表现出部分或完全的疾病症状的改善。当该抗体结合到一种放射性同位素或细胞毒类药物上时，该量可以是若干对数级的更低(即2到3个对数级的更低)。
治疗剂可以通过肠胃外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、颅内、腹膜内、鼻内或肌内手段施用，用于预防性和/或治疗性治疗，在一些方法中，将药剂直接注射到其中非功能性P2X7受体细胞已经累积的具体组织中，例如颅内注射。肌内注射或静脉输注对于抗体的施用是优选的。
一种抗体可以任选地结合在需要治疗的失调或病况的治疗中有效的(例如预防性或治疗性的)其他药剂而施用。实例是在肿瘤学中通常被用于化疗或放疗的那些药剂。额外地或者可替代地，该抗体或药剂可以在用于肿瘤或组织的切除或去除的手术治疗前、中或后来施用。
根据本发明的第一方面，在一个实施例中，该方法可以用于治疗癌症，尤其是用于癌症的治疗性治疗。
在一个实施例中，该治疗的目的或结果是下列中的一个或多个：
降低癌细胞的数目；
降低原发肿瘤的大小；
抑制(即在一定程度上减缓或优选停止)癌细胞渗入到周边器官；
抑制(即在一定程度上减缓或优选停止)肿瘤转移；
在一定程度上抑制肿瘤生长；
在一定程度上减轻与该失调有关的症状中的一种或多种。
在一个实施例中，本发明的第一方面的方法用于延长疾病进展的时间。
在一个实施例中，第一方面的方法用于延长动物的存活率，包括总的存活时间连同无进展存活率。
在一个实施例中，第一方面的方法用于提供一个对治疗的完整应答，由此响应于治疗的所有癌症迹象已经消失。
在一个实施例中，第一方面的方法用于提供对治疗的一个部分应答，由此响应于治疗，在一个或多个肿瘤或病变的大小上或者在身体中的癌症的程度上已经有一个降低。
在一个实施例中，需要治疗的动物包括患有良性的、癌症前的或非转移性肿瘤的那些。
在一个实施例中，该癌症是癌前期的或肿瘤前的。
在一个实施例中，该癌症是继发性癌症或转移瘤。该继发性癌症可以位于任何器官或组织，并且特别是那些具有相对更高的血液动力学压力的器官或组织，例如肺、肾、胰腺、肠和大脑。
在一个实施例中，该癌症可以是大体上不可检出的。
这种陪伴动物可以为一只猫或狗。然而，鉴于针对用于非灵长类受体的人蛋白而培育的抗体的交叉反应性，诸位发明人已经认识到，其他具有与人类相同远的***发育的非人类哺乳动物会从本发明中获益。在一个实施例中，该陪伴动物是一种高价值动物或良种动物。一个实例是一匹马。
典型地，需要治疗的癌症或癌前期是在一个给定的陪伴动物体内具有更高发病率的癌症。例如，当这种陪伴动物是一只狗时，该癌症可以是淋巴瘤、肥大细胞瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、骨肉瘤、鳞状细胞癌、乳癌、黑色素瘤、组织细胞瘤、梭形细胞癌或纤维肉瘤。
当这种陪伴动物是一只猫时，该癌症可以是淋巴瘤、肥大细胞瘤、鳞状细胞癌、乳癌、血管肉瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、或皮脂腺增生/腺瘤。
癌症的其他实例描述于表I中或包括胚细胞瘤(包括成神经管细胞瘤、视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌瘤、胃泌素瘤和胰岛细胞瘤)、间皮瘤，神经鞘瘤(包括听神经瘤)、脑膜瘤、腺癌、黑色素瘤、白血病或淋巴恶性肿瘤、肺癌(包括小细胞肺癌(SGLG)、非小细胞肺癌(NSGLG)、肺腺癌以及肺部鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃部的或胃癌(包括胃肠道癌症)、胰腺癌、恶性胶质瘤、子***、卵巢癌、肝癌，膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌(包括转移性乳癌)、结肠癌，直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、***癌、***癌、睾丸癌、食管癌、胆管肿瘤连同头颈癌。
施用的剂量和频率可以取决于该治疗是预防性的或治疗性的而改变。在预防性的应用中，将包括抗体或其混合物的组合物施用并未在疾病状态中或在疾病前状态的患者以增强患者的抵抗力。这样一个量被定义为“预防有效剂量”。在这种使用中，精确的量再次取决于该动物的健康状态以及全身免疫，但是通常范围是从0.1mg至25mg每剂量，尤其是0.5mg至2.5mg每剂量。较低剂量是以较不频繁的间隔经过长的时期施用。一些动物为了它们余下的生命而继续接受治疗。
在治疗应用中，有时要求较高剂量(例如，从约1mg/kg至400mg/kg的结合分子，例如每剂量的抗体，剂量是从5mg至25mg对于放射性免疫偶联物是更常使用的，并且对于细胞毒素-药物结合的分子的更高剂量)以较短间隔，直至疾病的进展降低或结束，并且优选直至动物示出部分或完全的疾病症状的改善。
在一个实施例中，该抗体结合另一种指明用于需要治疗的陪伴动物体内相关癌症的化疗的或抗肿瘤的化合物一起提供。这些化合物和相关指示的实例在表1中描述。
在另一个实施例中，该抗体在一个选自下组的临床手术前、中或后提供，该组由以下各项组成：外科手术、放射治疗、热疗、光动力疗法、化疗、基因治疗和免疫治疗。
C.通过免疫进行的癌症免疫治疗
在第二个方面，本发明提供了用于使一个陪伴动物体内的癌症进展最小化的一种方法，该方法包括以下步骤：
提供一个需要癌症治疗的陪伴动物；以及
在这个陪伴动物体内形成一种针对非功能性P2X7受体的免疫应答；
由此最小化在这个陪伴动物体内的癌症进展。
在第三方面，本发明提供了用于使一个已经接受了一种非自体抗原结合位点的陪伴动物体内的癌症进展最小化的一种方法，用于癌症治疗，该方法包括以下步骤：
提供一个已经接受一种非自体抗原结合位点的陪伴动物，用于癌症治疗；
在这个陪伴动物体内形成一种针对非功能性P2X7受体的免疫应答；
由此最小化在这个陪伴动物体内的癌症进展。
在另一个方面，本发明提供了一种非功能性P2X7受体或其片段在一种用于治疗一个陪伴动物体内的癌症的药剂的制造中的用途，尤其是一种已经接受一种非自体抗原结合位点用于癌症治疗的动物，例如猫或狗。
在又另一个方面，本发明提供了一种非功能性P2X7受体或其片段用于治疗一个陪伴动物体内的癌症的用途，尤其是一种已经接受一种非自体抗原结合位点用于癌症治疗的动物，如猫或狗。
在另一个方面，本发明提供了一种非功能性P2X7受体或其片段在一种用于治疗或抑制一个陪伴动物体内的癌症进展的药剂的制造中的用途，该陪伴动物已经接受一种抗非功能性P2X7受体抗原结合位点用于癌症治疗。
在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，在该免疫应答在这个陪伴动物体内形成时，这个陪伴动物可以在循环中没有可检出的非自体抗原结合位点。例如，输注的抗体在免疫时可能已经被从血浆中清除。另外，在该免疫应答在这个陪伴动物体内形成时，这个陪伴动物可以没有可检出的癌症，例如，作为将一种抗原结合位点施用这个陪伴动物后的结果，在该免疫应答在这个陪伴动物体内形成时，该癌症可以具有大体上减小的大小、质量或其他物理量度。
根据本发明的第二和第三方面，该免疫应答可能通过免疫原形成。该免疫原可以按一个能够诱导对一个非功能性P2X7受体在这个陪伴动物体内的免疫应答的P2X7受体的形式，或者是一个P2X7受体的片段的形式提供。一个非功能性P2X7受体被定义为具有形成在相邻的正确包装的不能结合ATP的单体之间的界面上的三个ATP结合位点中的至少一个。这种受体不能够扩大非选择性钙通道到凋亡孔隙的开口。该免疫原可以包含能够在一个主要组织相容性复合物II类分子上存在和/或能够与一个T或B细胞受体或一个B细胞膜结合的免疫球蛋白相互作用的至少一个序列。典型地，这种陪伴动物是一只猫或狗，在这种情况下该免疫原可以按以下形式提供：一个猫或狗P2X7受体，或者是其能够诱导对P2X7受体的免疫应答的片段。狗P2X7受体序列示出于在此的图2中。典型地，形成在这种陪伴动物体内的免疫应答对非功能性P2X7受体是特异性的，在这种情况下，在该陪伴动物体内形成了与非功能性P2X7受体(即非ATP结合受体)反应但不与功能性P2X7受体(即ATP结合受体)反应的抗体或细胞组分。
在本发明的第二和第三方面的优选形式中，该免疫原在一次最初施用中提供给该陪伴动物，由此形成包括IgM产生的应答。在另外的优选形式中，已经在最初施用中提供给该陪伴动物免疫原，由此形成包括IgM产生的应答，在稍后的时间，在相对于最初施用的另外的施用中，施用该免疫原，由此形成了包括IgG产生的一个应答。在本实施例中，典型地，在陪伴动物体内的循环中的IgM水平大体上不可检出时，发生免疫原的另外的施用。
根据本发明的第二和第三方面形成的该免疫应答可以是一个体液应答和/或细胞应答。体液应答可以包括B细胞向分泌抗体的浆细胞的转化、Th2激活和细胞因子产生、增殖中心形成和同种型转换、B细胞的亲和成熟和/或记忆细胞产生。细胞应答可以包括激活抗原特异性细胞毒素T-淋巴细胞，激活巨噬细胞以及自然杀伤细胞和/或刺激细胞分泌细胞因子。在陪伴动物体内形成的体液应答和/或细胞应答可以治疗或减轻这种陪伴动物体内的癌症，或最小化这种陪伴动物体内的癌症进展。
在本发明的第二和第三方面的上述实施例中，由这种陪伴动物接受的抗原结合位点可以与任何与癌症相关联的生物标记物反应。实例包括抗P2X7，尤其是非功能性P2X7，抗VEGF，尤其是VEGF A、C或D、Her-2、CD20或其它的抗原结合位点。典型地，由这种陪伴动物接受的抗原结合位点与P2X7受体，尤其是非功能性P2X7受体反应。
在本发明的第二和第三方面的另一实施例中，提供了一种组合物用于治疗或用于抑制陪伴动物体内的癌症进展，该组合物包括P2X7受体或其片段。优选地，该组合物进一步包括一种载体、赋形剂或稀释剂。优选地，该组合物进一步包括一种佐剂。在一个优选形式中，该组合物使在向该陪伴动物初次施用该免疫原时，能够形成初次免疫应答(包括IgM产生)，并且使在初次施用后，施用该免疫原时，能够形成第二免疫应答(包括IgG产生)。
不被任何理论或作用方式束缚，普遍认为与本发明的第二和第三方面相关的上述实施例提供了一种替代方案和/或改进治疗方案，因为内源免疫组分(例如从免疫产生的抗体和抗原特异性细胞)在已经完成施用抗原结合位点，并且非自体抗P2X7抗原结合位点的循环水平变得不可检出后，提供了细胞表面P2X7受体的更延长的以及更高的暴露。另外，普遍认为P2X7受体聚集(随着在陪伴动物体内提供高浓度的非自体或外源抗体时产生)最小化了结合到提供抗癌症免疫应答的关键P2X7表位的特异性抗体水平，由此限制了免疫疗法的功效。诸位发明人发现，陪伴动物的免疫在非自体抗体的循环水平大体上不可检出时，避免了受体聚集，并且这改进了免疫疗法的功效，特别是当这个陪伴动物体内的癌症可以是大体上不可检出时。
在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，这些选来用于治疗的动物还没有用抗体免疫疗法或其他形式的疗法治疗。在另一实施例中，这些选来用于根据上述方法治疗的动物是已经接受、或者继续接受抗体免疫疗法用于癌症治疗的那些。抗体免疫疗法通常是指向一个需要治疗的动物施用外源的(也称为“非自体”)抗体，如在抗体的继承性转移的情况中。例如，该动物可以已经接受治疗性抗体中的任何一种，这些抗体已经接受对涉及肿瘤学的指示的注册审批。阿瓦斯丁、赫塞汀、美罗华是实例。典型地，该动物已经接受了或正在继续接受一种抗P2X7受体抗体。合适的抗-P2X7抗体、它们的产生、制造、使用以及对一个陪伴动物的施用的实例描述在与本发明的第一方面相关的实施例中。
另外，这些选来用于根据本发明的第二和第三方面治疗的动物在治疗时可以具有或可能不具有可检出的癌症。当该动物不具有可检出的癌症时，更容易检测一种初级或二级体液应答，因为在癌症以大体上不可检出的量存在的情况下，存在非常少的可用的非功能性P2X7受体来从体液中去除IgM或IgG。
可以根据本发明的第二和第三方面治疗的癌症的类型以及希望的治疗结果是如在与本发明的第一方面相关的实施例中描述的那些。
根据本发明的第二和第三方面的治疗的目的是动物体内通过对P2X7受体的免疫应答的诱导或形成来至少最小化癌症进展。因此，选来用于治疗的动物必须是能够产生足够的免疫应答来满足这种目的。通常这一希望的免疫应答包括当该动物被癌症，如在癌症复发中激发时，产生循环的IgM和IgG之一或二者的能力。
通过多种本领域熟知的方法可以选择或筛选描述在此的具有产生免疫应答的能力的动物用于免疫缺陷检测。典型地，选来用于治疗的动物将是具有在正常参数范围内的至少一个白细胞组分计数的动物。例如，用于纳入的猫通常是具有的白细胞计数在5.5到19.0×109/L之间，或者淋巴细胞计数在0.9到7.0×109/L之间的猫。中性白细胞计数可以在2到13×109/L之间；单核细胞计数＜0.7×109/L，嗜酸性粒细胞小于约1.1×109/L并且嗜碱性粒细胞小于约0.1×109/L。例如，用于纳入的狗通常是具有的白细胞计数在4.5到17.0×109/L之间，或者淋巴细胞计数在0.9到3.5×109/L之间的狗。中性白细胞计数可以在3.5到12×109/L之间；单核细胞计数＜1.2×109/L，嗜酸性粒细胞小于约1.5×109/L并且嗜碱性粒细胞小于约0.1×109/L。
将理解，在某些实施例中，对于这些血细胞组分中的任意一个的细胞计数可以落在这些陈述的范围外，，特别是在其中该动物患有一种形式的血癌，例如CML、CLL等的情况下。
通常一个重要的因素是淋巴细胞计数和/或单核细胞计数。更详细地，对这些组分，当这些计数之一或二者显著地低于陈述的范围时，该动物会更不可能响应该免疫原的施用。
当该动物继续接受抗体免疫治疗，在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，允许该抗体免疫治疗继续直到希望的临床终点。典型地，该希望的临床终点是癌症降低到大体上不可检出的水平。然后在免疫治疗的过程中或结束时，评价该动物形成或产生对P2X7受体的免疫应答的能力。然后当该评价揭示该动物可能从用P2X7免疫原的免疫中受益时，那么施用该动物免疫原。
在本发明的第二和第三方面的一个优选形式中，在该动物体内的产生自抗体免疫疗法的循环的非自体或外源的抗原结合位点的水平，在该免疫应答在该动物体内形成时是大体上不可检出的。重要地，本发明者的一个关键发现是抗体治疗的功效在抗体结合位点的更高循环浓度时降低，特别是当癌细胞处于非常低的拷贝数时，或以其他方式大体上不可检出时。这被认为是相对于在标准抗体免疫疗法中产生的高浓度抗原结合位点，在癌细胞上的低拷贝数的非功能性P2X7受体的一个功能。确切地，在此的实例中，本发明者已经发现，随着抗原特异性结合位点的循环水平增加，以及癌细胞数目减少，通过阻断该受体的抗原特异性结合的抗原结合位点的非功能性P2X7受体的聚集的可能性远远更高。这种阻断增加了通过抗原结合位点的抗原特异性结合的预期的细胞毒性、凋亡或其他作用的可能性，这将是不可能的。人可以通过能够检测体液中的抗体的任何标准血清学技术来确定循环中的外源抗原结合位点的水平，一个优选的实例为利用抗体来捕获抗原结合位点的ELISA。
除以上外，但不想被假设束缚，诸位发明者考虑到，在输注抗体存在时施用免疫增加了该输注抗体可以结合到该免疫原上的风险，导致免疫复合物的形成和清除，由此避免了抗原递呈以及抗原特异性免疫的诱导。因此，在某些实施例中，等待直到在对免疫原的抗原特异性免疫应答的诱导前非自体或外源抗原结合位点的水平已经从循环中清除，是特别有用的。
在此描述的本发明的第二和第三方面中的方法需要在要用P2X7受体(尤其是一个非功能性P2X7受体)治疗的动物体内形成免疫应答。一般地，用于本目的免疫原是对非功能性P2X7受体，而不是对功能性P2X7受体引出免疫应答的免疫原。
诸位发明人发现，复合表位存在于大范围的物种中，意味着根据在此的本发明的第二和第三方面，(i)抗原结合位点或抗体可以在大范围的动物中培育用于抗体输注治疗以及(ii)大范围的物种的动物可以用主动免疫疗法来治疗。下表证明了人复合表位和在其他物种中的表位的％一致性。
表2：人E200/E300与其他物种的比对
该免疫原可以包括或由以下组成：包括一个P2X7受体的序列的肽。该肽可以包含至少一个序列，该序列能够在一个主要组织相容性复合物II类分子上存在，或能够与一个B细胞受体或一个B细胞膜结合的免疫球蛋白相互作用。典型地，该肽包括一个非人源的，优选的是陪伴动物P2X7受体或其片段的一个序列。
已知一系列的肽免疫原并且在PCT/AU2002/000061、PCT/AU2002/000061、PCT/AU2008/001364和PCT/AU2009/000869中讨论，它们的内容以其全文结合在此。
以下描述了在这些说明书中的包括用于对非功能性P2X7受体产生免疫应答的表位的示例性肽免疫原。
如上所讨论的，在一个实施例中，该肽免疫原包括部分或所有的犬或猫的P2X7受体序列。
将理解，根据本发明的第二和第三方面，这些仅是对形成一个免疫应答有用的可能免疫原的实例。另外，本发明包括如在这些申请中描述的对非功能性P2X7受体形成一个免疫应答有用的其他肽的用途。
典型地，该免疫方案涉及2个或更多个免疫。在第一免疫中，该研究对象可能会对免疫发展IgM应答。第二免疫可能会发展IgG应答。进一步的免疫可能会增加该IgG应答。
当该免疫原是一个肽时，该肽可以按每次施用约0.1mg到1mg的量提供，优选约0.25mg到0.75mg，在一只大狗体内优选约0.5mg，但在小狗或小猫体内减半。
在一只大狗体内可以应用约0.3mg肽的另一施用作为增长，但在小狗或猫体内减半。
在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，在已经被施用用于抗体免疫疗法的抗原结合位点的循环水平大体上不可检出时，进行第一免疫。换言之，对相关癌症生物标记物的循环抗体在外周血中不能被检测到。然后在接下来的几周监控IgM产生的水平。在第一免疫后约4到5周，IgM抗体的水平可能已经降低到可忽略的循环水平。然后在此时进行第二免疫，并且在接下来的几周检测IgG产生的水平。可以在接下来的几个月/年中对免疫进行进一步的测试，并且根据需要可以提供增加的免疫。
如上述所讨论的，该免疫应答可以靶向一个生物标记物，该生物标记物与已经通过抗体免疫疗法靶向的生物标记物不同。例如，抗CD20抗体可以用于抗体免疫疗法，并且一个非功能性P2X7免疫原用于产生一个免疫应答。
在本发明的第二和第三方面的另一实施例中，由抗体免疫疗法和免疫靶向一个单独的生物标记物。例如，一个指向P2X7受体上的一个表位(例如E300表位)的单克隆抗体可以用于抗体免疫疗法，并且用于形成靶向P2X7上的不同的表位(例如E200表位)的免疫应答的免疫原可以用于免疫。
在此的用于本发明的第二和第三方面的一个肽免疫原可以具有6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个残基的长度。
在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，根据本发明的一个方法，用于形成免疫应答的免疫原是具有P2X7受体的序列的肽，该P2X7受体可以具有或可以不具有顺式(cis)构象的Pro210。
该免疫原可以是P2X7细胞外结构域或P2X7同种型中的任何一种或多种的形式。该免疫原可以按可溶形式或与固相(例如细胞膜、珠粒或其他表面)缔合而提供用于施用。
在此披露了用于筛选可以被用作免疫原来根据在此的本发明的方法来形成免疫应答的肽的方法。一个实例包括红细胞在玫瑰花结试验中的用途。在该试验中，结合到功能性受体上的一个抗体被用作一个阳性对照，在其中观察玫瑰花结。如果不能够形成玫瑰花结，则确定该试验抗体不能结合到功能性受体上。如果观察到它结合到一个表达非功能性受体的细胞系(包括在此讨论的那些)中，则确定它结合到非功能性受体上。
本发明中的肽可以通过本领域任何多个已知技术制作，这些技术包括固相合成和重组DNA技术。
如在本领域中已知的，载体是可以被结合到肽表位由此增强免疫原性的物质。一些载体通过结合到多个肽上，由此向在其中将要发展免疫应答的宿主提供具有增加的分子量的一个抗原，来做到这一点。
优选的载体包括细菌毒素或类毒素。其他合适的载体包括脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白、白蛋白(例如牛血清白蛋白)、合成肽、热休克蛋白、KLH、百日咳蛋白、来自流感嗜血杆菌的蛋白D以及来自难辨梭状芽孢杆菌的毒素A、B或C。
当该载体为细菌毒素或类毒素时，白喉类毒素或破伤风类毒素为优选。
优选地，该载体包含可以与本发明的肽反应的官能团，或者可以被修饰为能够与该肽反应。
该免疫原可以皮下、皮内和/或肌内施用。
在一个优选形式中，用于对一个P2X7受体形成一个免疫应答用于在此描述的本发明的方法的组合物包括佐剂或化合物，用于增强免疫应答。
已知很多的佐剂；同样参见Allison(埃里森)(1998，Dev.Biol.Stand.(发育生物学标准)，92：3-11)(通过引用结合在此)、Unkeless(昂科列斯)等人(1998，Annu.Rev.Immunol.(免疫学年度评论)，6：251-281)以及Phillips(菲利普斯)等人(1992，Vaccine(疫苗)，10：151-158)。可以根据跟发明利用的示例性佐剂包括，但不局限于细胞因子、铝盐(例如氢氧化铝、磷酸铝等；Baylor(贝勒)等人(Vaccine(疫苗)，20：S18，2002))、凝胶型佐剂(例如磷酸钙等)；微生物佐剂(例如包括CpG基序的免疫调节DNA序列；内毒素例如单磷酰脂质A，Ribi(莱比)等人(1986，Immunology and Immunopharmacology ofbacterial endotoxins(细菌内毒素的免疫学和免疫药理学)，Plenum Publ.Corp.(普莱南出版公司)，NY，p407，1986)；外毒素例如霍乱毒素、大肠杆菌不耐热毒素以及百日咳毒素、胞壁酰二肽、等)；油乳胶和基于乳化剂的佐剂(例如弗氏佐剂、MF59[Novartis(诺华公司)]、SAF、等)；颗粒佐剂(例如脂质体、生物可降解微球、等)；合成佐剂(例如非离子化嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物、聚磷腈、合成多聚核苷酸、等)；以及它们的组合。其他示例性佐剂包括一些聚合物(例如聚磷腈类；描述于美国专利5,500,161)、Q57、皂苷(例如QS21，Ghochikyan(古基克扬)等人，(vaccine(疫苗))，24：2275，2006)、鲨烯、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、CPG7909(Cooper(库珀)等人，(vaccine(疫苗))，22：3136，2004)、聚[二(羧基苯氧基)磷腈](PCCP；Payne(佩恩)等人，(Vaccine(疫苗))，16：92，1998)、干扰素-γ(Cao(曹)等人，(Vaccine(疫苗))，10：238，1992)、嵌段共聚物P1205(CRL1005；Katz(卡兹)等人(Vaccine(疫苗))，18：2177，2000)、白细胞介素2(IL-2；Mbwuike(魏克)等人(Vaccine(疫苗))，8：347，1990)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA；Kreuter(克鲁泽)等人，(J.Pharm.ScL(制药科学杂志))，70：367，1981)、等。
在本发明的第二和第三方面的一个实施例中，在一个根据描述在此的本发明的一个方法，在用于一个动物的免疫的一个噬菌体表面上提供包含一个P2X7受体序列的肽免疫原。
仍在另外的方面，本发明提供了一种试剂盒或组合物用于陪伴动物体内的癌症治疗，该试剂盒包括：
一个包括一个可变结构域的全抗体，或其一个片段；或
一个P2X7受体，或一个P2X7受体的一个片段；
用于在此描述的一个方法中的书面说明。
优选地，该抗体或片段结合到一个P2X7受体，优选地为一个非功能性P2X7受体。更优选地，该抗体或片段不结合到功能性P2X7受体上。
优选地，该书面说明以具有使用说明的一个标签或包装的形式用于描述在此的一个方法中。
实例
实例1猫1(GB)
·广阔SCC(鳞状细胞癌)头皮和嘴唇，面积高达4cm2并且占嘴唇的全部厚度。在治疗前，SCC左唇已经扩散到皮下的下颌角。在治疗前，在SCC左唇染上IHC(免疫组化)用于nf-P2X7目标受体。
·用瘤内(i.t.)注射的部分功效
·如IHC揭示，目标受体在感染组织中广泛分布
·以剂量3mg/kg，在流体维持速度下施用，单次输注靶向nf-P2X7受体的癌症特异性治疗抗体
·到第4天，有肿瘤清除的清楚迹象
·到第14天，按3mg/kg单剂量IV(静脉注射)后，治疗2周后，大多数的SCC左唇肿瘤被消除。按3mg/kg IV后，治疗2周后，在左眼上方的SCC簇也清除了。现在，在原始病变位点上皮毛重生变得明显
·3次IV后，在5周内头皮SCC和唇SCC大量的被去除，尽管有被病猫抓伤的新上皮组织的迹象。位于下颌中线的、渗入骨骼中的中心SCC病变现在具有白色结节性疤痕组织的外观。不像在治疗开始时的其中有明显的重度疼痛的病况，该病猫不为具有处理的病变位点所烦恼。
·6个月的IV治疗后，该病况解决了，其中经由内下颌骨中的X光揭示，甚至有新的骨骼增长
·随着时间推移，由于抗绵羊抗体的出现而失去功效，影响临床清除率的总累积剂量估计为30mg/kg到40mg/kg
实例2猫2(AL)
·在i.t.注射前，在鼻子上有SCC
·仅1x i.t.注射，因为猫21岁了，由于全身麻醉导致皮质性盲持续若干小时
·随后用局部抗nf-P2X7IgG
·5天-SCC鼻子形成新组织
·19天-SCC鼻子形成更多的新组织
实例3猫3(PC)
·胰腺癌伴随向肝和肠系膜的转移
·2周静脉内(i.V.)输注后，超声扫描显示1cm级肠系膜转移不明显
·2次每周一次的静脉注射后，通过超声扫描的一些肿瘤溶解(液体)的迹象
·4周后，继发性肝已经从直径5cm收缩到2cm
·4周后，5-6cm直径的原发性胰腺具有约其液化质量的80％
·第5周末尾后，由于胰腺肿瘤溶解/出血到腹部以及所有者的要求，实行了安乐死
实例4猫4(FH)
·鼻子SCC从左鼻孔2cm扩展到鼻梁
·在2008年末手术治疗后，活组织检查揭示广泛的复发的SCC
·按5mg/kg单次静脉内给药后，上鼻表面肿瘤体积减小，该表面的海绵一致性变得坚固
·第二次每周一次的输注后，该病变不再明显。应用第三次输注，并且在2周末尾，所有的病变的临床迹象均不存在。应用另外的输注来确保可能已经存在的剩余肿瘤前细胞的消除。
·在总剂量18mg/kg下，在21天临床性清除
·14个月后不再复发，所以病猫看上去好像完全治愈了
实例5猫5(CO)
病史
病猫在2008年从从左颞区去除鲍温样(Bowen’s-like)病变。在2009年三月的一次检查中注意到该病变已再现并且在相反侧出现一个新病变。这些是具有以下结果的活组织检查：
诊断
具有中等到严重的血细胞结壳、表皮伤疤以及中度血管周的嗜伊红性皮炎的多中心鳞状细胞原位癌。来自左耳的皮肤活组织检查。
中度增生血管周的并且间质的嗜伊红性皮炎伴随中度表皮层状纤维组织增生。来自颈部的活组织检查。
伴随着中度色素沉着过度、中度红细胞结壳以及在更大头颅部中的广阔皮肤疤痕的多中心鳞状细胞原位癌。来自右耳的活组织检查。
评注
该猫具有表皮和毛囊组织的致瘤性转化的多个灶点，与多中心鳞状细胞原位癌或鲍温样病一致。这些病变与2008年六月提交的活组织检查类似。在检查的部分中，没有鳞状上皮***的迹象。
·原位SCC(鲍温氏(Bowen’s))
·对输注5mg/kg绵羊抗nf-P2X7IgG没有不良反应
·2周后，病变已经明显减少但仍广阔，由于初始的改善，所以施用了第二次输注
·在兽医皮肤科医生研究后，所有广阔鲍温样病变被清除，该兽医皮肤科医生注意到在表面病变以及相关感染被清除后，在右耳沟处的深SCC仅仅是表观性的。必须避免病猫撕抓而撕裂新上皮，通过附加一个限制项圈来允许皮肤表面愈合。
实例6狗1(CJ)
·30kg狗中在腹侧的腹部有血管肉瘤病史。因为肿瘤如此有侵略性，多次手术后，该狗不再是手术候选者。用瘤内注射nfP2X7IgG以及3次IV输注nfP2X7亲和纯化的抗体来治疗。瘤内注射6mg抗体到6cm直径的皮肤病变中，在一周内示出80％的降低，伴随着明显的肿瘤溶解作为明显的分泌物。
·按2-3.4mg/kg给药的剂量下进行1次瘤内注射和3次静脉注射来治疗4周
·用绵羊抗nf-P2X7IgG治疗后，肿瘤体积减小
·由于这些大肿瘤(总重量1-2kg)的肿瘤溶解/渗漏症状以及所有者的要求，在2010年3月21日实行安乐死
实例7狗2(MO)
·在尸检病理学中，伴随恶性腹水的移行细胞癌(TCC)被发现是转移性间皮瘤
·按1-2.7mg/kg的剂量下与化疗一起进行3次静脉注射治疗2周
·在第二周，肿瘤降低了15％，尽管还存在腹水
·在第3周，在所有者的要求下并反对兽医的建议，停止治疗
实例8狗3(PI)
·在右爪前中间的两个指头之间的肥大细胞淋巴瘤的特殊治疗与康复训练-外观坚硬并且足垫下的突出部分引起不适。手术会需要去除前腿来维持3cm的边际
·肥大细胞淋巴瘤特殊治疗与康复训练-IV5mg/kg1周后-体积减小40％
·肥大细胞淋巴瘤特殊治疗与康复训练-2周病变现在***并且体积大大减小，在足垫下没有突出的部分，并且在狗体内没有不适的迹象。病变的实体核心现在被限制到单个的指头，伴随着周围的反应细胞囊十分柔软。
·肩胛下***中的转移病变到第2周不可检出
·原发病变在外观上3个月大部分保持不变
·由于原发病变在爪子下变得溃烂，在所有者的要求下，对狗实行安乐死
·尸检活组织检查示出病狗无所有肿瘤，该原发病变位点没有肥大细胞，包含反应性淋巴细胞
·病变可能已经用小于30mg/kg的总剂量清除
实例9狗4(BE)
·在病狗出现极度疼痛和跛足后，左上肱骨经由CT扫描诊断出骨肉瘤，准备实行安乐死。
·开始按10mg/kg的每周一次的输注。一周内，病狗与所有者重新一起活动，并且看起来基本没有痛苦，并且想去散步。
·在第9周，在全身麻醉下获得CT扫描和治疗后诊断组织，该时间被认为是用于骨骼重新生长到容易可检出的最短的时间
·在第9周，在活组织检查中没有肿瘤细胞的迹象，同时病狗看起来非常好
·病狗由于在左肱骨近端骨折，在第5个月被实施安乐死。病变位点的活组织检查示出没有剩余的骨肉瘤迹象。似乎有明显的总体缓解，但是骨头因为肿瘤仍然薄和脆。
·在这种情况下，应该应用外部夹板来保护骨头同时进行相关治疗来辅助骨头重生。
实例10狗5(WC)
·具有高***指数(25)的转移性肥大细胞淋巴瘤(2级)。在肋骨上、肩和后腿有多处病变＞5cm。立即进行10mg/kg的每周一次IV输注。
·在第一周末尾，总病变体积减小75％，如PI示出，与快速清除的期望一致。
·主要病变仍然有积块，但是在第二次输注后，在第二周末尾进一步减小
·在三次输注和一周来引出一个应答后，在第三周末尾准点通过超声和细胞学全面分析病变位点
·所有病变位点的最后针抽吸在3个月后和6个月时进行。没有任何肥大细胞的迹象。
·13个月时病狗被认为没有肿瘤。
实例11狗6(HL)
·病狗呈现出源自腿上的高级别转移性肥大细胞肿瘤伴随腘***转移。
·每周一次在10mg/kg的剂量下通过输注治疗6周。
·到第三周所有的肿胀消除
·在第6周，病理学示出在肿瘤位点处没有肥大细胞
·病狗在一年内没有复发
实例12抗体制造
在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，将结合物的500μg绵羊抗P2X7抗体(约100μg的P2X7，表位)稀释到0.8mL，并且用1.2mL弗氏完全佐剂(Freund′s Complete adjuvant)乳化。用抗原/佐剂乳剂在多个位点处对绵羊进行皮下注射和肌内注射这二者。八周后，这些绵羊用相同量的用弗氏完全佐剂乳化的结合物在多个位点再次注射。4周后重复该过程，并且这些动物从颈静脉取血。收集的血清测试抗体特异性。然后这些绵羊在八周的间隔常规注射和取血来提供一个包含特异性抗体的血清池。
其他的绵羊用类似于以上方案以相同剂量的结合抗原注射，但是使用不同佐剂。在这些动物体中，0.7mL的稀释的抗体与0.1mL的Quill A/DEAE葡聚糖溶液(每mL的PBS中2.5mg的Quill A+25mg DEAE葡聚糖)以及1.2mL ISA50V Montanide混合。在多个位点处皮下注射和肌内注射乳剂。使用这种佐剂产生的抗体产生了和用弗氏佐剂产生的那些一样的特异性。
使用和绵羊中相同的两种佐剂以及相同注射方案在兔中培育抗体，唯一的差异是300μg量的结合物被用于注射。培育的抗体与那些在绵羊中产生的具有相同特异性，并且可以容易地区别培育的它们所抗的表位。
在小鼠中培育抗体来抗那些结合的表位，并且还抗非功能性P2X7表位的未结合表位(它可以区别那些不能形成(from)孔的受体并且因此不能凋亡)。在这些实验中，使用的佐剂是凯杰有限公司(QIAGEN Pty Ltd)的产品ImmunEasy，它包含免疫刺激产品CpG DNA(科莱制药集团(Coley Pharmaceutical Group Inc.)的商标)。在60μL PBS和25μLImmunEasy佐剂中稀释62.5μg的表位或结合的表位/小鼠。在多个位点，皮下注射和肌内注射小鼠。两周后重复该方案并且在另两周后再次重复。在第三次注射8天后取小鼠的血。用这种方法在小鼠中培育的抗体也能够区别不同的P2X7、表位，并且抗P2X7非功能性表位的抗体和那些在绵羊中和兔中培育的抗体给出结果。
实例13-在陪伴动物体内的免疫应答的诱导
材料与方法
肽
合成高纯度的GHNYTTRNILPGLNITC(SEQ ID号：3)形式的肽免疫原，在C末端Cys残基处向其中加入交联剂马来酰亚氨基己酰基-N-羟基琥珀酰亚胺(MCS)。将该肽交联到一个载体蛋白钥孔虫戚血兰素(KLH)，使得肽对总肽-蛋白结合物的平均百分数为40％。该肽或类似的结合到KLH的替代肽GHNYTTRNILPGAGAKYYKENNVEKC分别构成了初级和复合的选择性表位靶，它们使将从天然受体中制得的nfP2X7受体能够分化。
佐剂
使用Imject Alum，一种通常用于人免疫中，由一种水合氢氧化铝金和氢氧化镁加上一个凝胶中的惰性稳定剂的液体配制品组成的批准的佐剂。在2.5mg/mL结合物(1mg/mL肽)浓度下滴加该肽-蛋白结合物，其中以等于0.5mL结合物对0.75mL包含0.5mg的目标肽表位的佐剂的量充分混合在佐剂中。
免疫
免疫方案由以下组成：一个总剂量0.5mg肽的原发接种(两次皮下注射和两次肌内注射)，随后一个月后，用相同方式用0.3mg肽应用促进剂。在注射前和注射一周后立即收集血清样品。理想地，在抗nfP2X7抗体的最后输注不小于一个月后施用接种，通过残余特异性抗nfP2X7抗体输注来确保没有免疫原的隔离。
ELISA
通过ELISA测量特异性抗nfP2X7抗体应答。简要地，该ELISA板涂覆有特异性靶肽表位，在其上以递减的浓度添加患者血清。清洗后，应用适当二级抗人抗体(抗IgM或抗IgG类型)来检测和确定在患者血清中以IgM或IgG形式存在的特异性人抗nfP2X7抗体的浓度。
接种后，没有IgG可检出，但是检测到小量的IgM。随着该增长，IgM浓度已经回到基线零，而IgG以高于初始IgM的浓度产生，如果在现存肿瘤上不存在nfP2X7受体下沉(sink)。在其原发肿瘤已经被抗nfP2X7免疫疗法清除的动物患者中，在没有这种下沉的情况下，检测到在血清中有特异性内源抗nfP2X7抗体的明显的群，级别为25mg/kg。
图3示出了一只病犬的ELISA结果，该如上所述进行免疫。自由的特异性循环抗体的水平与初始完全的清除率和缺乏转移性肥大细胞肿瘤的复发是一致的。
将理解的是，在本说明书中披露并且定义的本发明扩展到所提及的或从上下文或附图中明显的两个或更多个单独特征的所有替代组合。所有这些不同的组合构成了本发明的不同替代方面。

Claims (6)

1.用于结合到一种狗非功能性P2X7受体上的全抗体或其包含一个可变结构域的一个片段在制备一种用于治疗狗体内癌症或与癌症相关联的病况或症状的药物中的用途，其中这种癌症是肥大细胞瘤。
2.如权利要求1所述的用途，其中该抗体或其片段不结合到功能性P2X7受体上。
3.如权利要求1所述的用途，其中该抗体或其片段来自一种多克隆抗血清。
4.如权利要求1所述的用途，其中该抗体或其片段是针对一种抗原而培育的，该抗原对于它在其中进行培育的免疫***而言是异种的。
5.如权利要求4所述的用途，其中该抗原对于狗是异种的。
6.如权利要求1所述的用途，其中该抗体或其片段对于狗是异种的。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1625565A (zh) * 2001-09-03 2005-06-08 因特里特有限公司 非功能性p2x7受体的抗体,癌症及其它疾病的诊断和治疗
CN102762595A (zh) * 2009-12-24 2012-10-31 生物权威国际有限公司 针对非功能性低聚p2x7受体的抗体

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